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关键词： 红阳猕猴桃   多糖   结构解析   秀丽隐杆线虫   抗衰老   抗氧化  

摘要： 为探究红阳猕猴桃多糖具体结构及其对秀丽隐杆线虫的抗氧化与抗衰老作用,采用超声辅助提取法提取红阳猕猴桃粗多糖(Actinidia chinensis *** polysaccharides,ACP),经DEAE-52纤维素柱初步纯化得到红阳猕猴桃多糖(ACP-3),再通过Sephadex G-100凝胶柱二次纯化,获得高纯度多糖组分红阳猕猴桃多糖(ACP-3-G),并结合高效液相色谱、高效凝胶渗透色谱和核磁共振对ACP-3-G分子结构进行解析。最后,以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为模式生物,评价不同质量浓度ACP-3-G对线虫寿命、运动能力、抗热应激和抗氧化应激能力的影响,揭示其在抗衰老方面的潜在功能。结果显示,通过Sephadex G-100凝胶柱二次纯化的ACP-3-G得率为(73.42±1.74)%,且ACP-3-G组分中多糖和糖醛酸含量均高于ACP组分。同时,ACP-3-G是一种分子质量为120.6 kDa多糖聚合物,其单糖组成为甘露糖(0.367%)、鼠李糖(2.384%)、半乳糖醛酸(58.859%)、葡萄糖(4.501%)、半乳糖(23.942%)以及阿拉伯糖(9.307%)。核磁共振解析显示,该多糖主链主要由二取代糖残基→1)-α-Araf(5→、→1)-α-GalpA(4→、→1)-β-Galp(4→和三取代糖残基→1,3)-β-GalpA(4→、→1,4)-β-Galp(6→和→1,2)-α-GalpA(4→连接构成。在10、50、100、500、1000μg/mL ACP-3-G干预下,线虫寿命、运动能力、抗热应激和抗氧化应激能力与对照组相比均有显著提升,其中1000μg/mL ACP-3-G干预组的效果最为显著。综上,ACP-3-G是一种具有抗氧化与抗衰老作用的多糖类化合物。

关键词： 党参提取物   颗粒   物理指纹图谱   多糖   含量测定  

摘要： 目的建立党参提取物颗粒物理指纹图谱,并测定其多糖质量分数。方法选择堆积性、流动性、稳定性、均一性作为一级指标;堆密度、振实密度、休止角、豪斯纳比、水分、吸湿率、相对均齐指数作为二级指标,建立党参提取物颗粒的物理指纹图谱;采用苯酚-硫酸法测定其多糖质量分数并进行方法学验证。结果10份平行制备的党参提取颗粒转换后的平均物理指标数据分别为:堆密度4.299±0.17、振实密度4.712±0.17、豪斯纳比9.517±0.16、休止角3.76±0.31、水分4.01±0.35、吸湿率7.52±0.23、相对均齐指数3.36±0.31;党参提取物颗粒多糖平均质量分数为(98.9±5.5)mg/g。结论物理指纹图谱说明党参提取物颗粒生产工艺稳定可行。多糖质量分数测定方法准确可靠,为党参提取物颗粒的生产与质量控制提供参考。

关键词： 毒害艾美耳球虫   动力蛋白轻链   克隆表达   单克隆抗体   定位  

摘要： 为制备毒害艾美耳球虫动力蛋白轻链(EnDLC)单克隆抗体,研究通过克隆与构建EnDLC基因的原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白(rEnDLC),利用纯化与复性后的rEnDLC免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术与间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆,鉴定单克隆抗体亚类和特异性,应用单克隆抗体检测天然蛋白和虫体定位,并以多克隆抗体为对照。结果显示:在上清和沉淀中,重组蛋白均有表达,能被6×His标签单克隆抗体和鸡抗毒害艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫阳性血清识别;获得2株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D7和4G10,亚类分别为IgG2a和IgG1,纯化腹水效价分别为1∶512000和1∶64000;2株单克隆抗体与多克隆抗体均能特异性识别重组蛋白rEnDLC以及子孢子与配子体中的EnDLC天然蛋白;IFA分析显示,rEnDLC鼠源多克隆抗体定位EnDLC于子孢子、第二裂殖子和配子体的细胞质,单克隆抗体2D7和4G10均定位EnDLC于子孢子和第二代裂殖子的一端以及配子体细胞质中,且在配子体中聚集成颗粒状。研究表明,研制的单克隆抗体2D7和4G10与毒害艾美耳球虫EnDLC蛋白之间具有良好的反应性与特异性,为进一步研究DLC蛋白的功能提供了重要工具。

关键词： 副溶血性弧菌   5'-核苷酸酶   外膜蛋白   原核表达   免疫原性  

摘要： 目的研究副溶血性弧菌新型外膜蛋白5'-核苷酸酶(5'-nucleotidase,5'-NT)的免疫原性。方法采用生物信息学方法分析5'-NT的序列保守性、结构及抗原表位;通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)克隆该基因,构建pET-28a(+)与5'-NT基因nutA的重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达,经镍-次氮基三乙酸琼脂糖亲和层析介质纯化及梯度透析复性获得可溶性重组蛋白;利用小鼠免疫实验、酶联免疫吸附试验、免疫印迹、补体介导的血清杀菌试验及免疫荧光共聚焦显微镜,系统评价蛋白的表面暴露性、免疫效价、交叉反应性及免疫保护性。结果5'-NT在弧菌属具有较高的序列保守性。成功构建了5'-NT重组质粒,通过诱导表达、纯化获得高纯度重组5'-核苷酸酶蛋白。重组5'-NT与副溶血性弧菌全菌免疫血清效价为1:81k,具有表面暴露性。重组5'-NT免疫血清对5'-NT蛋白效价在1:81k,对副溶血性弧菌效价在1:3k,与其他弧菌属大多存在微弱的交叉反应,且免疫血清仅有较弱的补体依赖杀菌活性(1:4)。免疫印迹表明,5'-NT免疫血清能对副溶血性弧菌及其他弧菌全菌蛋白产生特异性条带。免疫荧光共聚焦显微镜分析也表明了重组5'-NT免疫血清能够与副溶血性弧菌发生特异性结合,也说明该蛋白具有表面暴露性。结论副溶血性弧菌5'-NT虽具有弧菌保守性和表面暴露性特征,但较低的免疫血清效价说明其暴露性、免疫原性或表达丰度有限,限制了其单独作为疫苗或检测抗原的应用,后续可通过多抗原联合等策略挖掘其在副溶血性弧菌防控中的价值。本研究揭示了副溶血性弧菌外膜蛋白5'-NT的表面暴露性、免疫原性和血清保护性,为副溶血性弧菌诊断抗原和亚单位疫苗开发提供了参考。

关键词： 黑果枸杞多糖   2型糖尿病   代谢相关脂肪性肝病   肠道菌群   短链脂肪酸   Toll样受体4/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3/核因子κB信号通路  

摘要： 为探究黑果枸杞多糖(Lycium ruthenicum polysaccharide,LRP)对2型糖尿病合并代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease,MASLD)的改善作用及其作用机制,本研究以db/db小鼠为研究对象,随机分为正常组、模型组以及低、中、高剂量LRP组(50、100、200 mg/kg)和辛伐他汀组(10 mg/kg),干预8周。结合宏基因组学测序和气相色谱-质谱联用法等技术,评估LRP对小鼠血清生化指标、肝脏组织病理变化、肠道菌群结构以及短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)水平的影响。结果显示,LRP干预可显著降低db/db小鼠血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、游离脂肪酸、脂多糖及促炎因子水平,改善小鼠肝脏脂质沉积、炎症浸润及纤维化程度。LRP能够显著改善模型小鼠肠道菌群α多样性,增加有益菌(如Akkermansia muciniphila、Bacteroides acidifaciens)相对丰度,降低条件致病菌(如Klebsiella michiganensis、***)相对丰度,并显著提高粪便乙酸、丙酸、丁酸等SCFAs水平。LRP对肝脏Toll样受体4/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3/核因子κB(Toll-like receptor 4/NOD-like receptor pyrin domain-containing 3/nuclear factor-κB,TLR4/NLRP3/NF-κB)炎症信号通路具有抑制作用,能下调TLR4、髓样分化因子88、NLRP3、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β蛋白表达,以及降低NF-κB磷酸化水平。综上,LRP对2型糖尿病合并MASLD具有显著的改善作用,其机制可能通过调控肠道菌群结构、提高SCFAs产生、抑制肝脏炎症信号通路实现,本研究可为开发黑果枸杞功能性食品提供理论依据。

关键词： 猴头菌多糖   成分结构   药理作用   食品  

摘要： 猴头菌为药食两用型真菌,其结构可分为子实体和菌丝体两部分。猴头菌活性成分多,药理作用丰富。多糖作为其主要活性成分之一,具有免疫调节、抗氧化、胃肠道保护、抗癌及保肝等多种药理作用。该文回顾了近5年国内外相关文献资料,着重对猴头菌多糖的结构特征、药理作用及其产品的应用进行总结,旨在为猴头菌的深度开发利用提供参考。

关键词： 玉米醇溶蛋白   竹叶多糖   κ-卡拉胶   乳化性能   稳定性  

摘要： 以竹叶多糖(BLP)和玉米醇溶蛋白(Z)为原料,先通过反溶剂沉淀法制备得到竹叶多糖-玉米醇溶蛋白复合颗粒(BLP-Z),然后将其与κ-卡拉胶(KC)联合制成稳定的低油乳液凝胶BLP-Z/KC,并对乳液凝胶的粒径、微观结构、流变特性和稳定性进行了分析。研究结果表明:随着BLP用量的增加,乳液凝胶的黏度增加,阻止油滴在均质后的聚集,乳液液滴的平均粒径由12.67μm(10%BLP-Z/KC)减小至3.59μm(200%BLP-Z/KC)。BLP-Z与KC中的糖链形成较强的分子间氢键,使BLP-Z/KC表现出良好的类固性和优良的稳定性。BLP-Z/KC的主导分子作用力为氢键网络,氢键强度与BLP用量呈正相关趋势,BLP-Z/KC在90℃热处理、-20℃冻融处理以及两周储存过程中均表现出优异的稳定性。

关键词： 蛋白质组学   慢性肾脏病   生物标志物  

摘要： 蛋白质组学是继基因组学之后,在生命科学领域兴起的一门重要学科,其核心在于在系统层面研究蛋白质的表达丰度、翻译后修饰及分子间相互作用等特性,从而在蛋白质层面整体揭示疾病发生与细胞代谢等复杂生命过程的分子基础。慢性肾脏病已成为全球重要的公共卫生问题[1]。深入研究慢性肾脏病的发病机制并筛选有效的生物标志物,对于推进慢性肾脏病的治疗、保护肾功能及改善患者预后至关重要。本文旨在综述蛋白质组学技术在慢性肾脏病发病机制探索及生物标志物发现中的最新研究进展。

关键词： 美沙拉嗪   白术多糖   溃疡性结肠炎   Th17/Treg失衡   配对相关同源框1  

摘要： 目的探究美沙拉嗪联合白术多糖(PAMK)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠和肺损伤的改善作用及机制。方法Wistar大鼠随机分为对照组(Control组)、溃疡性结肠炎组(UC组)、美沙拉嗪联合PAMK组(Mesalazine+PAMK组)、美沙拉嗪联合PAMK+过表达对照组(Mesalazine+PAMK+ov-NC组)和美沙拉嗪联合PAMK+过表达PRRX1组(Mesalazine+PAMK+ov-PRRX1组),每组10只。检测大鼠结肠湿重、肠重指数、肺湿重和肺重指数;HE染色观察大鼠结肠和肺病理形态变化;流式细胞术检测大鼠脾脏Th17/Treg细胞比例;Western blot检测大鼠结肠组织中PRRX1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达。结果美沙拉嗪联合PAMK降低UC大鼠结肠湿重、肠重指数、肺湿重和肺重指数,改善大鼠结肠和肺组织病理损伤,降低大鼠脾脏中Th17细胞比例并增加Treg细胞比例,下调大鼠结肠组织中PRRX1、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达。过表达PRRX1逆转了美沙拉嗪联合PAMK对上述指标的作用。结论美沙拉嗪联合PAMK通过下调PRRX1改善UC大鼠结肠和肺损伤,其机制与抑制JAK2/STAT3信号通路激活并改善Th17/Treg失衡有关。

关键词： 球形棕囊藻   类菌胞素氨基酸   抗氧化   抗褐变   食品保鲜   分子机制  

摘要： 【目的】从赤潮生物球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)中提取高附加值天然产物——类菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids,MAAs),并评价其作为新型果蔬保鲜剂的潜力,为球形棕囊藻的资源化利用提供科学基础。【方法】监测球形棕囊藻培养过程中囊体MAAs提取物得率的变化,确定最佳采收时期。采用响应面法优化提取温度、提取时间以及液固质量体积比,获得MAAs提取物的最佳提取条件。通过核磁共振(NMR)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)鉴定提取物中的主要活性成分。测定MAAs提取物的体外抗氧化活性,并评价其对鲜切苹果和油桃的褐变抑制效果。采用分子对接模拟技术,探究MAAs提取物主要成分与酪氨酸酶的结合机制。【结果】确定球形棕囊藻的稳定生长期(培养10 d时)为MAAs提取物的最佳采收时期。最佳提取工艺条件为提取温度40.45℃、时间2.75 h、液固质量体积比25.36 mL/g,在此条件下MAAs提取物得率达26.57 mg/g。经NMR和LC-MS分析,确认提取物中的主要活性成分为Porphyra-334。活性评价结果显示,该提取物对DPPH自由基的半抑制浓度(IC50)为5.68 mg/mL,且富含钙、镁、钾、铁、锌、硒等有益矿物质元素。保鲜效果实验显示,20 mg/mL和15 mg/mL的MAAs提取物分别对鲜切苹果和油桃表现出最佳的褐变抑制效果。分子对接表明,MAAs提取物的主要成分Porphyra-334可通过氢键和盐桥作用稳定结合于酪氨酸酶活性空腔(结合自由能为-30.5 kJ/mol)。【结论】球形棕囊藻MAAs提取物的主要成分为Porphyra-334,具有良好的体外抗氧化活性,对鲜切苹果和油桃的褐变抑制效果显著。Porphyra-334可通过氢键和盐桥作用稳定结合于酪氨酸酶的活性空腔,抑制该酶活性。基于上述特性,该提取物具备开发为新型天然果蔬保鲜剂的潜力。