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关键词： 酒精相关性肝病   单核苷酸多态性   肝脏脂肪变性   肝纤维化  

摘要： 酒精相关性肝病(alcohol-associated liver disease,ALD)是因长期过量饮酒引起的包括肝脏脂肪变性、炎症、纤维化、肝硬化及肝细胞癌等一系列病理特征在内的肝脏疾病。ALD的发生发展不仅与饮酒量及饮酒时长相关,个体遗传背景的差异在疾病易感性和临床表型多样性中同样起关键作用。近年来,单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)作为人类基因组中最常见的遗传变异形式,其在ALD的发生发展中的作用机制引起广泛关注。该文综述了近年来与ALD发生发展密切相关的基因SNP的研究进展,旨在为构建基于SNP的遗传风险评估模型,开展高危人群的早期筛查、个体化干预及预后判断提供重要依据。

关键词： 荷叶碱   人脐静脉内皮细胞   炎症   凋亡   Toll样受体4/核因子κB  

摘要： 目的研究荷叶碱对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症的作用及其机制。方法体外培养的HUVECs经不同浓度的荷叶碱(0.6、1.25、2.5、5、10、20μmol·L^(-1))处理24 h后再用LPS(1μg·mL^(-1))刺激12 h,通过CCK-8试剂盒检测内皮细胞活性,确定荷叶碱的最适宜浓度为10μmol·L^(-1),并利用此浓度进行后续实验。将HUVECs随机分为4组:空白对照组;荷叶碱组(10μmol·L^(-1));LPS组(1μg·mL^(-1));LPS(1μg·mL^(-1))+荷叶碱(10μmol·L^(-1))组。利用实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附测定试剂盒检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子的表达;使用蛋白质印迹法检测环氧化酶-2(COX2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(c-caspase-3)、Toll样受体4(TLR4)、IκB激酶β(IKKβ)、核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)和核因子κB p65亚基(p65)的蛋白表达水平;采用免疫荧光染色法检测细胞p65蛋白表达。结果与空白对照组比较,LPS组细胞活力显著降低(P<0.01);IL-1β、IL-6及TNF-α的转录及蛋白表达水平显著上调,COX2和iNOS的蛋白表达水平显著提高(P<0.01);Bax/Bcl-2和c-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与LPS组比较,LPS+荷叶碱组细胞活力显著提高(P<0.05);炎症反应减弱,细胞凋亡减少,Bax/Bcl-2和c-caspase-3蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。结论荷叶碱可抑制LPS诱导的HUVECs炎症和凋亡损伤,可能通过抑制Toll样受体4(TLR4)/信号通路发挥作用,为进一步探究荷叶碱治疗脓毒血症的分子机制和临床应用提供科学依据。

关键词： 天麻   多糖   天麻素   对羟基苯甲醇   白酒   检测方法   稳定性  

摘要： 该研究基于苯酚-硫酸法与高效液相色谱法(HPLC),建立了天麻中多糖、天麻素及对羟基苯甲醇的定量检测方法,并完成方法学验证。实验结果表明:天麻多糖在0~15.4239mg/L浓度范围内线性关系良好(R^(2)=0.9999),天麻素与对羟基苯甲醇的线性范围分别为2.1201~31.8015mg/L(R^(2)=0.9999)和1.7337~12.1360mg/L(R^(2)=0.9999)。方法学验证显示,该方法精密度高(RSD≤5%)、稳定性与重复性良好(RSD≤1.66%),且加标回收率符合要求,表明方法准确可靠。在酒体稳定性研究中,天麻多糖在冷冻(-5℃)条件下含量明显下降(降幅为27.8%),而天麻素在高温(50℃)条件下含量明显增加(增幅为68.5%)。对羟基苯甲醇在室内避光、冷冻及高温条件下均呈下降趋势,其中高温条件下降幅最大(43.0%)。上述研究结果为天麻功能成分在酒体中的稳定性评估及实际应用提供了科学依据。

关键词： 墨旱莲多糖   单因素   响应面分析   Box-Behnken  

摘要： 目的对墨旱莲多糖的提取工艺进行系统的研究,以期获得高提取率的多糖提取工艺。方法通过水提法提取墨旱莲多糖,经单因素实验分析,不同料液比、回流时间及回流次数等因素对多糖提取率的影响,并初步筛选出较为理想的提取工艺范围,再借助Box-Behnken响应面法,确定最佳的提取条件组合。结果确定最佳提取工艺条件,液料比为33∶1(mL∶g),回流时间为120min,回流提取3次。在最优提取条件下,墨旱莲多糖的得率平均值为10.75%。结论将Box-Behnken法应用于水提墨旱莲多糖工艺的优化是可行的,建立了一种经济、简便、可行的墨旱莲多糖提取方法。

关键词： 新农科   蛋白质组学   人工智能   教学改革   农业导向  

摘要： 结合智慧农业加速发展的背景,针对农林院校蛋白质组学课程脱离现实需求的核心痛点,该文系统开展AI赋能的课程教学改革实践。改革以“AI融合、农业应用”为导向,通过重构三维教学目标,优化AI技术深度融合的课程知识体系,更新涵盖AI分析工具、虚拟仿真项目的教学资源库;同时创新构建“双平台协同教学+学训赛一体实践”的智慧教学模式,并建立多维度量化评价体系,形成“理论、实践、创新”三位一体教学新范式。改革显著增强课程的前沿性与实践性,为培养适配农业产业发展、能运用智能技术解决实际问题的理农复合型创新人才提供可行路径。

关键词： 脊髓损伤   水凝胶   石墨烯   大鼠  

摘要： 目的探讨复合石墨烯蛋白质水凝胶修复大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI),对其神经再生的作用。方法采用自由基共聚法制备复合石墨烯蛋白质水凝胶,通过剪切实验检测黏附性等物理性能,MTT法检测细胞毒性。取24只成年雌性SD大鼠,随机分为假手术组、损伤组、水凝胶组、水凝胶+石墨烯组,每组6只;假手术组仅暴露T_(10)节段脊髓组织,其余组采用椎板切除联合脊髓组织切除术制备T_(10)节段SCI模型;水凝胶组、水凝胶+石墨烯组进一步于缺损处分别植入单纯蛋白质水凝胶、复合石墨烯蛋白质水凝胶,损伤组不作进一步处理。术后观察各组大鼠存活情况,术后12周内每周采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能恢复情况;12周时行运动诱发电位检测评估神经电生理功能后,取T_(10)节段脊髓组织行HE染色观察组织病理形态,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、层粘连蛋白(Laminin)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)免疫荧光染色观测损伤区胶质瘢痕形成及轴突再生情况。结果剪切实验及MTT法检测显示,制备的复合石墨烯蛋白质水凝胶具有良好水下黏附性及细胞相容性。术后各组大鼠均存活至实验完成,术后12周内水凝胶组、水凝胶+石墨烯组BBB评分随时间延长呈持续升高趋势(P<0.05);12周时水凝胶组、水凝胶+石墨烯组BBB评分均高于损伤组,且水凝胶+石墨烯组高于水凝胶组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后12周神经电生理检测显示,水凝胶+石墨烯组运动诱发电位振幅高于损伤组及水凝胶组(P<0.05),与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色示水凝胶+石墨烯组脊髓组织形态最接近假手术组,组织结构完整性明显恢复,空泡化及炎症细胞浸润极少。免疫荧光染色定量分析示,损伤组GFAP、Laminin荧光相对强度高于其余各组(P<0.05),水凝胶+石墨烯组低于水凝胶组(P<0.05);损伤组5-HT荧光相对强度低于其余各组(P<0.05),水凝胶+石墨烯组高于水凝胶组(P<0.05),与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复合石墨烯蛋白质水凝胶可有效修复大鼠SCI,显著抑制损伤区胶质瘢痕形成,促进5-HT阳性轴突再生,改善大鼠神经电生理功能及后肢运动功能恢复,是一种具有潜在应用价值的SCI修复材料。

关键词： 红心藜   台湾红藜   营养评价   氨基酸   风味  

摘要： 为了系统评估红心藜Chenopodium album ***的食用营养价值,本研究对其籽粒的主要营养功能成分、脂肪酸组成、氨基酸构成以及挥发性成分进行了全面分析,并与台湾红藜Chenopodium formosanum进行了对比评价。研究结果显示,两种藜麦均属于高钾低钠食品。相较于台湾红藜,红心藜具有较低的蛋白质和脂肪含量,但黄酮类化合物含量较高,风味物质种类较为丰富,但香气强度较弱。综合来看,红心藜的营养价值略低于台湾红藜。然而,鉴于其优异的抗逆性,红心藜可作为本土藜麦品种选育与改良的优质种质资源。

关键词： 空山牛   去势   氨基酸   营养价值   牛肉风味  

摘要： 为探讨去势对空山牛牛肉营养价值和风味物质的影响,试验选取12头健康的36月龄空山牛公牛,经药物驱虫后,根据体重进行配对试验设计,设置未去势组和去势组,每组6头,育肥试验结束后每组各选取3头屠宰,测定牛肉中常规营养成分和氨基酸含量。结果表明,与未去势组相比,去势组胴体脂肪沉积能力更强;去势组氨基酸组成含量更丰富,必需氨基酸、非必需氨基酸和总氨基酸含量均呈现增加趋势,人体必需氨基酸评分更优,风味氨基酸中鲜味氨基酸和甜味氨基酸含量更高。未去势组和去势组空山牛牛肉蛋白质中必需氨基酸/总氨基酸、必需氨基酸/非必需氨基酸基本符合FAO/WHO理想蛋白质模式要求,人体必需氨基酸评分均高于FAO/WHO氨基酸评分标准。说明空山牛牛肉属于优质蛋白质肉类,空山牛具有生产优质牛肉的潜质,去势育肥能够提高牛肉营养价值,改善牛肉风味,是生产高档牛肉的重要方式。

关键词： 蛋白质含量   Sabin株脊髓灰质炎病毒   改良Lowry法   Lowry2法  

摘要： 目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)(Vero细胞)蛋白质含量检测的改良Lowry法,验证后,与Lowry2法进行比较。方法对建立的改良Lowry法进行专属性、线性范围、重复性、中间精密度、准确度、耐用性验证后,与Lowry2法sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型单价原液及成品蛋白质含量检测结果进行比较,并进行改良Lowry法的适用性研究。结果2种稀释液稀释的同一浓度标准品蛋白质含量检测结果的总RSD为2.1%;蛋白质含量在0~50μg/mL范围内线性良好,R2>0.99,30μg蛋白质回收率为101%~103%;不同实验人员在同一设备上对sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型单价原液及成品重复6次检测的总RSD分别为1.2%、0.0%、1.9%、2.4%,同一实验人员在不同设备上重复6次检测的总RSD分别为1.4%、0.0%、1.9%、2.4%;sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型单价原液及成品的加标回收率分别为96%~102%、99%~101%、96%~101%、100%~103%;室温放置30和50 min后,sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型单价原液及成品的总RSD分别为2.1%、1.1%、2.2%、2.4%。改良Lowry法操作步骤更简单,二者回收率接近(F=1.655,P>0.05),均可去除疫苗中杂质。sIPVⅠ、Ⅱ、Ⅲ型单价原液及成品各3批12次适应性检测样品均合格。结论改良Lowry法可用于sIPV(Vero细胞)蛋白质含量的检测,可作为产品有效性评价指标。

关键词： 糖尿病肾病   支链氨基酸   激活转录因子4   哺乳动物雷帕霉素靶蛋白  

摘要： 目的探讨支链氨基酸(branched chain amino acids,BCAAs)分解代谢障碍诱导肾小球足细胞损伤的分子机制,并促进高脂饮食诱导的肥胖小鼠糖尿病肾病发生发展的作用和机制研究。方法(1)细胞实验:(1)提取6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠(体质量20~25 g)原代肾小球足细胞进行体外培养,采用完全随机化法分为3组(n=4):低糖组(low glucose,LG,5.5 mmol/L)、高糖组(high glucose,HG,25 mmol/L)、高糖+3 mmol/L BCAA(HG+BCAA)组,Western blotting检测其BCAAs代谢相关分子(PPM1K、BCKD、BCKD pSer293)、足细胞功能标志物(Nephrin、Synaptopodin和WT1)和凋亡分子Cleaved Caspase-3的表达水平;免疫组化和Western blotting检测其mTOR信号通路(p70s6K pThr389、p70s6k、ATF4 pSer166和ATF4)及凋亡通路分子(Chop和Trib3)的表达水平。(2)体外培养ATF4敲除成纤维细胞系,采用完全随机化法分为2组(n=4):对照组和BCAA组,Western blotting检测其凋亡通路分子的表达水平。(3)提取6~8周龄C57BL/6J小鼠原代肾小球足细胞进行体外培养,采用完全随机化法分为3组(n=4):HG(25 mmol/L)组、HG+3 mmol/L BCAA(HG+BCAA)组、HG+3 mmol/L BCAA+雷帕霉素(HG+BCAA+Rap)组,Western blotting检测其mTOR信号通路及凋亡通路分子的表达水平。(2)动物实验:构建高脂饮食(high fat diet,HF)诱导肥胖的小鼠模型,将6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠采用随机数字表法随机分为4组:HF组、HF/配对组(HF/Paired,食物摄入量与HF/BCAA组匹配)、HF/BCAA组(饮水添加4%BCAAs)和HF/BCAA+Rap干预组。PAS染色、油红O染色和肾甘油三酯水平检测肾脏病理形态及脂质沉积;生化检测分析尿液微量白蛋白、肌酐含量及尿白蛋白/肌酐比值;免疫荧光/RT-PCR检测肾小球足细胞功能分子(Nephrin和Synaptopodin)和纤维化相关分子(CollagenⅣ)表达水平;免疫组化及Western blotting检测肾脂代谢分子(FABP4、CD36、PGC1α和PPARα)及mTOR信号通路及凋亡通路分子的表达水平。结果(1)细胞实验:(1)高糖处理足细胞PPM1K表达降低,BCKD pSer293表达升高(P<0.0001)。BCAAs下调高糖处理的足细胞Nephrin表达(P<0.0001)和Synaptopodin表达(P<0.01),上调Cleaved Caspase-3表达(P<0.0001)。BCAAs显著上调足细胞p70s6K pThr389、p70s6k、ATF4 pSer166、ATF4、Chop和Trib3的蛋白表达(P<0.0001)。(2)敲除ATF4显著阻断BCAAs激活mTOR诱导的Chop和Trib3表达(P<0.0001)。(3)mTOR抑制剂Rap显著抑制ATF4 pSer166、ATF4、Chop和Trib3的表达(P<0.0001)。(2)动物实验:(1)外源性补充BCAAs升高高脂饮食小鼠尿微量白蛋白/肌酐比值(P<0.0001),加重肾小球滤过膜损伤,同时下调肾小球WT1、Nephrin和Synaptopodin的表达(P<0.0001),上调肾小球p70s6k pThr389的表达(P<0.01)和Chop的表达(P<0.0001);并促进肾小管管型形成和肾脏脂质蓄积(P<0.0001),上调肾小管FABP4和CD36的表达。(2)mTOR抑制剂Rap阻断mTOR-ATF4-Chop/Trib3通路,下调肾小球ATF4 pSer166、ATF4、Chop和Trib3的表达(P<0.0001),改善肾脏脂质沉积(P<0.0001)、肾小管管型形成及蛋白尿(P<0.0001)。结论BCAAs代谢障碍通过激活mTOR-ATF4-Chop/Trib3信号通路诱发肾小球足细胞功能障碍和凋亡,导致肾脏脂质沉积、肾小管管型形成和肾纤维化进展,促进糖尿病肾病发生发展。