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关键词： β-葡萄糖苷酶   异源表达   链格孢属MG1   酶学性质  

摘要： β-葡萄糖苷酶是酿酒等工业领域的关键酶制剂，新型产酶微生物资源挖掘与酶学特性解析是其高效应用转化的核心前提。本研究旨在以链格孢属菌株***1为材料，系统挖掘其基因组中β-葡萄糖苷酶编码基因，明确重组酶的酶学特性及环境因子调控效应，为该酶的开发应用提供理论支撑与技术参考。结果表明，菌株MG1基因组中的3个β-葡萄糖苷酶编码基因（β-Glu5、β-Glu6及β-Glu11）均在酵母体系中高效表达。重组酶液最适反应条件一致，均为反应温度45℃、反应pH6.0；在低温及近中性pH范围内稳定性较好。乙醇和葡萄糖对重组酶液的催化活性产生抑制作用，且葡萄糖的抑制效应更为显著。金属离子对重组酶液活性的影响具有离子特异性，其中Mn2+、Mg2+、Ca2+、Cu2+和Zn2+表现为抑制作用，而Fe2+和Fe3+则具有促进作用。总的来说，β-Glu5重组酶液对单一胁迫条件下的低pH、高浓度乙醇及高葡萄糖均表现出较强耐受性，在葡萄酒发酵中展现良好的应用前景。

关键词： 人参皂苷Rg   二型糖尿病   糖尿病肾病   蛋白质组学   炎症  

摘要： 糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy， DN）是2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus， T2DM）常见的微血管并发症，目前临床对其干预手段略显不足。为了探究人参皂苷Rg2对T2DM并发症DN的改善作用及相关调控机制，本研究采用定量蛋白质组学联合蛋白免疫印迹技术进行分析。经干预28 d后，采集各组小鼠的血清及肾脏组织样本，检测空腹血糖、体重、炎症因子、血清肌酐值等指标，通过苏木精-伊红对肾组织染色，采用蛋白组学技术探究Rg2改善DN所调控的相关蛋白通路，蛋白免疫印迹分析小鼠肾脏组织中TGF-β、LC3B、Bax、Bcl-2与AQP1蛋白的表达水平。结果表明，Rg2可降低T2DM小鼠空腹血糖水平，下调肌酐、尿素氮及TNF-α、IL-6炎症因子水平，改善DN小鼠的肾组织纤维化。分别从正常组vs二型糖尿病组、二型糖尿病组 vs 阳性组、二型糖尿病组 vs Rg2干预组，三个对比组中鉴定出234、171、223个差异蛋白质（Differential Expression proteins， DEPs），这些DEPs主要富集于NOD样受体等途径，发现Rg2可上调肾组织中LC3B、Bcl-2蛋白表达，下调AQP1、Bax、TGF-β蛋白表达，表明人参皂苷Rg2可能通过增强肾脏细胞自噬、抑制过度凋亡、减轻肾脏纤维化、改善水转运紊乱等途径发挥肾脏保护作用，为其进一步开发为功能性膳食补充剂提供实验依据。

关键词： 氨基酸   氮矿化   蛋白酶活性   脲酶活性   pH   林型  

摘要： 为探究不同氨基酸添加对温带暗棕壤氮矿化过程的调控作用，本研究依托黑龙江帽儿山森林生态系统国家野外科学观测研究站，以阔叶林、针阔混交林及针叶林下暗棕壤为研究对象，设置对照、甘氨酸、谷氨酸、组氨酸添加(40 mg N·kg-1)处理，采用室内培养试验（50 d），测定无机氮(NO3--N、NH4+-N)含量、氮矿化速率（氨化、硝化、净氮矿化速率）、pH、蛋白酶和脲酶活性动态变化。结果表明：与CK相比，氨基酸添加均显著提高了土壤NH4+-N含量、氨化速率和净氮矿化速率，培养结束时分别提高15.5%～51.9%、24.3%～93.6%、32.5%～59.3%，NO3--N含量和硝化速率的响应具有滞后性，在培养至第14天才开始显著高于CK；甘氨酸添加处理的NH4+-N含量、氨化速率增幅显著高于谷氨酸和组氨酸添加处理。氨基酸添加显著提高了土壤pH、蛋白酶和脲酶活性，与CK相比，蛋白酶活性在培养第14天提高60.1%～85.9%，脲酶活性在培养第7天提高11.2%～39.2%。林型显著影响土壤氮转化过程，针阔混交林和阔叶林的土壤无机氮含量、硝化速率、脲酶活性显著高于针叶林，在培养后期（28～50 d）针阔混交林和阔叶林的土壤氨化、净氮矿化速率显著高于针叶林；而pH和蛋白酶活性表现为针阔混交林>阔叶林>针叶林。相关性分析表明，蛋白酶和脲酶活性与pH、NH4+-N含量及氮矿化速率均呈极显著正相关。综上，氨基酸输入显著促进了温带暗棕壤氮矿化过程，其效应受林型及土壤环境条件的显著调控。

关键词： 泽兰多糖   秀丽隐杆线虫   热应激   衰老  

摘要： 目的 观察中药泽兰成分多糖对秀丽隐杆线虫衰老的影响,并探讨其作用机制。方法 选用秀丽隐杆线虫作为研究对象,分为空白对照组及实验组,观察不同浓度泽兰多糖(0.08、0.4、2和10mg/mL)对线虫寿命、生殖能力、热应激、氧化应激的影响。其中寿命实验和氧化应激实验另设阳性对照组(寿命实验以二甲双胍作为阳性对照药,氧化应激实验以维生素C作为阳性对照药)。结果 在第6天所有浓度下,秀丽隐杆线虫的存活率均为100%。与空白对照组相比,秀丽隐杆线虫的产卵量随姜泽兰多糖浓度和培养时间的不同而增加,24h后空白组存活条数为88.50±3.73,0.08mg/mL组82.20±3.91,0.4mg/mL组,2mg/mL组P<0.001)。与空白对照组相比,0.4mg/mL和2mg/mL的泽兰多糖显著延长了秀丽隐杆线虫的寿命(P<0.05,P<0.01);(4)与空白对照组相比,2mg/mL的姜黄素多糖显著增强了秀丽隐杆线虫的热应激耐受性(P<0.001);(5)在氧化应激实验中,0.08mg/mL和0.4mg/mL的姜黄素多糖显示出寿命延长的趋势。结论 泽兰多糖具有延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用,其机理可能与泽兰多糖提高线虫热应激能力有关。

关键词： 溃疡性结肠炎   mytilus coruscus glucans(MCG)   葡聚糖硫酸钠(DSS)   多糖   C57BL/6J小鼠  

摘要： 目的 探究海洋来源的贻贝多糖MCG(mytilus coruscus glucans)对葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）诱导急性和慢性溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠模型的保护作用。方法 采用C57BL/6J小鼠，构建DSS诱导的急性和慢性UC小鼠模型，腹腔注射给予模型小鼠高、低剂量的MCG。通过检测小鼠体重、腹泻程度、便隐血评分、实验终点小鼠结肠长度以及直肠组织H&E染色和病理评分等主要药效学指标和紧密连接蛋白Ecadherin/Occludin的蛋白表达情况，以评价MCG对急性和慢性UC的保护作用。结果 将小鼠连续5天饲养在含3%DSS饮水的条件下，随后更换成普通饮水再饲养2天，成功构建急性UC小鼠模型；以连续7天2%DSS饮水及14天普通饮水为1个周期，循环3个周期后成功构建慢性UC小鼠模型。利用以上两种模型评价MCG对于急慢性UC的保护作用。结果显示，腹腔注射MCG对小鼠急性和慢性UC治疗效果良好，主要表现在缓解小鼠体重下降、降低疾病活动指数（DAI）评分、改善结肠长度缩短、恢复肠道紧密连接相关蛋白水平。结论 贻贝多糖MCG可以有效保护DSS诱导的小鼠急慢性结肠炎，为抗UC药物的开发提供了新的候选药物。

关键词： 牛樟芝多糖   锌   肉鸡   锌对脂多糖   肠道屏障  

摘要： 为了探讨牛樟芝多糖(ACP)和锌对脂多糖(LPS)诱导的肉鸡肠道形态和屏障功能相关基因表达的影响,选取1日龄雄性健康的麻黄肉鸡540羽,随机分为6组(每组6个重复,每个重复15羽):6个处理组饲喂3种饲粮,3种饲粮分别为CON饲粮(玉米-豆粕型基础饲粮)、ACP饲粮(基础饲粮+500 mg/kg ACP)、ACP+锌饲粮(基础饲粮+500 mg/kg ACP+100 mg/kg锌)。在第16、18、20天向LPS诱导组肉鸡腹腔注射300μg/kg LPS溶液,LPS未诱导组腹腔注射等量生理盐水,试验期为21 d。结果显示:(1) LPS诱导显著增加了21日龄肉鸡的十二指肠肠壁厚度(P<0.05),ACP和锌饲粮对21日龄肉鸡十二指肠绒毛高度有增加趋势(P=0.078),对绒/隐比值有增加趋势(P=0.074)。ACP、ACP和锌显著降低了21日肉鸡空肠隐窝深度(P<0.05),空肠绒/隐比值显著增加(P<0.05)。(2)LPS诱导显著下调了21日龄肉鸡的十二指肠和空肠Claudin-1和ZO-1的mRNA表达(P<0.05)。ACP显著上调21日龄肉鸡十二指肠Occludin的mRNA表达(P <0.05),显著上调空肠Claudin-1、Occludin和ZO-1的mRNA表达(P<0.05)。ACP和锌显著上调21日龄肉鸡空肠Occludin和ZO-1的mRNA表达(P<0.05)。(3)LPS诱导显著上调了21日龄肉鸡空肠NF-κB、TLR4和TNF-α的mRNA表达(P<0.05);ACP、ACP和锌显著下调了21日龄肉鸡的空肠NF-κB、TLR4和TNF-α的mRNA表达(P<0.05)。(4) LPS诱导显著下调了空肠IL-4的mRNA表达(P<0.05),ACP、ACP和锌显著上调空肠IL-2的mRNA表达(P <0.05)。饲粮添加ACP和锌显著下调了LPS诱导21日龄肉鸡空肠IL-1β的mRNA表达(P<0.05),显著上调IL-4的mRNA表达(P<0.05)。ACP、ACP和锌对21日龄肉鸡血清中TNF-α和IL-2的含量无显著影响。结果表明:LPS诱导导致肉鸡发生应激反应,饲粮添加ACP、ACP和锌通过下调NF-κB信号通路上与炎症相关基因的表达,从而减轻LPS刺激对肉鸡肠黏膜的炎症反应,并有利于肠黏膜屏障功能的恢复。

关键词： 马铃薯创伤木栓化   蛋白组学   苯丙烷代谢   活性氧代谢   脂肪酸代谢  

摘要： 【目的】从蛋白质组学角度，解析外源NO对马铃薯创伤木栓化的影响机制。【方法】以马铃薯品种滇薯47为材料，在人工损伤下，以蒸馏水为对照(CK)，用0.5 mmol/L硝普钠(sodium nitroprusside,SNP，作为NO供体)和1.3 mmol/L羧基-PTIO(carboxy-PTIO,C-PTIO，作为NO清除剂)浸泡损伤块茎，于培养箱进行创伤愈合反应，在创伤后0、27和54 h取样进行蛋白质组学分析。【结果】创伤后27 h,SNP vs. CK组有147个差异表达蛋白(differently expressed proteins,DEPs),C-PTIO vs. CK组有113个DEPs,SNP vs. C-PTIO组有176个DEPs;GO分析显示：DEPs主要富集于果胶代谢过程、细胞壁组织、细胞分裂素活性信号途径、苯丙烷代谢等过程；KEGG分析显示：DEPs主要涉及苯丙烷生物合成、谷胱甘肽代谢、植物激素信号转导等通路。创伤后54 h,SNP vs. CK组中有120个DEPs,C-PTIO vs. CK组中有164个DEPs,SNP vs. C-PTIO组中有144个DEPs;GO分析显示：DEPs主要富集于软木脂生物合成、苯丙烷生物合成、细胞水稳态等过程；KEGG分析显示：DEPs主要涉及苯丙烷生物合成、脂肪酸代谢和角质、软木脂和蜡质生物合成等通路。SNP处理提高了16个过氧化物酶蛋白、4个苯丙氨酸解氨酶蛋白、2个4-香豆酰-辅酶A-连接酶蛋白、14个与脂肪酸代谢相关蛋白、3个顺式玉米素蛋白和1个乙烯受体蛋白的表达量。【结论】外源增加NO供体(SNP处理)上调了马铃薯创伤块茎苯丙烷生物合成、谷胱甘肽代谢、脂肪酸代谢和信号转导等通路相关蛋白表达，进而加快创伤木栓化。本研究为解析NO促进马铃薯块茎创伤愈合分子机制提供了新思路。

关键词： 铁硫簇   支架蛋白   转运蛋白   志贺氏菌   顺乌头酸酶  

摘要： 铁硫簇是生物体中十分重要的一种无机辅因子，在志贺氏菌中有2套铁硫簇合成系统即SUF系统与ISC系统，它们在志贺氏菌生活史中不同阶段的作用与系统内相应蛋白质的功能尚不清楚。本研究采用荧光定量PCR技术分析了志贺氏菌侵染HeLa细胞前后与氧胁迫条件下各系统内基因表达量的差异，发现侵染宿主细胞后及长时间氧胁迫条件下主要发挥作用的是SUF系统，说明SUF系统与志贺氏菌侵染及适应极端生存环境息息相关。进一步重组表达铁硫簇合成系统中相关的蛋白质，体外研究证实，SufB与IscU具有支架蛋白质的功能，可以将无机亚铁离子与硫离子结合形成铁硫簇，并且SufC与SufD可以与SufB形成蛋白质复合体进而提高其稳定性；SufA与IscA具有铁硫簇转运蛋白的功能，可以将支架蛋白质上的铁硫簇转运给脱辅基顺乌头酸酶，从而激活其催化活性。同时发现，HscA与HscB作为分子伴侣亦可以提高IscU转运铁硫簇的能力。总之，本研究确定SUF与ISC系统在志贺氏菌生活史中不同阶段的作用，并且对各自系统内相应蛋白质的功能进行研究，对志贺氏菌的致病机制和分子进化的研究提供一定的理论基础。

关键词： lncRNA MALAT1/miR-146a/TLR4信号通路   芪黄煎剂   巨噬细胞M1   胃切除  

摘要： 目的 通过细胞实验探究芪黄煎剂抑制巨噬细胞M1极化的作用机制。方法 给予大鼠灌服芪黄煎剂制备含药血清。培养RAW264.7巨噬细胞，将其分为正常组、脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）组、sh-lncRNA MALAT1组、sh-miR-146a组、TLR4抑制剂组、NF-κB抑制剂组、芪黄煎剂组，除正常组外，其余各组均使用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞24 h；采用流式细胞术检测体外诱导巨噬细胞M1/M2极化；CCK-8法检测不同比例芪黄煎剂含药血清对细胞活力的影响；RT-qPCR法检测各组细胞中lncRNA MALAT1、miR-146a、Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）、髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）、白细胞介素-1受体相关激酶1（interleukin-1 receptor-associated kinase 1，IRAK1）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TNF receptor associated factor 6，TRAF6）、核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6，IL-6）mRNA表达水平；Western blot法检测各组细胞中TLR4、MyD88、IRAK1、TRAF6、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达水平。结果 与正常组比较，LPS诱导RAW264.7巨噬细胞24 h后，巨噬细胞向M1型转化，lncRNA MALAT1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05），miR-146a mRNA表达水平显著降低（P＜0.05），TLR4、MyD88、IRAK1、TRAF6、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）；CCK-8实验结果显示，1∶5比例稀释的芪黄煎剂含药血清最适合后续实验；与LPS组比较，sh-lncRNA MALAT1组和芪黄煎剂组lncRNA MALAT1水平均显著降低、miR-146a表达水平显著升高（P＜0.05），sh-miR-146a组lncRNA MALAT1水平显著升高、miR-146a表达水平显著降低（P＜0.05）；此外sh-lncRNA MALAT1组与芪黄煎剂组TLR4、MyD88、IRAK1、TRAF6、NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论 芪黄煎剂抑制脂多糖诱导巨噬细胞M1极化的作用机制可能与下调lncRNA MALAT1表达、上调miR-146a表达，从而阻断TLR4信号通路的激活有关。

关键词： 黄精   多糖   皂苷   药食同源   品质特性   生物活性   非靶向代谢组学  

摘要： 为明确湖北省黄精产业种质资源的品质特征与差异化利用价值，系统评价了湖北省崇阳多花黄精（CYD）、崇阳鸡头黄精（CYJ）、罗田多花黄精（LTD）、十堰紫杆鸡头黄精（SYJ）及恩施黄恩1号（ESH）等5种黄精的主要化学成分、活性成分、代谢产物以及体外活性差异。结果显示：5种黄精呈现低淀粉（0.33%～1.49%）、低脂肪（0.36%～0.76%）、低还原糖（0.97%～5.44%）、高蛋白（9.03%～10.47%）的营养特征，醇溶性浸出物含量为73.34%～81.86%，多糖含量为5.05%～8.99%，皂苷含量为3.17%～10.97%，其中CYJ和ESH未达到药典中多糖的要求（7%），而ESH皂苷含量远高于文献报道值。代谢组学分析显示，CYD与LTD富集多糖、黄酮与酚酸类成分，而ESH与CYJ则高表达甾体皂苷类成分，整体呈现出多糖-酚酸与皂苷-脂质2条不同的代谢积累路径。各样品重金属及溶血率均符合安全标准。体外活性评价结果显示，5种黄精的抗氧化活性由亲水性成分主导，LTD表现最优；CYD水提物对α-葡萄糖苷酶抑制活性最强(IC50=0.61 mg/mL)，而CYD醇提物对α-淀粉酶抑制活性最强(IC50=1.30 mg/mL)，这些功能活性值高于部分文献报道。研究表明，湖北黄精种质资源丰富且功能各异，可以根据物质基础和功能活性进行品种选育和产品开发。