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关键词： 乙醇梭菌蛋白   生长猪   氨基酸消化率  

摘要： 该文旨在分析乙醇梭菌蛋白在生长猪上的氨基酸消化率。选取健康、体重为(38.2±4.4)kg的安装了“T型瘘管”的生长猪16头,试验共7 d(5 d预饲期+2 d试验期),试验共2个处理,每个处理组8个重复,分别饲喂乙醇梭菌蛋白配制的SID(标准回肠末端氨基酸消化率)日粮和无氮日粮。结果显示:乙醇梭菌蛋白的粗蛋白质为88.57%,总能为5514 kcal/kg。必需氨基酸中赖氨酸、蛋氨酸和苏氨酸的含量分别为8.12%、1.78%和3.73%。乙醇梭菌蛋白的表观回肠末端消化率分别为71%、72%、73%、74%,标准回肠末端消化率分别为82%、87%、85%、89%。

关键词： 茯苓多糖   非酒精性脂肪肝   大鼠   脂质沉积   总胆固醇   甘油三酯   低密度脂蛋白胆固醇  

摘要： 目的:研究分析茯苓多糖(PCP)调控SREBP1信号通路对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏脂质沉积的影响。方法:SFP雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组(100、300 mg/kg),喂养6周高脂饲料建立NAFLD模型。模型组灌胃蒸馏水,低剂量组、高剂量组大鼠灌胃不同剂量PCP,连续给药8周,处死并取出大鼠肝脏组织,体外进行HepG2细胞培养,游离脂肪酸诱导NAFLD细胞模型,低剂量组和高剂量组加入不同浓度的茯苓多糖培养24 h。检测各组大鼠血脂、抗氧化应激指标,行细胞油红O染色。荧光定量PCR检测各组大鼠肝组织中固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)的表达。结果:与对照组比较,模型组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙二醛(MDA)表达水平升高(均P<0.05),模型组HDL-C、SOD、GSH-Px水平、SREBP1信号通路相关蛋白表达降低(均P<0.05)。与模型组、低剂量组比较,高剂量组TG、TC、LDL-C、MDA水平下降,HDL-C、SOD、GSH-Px水平升高(均P<0.05)。油红O染色后,模型组比对照组细胞内红色脂滴的数量增多,与模型组比较,低剂量组、高剂量组细胞内红色脂滴数量减少(P<0.05)。结论:茯苓多糖能够降低肝脏内脂质积累,改善血脂水平,可有效改善体内氧化应激反应,其作用机制为调节SREBP1脂质合成相关信号通路。

关键词： 肾移植   缺血-再灌注损伤   人脐带间充质干细胞   外泌体   细胞焦亡   激活转录因子3   Toll样受体4   核因子-κB  

摘要： 目的探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体(hucMSC-Exo)对肾缺血-再灌注损伤(IRI)的保护作用及机制。方法分离并鉴定hucMSC-Exo。建立小鼠肾IRI模型,分为假手术组(Sham组)、IRI组、IRI+hucMSC-Exo组、IRI+hucMSC-Exo+JY-2组、Sham+JY-2组。检测各组小鼠血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理变化,酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清白细胞介素(IL)-1β和IL-18水平,蛋白质印迹法检测激活转录因子3(ATF3)、Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κB、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测ATF3、TLR4、NF-κB信使RNA(mRNA)表达,免疫组织化学检测NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD表达。建立HK-2细胞缺氧/复氧(H/R)模型,分为对照组(Control组)、H/R组、H/R+hucMSC-Exo组、H/R+hucMSC-Exo+JY-2组、Control+JY-2组。蛋白质印迹法检测各组ATF3、TLR4、NF-κB蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应检测NLRP3、GSDMD、Caspase-1 mRNA表达水平。结果成功分离并鉴定出hucMSC-Exo。与Sham组比较,IRI组小鼠血清Scr和BUN水平升高,肾小管损伤评分升高,ATF3、TLR4、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD蛋白表达水平升高,ATF3、TLR4、NF-κBmRNA表达水平升高;与IRI组比较,IRI+hucMSC-Exo组血清Scr和BUN水平下降,肾小管损伤评分下降,ATF3蛋白表达水平升高,TLR4、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD蛋白表达水平下降,ATF3 mRNA表达水平升高,TLR4、NF-κB mRNA表达水平下降;与IRI+hucMSC-Exo组比较,IRI+hucMSC-Exo+JY-2组Scr和BUN水平升高,肾小管损伤评分升高,ATF3蛋白表达水平下降,TLR4、NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD蛋白表达水平升高,ATF3 mRNA表达水平下降,TLR4、NF-κB mRNA表达水平升高(均为P<0.05)。与Control组比较,H/R组ATF3、TLR4及NF-κB p65蛋白表达水平升高,NLRP3、Caspase-1和GSDMD mRNA表达水平升高;与H/R组比较,H/R+hucMSC-Exo组ATF3蛋白表达水平升高,TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平下降,NLRP3、Caspase-1和GSDMD mRNA表达水平下降;与H/R+hucMSC-Exo组比较,H/R+hucMSC-Exo+JY-2组ATF3蛋白表达水平下降,TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平升高,NLRP3、Caspase-1和GSDMD mRNA表达水平升高(均为P<0.05)。结论HucMSC-Exo可通过上调ATF3表达,负向调控TLR4/NF-κB信号通路,进而抑制细胞焦亡,最终减轻肾IRI。

关键词： 鹌鹑   INHA基因   基因克隆   生物信息学分析   组织表达  

摘要： 为了探究栗羽鹌鹑INHA(Inhibin Alpha Subunit)氨基酸序列特征以及INHA在不同组织的表达量变化,试验对栗羽鹌鹑INHA基因CDS区进行PCR克隆并使用在线软件分析氨基酸序列,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测鹌鹑组织INHA基因在不同组织中的表达水平。结果显示:获得了栗羽鹌鹑INHA基因CDS区2条序列,命名为LYAC-1与LYAC-2;全长990 bp,编码329个氨基酸残基,与Ensembl中鹌鹑INHA CDS序列相比,LYAC-1存在14处碱基突变,LYAC-2存在1处碱基突变;同源性比对结果显示,栗羽鹌鹑INHA基因编码的氨基酸与鸡同源性最高;系统进化树显示,栗羽鹌鹑与鸡INHA基因亲缘关系最近;LYAC-1蛋白分子式为C_(1600)H_(2515)N_(447)O_(467)S_(17),分子质量为36030.31 Da,LYAC-2蛋白分子式为C_(1601)H_(2519)N_(449)O_(466)S_(17),分子质量为36058.36 Da;二者等电点均为6.26,属于酸性蛋白;INHA蛋白属不稳定亲水蛋白,主要位于细胞外,不含跨膜结构域,信号肽切割位点位于第16~17位氨基酸,存在32处磷酸化位点及14处糖基化位点;蛋白二级结构以无规则卷曲为主;蛋白互作分析显示INHA与KLHL23、BMP15等之间有紧密联系。qRT-PCR结果表明,栗羽鹌鹑各组织中均有INHA基因表达,在睾丸中的表达量最高,显著高于其他组织。研究结果为进一步探究INHA基因在栗羽鹌鹑繁殖性能中的作用提供了一定的理论依据。

关键词： 间充质干细胞   肿瘤治疗   肿瘤微环境  

摘要： 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)能黏附于塑料表面,表达CD73、CD90和CD105等特异性分化簇;在体外可分化为成骨、软骨或脂肪细胞;且不表达CD14、CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR等分子标记。MSCs在肿瘤治疗中扮演着复杂的角色,既是潜在的“盟友”,也是“敌人”。一方面,MSCs能够通过调节信号通路和免疫反应抑制肿瘤生长和转移,发挥抗肿瘤效应;另一方面,MSCs也可能增强肿瘤细胞的侵袭性、转移能力和血管生成,从而促进肿瘤发展。MSCs对肿瘤的影响取决于其自身特性、肿瘤微环境以及信号通路的激活或抑制。因此,在肿瘤治疗中,需综合考虑这些因素,通过优化MSCs的来源和特性、调控肿瘤微环境、调控信号通路等策略,将MSCs从潜在的“敌人”转化为“盟友”。本文综述了MSCs的特征、在肿瘤治疗中的双重作用及其机制,并提出“化敌为友”的思路和策略,以实现基于MSCs的肿瘤治疗的突破性进展,并安全有效地应用于临床治疗。

关键词： 积雪草   CaCYP2基因   基因克隆   原核表达   亚细胞定位  

摘要： 目的克隆积雪草Centella asiatica中参与三萜皂苷C-6β羟基化修饰的细胞色素P450基因(CaCYP2),系统解析其分子特征、组织表达模式及亚细胞定位,并实现原核可溶性表达,为阐明其在三萜生物合成中的功能提供实验基础。方法从积雪草c DNA中克隆CaCYP2全长序列,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR检测其组织特异性表达情况;利用无缝克隆技术构建酵母双杂交载体、原核表达载体及亚细胞定位载体,分别进行自激活检测、重组蛋白表达及烟草瞬时定位分析。结果成功克隆Ca CYP2基因,其开放阅读框(open reading frame,ORF)1443 bp,编码480个氨基酸,属于CYP716家族,命名为CYP716E116。预测蛋白相对分子质量为54425.09,理论等电点8.98,呈亲水性,含典型CYP90-like保守结构域及1个跨膜结构域。亚细胞定位结果显示,该蛋白定位于内质网。qRT-PCR分析表明,CaCYP2在叶片中表达量最高,是根中表达量的6.2倍(P<0.0001),与其他组织存在显著差异;原核表达结果表明,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导后获得相对分子质量约为91300的可溶性重组蛋白(含40300的标签蛋白);酵母双杂交实验证实,酵母双杂交载体无自激活活性,可用于后续互作蛋白筛选。结论成功克隆CaCYP2基因,明确其分子结构特征、组织表达特异性及内质网定位,证实其可在原核系统中进行可溶性表达,为深入研究其催化功能及在积雪草三萜皂苷生物合成途径中的调控作用奠定重要的基础。

关键词： 黄精多糖   罗伊氏粘液乳杆菌   后生元   肠道菌群   认知障碍  

摘要： 后生元在加工稳定性、贮藏稳定性及食用安全性方面优于活菌及其合生元。滇黄精(Polygonatum kingianum *** Hemsl.)是我国传统药食同源植物,其富含的黄精多糖(Polygonatum kingianum polysaccharides,PKP)不仅自身具有降糖降脂的生物活性,还可作为益生菌的优质碳源。该研究将PKP与一株源自健康人粪便且具有显著抗炎效果的罗伊氏粘液乳杆菌WX-94(Limosilactobacillus reuteri WX-94)共培养,经灭活后制备后生元(***),系统评价其对长期高脂高蔗糖饮食诱导的大鼠认知功能障碍的改善作用及机制。结果显示,经过8周干预,***能有效缓解HFHS饮食导致的大鼠认知功能下降、海马区炎症浸润及尼氏体损伤,显著改善脂代谢紊乱,降低海马中炎症因子(IL-6、TNF-α、IL-1β)和脂多糖水平,同时提高超氧化物歧化酶和还原型谷胱甘肽含量,减轻脑组织氧化应激损伤,其效果优于合生元(PKP+***)及基于MRS培养基的后生元(***)。此外,***显著抑制海马区Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、髓样分化因子88(MyD88)基因表达,并提升脑源性神经营养因子(BDNF)水平,还可重塑肠道菌群结构,提高乳杆菌属、鼠李糖乳酪杆菌、普雷沃菌属和格氏乳杆菌等有益菌丰度,降低螺杆菌属和颤螺菌属等条件致病菌比例,促进短链脂肪酸(尤其是丁酸和丙酸)生成。相关性分析表明,***对肠道菌群与代谢产物的调节与行为学及海马指标显著相关。研究揭示了黄精多糖协同罗伊氏粘液乳杆菌后生元在改善西式饮食诱导认知障碍方面的潜力,并证实了黄精多糖增强罗伊氏粘液乳杆菌通过抑制TLR4/NLRP3/MyD88信号通路改善脑源性神经营养因子,重塑肠道菌群并提升短链脂肪酸含量发挥的调控肠脑轴改善认知障碍的功效,为认知健康的营养干预策略提供了新思路。

关键词： PRRSV   铁蛋白   多表位疫苗   核酸疫苗   免疫原性   中和抗体  

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对全球养猪业危害严重,现有疫苗存在免疫效果或安全性不足的缺陷。为提高核酸疫苗的免疫原性,本研究基于PRRSV结构蛋白(GP3、GP4、GP5)和非结构蛋白(NSP2、NSP7、NSP12)的8个B细胞表位,通过柔性连接肽串联,并在N端引入树突状细胞肽(DCpep)、通用T细胞表位PADRE及肠微褶皱细胞肽(Mpep),构建多表位抗原NGP。进一步将铁蛋白(Ft)与NGP融合,构建真核表达质粒pcDNA3.1-NGP-Ft,以评估Ft对DNA疫苗的免疫增强作用。试验前期通过原核表达系统制备重组蛋白MBP-NGP,并免疫小鼠验证其免疫原性。Western blot和间接免疫荧光(IFA)证实NGP及NGP-Ft在细胞中成功表达。小鼠免疫结果显示,pcDNA3.1-NGP-Ft组相较于pcDNA3.1-NGP组,ELISA抗体效价、中和抗体水平、脾淋巴细胞增殖能力及γ干扰素(IFN-γ)分泌量均增强(P<0.05)。淋巴结生发中心分析表明,Ft融合抗原可延长淋巴结内抗原滞留,促进免疫应答。本研究首次证实Ft可有效提升PRRSV多表位DNA疫苗的体液与细胞免疫水平,为新型纳米颗粒疫苗的研发提供了理论依据。

关键词： 帕米尔牦牛   FGF10基因   基因克隆   组织表达  

摘要： 本研究旨在探究牦牛FGF10基因的结构和功能,并分析其在帕米尔牦牛8个组织中的表达规律。以帕米尔牦牛肌肉组织cDNA为模板,采用PCR技术克隆FGF10基因的CDS区,通过生物信息学方法对该基因序列进行分析,结合qRT-PCR对帕米尔牦牛8个不同组织样本的FGF10基因表达水平进行定量检测。结果表明,帕米尔牦牛FGF10基因的编码序列(CDS区)长度为642 bp,共编码213个氨基酸。同源性比对结果表明,帕米尔牦牛与野牦牛和家牛的相似性最高,为100%;与小家鼠的相似性最低,为90.1%。生物信息学分析结果显示,帕米尔牦牛FGF10蛋白的分子式为C_(1049)H_(1639)N_(299)O_(307)S_(13),原子总数、不稳定指数和总平均亲水指数分别为3307、45.07和-0.358,表明该蛋白为稳定性亲水蛋白。信号肽分析证明FGF10蛋白属于分泌型蛋白,且含跨膜螺旋结构,经亚细胞定位分析发现,该蛋白主要分布在胞外环境中。其分子结构中包含2个N糖基化位点,同时存在47个潜在磷酸化位点。此外,FGF10蛋白的二级结构以无规则卷曲为主要构成形式,与FGFR1、FGFR2和FLT1等蛋白存在互作关系。FGF10基因在8个组织中的表达规律分析结果表明,不同组织间的表达存在差异,其中,背最长肌组织中的相对表达量最高,显著高于其余7个组织(P<0.01)。

关键词： 水稻   独脚金内酯   生长素   矮化多蘖   OsCCD8/DMT1  

摘要： 分蘖数是调控水稻产量的关键农艺性状之一。本研究获得1个新的矮化多分蘖自然突变体dmt1(dwarf and multi-tiller 1)。表型分析显示, dmt1的分蘖数高达(155.07±18.53)个,是野生型HY67的12.64倍;同时,其株高、穗长、结实率、粒长、千粒重等农艺性状均显著低于HY67。组织切片结果表明, dmt1分蘖数增多的表型可能源于分蘖芽的提早伸长。遗传学分析证实, dmt1的矮化多分蘖表型受1个主效隐性基因控制。通过图位克隆和基因沉默技术,成功克隆得到DMT1基因。该基因是独脚金内酯(SLs)合成通路中的关键基因D10/OsCCD8(LOC_Os01g54270)发生点突变产生的新等位变异,编码产物仅包含OsCCD8蛋白N端的279个氨基酸。RT-qPCR结果显示, SLs和IAA通路相关基因在dmt1突变体与野生型HY67中的表达量存在显著差异。此外,外源施加IAA可以显著诱导DMT1基因的表达,并提高SLs合成途径中的中间产物CL和5-DS的含量。上述结果说明, DMT1是介导IAA与SLs通路互作的关键节点。本研究结果丰富了D10/OsCCD8基因的功能认知,为解析其蛋白结构域的功能提供了理想材料,对水稻高产育种具有重要理论指导意义。