关键词:
人工韧带
抗疲劳
编织
静电纺丝
软组织再生
摘要:
前交叉韧带(Anterior cruciate ligament,ACL)是连接股骨和胫骨的致密条带状结缔组织,位于人体膝关节腔内。ACL损伤在日常生活中频发,仅在美国发病率高达1700万例每年。由于关节腔内缺乏细胞和血管组织,ACL损伤后难以自愈,需要使用移植物进行手术重建。受限于自体移植物的供体并发症和同种异体移植物的感染风险,人工韧带在临床应用中愈发受到关注。临床常用的人工韧带(ligament advanced reinforcement system,LARS)使用不可降解聚酯材料,模拟天然韧带在关节腔内的平行排列纤维结构,可提供更高的抗疲劳能力,特别是弯曲扭转应力和极小的后期延长。然而,在长期使用中,由于其结构致密和不可降解,新生组织向人工韧带内部浸润困难,同时产生应力遮挡使组织难以在力学刺激或诱导作用下有序重塑,最终导致重建失败。尽管已有大量研究聚焦提高人工韧带的机械性能,或改善细胞和组织浸润及取向,然而目前尚未有研究采用结构优化策略协同改善人工韧带抗疲劳性能和诱导性能。
因此,本研究以可降解的PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物,poly(lactic-co-glycolic acid))、PPDO(聚对二氧环己酮,Poly(p-dioxanone))和蚕丝(Silk)为原料,采用编织技术制备抗疲劳可降解编织支架,并通过静电纺丝技术制备负载纤维蛋白(Fibrin,Fb)成分的纳米膜。通过调控纳米纤维诱导层在抗疲劳支架中的空间分布,制备了四种结构的促再生支架。编织结构通过编织角提供类似天然ACL中胶原纤维生物铰链的缓冲作用,同时平行纤维段降低循环载荷中的疲劳磨损,为促再生支架提供优异的抗疲劳性能,纳米拓扑形貌协同支架降解后产生的动态空间/力学刺激为支架提供诱导作用,促进细胞和组织浸润。
本研究的主要内容包括:(1)基于编织技术,制备抗疲劳可降解编织支架(PLGA:PPDO:Silk=1:2:3),其模拟天然ACL在关节腔内的平行纤维结构,具有编织和未编织的结构;通过静电纺丝技术制备纳米诱导层,并筛选纺丝液浓度;结合抗疲劳支架和纳米诱导层制备促再生支架。(2)通过单次及循环拉伸测试,表征编织支架的抗疲劳性能,优选与自体ACL抗疲劳性能匹配的支架。(3)通过体外加速降解实验,表征促再生支架的降解性能,分析四种促再生支架在降解过程中的形貌、结构、组分变化,评估其与韧带重塑过程中力学性能及空间的匹配性。(4)通过细胞增殖和体内组织相容性评估,考察促再生支架内部细胞和组织浸润情况,评估软组织重建效果。
研究结果及主要结论如下:
(1)通过编织技术,制备了抗疲劳支架TD(三段结构的可降解编织支架,Three-section Degradable scaffold),具有更强的单轴拉伸机械性能,及更优异抗疲劳性能,具体表现在,峰值载荷下降率更低(15.12±1.96%),弹性回复率更高(74.30±9.28%),抗应力松弛率也更高(73.94±0.53%)。
(2)通过静电纺丝技术制备纳米诱导层(Fb-NM),并调控其在抗疲劳支架内部的空间分布(皮/芯层),成功制备四种结构TD、TDN@C(纳米膜在芯层的三段结构可降解编织支架,Three-section Degradable scaffold with Nanofiber membrane wrapped in Core layer)、TDN@S(纳米膜在皮层的三段结构可降解编织支架,Three-section Degradable scaffold with Nanofiber membrane wrapped in Shell layer)、TDN@CS(纳米膜在皮-芯层的三段结构可降解编织支架,Three-section Degradable scaffold with Nanofiber membrane wrapped in Core layer and Shell layer)促再生支架。
(3)体外加速降解实验结果表明,TDN@C(纳米膜在芯层的三段结构可降解编织支架,Three-section Degradable scaffold with Nanofiber membrane wrapped in Core layer)皮层在初始状态即具有较大的孔隙率,随着PLGA、PPDO的降解提供逐步增大的内部空间,芯层Fb-NM可为韧带重塑持续提供长达4 W的诱导作用;降解12 W后,促再生支架的断裂强力下降为初始的45%左右,仍能满足韧带再生的力学要求。细胞黏附和增殖结果表明细胞在TDN@C支架上具有最高的增殖率,表明匹配的内部空间更有利于细胞的增殖。
(4)皮下包埋实验结果表明,TDN@C支架表现出最高的组织浸润深度和胶原容积分数,芯层的Fb-NM显著