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关键词： 大口黑鲈   IgM单克隆抗体   ELISA   诺卡氏菌   质谱分析  

摘要： 目的:制备抗大口黑鲈IgM单克隆抗体,并利用该抗体筛选和分析感染诺卡氏菌的鱼体血清中IgM结合蛋白,为疫苗研发及免疫防控策略提供依据。方法:基于大口黑鲈IgM重链的保守序列设计多肽抗原,并偶联载体蛋白KLH后免疫BALB/c雌性小鼠。细胞融合与亚克隆筛选获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。间接ELISA测定腹水抗体效价,并利用Western blot检测人工感染鰤鱼诺卡氏菌的大口黑鲈血清中IgM。液质联用技术(LC-MS/MS)分析与IgM结合的细菌免疫原蛋白。结果:成功筛选出3株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(A9A12、A9H2和A12C3),传至第8代时仍能特异性识别IgM。其中,A9A12与A9H2的腹水效价达1∶7.29×10^(5)(间接ELISA)。Western blot表明制备的单克隆抗体可识别感染鱼体血清中的IgM。LC-MS/MS分析显示,单抗A9A12在130~170 kD蛋白条带中检测到40种与IgM结合的诺卡氏菌蛋白,这些蛋白涉及多个重要生物功能,包括转录与翻译、代谢、脂肪酸与多聚体合成、DNA与染色体维护、酶活性、核酸相关过程以及物质转运与能量生成等。进一步比对分析发现,该条带中有4种蛋白可能是关键免疫原蛋白,分别为DNA导向的RNA聚合酶亚基β'、α-酮戊二酸脱羧酶、染色体分配蛋白Smc和钴胺素生物合成蛋白CobN。结论:本研究成功制备了高效价、稳定性良好的抗大口黑鲈IgM单克隆抗体,并利用该抗体筛选出诺卡氏菌感染相关免疫原蛋白,不仅为大口黑鲈诺卡氏菌病疫苗开发和诊断工具提供了重要线索,还为抗体疗法和细菌感染机制深入研究奠定了基础。

关键词： 西藏赤芝   多糖   超声辅助提取   提取工艺优化   降糖活性  

摘要： 西藏自治区林芝地区独特的高原生态环境孕育了品质良好的灵芝资源.林芝灵芝作为国家地理标志产物,其富含的多糖、三萜等活性物质赋予其独特的保健功效.多糖作为灵芝的主要活性物质之一,使用传统的热水萃取存在效率低、高耗能等问题,而物理辅助技术如超声辅助提取具备绿色高效、条件温和的特点,在活性成分提取领域展现出显著优势.研究以西藏自治区林芝地区人工栽培的赤芝作为实验原料,采用超声辅助提取技术,以赤芝多糖提取率设定为衡量指标,通过单因素实验与正交试验优化提取条件,并探究所得多糖对α-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶活性的抑制率.超声辅助提取赤芝多糖的最优条件为:料液比1∶10、超声功率200 W、提取温度70℃以及提取时间40 min,在此条件下,多糖提取率可达2.38%.此外,赤芝多糖粗提物对α-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶活性的抑制率呈现出明显的浓度依赖性,在粗多糖浓度为1.0 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶活性抑制率分别为72.9%和80.8%,这充分表明赤芝多糖具备良好的降糖活性.本研究不仅为西藏赤芝资源的高值化利用提供关键技术支撑,更为天然降糖药物研发开辟新路径.

关键词： 干细胞   类器官   烧伤   创面修复   皮肤再生  

摘要： 烧伤可致持久的生理与心理损害。大面积深度烧伤仍是临床难题,传统治疗在皮肤结构与功能的同步重建方面受限。再生医学为此提供了新路径,其中干细胞与皮肤类器官在创面闭合、皮肤再生及皮肤附属器重建中展现出显著潜力。本综述系统梳理了相关研究进展与应用,并引用关键研究案例(如过表达生长停滞特异性蛋白6的骨髓间充质干细胞加速创面愈合、诱导多能干细胞构建含毛囊类器官等)进行说明。现有证据表明,干细胞可通过促血管生成、调控炎症、增强细胞增殖与迁移以及抑制瘢痕形成等机制加速创面愈合;皮肤类器官因可模拟多层次结构与功能,支持体外建模与移植修复。同时,文中还评估了临床转化的关键瓶颈,包括干细胞/类器官的致瘤性、免疫原性、规模化生产与标准化难题,以及对相关伦理法规的挑战。展望未来,干细胞—类器官协同策略与智能生物材料、三维生物打印的集成,有望推动烧伤修复的精准化与个体化,实现功能性皮肤再生。

关键词： 菊花多糖   提取   纯化   结构解析   体外抗氧化活性   体外免疫调节活性  

摘要： 为探讨菊花多糖的结构特性、生物活性及其潜在应用价值,采用水提醇沉法提取菊花多糖,并通过苯酚硫酸法和考马斯亮蓝法测定其多糖与蛋白质含量,利用光谱和色谱技术分析菊花多糖的结构特征,结合自由基清除试验和酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试验,评估其体外抗氧化能力及对RAW 264.7细胞免疫因子分泌的影响。研究结果表明:菊花多糖中总糖和蛋白质含量分别为96.72%±0.13%和2.85%±0.34%,多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和甘露糖组成,物质的量比为0.0522∶0.1127∶0.7999∶0.0119∶0.0232,分子质量为45.253 kDa,多分散系数为1.403;红外光谱和核磁共振波谱分析证实,菊花多糖含有β-糖苷键和α-糖苷键,并具有吡喃糖构型;体外抗氧化试验显示,在5 mg/mL下,菊花多糖对DPPH和ABTS自由基的清除率分别为75.48%±3.09%和99.11%±2.19%,对超氧阴离子和羟自由基的清除率分别为47.88%±1.94%和56.59%±1.37%;菊花多糖对RAW 264.7细胞无毒性,在5 mg/mL时可显著促进RAW 264.7细胞分泌NO、TNF-α、IL-6和IL-1β,分泌量分别为(91.29±6.62)μmol/L、(467.89±14.73)ng/L、(51.21±1.74)pg/L和(61.63±30.70)ng/L。本研究表明菊花多糖具有显著的抗氧化和免疫调节活性。

关键词： 单宁酸   耐甲氧西林金黄色葡萄球菌   TMT蛋白质组学   抗菌机制  

摘要： 目的本研究采用串联质量标签(tandem mass tag,TMT)定量蛋白质组学探讨单宁酸对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抑菌机制。方法药敏试验首先采用肉汤微量稀释法测定单宁酸对MRSA的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC);采用TMT定量蛋白组学技术研究单宁酸作用后MRSA差异表达的蛋白,随后应用qRT-PCR方法对随机选取的差异表达蛋白进行验证。再利用软件对差异表达蛋白进行GO和KEGG pathway富集分析及蛋白相互作用(PPI)分析,筛选富集分析及蛋白相互作用分析排名靠前的核心蛋白进行分子对接,以验证单宁酸与MRSA中关键蛋白的相互作用。结果单宁酸的MIC为0.625 mg/mL,MBC为1.25 mg/mL。在1/2 MIC单宁酸干预作用下,共鉴定到差异表达蛋白208个,其中上调蛋白127个,下调蛋白81个。GO分析显示,差异表达蛋白亚细胞结构定位主要是:细胞质占55.29%、未知细胞成分占21.63%,细胞膜占9.13%、细胞外基质占8.65%、细胞壁占5.29;qRT-PCR结果显示,随机筛选的差异蛋白对应的基因(glnA、ribD、clpB、gap和lukE)转录水平与组学数据一致(P<0.05);KEGG pathway富集分析发现,五倍子单宁酸干预后,单宁酸能够显著影响MRSA的氮代谢和碳代谢途径,包括嘧啶代谢、嘌呤代谢、组氨酸代谢、精氨酸生物合成、甲烷代谢、柠檬酸循环等;PPI分析显示相互作用蛋白主要集中在核苷酸生物合成和DNA复制修复,随后选取排名靠前的蛋白与单宁酸进行分子对接分析,结果显示单宁酸与核心靶点蛋白InfB、RplB、RplK、RpIO具有较强的结合,其中与RplB的结合最为紧密。结论本研究通过探讨单宁酸对MRSA的抑菌机制,发现单宁酸与参与蛋白质生物合成、核苷酸生物合成和DNA复制修复相关的蛋白能够产生相互作用,尤其是单宁酸与RplB蛋白的相互作用,从而抑制MRSA的生长,为深入研究单宁酸抑制MRSA机制提供依据。

关键词： 米糠多糖   提取工艺   分离纯化   结构特征   功能特性  

摘要： 米糠多糖是一类主要存在于稻谷颖果皮层的复杂杂聚多糖,含有木糖、甘露糖、鼠李糖和半乳糖等多种单糖。米糠多糖具有良好的溶解性和稳定性,能够在多种溶剂中保持其结构和活性,同时表现出优异的热稳定性和酸碱稳定性,因此在食品加工和药物开发领域具有重要的应用潜力。系统论述了米糠多糖的提取、纯化、结构特征及功能活性,旨在为优化提取工艺和深入开展研究提供理论支持。此外,还简要探讨了米糠的综合利用及其在功能性食品中的开发潜力,并指出当前米糠多糖在应用转化方面仍存在一定局限性,未来需进一步加强多组分协同开发,以促进米糠资源的高值化利用。

关键词： 灵芝   灵芝多糖   β-葡聚糖   结构   免疫调节  

摘要： 灵芝作为一种传统的食药用真菌,其主要活性成分灵芝多糖(GLPs)在免疫调节领域受到广泛关注。GLPs的分子质量分布、支链度、构象特征及空间构型与其原料来源、提取分离工艺及纯化方式密切相关,并直接影响其生物活性。β-葡聚糖是GLPs中最常见的结构骨架,其可通过不同的糖残基支链连接形成多种空间构型,进而影响GLPs的免疫调节功能。GLPs通过调节固有免疫和适应性免疫发挥广泛作用,其可通过与模式识别受体(如TLR4、Dectin-1等)结合,激活NF-κB、MAPK、PI3K/Akt等关键信号通路,进而增强巨噬细胞吞噬功能,促进树突状细胞成熟,提高NK细胞的细胞毒活性,调节T、B淋巴细胞增殖与分化,并有效调控细胞因子、趋化因子、免疫球蛋白、补体等免疫分子的分泌。此外,GLPs还可通过调节肠道菌群组成及其代谢产物,影响宿主的“肠道菌群—免疫轴”,从而间接调控机体免疫反应。这种多途径、多靶点的免疫调节特性,使其持续成为研究热点。文章系统综述了GLPs的来源、结构与分子特征,重点探讨了其免疫调节作用机制,并对其在免疫调节方面未来的研究方向进行了展望。

关键词： RRP1B   多克隆抗体   核糖体   核仁   共定位  

摘要： 本研究旨在获得猪源核糖体RNA加工蛋白1B(RRP1B)多克隆抗体并研究其与核糖体及核仁共定位情况。通过RT-PCR技术,扩增IPEC-J2中完整的RRP1B基因,构建pcDNA3.1(+)-RRP1B-His真核表达质粒,经测序鉴定后转染HEK-293T和IPEC-J2,采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot方法检测RRP1B表达情况。利用镍柱亲和层析法纯化带有His标签的重组RRP1B,以His-RRP1B作为免疫原,皮下注射BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。通过Western-blot和IFA试验测定抗体效价,评价免疫原性。同时利用制备的多克隆抗体进行RRP1B与核糖体及核仁共定位试验。结果表明,重组质粒pcDNA3.1(+)-RRP1B-His能够在HEK-293T和IPEC-J2内表达。制备的重组RRP1B免疫小鼠可产生较高水平抗体,抗体效价可达1:2000以上;免疫荧光共定位试验发现RRP1B定位于核仁中,与核糖体没有明显共定位现象。本研究为后续研究RRP1B的生物学功能奠定了基础。

关键词： 蛋白质含量测定   计算机视觉   人工智能   跨学科思维   Python  

摘要： 提出了一种融合计算机视觉与Python编程的高中蛋白质定量实验新方法。该方法利用生成式人工智能辅助学生进行Python代码编写,通过摄像头采集蛋白质与双缩脲试剂的显色反应信息,并将颜色数据量化处理,进而建立线性回归模型并绘制标准曲线,实现蛋白质含量的便捷测定。教学采用任务驱动模式,引导学生通过实验设计、图像采集、编程建模和数据分析,将生物化学知识与信息技术深度融合,有效培养其跨学科建模思维与科学探究素养。

关键词： CiDUF668   表达分析   非生物胁迫   中间锦鸡儿  

摘要： 研究表明,DUF基因与植物应对非生物胁迫有着密切的联系,其中DUF668基因家族目前被发现仅存在于植物当中。本研究从中间锦鸡儿干旱转录组数据库中筛选获得一段具有DUF668结构域的基因序列,命名为CiDUF668,克隆获得的CiDUF668有完整开放阅读框,长1812 bp,编码602个氨基酸;预测其编码蛋白的分子量为67487.92 Da,理论等电点为9.37。将CiDUF668与拟南芥、水稻和蒺藜苜蓿DUF668基因家族成员进行系统发育分析,34个DUF668基因被分为3组,其中CiDUF668在第Ⅲ组。基因结构分析发现,DUF668基因的外显子数量有明显的区别,第Ⅰ、Ⅱ组基因含有1~3个的外显子,而第Ⅲ组的基因含有8~12个的外显子。组织特异性分析显示,CiDUF668在叶片中表达量最高,在根中表达量最低。非生物胁迫下表达分析发现,CiDUF668在脱水和冷胁迫处理下表达量上调,在热胁迫处理后,表达量明显下调。随后构建了CiDUF668基因的植物表达载体,为后续基因功能的研究提供了基础。