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关键词： 盐碱土壤   胞外多糖   结构特征   官能团   单糖组成  

摘要： 【目的】旨在探究产胞外多糖菌株对盐碱土壤植物的促生改土作用,为盐碱地微生物修复及高效生物菌剂开发提供参考依据。【方法】以前期分离自盐生植物根际土壤的泛菌(Pantoea vagans)MQ A0和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MQ 7-6为试验材料,通过接种试验评估其对盐碱土栽培玉米的促生效果及土壤团聚体的影响。同时采用红外光谱(FT-IR)、高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、离子色谱(IC)及核磁共振(NMR)等技术对比分析其粗多糖结构特征。【结果】(1)接种MQ A0和MQ 7-6发酵液和粗多糖提取液均能促进盐碱土玉米生长,并促进土壤团聚体形成,其中粗多糖提取液对团聚体质量分数和平均重量直径的提升效果优于发酵液。(2)MQ A0所产粗多糖EPS-P1和MQ 7-6所产粗多糖EPS-B1官能团中均含有羟基(-OH)、甲基(-CH3)或亚甲基(-CH_(2)-)基团、硫酸基团和吡喃糖环结构,EPS-P1分子量小于EPS-B1,但均为大分子。(3)2种粗多糖单糖组成相似但比例不同,EPS-P1由11种单糖组成,以甘露糖占比最高,糖苷键构型为α型,而EPS-B1由7种单糖组成,以葡萄糖占比最高,糖苷键构型为α型和β型混合物。【结论】泛菌(Pantoea vagans)MQ A0和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)MQ 7-62株产胞外多糖菌株能促进盐碱环境中植物生长、改良土壤,其分泌的粗多糖结构差异明显,可为后续微生物多糖功能活性研究及应用提供数据支撑。

关键词： 龙胆多糖   脂多糖   急性肺损伤   髓样分化蛋白88   细胞凋亡  

摘要： [目的]探索龙胆多糖对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的肺保护作用及相关机制。[方法]随机将40只小鼠分为空白对照组(NC组)、模型组(LPS组)、龙胆多糖溶液低剂量组(GSPL组)、龙胆多糖溶液高剂量组(GSPH)、阳性对照组(DEXA组)。对GSPL组和GSPH组小鼠,分别灌胃8 mg·kg^(-1)·d^(-1)和32 mg·kg^(-1)·d^(-1)龙胆多糖溶液;DEXA组小鼠灌胃2 mg·kg^(-1)·d^(-1)地塞米松溶液;NC组和LPS组灌胃同体积蒸馏水。在给药8 d时,除NC组外,其余各组小鼠均一次性腹腔注射脂多糖(10 mg·kg^(-1)),以建立急性肺损伤模型。检测小鼠血液样本中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)水平,测定肺组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)含量。对小鼠肺组织进行苏木精-伊红染色,观察肺组织的相关病理变化。免疫印迹法检测小鼠肺组织髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子κB抑制蛋白(IκBα)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤-2相关X(Bax)蛋白表达水平。[结果]与LPS组相比,DEXA组、GSPH组和GSPL组的TNF-α和IL-1水平均显著下降;DEXA组、GSPH组和GSPL组的SOD含量显著升高,MDA含量显著降低,MPO含量显著降低;对不同处理组小鼠肺组织切片观察发现,在LPS组中,有大量炎细胞浸润,有明显炎症表征,与LPS组相比,DEXA组、GSPH组和GSPL组的肺组织中上述症状有明显改善;通过免疫印迹法检测发现,与LPS组相比,DEXA组、GSPH组和GSPL组中MyD88、IκBα和Bax蛋白表达水平均呈降低趋势,而Bcl-2蛋白表达水平呈升高趋势,差异均具有统计学意义。[结论]GSP可以通过调控MyD88通路改善LPS诱导的小鼠ALI,通过调控线粒体介导的内源性细胞凋亡通路关键蛋白的表达平衡,抑制该通路的异常激活,进而可能减少ALI所致肺组织的异常细胞凋亡,从而起到一定的肺保护作用。

关键词： 牛结节性皮肤病病毒   dUTPase   多克隆抗体  

摘要： 脱氧鸟苷三磷酸焦磷酸酶(dUTPase)作为核苷酸代谢的关键调控因子,在自然界中广泛分布,多种病毒基因组编码的dUTPase被报道具有独特的生物学功能。本研究旨在探究牛结节性皮肤病病毒(LSDV)编码的dUTPase具体功能。基于LSDV/XJ/201901毒株基因序列,采用mRNA疫苗技术构建脂质纳米颗粒(LNP)包装的LSDV dUTPase mRNA(LNP-dUTPase mRNA),将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗LSDV dUTPase的多克隆抗体。经免疫印迹试验与间接免疫荧光试验验证,所获抗体可特异性识别细胞外源表达蛋白。本研究创新性地通过mRNA免疫技术制备出抗dUTPase蛋白多克隆抗体,为解析LSDV dUTPase的生物学功能提供了关键试验材料。

关键词： 鲍曼不动杆菌   生物被膜   蛋白质组学   动态变化   代谢重编程  

摘要： 目的本研究旨在动态解析鲍曼不动杆菌生物被膜发育的分子适应机制,为开发阶段特异性的抗生物被膜策略提供理论依据和潜在靶点。方法采用基于质谱的定量蛋白质组学技术,系统比较鲍曼不动杆菌生物被膜发育不同阶段的全局蛋白表达谱。结果蛋白组时序分析显示,在定植初期(0~24 h),细菌下调核糖体合成与有氧代谢,激活信号传导系统以适应附着;在快速生长期(24~48 h),细菌启动无氧呼吸,并增强毒力因子磷脂酶C、绿脓菌素铁获取和DNA修复能力,同时抑制氨基酸合成进入持留状态;至成熟期(48~72 h),尿素代谢通路被显著激活以应对微环境酸化和氮源匮乏,同时抑制细胞壁合成等生长活动,进入稳定维持期;在脱落期(72~96 h),细菌通过提升酸性磷酸酶和抗氧化能力,大幅下调核糖体及耗能分泌,形成高度耐受表型。同时,生物被膜发育全程都维持泛醌/萜醌合成与DNA修复通路,并减弱外源芳香族降解,集中资源来保证能量与遗传稳定性。结论时序代谢重编程是鲍曼不动杆菌生物被膜实现结构稳定和高度耐受的内在驱动力。本研究揭示的阶段性关键通路和蛋白为靶向生物被膜特定发育阶段的精准干预提供了新靶标。

关键词： 裂解性多糖单加氧酶   生物信息学分析   分子进化   结构域  

摘要： 裂解性多糖单加氧酶(lytic polysaccharide monooxygenase,LPMO)能够催化纤维素等多糖中糖苷键的氧化裂解,在秸秆等农业废弃物的资源化利用中起到关键作用。为进一步探究LPMO的构效关系,利用生物信息学分析技术系统研究了UniProtKB数据库包含的人工校对注释且经过实验验证的115个LPMO。根据其来源统计发现AA9家族有101个,占比高达87.8%。依据遗传距离与聚类关系进行分子进化树分析获得6个组,所有AA9家族LPMO都分布在GroupⅠ—GroupⅤ中,其他3个家族均聚集在GroupⅥ中。分析34个来源于曲霉属(Aspergillus)的LPMO,发现这些蛋白质都具有至少2个铜离子结合位点,且含有5个100%高度保守的序列位点。研究来源于曲霉属LPMO的基序与结构域发现:模体(motif)组成高度相似的LPMO在进化发育关系上较为亲近,但motif的排列顺序不同也会影响催化活性;AA9家族LPMO催化结构域主要具有纤维素降解酶活性,而AA13家族催化结构域主要具有淀粉降解活性。本研究为进一步探明LPMO构效关系提供了理论基础。

关键词： β2-微球蛋白(β2-MG)   单克隆抗体   临床诊断   双抗体夹心酶联免疫吸附测定法   化学发光酶免疫测定法   胶体金免疫层析法  

摘要： 制备抗人β2-微球蛋白(Beta-2-microglobulin,β2-MG)单克隆抗体,建立快速、准确的β2-MG定性、定量检测方法。原核表达重组β2-MG并进行纯化后用于BALB/c小鼠免疫,通过杂交瘤技术制备抗人β2-MG单克隆抗体,通过双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)进行筛选,建立基于化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoasssay,CLEIA)的检测平台,将其应用于临床血清β2-MG的测定,并初步建立可快速检测β2-MG的胶体金免疫层析法。结果表明,基于5H7/6H9-AP抗体对构建的CLEIA检测体系线性范围为0.14~120.00μg/L(可扩展至60.00 mg/L),所开发的CLEIA与医院使用的胶乳增强免疫比浊法相比,两种方法具有良好的一致性和较高的相关性,相关系数R^(2)为0.96且P<0.0001。本研究建立的胶体金免疫层析法检测重组β2-MG的最低限度可达到0.20 mg/L,表现出较好的敏感性,表明筛选的抗人β2-MG单克隆抗体及建立的定量和定性免疫检测方法具有临床诊断应用的潜力。

关键词： 无菌PCR法   细菌   真菌   干细胞制剂  

摘要： 研究一种干细胞制剂无菌快速检测的PCR方法。通过探索6种细菌和2种真菌PCR检测方法,并将其运用到干细胞制剂检测中,对其适用性、检测限、干细胞检测样品类型进行探索,研究无菌PCR方法对直接接种法和薄膜过滤法的替代可行性。结果显示,8种菌原液均能检测100 CFU/m L;但对干细胞制剂进行检测,高浓度(1×10^(6)cells/mL)样品中白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌未见明显条带;低浓度细胞制剂(1×10^(5)cells/mL)中,除绿脓假单胞菌未见明显电泳条带,其余7个菌均能检测到;对干细胞制剂中间产物(培养上清和制备上清)进行检测,8种菌均能在100 CFU/m L以内被检出。无菌快检PCR方法初步建立,缩短检出时间。但高浓度细胞可干扰细菌的检出率,低浓度干细胞制剂及培养上清、制备上清均可运用该方法进行检测。

关键词： 黑木耳   多糖   提取工艺   铜绿假单胞菌  

摘要： 以黑木耳作为实验材料,采用单因素试验和正交实验法,优化黑木耳多糖的复合酶辅助提取工艺,并测定其对铜绿假单胞菌的抑制效果.结果表明:黑木耳多糖最佳提取工艺为酶浓度5%,温度55℃,时间75 min,料液比1:70 g/mL.通过微量肉汤稀释法测定黑木耳多糖对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度为50 mg/mL,表明其对该细菌具有显著抑制作用;进一步通过结晶紫生物膜法检测,证实黑木耳多糖可有效抑制铜绿假单胞菌生物膜的形成.因此黑木耳多糖可作为功能性食品辅助防治铜绿假单胞菌感染.研究可为解决该细菌在临床中常见的耐药性问题提供重要的参考价值.

关键词： 黄芪多糖   生产性能   抗氧化   免疫功能   奶牛  

摘要： [目的]探讨黄芪多糖对奶牛生产性能、抗氧化能力和免疫功能的影响,为提高奶牛养殖效益及健康管理提供理论依据。[方法]选取72头胎次、泌乳量及体况相似的奶牛,随机分为4组:对照组(CON)、低剂量组(APS 1.5)、中剂量组(APS 3.0)和高剂量组(APS 4.5)。对照组饲喂基础日粮,其余三组在基础日粮中分别添加1.5、3.0、4.5 g/kg黄芪多糖。预试期15 d,正试期60 d,期间监测并分析产奶量、乳成分、抗氧化指标及免疫指标。[结果]APS 3.0组日产奶量显著提高,乳蛋白率、乳脂率及干物质含量有所改善,体细胞数显著降低;各试验组血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高,丙二醛(MDA)含量显著降低;添加黄芪多糖组免疫球蛋白IgA、IgM含量显著提高,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低,且中剂量组效果最优。[结论]黄芪多糖能显著提升奶牛生产性能,增强抗氧化能力和免疫功能,其中3.0 g/kg添加量效果最佳,具有较高的养殖应用价值。

关键词： 水凝胶   多糖   重金属离子   吸附   吸附机理  

摘要： 以玉米淀粉(St)和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为原料,丙烯酰胺(AM)、丙烯酸(AA)和2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)为接枝单体,合成了多糖基水凝胶SCAS。仅以St为原料,采用同样的接枝单体,合成了另一种多糖基水凝胶StAS。将两种水凝胶用于溶液中Cu^(2+)的吸附,比较两者的吸附性能。实验发现,由于CMC-Na的引入,SCAS的吸附性能优于StAS。对两种水凝胶的吸附动力学和吸附等温线数据进行拟合,结果表明,两种水凝胶对Cu^(2+)的吸附过程都符合准二级动力学模型和Langmuir模型,属于化学吸附和单分子层吸附。在25℃时,StAS的吸附容量为85.47 mg·g^(-1),SCAS为99.90 mg·g^(-1)。以SCAS作为Cu^(2+)吸附剂,适用于4.0Cd^(2+)>Ni^(2+)。对吸附机理的研究表明,SCAS对Cu^(2+)的吸附主要通过配位作用。SCAS具有较好的循环使用性,经过4次再生后,Cu^(2+)去除率仍可达到83.2%。研究结果可为多糖基水凝胶的研究开发提供思路和借鉴。