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关键词： 芥菜   WRKY44   基因克隆   生物信息学分析   表达分析   花青素  

摘要： 为明确转录因子WRKY44对芥菜花青素积累的影响,本研究以紫薹-绿薹芥菜近等位基因系为材料,从芥菜中获得1个WRKY转录因子基因BjWRKY44,对其编码蛋白进行生物信息学分析,同时分析该基因在不同颜色芥菜中的表达特性及其与花青素含量的相关性。结果表明,芥菜BjWRKY44的基因组DNA和cDNA序列分别为1 516、1 266 bp,编码421个氨基酸。BjWRKY44蛋白具有WRKY保守结构域,定位于细胞核,与拟南芥、甘蓝型油菜等植物的WRKY44聚类在同一个分支,亲缘关系近。荧光定量PCR结果表明,BjWRKY44基因在紫色芥菜中的表达水平显著高于绿色芥菜,其表达水平与花青素含量呈显著正相关。蛋白互作网络结果表明,BjWRKY44可与花青素合成、转运及MBW复合体形成相关蛋白存在互作。综上,BjWRKY44可能参与调控芥菜花青素积累。本研究结果可为后续研究WRKY在芥菜花青素积累过程中的功能和机制提供一定的理论支撑。

关键词： 小麦   非淀粉多糖酶   表观回肠消化率   标准回肠消化率   表观全肠道消化率  

摘要： 本试验旨在研究小麦饲粮添加非淀粉多糖(NSP)酶对母猪不同生理阶段氨基酸表观回肠消化率(AID)和标准回肠消化率(SID)及常规养分表观全肠道消化率(ATTD)的影响。选取6头体况相似、经产3~7胎的健康长大二元(LY)母猪进行T型瘘管手术。采用重复测量的3×3拉丁方试验设计,将6头母猪分为3个组,每个组2头,固定分配于1个拉丁方中,分别饲喂无氮饲粮、小麦饲粮和加酶小麦饲粮。试验包含3个生理阶段:妊娠中期(妊娠第40~74天)、妊娠后期(妊娠第75~110天)和泌乳期(产后第5~34天),每个阶段分为3期,每期7 d,包括5 d的预试期和2 d的食糜和粪便收集期。结果表明:1)妊娠中期,与小麦饲粮相比,饲喂加酶小麦饲粮极显著提高了母猪精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)、色氨酸(Trp)、缬氨酸(Val)、谷氨酸(Glu)的AID(P<0.01),显著提高了异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、蛋氨酸(Met)、苏氨酸(Thr)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)的AID(P<0.05);饲喂加酶小麦饲粮极显著提高了母猪Arg、His、Leu、Lys、Glu的SID(P<0.01),且显著提高了Met和Val的SID(P<0.05)。2)妊娠后期,与小麦饲粮相比,饲喂加酶小麦饲粮极显著提高了母猪苯丙氨酸(Phe)的AID(P<0.01),显著提高了粗蛋白质(CP)、Leu、Lys、Met、Trp、Glu、酪氨酸(Tyr)的AID以及CP、His、Lys、Phe、Glu的SID(P<0.05)。3)泌乳期,与小麦饲粮相比,饲喂加酶小麦饲粮极显著提高了母猪AID-Met(P<0.01),显著提高了His、Leu、甘氨酸(Gly)的AID(P<0.05);饲喂加酶小麦饲粮极显著提高了母猪Leu、Trp、丙氨酸(Ala)和Ser的SID(P<0.01),显著提高了CP和His的SID(P<0.05)。4)与小麦饲粮相比,饲喂加酶小麦饲粮显著或者极显著提高了母猪妊娠中期干物质(DM)、总能(GE)的ATTD(P<0.05)以及妊娠后期DM、GE、CP的ATTD(P<0.01)。综上所述,纯小麦饲粮添加NSP酶可不同程度地改善饲喂小麦饲粮母猪不同生理阶段的大部分AA的AID和SID以及DM、GE、CP的ATTD,这为通过添加外源NSP酶提高小麦饲粮利用效率、减少饲料资源浪费提供了科学依据。

关键词： 小麦叶锈菌   效应因子   基因克隆   荧光定量PCR   亚细胞定位  

摘要： 为明确小麦叶锈菌效应因子Pt6647的表达特性及在寄主致病中的作用,以前期筛选获得的高表达候选效应子Pt6647为研究对象,采用PCR技术进行基因克隆,利用NCBI数据库进行序列比对分析,通过信号肽预测与功能验证分析其分泌特性,借助亚细胞定位技术确定其细胞内分布,并应用实时荧光定量PCR技术检测其在侵染过程中的表达模式。结果显示,成功克隆获得长度为765 bp的Pt6647开放阅读框(ORF);该基因在8个小麦叶锈病菌生理小种中高度保守,仅存在2个氨基酸变异;该效应子由254个氨基酸组成,其N端1—18位氨基酸被证实为具有分泌功能的信号肽;亚细胞定位显示,全长的Pt6647定位于细胞膜,而去除信号肽的截短体(Pt6647^(Δsp))则定位于细胞核、细胞质和细胞膜;表达模式分析表明,Pt6647在叶锈菌侵染小麦后36 h表达量达到高峰。成功克隆并鉴定了小麦叶锈菌效应子Pt6647,其特异性的亚细胞定位和侵染早期的表达高峰表明效应子Pt6647在病原菌侵入寄主植物早期发挥关键作用。

关键词： 宝石鲈   推水养殖   营养成分   氨基酸   脂肪酸  

摘要： 本试验旨在研究推水养殖模式对宝石鲈肌肉营养品质的影响。选取传统池塘养殖和推水养殖模式下,平均规格500 g左右的宝石鲈各6尾,分别测定其常规营养、肌肉氨基酸及脂肪酸组成。结果显示:推水养殖模式下,宝石鲈肌肉粗蛋白、水分和灰分含量显著升高(P<0.05),粗脂肪含量显著降低(P<0.05)。推水养殖组,除甘氨酸(Gly)含量显著降低(P<0.05)外,其余氨基酸含量与对照组相比无显著差异(P>0.05),其中必需氨基酸占氨基酸总量比为39%~40%,均符合FAO/WHO的理想模式推荐比例(EAA/TAA:40%)。推水养殖组苏氨酸(Thr)、结氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸+酪氨酸(Phe+Tyr)和赖氨酸(Lys)的氨基酸指数(AAS)和化学评分(CS)及必需氨基酸指数(EAAI)均显著低于传统池塘养殖组(P<0.05)。推水养殖组饱和脂肪酸总量显著低于传统池塘养殖组(P<0.05)。结果表明,与传统池塘养殖模式相比,推水养殖模式降低了宝石鲈肌肉粗脂肪和饱和脂肪酸含量,提高了粗蛋白含量,在一定程度上提升了宝石鲈品质。

关键词： 创伤性脑损伤   BMSCs   外泌体   ERK信号通路  

摘要： 目的探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)源外泌体调控细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路修复创伤性脑损伤大鼠的作用机制。方法将32只SPF级健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、模型对照组和BMSCs外泌体组,每组8只,在造模后3 d及治疗10 d后,进行Morris水迷宫定位航行试验。采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组病理组织变化,采用蛋白免疫印记法(Western blot)检测ERK、p-ERK及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达。结果造模后3 d:与正常组大鼠比较,其余三组大鼠逃避潜伏期均明显增加(P<0.05),但三组间未见明显差异(P<0.05),而治疗10 d后,与模型组相比,BMSCs外泌体组逃避潜伏期则明显减少(P<0.05),但仍明显高于正常组(P<0.05)。HE染色结果显示,相较于正常组,模型组与模型对照组展现出显著的结构异常。在观察视野内,可见大量神经元发生坏死,并伴有空泡样病变的出现。细胞排列呈现紊乱状态,形态亦发生异常。此外,细胞核出现偏移及固缩等病理改变。而BMSCs外泌体组神经元排列紊乱改善,部分整齐有序,神经元坏死情况改善,细胞形态部分恢复正常。Western blot结果显示,与正常组相比,ERK、p-ERK及Cyclin D1蛋白在模型组和模型对照组表达明显增加(P<0.05),而BMSCs外泌体组表达明显降低(P<0.05)。结论BMSCs源外泌体通过ERK/Cyclin D1通路减轻海马组织的病理损伤程度和改善颅脑损伤大鼠认知功能。

关键词： 枸杞   炮制   干燥   多糖   类胡萝卜素   化学成分  

摘要： 枸杞是我国传统的药食两用资源。以不同品种(系)宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)为研究对象,利用超高效液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱联用技术探究不同炮制工艺对枸杞化学成分的影响。结果表明,传统炮制工艺(即热风干燥)的枸杞总黄酮含量较高,真空脉动干燥及热风干燥枸杞总糖含量较高,而真空脉动干燥和真空冷冻干燥的枸杞中总类胡萝卜素含量较高。相较于品种,炮制工艺对枸杞总糖和黄酮的影响更大,而对于多糖和类胡萝卜素,其含量变化与品种和炮制工艺密切相关。炮制后,枸杞中主要化学成分为生物碱(16.13%)、酚酸(13.99%)、黄酮类化合物(13.11%)、氨基酸及其衍生物(8.72%),热风干燥枸杞与真空脉动干燥、真空冷冻干燥组枸杞在化学成分组成上存在更多差异,氨基酸及其衍生物、核苷酸及其衍生物、有机酸等物质在真空脉动干燥和真空冷冻干燥枸杞中富集,而在传统炮制过程中则形成了更多的酚胺及酚酸物质。该研究可为枸杞干果品质评价及不同用途枸杞干果筛选与应用提供数据支撑。

关键词： 聚集诱导发光   杯芳烃   手性识别  

摘要： 合成了两种基于杯[4]芳烃的手性AIEgen,该分子表现出显著的对映体选择性识别能力.实验结果表明,它们能够高效区分12种手性酸及氨基酸,其中与D-丝氨酸和L-丝氨酸作用后,体系的荧光强度比高达约42,展现出优异的手性识别性能.采用扫描电子显微镜(SEM)对识别前后体系的形貌进行了表征,发现不同对映体诱导形成了不同的形态结构,揭示了手性依赖的组装行为与荧光响应之间的内在关联.

关键词： 牦牛乳蛋白   氧化修饰   氧化规律   蛋白质组学  

摘要： 为实现对牦牛乳蛋白结构的可控性修饰,精准调控其营养功能,从而改善牦牛乳加工过程中营养品质下降的问题,本研究以不同浓度H_(2)O_(2)(0,0.5,1,3,5,10 mmol·L^(-1))氧化的牦牛乳蛋白为研究对象,进行羰基、游离巯基、总巯基等氧化指标及蛋白质组学测定,明确氧化处理过程中牦牛乳蛋白的氧化规律及蛋白功能的变化。结果发现,随着H_(2)O_(2)浓度的增加,羰基含量增加,游离巯基、总巯基、二硫键含量下降,溶解度先增加后降低,表面疏水性增加,粒径增大,Zeta电位绝对值增加,二聚酪氨酸含量降低。蛋白质组学分析鉴定到1351种蛋白,其中5 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组蛋白功能差异最显著,有183种蛋白下调,276种蛋白上调;1 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组蛋白功能差异最小,有237种蛋白下调,292种蛋白上调。与对照组相比,0.5 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组上调8种通路,下调17种通路;1 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组上调22种通路,下调10种通路;3 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组上调11种通路,下调16种通路;5 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组上调10种通路,下调9种通路;10 mmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组上调10种通路,下调14种通路。本研究为牦牛乳的绿色加工及相关产品的质量控制提供理论依据。

关键词： 林下种植三七   PnAACT基因   基因克隆   萜类合成   表达分析  

摘要： AACT基因是合成三萜皂苷的甲羟戊酸(MVA)途径中的关键酶基因。然而,迄今为止,尚未见关于AACT基因在不同林下种植条件下以及不同花期三七中的变化研究。本研究以华山松-三七和云南松-三七林下种植系统中的三七花为研究对象,基于其转录组数据设计引物,利用PCR技术从三七花中成功克隆出MVA合成酶基因,命名为PnAACT,并对其进行生物信息学分析及在不同时期花中的表达分析。结果表明,PnAACT基因的开放阅读框长度为1 227 bp,编码408个氨基酸;PnAACT蛋白属于酸性疏水蛋白,不含有跨膜区和信号肽。系统发育树显示PnAACT与越南参PvAACT蛋白的同源相似度达99.26%。同时,荧光定量PCR(RT-qPCR)揭示了PnAACT基因在三七花初开期的表达显著高于全开期,且在华山松林下种植的三七花中表达最高。此外,三七花PnAACT基因表达与环境因子中的气温呈正相关,与空气湿度和海拔呈负相关。本研究旨在揭示PnAACT基因在三七花萜类生物合成过程中的调控作用,并为三七花皂苷及其他次生代谢物的生物合成研究提供新的方向。

关键词： 电针   次髎   压力性尿失禁   骨髓间充质干细胞   归巢   小鼠  

摘要： 目的探讨电针小鼠“次髎”是否通过促进内源性骨髓间充质干细胞(BMMSC)向尿道周边归巢,从而改善小鼠尿道周边组织线粒体稳态失衡,最终改善小鼠压力性尿失禁(SUI),为治疗盆底功能障碍性疾病提供参考。方法实验一,将25只C57BL/6雌性小鼠任意分为假手术组、模型组、电针组、针刺组、电刺激组,每组5只。基于实验一电针组指标改善程度最大,进行实验二,另15只C57BL/6雌性小鼠任意分为模型组、电针组、电针+ADM3100组,每组5只。假手术组仅将导管置于小鼠阴道内,不进行球囊注射扩张;其他各组小鼠采用阴道扩张法构建SUI模型。实验一:假手术组、模型组不进行任何干预,电针组电针刺激小鼠“次髎”,针刺组仅针刺“次髎”,电刺激组将电极片贴于“次髎”处。实验二:模型组不进行任何干预;电针+ADM3100组第1次干预前24 h于尿道周边注射ADM3100溶液,电针“次髎”;电针组第1次干预前24 h于尿道周边注射等体积磷酸盐缓冲液,电针“次髎”。每次干预20 min,每日1次,连续7 d。干预结束后,采用改良的模拟人类尿道膀胱插管法记录小鼠膀胱漏尿点压(BLPP)、腹压漏尿点压(ALPP);Masson染色检测尿道周边组织胶原沉积情况;萤光素酶发光法检测尿道周边组织线粒体三磷酸腺苷(ATP)含量;免疫荧光染色法检测尿道周边组织BMMSC归巢;JC-1染色法检测尿道周边组织线粒体膜电位;荧光探针DCFH-DA法检测尿道周边组织活性氧(ROS)表达;实时荧光PCR法检测尿道周边组织基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)mRNA表达。结果实验一:与假手术组比较,模型组小鼠BLPP、ALPP下降(P<0.05);尿道周边组织胶原纤维蓝色变浅,分布紊乱,沉积减少;尿道周边组织胶原容积分数、线粒体膜电位及线粒体ATP含量降低,ROS表达增加(P<0.05)。与模型组比较,电针组、针刺组、电刺激组小鼠BLPP、ALPP升高(P<0.05);尿道周边组织胶原纤维蓝色加深,分布紊乱减轻,沉积增多;尿道周边组织胶原容积分数、BMMSC比例、线粒体膜电位、线粒体ATP含量、SDF-1αmRNA表达增加,ROS表达减少(P<0.05)。与电针组比较,针刺组、电刺激组小鼠BLPP、ALPP下降(P<0.05);尿道周边组织胶原容积分数、BMMSC比例、线粒体膜电位、线粒体ATP含量、SDF-1αmRNA表达降低,ROS表达增加(P<0.05)。实验二:与电针组比较,电针+ADM3100组小鼠BLPP、ALPP下降(P<0.05);尿道周边组织胶原容积分数、BMMSC比例、线粒体膜电位、线粒体ATP含量、SDF-1αmRNA表达降低,ROS表达增加(P<0.05)。结论电针“次髎”可能通过促进SUI小鼠内源性BMMSC归巢改善尿道周边组织线粒体稳态失衡,进而改善小鼠SUI。