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关键词： 肝纤维化   间充质干细胞   外泌体  

摘要： 肝纤维化是肝损伤后异常修复的核心病理过程,是发展为肝硬化和肝细胞癌的关键环节,其发生涉及肝细胞损伤、慢性炎症、肝星状细胞活化及细胞外基质过度沉积等复杂病理过程。肝纤维化的早期临床干预主要为消除原发病因,如抗病毒、代谢调节治疗等,但面临病因难以消除以及耐药性等局限性;疾病进展晚期则依赖于肝移植,其受限于供体器官短缺以及终身免疫抑制治疗的需求,因此开发能够高效阻断乃至逆转肝纤维化进程的新型治疗策略已成为迫切的临床需求。间充质干细胞来源的外泌体(mesenchymal stem cell-derived exosome, MSC-Exo)作为一种新兴的无细胞治疗方式,可通过递送生物活性物质,如miRNA、蛋白质等抑制炎症反应,抑制促纤维化信号传导,促进肝细胞再生以及调节肝细胞自噬等机制发挥抗纤维化作用。其无细胞特性既可规避干细胞移植的免疫排斥与潜在致瘤风险,同时兼具低免疫原性、高稳定性、良好的生物相容性以及一定的损伤组织归巢能力,在肝纤维化治疗中展现出广阔的应用前景。尽管MSC-Exo在临床前研究中已取得显著进展,但其临床转化仍然面临包括来源异质性、规模化生产、体内靶向递送效率在内的多种挑战。未来,通过标准化生产与质控体系的建立、工程化改造技术的应用、联合治疗策略的探索优化等途径,将有助于提高MSC-Exo治疗的有效性和安全性,进而推动其临床转化并为肝纤维化的精准治疗提供新途径。

关键词： 细花百部   细胞色素P450   基因克隆   生物信息学分析   百部生物碱  

摘要： 细花百部(Stemona parviflora C. H. Wright)是海南特有的珍稀百部物种,在当地黎族和苗族传统医药中具有重要地位,其根部富含结构独特的百部生物碱,极具药用开发价值,但目前其生物合成途径尚不清楚。为解析百部生物碱生物合成的分子机制,本研究从细花百部中克隆了一个细胞色素P450基因SpCYP1。该基因开放阅读框全长1521 bp,共编码506个氨基酸。系统发育分析表明SpCYP1属于CYP76家族,但位于进化树基部形成独立分支;多序列比对证实该蛋白含有P450酶的所有特征性保守基序,N端含有单一跨膜螺旋,属于典型的I型膜锚定P450酶。分子对接模拟表明百部生物碱前体Stemonamide可稳定结合于SpCYP1活性中心附近(结合能为-38.78 kJ/mol)。共表达网络分析共鉴定出341个高度共表达的基因。KEGG注释显示,这些基因的功能主要聚焦于植物-病原互作、MAPK信号转导,以及细胞色素P450催化的外源物质代谢等生物学过程。UPLC-MS/MS检测显示细花百部根中总生物碱相对含量极显著高于茎和叶,RT-qPCR结果表明SpCYP1在根中表达量最高,说明该基因可能参与百部生物碱的生物合成。本研究是百部属植物中首个P450基因的系统研究,为后续解析百部生物碱合成途径及代谢工程改良提供了重要的基因资源。

关键词： 卵孢小奥德蘑   活性物质   提取工艺   栽培基质   抗氧化能力  

摘要： 本研究以9种正交试验设计的基质配方栽培的卵孢小奥德蘑子实体为材料,采用水提醇沉法提取多糖,运用单因素及正交试验优化提取工艺,重点聚焦固液比、提取时间、提取温度和乙醇浓度对多糖得率的影响,并分析不同基质配方对子实体多糖含量及其抗氧化活性的影响。通过测定多糖对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基的清除能力,评价其体外抗氧化活性。研究结果揭示卵孢小奥德蘑多糖最佳提取工艺为固液比1:30 (g/mL)、提取时间4 h、提取温度100 ℃、乙醇浓度95%。在供试配方中,以酒糟55%、棉籽壳20%、麦麸20%、石灰2%、石膏1%、玉米芯2%组成的栽培基质所获子实体多糖得率最高,为20.05%。该多糖表现出良好的抗氧化活性,在加液量分别为0.8 mL、0.8 mL和0.6 mL时,对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基的清除率为87.03%、88.91%和93.77%,清除上述三种自由基的IC50值分别为0.46 mg/mL、0.34 mg/mL和0.15 mg/mL。本研究为卵孢小奥德蘑的高值化开发及功能性栽培提供了理论依据和技术参考。

关键词： 意义未明的克隆造血(CHIP)   心血管疾病   衰老   炎症  

摘要： 意义未明的克隆造血(clonal hematopoiesis of indeterminate potential,CHIP)是一种伴随衰老的体细胞突变,近年研究揭示,CHIP可能是心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的新型独立风险标志物,这一关联在老年人群中更为突出。其通过激活NLRP3炎症小体等髓系促炎通路,加剧慢性炎症,促进动脉粥样硬化、冠心病及心力衰竭的发展。临床研究显示,CHIP明显增加心血管事件风险,并与低密度脂蛋白胆固醇水平升高、糖尿病等传统风险因素产生协同效应。动物实验证实,多种基因突变可加重动脉粥样硬化,而抗炎治疗能缓解该进程。因此,CHIP不仅能为识别残余心血管风险人群(传统风险因素控制良好但仍属“高危”的个体)提供线索,也为CVD风险分层及一级预防提供了新方向;抗炎药物秋水仙碱等在减轻CHIP相关炎症方面展现出潜力,也为CVD治疗提供了新靶点。未来,建立CHIP登记库、推进靶向干预及个体化防治策略,是实现CVD“精准预防”的关键步骤,将有助于实现从“治已病”向“防未病”的转变。

关键词： 金溶胶   球核酸   制备   表征   DNA检测  

摘要： 溶胶是生物医学领域常用的纳米材料,其在生物传感、生物成像、生物医药等方面有广泛的应用。在现有溶胶基本性质研究实验基础上,进一步开展溶胶的修饰和应用实验对拓展医学生的溶胶前沿知识、深化理解溶胶的医学应用具有重要意义。球核酸是溶胶修饰和应用最为成熟和典型的代表。本文结合团队关于球核酸制备的创新研究成果,面向医学检验技术专业新创球核酸的制备及应用实验。该实验系统融合金溶胶的合成、球核酸的制备(即金溶胶的DNA修饰)和DNA检测应用,实验内容前沿新颖,且设计合理、层层递进,有利于激发学生实验探究兴趣。实验结果表明,该新创实验操作简单、无需大型仪器、绿色安全、可行性和重复性好,适合本科生实验教学。本实验项目以培养科学创新素养为导向,将理论知识与实际问题相结合,且具备一定的挑战度,有助于提升学生综合运用知识分析问题、解决问题的能力。

关键词： 发酵粘液乳杆菌   荚膜多糖   抗氧化   抗衰老   秀丽隐杆线虫  

摘要： 为探究乳酸菌荚膜多糖(capsular polysaccharides,CPS)的抗衰老活性并评估其应用于功能性食品的潜力,该研究以发酵粘液乳杆菌S1为出发菌株,采用溶菌酶法提取和DEAE-52离子交换柱层析纯化CPS,并对其结构进行表征。在此基础上,以秀丽隐杆线虫为模型,系统评价了CPS的抗衰老作用。结果表明,CPS经DEAE-52离子交换柱纯化获得一个主要组分CPS-3。该多糖的平均分子质量为4.47×104 Da,呈无规卷曲构象,由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖组成(摩尔比1:1.58:12.39)。甲基化和NMR分析表明,CPS-3主要由β-D-Galp-(1→2,6),β-D-Glcp-(1→2,6),β-D-Glcp-(1→2),β-D-Galp-(1→3),α-L-Rhap-(1→2),α-D-Galp-(1→3)和β-D-Galp-(1→残基构成。线虫实验结果显示,160 μg/mL CPS-3能显著提升线虫的体内抗氧化能力,并将正常培养及氧化/热应激条件下的线虫寿命分别延长19.24%、32.91%和30.02%。同时,该剂量CPS-3还可使线虫体内活性氧和脂褐素水平分别降低76.02%和59.63%,并有效改善其繁殖能力、咽泵速率与运动能力。综上,CPS-3具有明确的抗衰老活性,有望作为天然抗衰老成分应用于功能性食品。

关键词： 大眼双锯鱼   HSPA1B   序列分析   运输胁迫   表达分析  

摘要： 对大眼双锯鱼(Amphiprion ephippium)热休克蛋白A家族1B(heat shock protein family a member 1B,HSPA1B)的分子特征及其在运输状态下的表达模式进行了探讨。以大眼双锯鱼为实验材料,取其肝脏组织样品,提取RNA逆转录后进行HSPA1B基因克隆,然后使用实时荧光定量PCR的方法检测HSPA1B基因在各个组织中的表达情况。同时构建在运输状态下的应激模型,通过实时荧光定量PCR技术分析不同组织中HSPA1B基因在不同运输阶段的表达变化。结果显示,HSPA1B基因ORF全长1 734 bp,编码577个氨基酸残基,预测其分子质量大小约为63.94×10~3 u,理论等电点pI为5.42。构建系统进化发育树显示,大眼双锯鱼HSPA1B蛋白与眼斑双锯鱼(Amphiprion ocellaris)HSPA1B聚为一支,相似度高达99.13%。HSPA1B基因广泛分布于大眼双锯鱼(A. ephippium)各组织中,相比于肠道组织,在肌肉中表达量最高,其次是脑组织和皮肤组织,其他所测组织中表达量较低。除肝脏外,大眼双锯鱼(A. ephippium)HSPA1B基因在运输胁迫前期(6 h)即出现显著响应,表达上调,在运输中期(12 h,24 h)达到峰值,运输后期表达量下调,并维持一定量的高表达。HSPA1B基因参与大眼双锯鱼免疫组织应激性免疫应答,由此可将HSPA1B基因作为大眼双锯鱼是否处于应激状态的重要指标。

关键词： 人脐带间充质干细胞   小鼠   电离辐射   放射性肺纤维化   放射性肺损伤   上皮-间质转化   干细胞移植   呼吸功能  

摘要： 目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对全身电离辐射(TBI)诱导的小鼠放射性肺损伤(RILI)远后效应的影响及机制。方法 将120只C57BL/6小鼠随机分为对照组(Ctrl)、照射组(Rad)和照射+干细胞治疗组(Rad+MSCs)。Rad组和Rad+MSCs组小鼠接受6 Gy的60Co γ射线TBI。Rad+MSCs组照射后立即经尾静脉注射hUC-MSCs悬液(1×106/100 μL)。检测hUC-MSCs肺归巢情况;照射后4、12、20周,评估小鼠呼吸功能、肺组织影像学和病理学变化;检测肺组织中E-cadherin、Vimentin、α-SMA及Egr1等蛋白表达;通过转录组学筛选差异表达基因并进行验证。结果 hUC-MSCs干预显著提高照后30 d生存率。Rad组照后4周出现呼吸功能异常,随时间延长逐渐加重,至20周表现为典型限制性通气功能障碍;hUC-MSCs干预对呼吸功能损害有改善作用,20周时效果最显著。病理结果显示,Rad组照后4周肺组织充血、肺泡间隔增厚;12周肺泡间隔破坏;20周结构松散、肺泡壁破损严重。hUC-MSCs干预对各时间点病理改变均有改善。照后20周,Rad组出现广泛磨玻璃样改变,胶原纤维沉积显著增加,E-cadherin表达下调,Vimentin和α-SMA上调;hUC-MSCs干预后上述改变减轻,上皮标志物回升,间质标志物下降。转录组学鉴定出8个共同差异表达基因,其中Egr1表达呈动态变化:Rad组照后4周高表达,12周及20周低表达;hUC-MSCs对Egr1表达具有调控作用。结论 hUC-MSCs可能通过调控RILI的不同阶段Egr1的表达及中晚期上皮-间质转化进程,改善TBI诱导的RILI远后效应。

关键词： 奶牛   间充质干细胞   子宫内膜炎  

摘要： 奶牛子宫内膜炎是我国奶牛养殖业中最常见的繁殖障碍性疾病之一,以子宫黏膜炎症为主要特征,严重损伤奶牛生殖系统健康,降低奶牛繁殖性能,制约奶牛养殖业的可持续发展。近年来,间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)因其来源广泛、易于获取,且其具备显著的免疫调节功能、组织修复能力以及旁分泌功能生物活性因子等特性,成为疾病治疗领域的新型策略,广阔应用前景。本文综述了奶牛子宫内膜炎的分类及诊断标准,系统阐述了MSCs的来源、功能及其通过抗炎和免疫调节机制在奶牛子宫内膜炎治疗中的作用,并对基于MSCs的未来研究方向进行展望,以期为奶牛子宫内膜炎的治疗提供更有效策略。

关键词： 延胡索酸   琥珀酸化修饰   S-(2-琥珀酸)半胱氨酸   延胡索酸水合酶   半胱氨酸   生物标志物  

摘要： 代谢异常是癌症的显著特征之一。编码三羧酸(tricarboxylic acid, TCA)循环关键代谢酶的基因突变可导致“致癌代谢物”的积累。这些代谢物通过抑制酶活性或驱动蛋白质共价修饰,在肿瘤发生、发展及免疫反应中发挥重要作用。延胡索酸因TCA循环紊乱及延胡索酸水合酶(fumarate hydratase, FH)失活突变而积累,影响线粒体功能、DNA损伤修复、蛋白质功能及肿瘤微环境。作为一种α,β-不饱和亲电子代谢物,延胡索酸通过迈克尔加成反应与蛋白质半胱氨酸残基形成稳定的S-(2-琥珀酸)半胱氨酸[S-(2-succinyl)cysteine, 2SC]修饰,这一翻译后修饰过程被称为蛋白质琥珀酸化修饰。研究表明,蛋白质琥珀酸化修饰在肿瘤发生、发展及免疫逃逸中发挥关键作用,其研究结果为肿瘤诊疗提供了新视角。未来,基于蛋白质琥珀酸化修饰的代谢干预策略有望显著改善肿瘤治疗效果。本综述系统总结了蛋白质琥珀酸化修饰在肿瘤代谢和免疫逃逸中的作用及其潜在的临床应用价值。