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关键词： 甜樱桃   JAZ   果实成熟   表达模式   果实品质  

摘要： 茉莉酸类物质在调控果实成熟和品质形成过程中发挥着重要作用。JAZ蛋白是茉莉酸信号转导通路的核心抑制因子。为研究茉莉酸信号转导关键抑制因子JAZ蛋白在甜樱桃果实成熟和品质调控中的功能,从甜樱桃基因组中鉴定并克隆了PavJAZ1基因,基于生物信息学,分析了其理化性质、蛋白结构、保守结构域分布、启动子顺式作用元件等信息,通过荧光定量PCR分析了其在甜樱桃果实中的表达模式,观察了PavJAZ1蛋白亚细胞定位;此外,借助双分子荧光互补(BiFC)技术验证了PavJAZ1与PavMYC2之间的互作关系。基因鉴定与克隆结果表明,PavJAZ1基因开放阅读框长度为837bp,编码278个氨基酸,蛋白分子质量为30.09ku,理论等电点为9.21,不稳定系数为54.14,亲水性系数为-0.564,说明其为碱性亲水蛋白,且蛋白性质不稳定。蛋白序列和结构分析表明,PavJAZ1主要由无规则卷曲和α-螺旋构成,包含Tify和Jas2个保守结构域,且与其他物种同源性较高,其中与同为蔷薇科李属的桃同源性最高。亚细胞定位观察发现,PavJAZ1蛋白定位于细胞核。表达模式分析表明,随着果实的发育和成熟,PavJAZ1表达量呈现先升高后逐步下降的趋势,暗示其可能在果实不同阶段发挥不同的作用。此外,BiFC结果表明,PavJAZ1可以与PavMYC2在植物体内互作,初步证明其可以参与茉莉酸信号转导。

关键词： 产气荚膜梭菌   ε毒素重组蛋白   单克隆抗体   竞争ELISA   抗体检测  

摘要： 为建立检测产气荚膜梭菌(Cp)ε毒素抗体的竞争酶联免疫吸附(ELISA)检测方法,首先利用纯化的产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选并获得1株稳定分泌特异性抗体的单抗6B9。再以Cp ε毒素重组蛋白为包被抗原,6B9为竞争性抗体,HRP-山羊抗小鼠Ig G为二抗,通过优化反应条件,建立了Cp ε毒素抗体的竞争ELISA检测方法。结果显示,蛋白包被质量浓度为3.0μg/m L,待检血清不稀释,单抗1∶12 000稀释,二抗1∶20 000稀释,避光显色15 min为所建立竞争ELISA方法的最优反应条件。用该方法检测羊血清样本的阳性临界值为27.048%,阴性临界值为19.373%,检测羊阳性血清的敏感度为1∶1 024,批间、批内试验变异系数均小于10%。与Cp的α、β1、β2毒素,腐败梭菌、大肠杆菌以及支原体阳性血清均无非特异性反应。检测126份临床绵羊血清样品,该竞争ELISA方法与间接ELISA方法的阳性符合率为88.52%,阴性符合率为96.92%,总符合率为92.86%。结果表明,本研究成功获得1株高特异性的产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体,并据此建立了产气荚膜梭菌ε毒素抗体竞争ELISA检测方法。该方法重复性佳、特异性强、灵敏度高,从而为精准检测动物临床血清中的ε毒素抗体,评价动物梭菌疫苗的免疫效果提供了技术支撑。

关键词： 黄水多糖   急性毒性   硫酸化改性   抗氧化活性   酿酒副产物  

摘要： 为评价黄水多糖(HSP)的急性毒性并探讨其硫酸化改性后的理化性质、结构及抗氧化活性变化,以浓香型白酒副产物黄水为原料,经分级醇沉获得多糖并进行大鼠急性毒性试验。选取40%乙醇沉淀的多糖组分(cHSP40),经不同体积比氯磺酸-吡啶改性(1:2和1:4)制备2种衍生物(S_(1:2)-cHSP40、S_(1:4)-cHSP40),测定其理化性质、取代度和抗氧化活性,并对其结构进行表征。结果表明,在最大灌胃剂量(10000 mg/kg)下,黄水多糖组大鼠14 d内无死亡,体质量、脏器指数、血清生化指标及组织学均与生理盐水组(对照)无显著差异(P>0.05),表明其急性安全性良好。cHSP40的单糖组成主要为葡萄糖(82.59%),并含甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸等;S_(1:2)-cHSP40、S_(1:4)-cHSP40的取代度分别为0.63和0.56,分子质量均低于原多糖。抗氧化实验结果显示,硫酸化产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、2,2'-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)阳离子自由基和羟自由基的清除率均优于原多糖,S_(1:2)-cHSP40在6 mg/mL时活性最强,分别达到67.13%、59.26%和68.38%。综上,黄水多糖具有良好的安全性,硫酸化改性可显著提升其抗氧化活性。

关键词： 黄芪多糖   肺癌   荷瘤小鼠   机体免疫   调节作用  

摘要： 目的探讨黄芪多糖对肺癌荷瘤小鼠机体免疫、肿瘤细胞生长的调节作用。方法选取无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级的C57BL/6J小鼠72只,随机分为模型组(等量生理盐水灌胃)、阳性对照组(顺铂6.0 mg/kg腹腔注射)、低剂量组(黄芪多糖溶液50 mg/kg灌胃,浓度为1.0 mg/mL)、高剂量组(黄芪多糖溶液100 mg/kg灌胃,浓度为1.0 mg/mL)各18只,对比各组小鼠造模后第14天肿瘤体积、肿瘤瘤体质量、抑瘤率、外周血中T淋巴细胞、肿瘤组织中Survivin蛋白表达,采用流式细胞技术检测各组小鼠肿瘤组织中肿瘤细胞的分期分布情况。结果阳性对照组、低剂量组、高剂量组的肿瘤体积、肿瘤质量与模型组比较均更低(P<0.05);阳性对照组的肿瘤体积、肿瘤质量与低剂量组、高剂量组小鼠比较明显更低(P<0.05),抑瘤率相较于低剂量组、高剂量组则明显更高(P<0.05);高剂量组的肿瘤体积、肿瘤质量均低于低剂量组(P<0.05),抑瘤率高于低剂量组(P<0.05);低剂量组、高剂量组外周血中CD4^(+)T淋巴细胞(cluster of differentiation 4,CD4^(+))、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞(cluster of differentiation 8,CD8^(+))高于模型组和阳性对照组(P<0.05),CD8^(+)水平低于模型组和阳性对照组(P<0.05);高剂量组外周血中CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)高于低剂量组(P<0.05),CD8^(+)水平低于低剂量组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组、高剂量组的肿瘤组织中Survivin蛋白评分低于模型组(P<0.05),阳性对照组的Survivin蛋白评分低于低剂量组、高剂量组(P<0.05),高剂量组Survivin蛋白评分低于低剂量组(P<0.05);阳性对照组、低剂量组、高剂量组的肿瘤组织中S期细胞占比高于模型组(P<0.05),阳性对照组的S期细胞占比高于低剂量组、高剂量组(P<0.05),高剂量组S期细胞占比高于低剂量组(P<0.05)。结论黄芪多糖通过调节肺癌荷瘤小鼠免疫功能、降低Survivin蛋白表达,达到抑制肿瘤细胞生长的效果。

关键词： 南美白对虾   镉   蛋白质组   富集机制   抗氧化酶  

摘要： 本研究基于串联质量标签(tandem mass tag,TMT)标记蛋白质组学技术,探究南美白对虾在0.2 mg/L Cd2+胁迫6 d后肝胰腺组织的蛋白质表达变化,以阐明典型海洋甲壳类生物的Cd富集耐受机制。结果显示:与对照组相比,胁迫组共鉴定出369个差异蛋白,其中214个上调表达、155个下调表达。基因本体(gene ontology,GO)分析表明,差异蛋白在生物学过程中主要参与细胞过程、代谢过程等,细胞组成涉及细胞和蛋白质结合复合物等,分子功能以催化活性、结合功能为主;真核生物直系同源蛋白簇(eukaryotic orthologous groups,KOG)注释显示其显著富集于翻译后修饰、能量代谢等功能;京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析揭示上调蛋白与内质网中蛋白质加工通路相关,下调蛋白集中于核糖体及精氨酸和脯氨酸代谢通路。Cd胁迫下,锌指蛋白、金属硫蛋白、钙连蛋白、钙网蛋白、热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)中的部分蛋白质(HSP60、HSP70、HSP90)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)等抗氧化酶表达均显著上调。这些蛋白质可能通过调控Cd2+结合与外排、修复错误蛋白、缓解内质网应激及清除活性氧,构成南美白对虾应对Cd胁迫的分子响应网络。

关键词： 热裂解质谱(Py-MS)   蛋白质   脂肪酸   核酸   原位检测  

摘要： 质谱技术的持续创新推动了多元化分析系统的快速发展,催生出多种能够满足不同检测需求与应用场景的仪器平台及方法体系。热裂解质谱(pyrolysis-mass spectrometry,Py-MS)联用技术凭借其独特的在线分析特性,在复杂样品的原位实时检测方面展现出显著优势。该技术基于有机化合物的热不稳定性,通过高温裂解使大分子物质解聚生成低分子质量产物,进而依据特征裂解产物的指纹图谱及其相对丰度与母体物质的对应关系实现定性与定量分析。为进一步提升Py-MS对难挥发样品的分析性能,研究人员开发了以四甲基氢氧化铵(tetramethylammonium hydroxide,TMAH)为衍生试剂的在线甲基化改进方法——原位热辅助水解甲基化质谱(in situ thermally assisted hydrolysis and methylation mass spectrometry,in situ THM-MS)技术。该技术通过在热裂解过程中同步进行甲基化反应,有效提高裂解产物的挥发性并改善其质谱响应特性,现已在蛋白质、核酸、脂类等生物大分子的快速检测中得到成功应用。Py-MS技术凭借其强大的分析能力与现场检测优势,已拓展至化工材料表征、生物医药分析、环境污染物监测、微生物鉴定、文物考古及法医物证检验等多个交叉学科领域。本文介绍了应用于Py-MS的3种典型热裂解装置,并对用于蛋白质、核酸及脂质等生物样品的研究进展进行综述。

关键词： 肾结石   通淋排石汤   中医证候   红细胞免疫功能   核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3   单核细胞趋化蛋白-1   前列腺素E_(2)  

摘要： 目的探讨通淋排石汤辅助治疗肾结石的疗效及对患者中医证候、红细胞免疫功能、血清核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide oligomerization structural domain-like receptor protein 3,NALP3)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、前列腺素E_(2)(prostaglandin E_(2),PGE_(2))等指标的影响。方法选取2022年1月至2024年6月南阳南石医院收治的肾结石患者112例作为研究对象,用随机数字表法分为对照组和试验组,每组56例。2组均行输尿管软镜碎石术,对照组术后给予盐酸坦索罗辛缓释胶囊,试验组在对照组治疗的基础上加用通淋排石汤,2组均治疗2周,并随访6个月。比较2组随访6个月后的疗效;治疗前和随访6个月后的中医证候、视觉模拟评分法(Visual Analog Scale,VAS)评分;治疗前和治疗2周后的肾功能,红细胞免疫功能,血清NALP3、MCP-1、PGE_(2)水平及随访期间不良反应的发生情况。结果与对照组比较,试验组随访6个月后的总有效率更高(P<0.05)。与治疗前比较,随访6个月后,2组的血尿、排尿涩痛、腰腹疼痛、排尿中断、便干评分,VAS评分均降低(P<0.05),且试验组的上述评分均更低(P<0.05)。治疗2周后,2组的尿24 h尿蛋白定量(24 h urinary protein,24 h UPro)及血清胱抑素C(cystatin C,Cys-C)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、NALP3、MCP-1、PGE_(2)水平均降低(P<0.05),且试验组均低于对照组(P<0.05);2组的外周血红细胞免疫复合物受体花环率(red blood cell immune complex receptor rosette rate,RBC-ICR)、免疫复合物受体花环率(immune complex receptor rosette rate,ICRRR)及C3b受体花环率(c3b receptor rosette rate,C3bRR)水平均降低(P<0.05),但试验组均高于对照组(P<0.05)。随访期间,2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论通淋排石汤辅助治疗肾结石可有效调节患者的血清NALP3、MCP-1、PGE_(2)水平,减轻机体炎症反应,并可改善患者中医证候及肾功能,缓解疼痛程度,同时对患者红细胞免疫功能的影响较小,进而有利于提高疗效,且具有良好的安全性。

关键词： 紫花苜蓿   MsJUB1   基因克隆   亚细胞定位   酵母双杂交  

摘要： JUNGBRUNNEN1(JUB1)是NAC转录因子家族成员之一,在植物延缓衰老及逆境胁迫响应中发挥重要作用。但是,有关JUB1基因在紫花苜蓿中的功能尚不清楚。为探究MsJUB1基因在紫花苜蓿中的作用,本研究在紫花苜蓿耐盐品种GIB中成功克隆出MsJUB1基因,其开放阅读框长936 bp,编码311个氨基酸。生物信息学分析显示,该蛋白为稳定亲水性蛋白,不含信号肽和跨膜区。顺式作用元件分析表明,MsJUB1基因含有防御与胁迫响应、脱落酸响应、茉莉酸甲酯响应和赤霉素响应等相关元件。亚细胞定位显示,MsJUB1定位于细胞核。酵母双杂试验证明MsJUB1具有自激活活性。RT-qPCR分析显示,MsJUB1在耐盐品种GIB根、茎和叶中的表达随着NaCl处理时间的延长均呈先显著下降后显著上升的趋势,而在敏盐品种LS根和茎中则呈先上升后下降趋势,在LS叶中随着处理时间延长持续下降,说明MsJUB1参与紫花苜蓿对盐胁迫的响应。

关键词： 牙源性间充质干细胞   水凝胶   基质硬度   力学转导   牙周组织再生   力学微环境   牙周炎   组织工程   三维支架  

摘要： 牙周组织的完全性功能再生(即牙槽骨、牙骨质与牙周韧带的同步重建)是口腔再生医学面临的重大挑战。牙源性间充质干细胞(DMSCs)因其多向分化潜能与免疫调节特性,是实现这一目标的理想种子细胞。水凝胶作为细胞载体,其核心优势在于能够通过精确调控的理化性质(如基质硬度、拓扑结构、降解动力学)模拟细胞外基质,构建主动调控干细胞命运的力学与生化微环境。本文系统综述了载DMSCs水凝胶在牙周组织修复中的应用与研究进展。文章首先分析了不同水凝胶体系的材料学特性,进而重点阐述了水凝胶通过基质硬度等力学属性调控DMSCs分化的具体分子机制:刚性水凝胶通过激活整合素-粘着斑激酶(FAK)-蛋白激酶B(Akt)哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号轴驱动成骨分化;诱导细胞骨架重构,促使Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)去磷酸化并发生核转位,启动成骨相关基因的转录;同时稳定Wnt/β连环蛋白(Wnt/β-catenin)并激活Wnt信号通路,上调Runt相关转录因子2(Runx2)及Osterix等成骨关键转录因子的表达。此外,作为生物活性因子的程序化控释载体,水凝胶能够选择性激活Smad家族蛋白(Smad)信号亚型,促成骨因子特异性激活Smad1/5/8通路,促牙周韧带形成因子则激活Smad2/3通路,从而实现DMSCs向成骨、成牙骨质或成纤维谱系的精准定向分化。目前,该领域面临的关键科学问题包括水凝胶性能在再生过程中的动态适配、复杂口腔微环境(如微生物、机械力、炎症)的稳定控制、干细胞高效定向分化策略以及临床转化可行性。未来研究方向将集中于开发智能响应型水凝胶、结合3D生物打印技术构建个性化仿生支架,以及设计具有免疫调控功能的复合材料体系,以期最终实现牙周组织的结构与功能一体化再生。

关键词： 破壁灵芝孢子粉   斑马鱼   免疫功能   多糖   总三萜  

摘要： 该研究以感官、水分、浸出物、多糖含量、总三萜含量为考察指标,分析4个不同厂家的破壁灵芝孢子粉产品的质量差异;构建酒石酸长春瑞滨和荧光微球混合液诱导的斑马鱼免疫抑制模型,设置正常对照组、模型对照组、阳性对照组以及破壁灵芝孢子粉低、中、高剂量组,使用荧光显微镜观察各组斑马鱼体内荧光微球残留量,探讨不同厂家破壁灵芝孢子粉对斑马鱼免疫功能的影响。结果表明,不同厂家产品的水分指标均符合相应标准要求,感官、浸出物、多糖含量、总三萜含量具有明显差异;各厂家破壁灵芝孢子粉产品均具有促进巨噬细胞吞噬功效,且各产品不同剂量组促进巨噬细胞吞噬功能呈非线性关系。