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关键词： 猪瘟病毒   E2蛋白   单克隆抗体  

摘要： 猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。CSF传播范围覆盖全球,对畜牧业可持续性发展和食品安全带来严重威胁。CSFV囊膜糖蛋白E2在病毒的生命周期中扮演着关键角色,其不仅是介导病毒吸附及侵入宿主细胞的主要功能蛋白,也是刺激宿主免疫系统产生中和抗体的核心抗原。单克隆抗体(monoclonal antibodies,mAbs)是由单一B细胞产生的针对特定抗原表位的抗体,具有高度特异性、均一性及可标准化生产的特性,在医学诊断、治疗和科学研究等领域展现了广阔的应用前景。近年来,针对CSFV E2蛋白的单克隆抗体制备技术持续创新,从传统杂交瘤技术向基因工程技术拓展,为高性能抗体的获取提供了有力支撑。笔者围绕CSFV E2蛋白单克隆抗体制备技术现状进行综述,重点分析其在鉴别诊断中的应用价值,深入探讨了其在解析病毒抗原性和E2蛋白表位分析方面的研究成果,并总结了其在疫苗研发与评估领域和病毒学基础研究中的作用,旨在为CSFV病原学研究、新型诊断试剂开发及疫苗设计等提供参考。

关键词： 稳定同位素生物考古   单体氨基酸稳定同位素分析   古食谱   营养级位置   食物资源  

摘要： 稳定同位素生物考古是生物考古研究的重要组成部分,可为揭示先民(动物)的营养级以及食物来源提供直接的科学证据。相较于骨胶原的整体同位素分析,单体氨基酸稳定同位素分析(CSIA-AA)能够有效弥补其在同位素基线变异、施肥效应、生理压力等方面的内在局限,更为精确地揭示古代人群或动物的营养级位置与食物资源利用情况。当前,该分析方法已成为国际生物考古界的研究前沿,但在我国的应用仍十分薄弱。为此,本文系统介绍了CSIA-AA的基本概念与分析原理,结合典型案例阐述了其在古食谱研究中的独特优势,系统梳理了其在营养级估算参数优化、机器学习辅助食谱判别、个体生活史重建等方面的重要研究进展。最后,本文对CSIA-AA在我国考古学领域的应用前景进行了展望。

关键词： 灵芝菌丝体多糖   二型糖尿病   肠道屏障   肠道菌群  

摘要： 本研究旨在系统评价灵芝菌丝体多糖(GL)对二型糖尿病(T2DM)的体内改善作用,并深入阐释其基于肠道屏障与菌群调节的作用机制。结果显示,GL能剂量依赖性地改善T2DM小鼠多饮、多食及体重减轻的症状,显著降低空腹血糖。在代谢调节方面,GL有效降低了血清和肝脏中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA)水平,同时提升了高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。GL还改善了肝功能,使血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性下降,并增强了机体的抗氧化能力,表现为超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性显著上升而丙二醛(MDA)含量降低。组织病理学分析进一步证实,GL减轻了肝脏脂肪变性及结肠黏膜结构损伤。机制研究发现,GL干预可显著上调结肠紧密连接蛋白(ZO-1, Claudin-1, Occludin)的蛋白与基因表达,降低血清促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的水平,并促进黏蛋白MUC2的基因表达。通过16S rRNA测序分析发现,GL能重塑紊乱的肠道菌群结构,增加菌群α多样性,在门水平上调整厚壁菌门与拟杆菌门比值,在属水平上显著提升阿克曼氏菌属(Akkermansia)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)及布劳特氏菌属(Blautia)等有益菌的相对丰度。综上所述,灵芝菌丝体多糖可通过多靶点协同作用,在调节糖脂代谢、改善氧化应激与肝损伤的同时,有效维护肠道屏障完整性、抑制系统性炎症并调节肠道菌群稳态,从而发挥改善T2DM的功效。本研究为GL作为功能性食品或辅助治疗T2DM的潜在应用提供了新的机制依据。

关键词： 番鸭   FGF5蛋白   卵泡颗粒细胞   多克隆抗体   亚细胞定位  

摘要： 本研究旨在制备并验证针对番鸭FGF5蛋白的特异性多克隆抗体,为其在细胞水平的表达检测与功能研究提供可靠的实验工具。以黑羽番鸭卵巢组织cDNA为模板,构建重组真核表达载体pCAGGS-FGF5和干扰载体shRNA-FGF5。通过生物信息学分析筛选FGF5蛋白155~274位氨基酸区域作为免疫原片段,构建原核表达载体pET30a-FGF5,表达并纯化重组蛋白,用于免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA、Western Blot及间接免疫荧光技术评估抗体的效价和特异性。结果显示,pET30a-FGF5经诱导表达与纯化后获得高质量重组蛋白,所得抗体效价达1:102 400;Western Blot在约30? kDa处可检测到清晰的特异性条带;在卵巢颗粒细胞中过表达或干扰FGF5基因后,制备的FGF5多克隆抗体能灵敏识别不同表达水平的FGF5蛋白,亚细胞定位显示其在颗粒细胞中呈核-质双重分布。综上,本研究成功制备了具有高效价与良好特异性的番鸭FGF5多克隆抗体,为深入探究其在水禽卵巢发育及繁殖调控中的作用提供了关键实验基础与理论支撑。

关键词： 牛冠状病毒   RT-RAA   CRISPR/Cas12a   一管式核酸检测  

摘要： 为构建一种快速、简便、适用于基层检测牛冠状病毒(bovine coronavirus, BCoV)的可视化方法,本研究利用逆转录重组酶介导链替换核酸扩增技术(RT-RAA)与CRISPR/Cas12a技术,建立针对BCoV N基因的一管式核酸可视化检测方法。该方法无需专业的仪器设备和实验人员,操作简便,在37 ℃恒温条件下反应40 min,即可检测低至3.42×101 copies/μL的RNA转录本,且与传染性牛鼻气管炎病毒、牛轮状病毒、牛肠道病毒、牛病毒性腹泻病毒均不存在交叉反应,具有较高特异性;同时该方法具有良好的重复性。本研究结果为基层单位快速检测牛冠状病毒提供了新的技术方法。

关键词： 海参性腺   多糖   酶解   提取率  

摘要： 为探究海参性腺多糖的最优提取方法,比较了多种提取方式对海参性腺多糖提取率的影响,在选取最佳提取方法的基础上优化提取条件。结果表明,相比于热水提取法和碱提取法,酶解法的海参性腺多糖提取率更高,其中菠萝蛋白酶提取效果最佳。优化后的菠萝蛋白酶提取海参性腺多糖的工艺条件为:加酶量12 000 U·g-1、料液质量比1∶40、酶解温度55℃、酶解时间4 h,在此条件下,海参性腺的多糖得率高达10.7%。

关键词： 熟地黄   多糖   低共熔溶剂   抗氧化   抗衰老  

摘要： 为优化熟地黄多糖的提取工艺并评价其抗氧化和抗衰老的活性,本研究采用层次分析-基于指标相关性的权重确定(analytic hierarchy process-criteria importance through intercriteria correlation,AHP-CRITIC)复合加权法结合单因素试验和Box-Behnken响应面法对超声辅助低共熔溶剂(deep eutectic solvents,DES)提取熟地黄多糖的工艺进行优化,并以DPPH自由基、ABTS阳离子自由基以及羟基自由基清除实验和野生型秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为模型评价其抗氧化和抗衰老的活性。结果表明,超声辅助DES提取熟地黄多糖的最佳工艺为:氯化胆碱和尿素以摩尔比1∶3组合,控制含水率为48%,并以料液比1∶42(g/mL),提取温度73 ℃、超声功率500 W,提取时间46 min进行提取,多糖得率为15.07%;该多糖在3种模式下对自由基的清除率分别达到了75.53%、73.86%和65.95%;同时,该多糖处理后的线虫与空白组相比,平均寿命可增加9.09%,在氧化应激及热应激下存活时间增加17.68%和33.33%。本研究建立了一种绿色、高效的熟地黄多糖提取工艺,可为熟地黄药材资源的开发和应用提供理论参考。

关键词： 平胃散加味方   芪桂苓合剂   急性肺损伤   PI3K-Akt信号通路  

摘要： 目的:通过腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠模型,探究平胃散加味方改善ALI的作用及可能作用机制。方法:将72只大鼠随机分为空白组,模型组,阳性对照组(醋酸泼尼松,3 mg·kg-1),平胃散加味方低、中、高剂量组(7.6、15.2、30.4 mg·kg-1),灌胃给药7 d后,除空白组腹腔注射生理盐水外,其余各组通过腹腔注射LPS构建大鼠ALI动物模型,造模24 h后取材。测定大鼠动脉血气值和淋巴细胞数量;计算大鼠肺指数和肺组织湿/干质量比(mW/mD);酶联免疫吸附试验检测大鼠血浆和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中TNF-α、IL-6和IL-1β水平;苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化;免疫蛋白印迹法检测肺组织中PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果:动物实验结果表明,与模型组相比,平胃散加味方组大鼠动脉血氧分压水平升高(P<0.01),炎症细胞数量降低(P<0.01);肺指数和肺组织mW/mD降低(P<0.05,P<0.01);血浆和BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β因子水平降低(P<0.05,P<0.01);肺组织形态损伤得到改善(P<0.01);肺组织中PI3K、p-Akt蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论:平胃散加味方可有效缓解LPS诱导的ALI炎症反应,保护肺组织,其机制可能与抑制PI3K-Akt信号通路的表达有关。

关键词： 香菇   近红外光谱   化学计量学   多糖   蛋白   快速检测  

摘要： 为快速检测香菇中多糖与蛋白含量,研究利用化学计量法分别测定不同产地共124份香菇的多糖与蛋白含量并作为参比,利用近红外光谱技术采集124份样品的光谱数据,利用马氏距离剔除异常值后,结合肯纳德-斯通(Kennard-Stone,KS)划分样本集,对近红外光谱进行不同方式预处理,利用最优预处理方法采用竞争自适应权重加权(competitive adaptive reweighted sampling,CARS)和变量组合整体分析-遗传算法(variable combination population analysis-genetic algorithm,VCPA-GA)提取特征波长,结合偏最小二乘法(partial least squares regression,PLSR)、支持向量回归(support vector regression,SVR)和冠豪猪算法优化-小二乘支持向量机(crested porcupine optimizer - least squares support vector machine,CPO-LSSVM)3种建模方法构建6种数学模型,对各模型的预测精度进行对比分析。建模结果表明,对于多糖含量的最优预测模型为萨维茨基-戈雷滤波平滑(Savitzky-Golay,SG)-乘性散射校正(multiplicative scatter correction,MSC)+CARS+CPO-LSSVM,其预测集相关指数分别为预测决定系数(Prediction coefficient of determination,R2p)为0.9489,预测均方根误差(Root Mean Square Error of Prediction,RMSEP)为0.0102 g/g,相对分析误差(ratio of performance to deviation,RPD)为4.4238;对于蛋白含量的最优预测模型为标准正态变换预处理(standard normal variate,SNV)+CARS+SVR,其预测集相关指数分别为Rp为0.9280,RMSEP为0.0125 g/g,RPD为3.8056。该研究对于香菇多糖和蛋白的预测,化学法和近红外仪器法测定间无显著差异,证实了近红外光谱技术应用于香菇主要品质成分快速检测的可行性与优越性,能够满足对香菇多糖和蛋白含量的检测。

关键词： 嗜酸乳杆菌   特异性引物   锁核酸   实时荧光定量PCR  

摘要： 随着益生菌产业的快速发展,菌株水平的精准鉴定已成为保障产品质量及追溯污染来源的核心环节,该文旨在建立一种嗜酸乳杆菌LIHUO 1978(Lactobacillus acidophilus)的株特异性定量检测技术。该文以嗜酸乳杆菌LIHUO 1978的全基因组信息为基础,以比较基因组数据分析作为依据,设计嗜酸乳杆LIHUO 1978的株特异性引物,通过锁核酸(locked nucleic acid, LNA)修饰增强引物特异性,并建立实时荧光定量PCR检测体系。结果表明,该研究所设计的引物特异性强,能够在7株嗜酸乳杆菌中对菌株LIHUO 1978进行特异性验证;所建立的定量检测方法,灵敏度高,最低检出限为103 CFU/mL,构建的标准曲线R2为0.993 2,具有良好的线性关系;在复合菌粉和乳酸菌饮料中,该方法稳定性强,可在不同混菌产品及食物基质干扰条件下实现LIHUO 1978菌株的准确检出。该研究建立了株特异性的嗜酸乳杆菌LIHUO 1978的定量检测体系,不仅为该菌株在多种产品中的定量检测提供了技术支持,并且为其他益生菌菌株的定量检测提供了参考。