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关键词： 牛耳枫   查尔酮合成酶(CHS)   基因克隆   生物信息学  

摘要： 为了揭示牛耳枫查尔酮合成酶基因(DcCHS)的特征及潜在功能,基于牛耳枫转录组数据筛选高表达候选基因,提取总RNA合成cDNA后,利用PCR技术克隆目的基因。采用生物信息学方法分析基因的理化性质、结构域、亚细胞定位及空间结构,进行多序列比对和系统发育树构建,并通过分子对接验证CHS蛋白与小分子的结合活性。结果表明,DcCHS1、DcCHS2和DcCHS3的开放阅读框(ORF)全长分别为1188、1188 、1023 bp,G+C含量均大于51%,分别编码395、395、340个氨基酸。DcCHS1、DcCHS2、DcCHS3蛋白的分子质量分别为43.08、43.03和37.03 ku。3个DcCHS均为非分泌型蛋白,其中,DcCHS1为弱酸性不稳定蛋白,DcCHS2和DcCHS3为弱酸性稳定蛋白。亚细胞定位预测显示其主要位于细胞质。3个DcCHS蛋白的脂肪指数均大于90,且均无信号肽和跨膜结构域。3个DcCHS蛋白均含有CHS催化中心的4个保守残基(Cys、Phe、His、Asn)及CHS家族特征序列“WGVLFGFGPGLT”。系统发育分析显示,牛耳枫CHS基因与柑橘、拟南芥等物种的CHS基因亲缘关系较近。分子对接结果显示,DcCHS蛋白与柚皮素、根皮素等黄酮类小分子具有良好的结合能力。3个DcCHS基因可能在花色苷积累、非生物胁迫响应等方面起到了重要作用。

关键词： 黄酒   外加氮源   风味   氨基酸   挥发性成分  

摘要： 为探究外加酵母可同化氮源(Yeast Assimilable Nitrogen,YAN)对黄酒风味品质的调控机制,本研究以氯化铵(NH4Cl)、精氨酸(Arg)和谷胱甘肽(GSH)为外加氮源,通过模拟发酵实验系统分析其对黄酒理化指标、挥发性成分、游离氨基酸和有机酸的影响,并结合感官评价验证风味品质差异。结果表明:NH4Cl组总糖(22.04 g/L)与总酸(7.36 g/L)显著高于对照组(未添加外加氮源);Arg组氨基酸态氮(0.58 g/L)积累最优,鲜味氨基酸定向富集,酯类种类增至19种,总糖(9.37 g/L)与总酸(4.68 g/L)最低,有机酸总量最高;GSH组己酸乙酯含量最高,风味与对照组差异最小,且游离氨基酸总量提升14%,定向富集琥珀酸等风味协调型有机酸。主成分分析证实不同YAN驱动的挥发性物质差异显著(累计方差贡献率75%),其中Arg与GSH通过调控酯类合成及氨基酸代谢优化风味平衡。感官评价显示,Arg组在酒香浓郁度、酒体醇厚感上表现突出,GSH组香气协调性与余味持久度最优。综上,外加氮源通过调控酵母氨基酸代谢及酯类合成路径,差异化调节黄酒风味品质:NH4Cl适用于高级醇控制,Arg利于鲜味提升与酯类多样性拓展,GSH组则与对照组结果较为相似,维持风味稳定性。本研究为黄酒发酵工艺的氮源精准调控提供了理论依据。

关键词： 香兰素   人工抗原   细胞融合   杂交瘤细胞   单克隆抗体  

摘要： 香兰素过量摄入存在健康风险,建立其精准检测方法至关重要,而高灵敏度、高特异性的单克隆抗体是实现免疫学快速检测的关键。以香草酸为半抗原,采用活性酯法与载体蛋白(BSA、OVA)偶联,合成香兰素人工抗原(免疫原与包被原)。通过紫外全波长扫描及凝胶电泳鉴定偶联效果。将免疫原免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,多克隆抗体效价达1:160 000,表明人工抗原具有良好的免疫原性。选取效价较高的小鼠进行细胞融合,经3次亚克隆筛选获得两株阳性杂交瘤细胞(1A2和3D4),分别注入小鼠(B1和B2)腹腔制备腹水,获得抗香兰素单克隆抗体。间接ELISA结果显示,两种腹水效价均为1:819 200;间接竞争ELISA测定腹水的灵敏度,B1和B2小鼠腹水的半数抑制浓度分别为1610 ng/mL和290 ng/mL。其中,B2腹水与乙基香兰素、甲基香兰素、香豆素、BSA及OVA的交叉反应率均低于0.1%。成功制备出高灵敏度、高特异性的香兰素单克隆抗体,为后续开发香兰素免疫学检测方法奠定了基础。

关键词： 类风湿关节炎   微小核糖核酸   巨噬细胞极化   炎症反应   信号通路  

摘要： 类风湿关节炎(RA)是一种以慢性滑膜炎症和关节破坏为特征的自身免疫性疾病,其发病机制复杂,巨噬细胞极化在疾病进展中起着重要作用。近年来,多项研究发现微小核糖核酸(miRNA)作为重要的转录后调控因子,可以通过调节巨噬细胞的极化状态参与RA的炎症反应过程,从而加重关节损伤。该文综述了各种miRNA在调控巨噬细胞极化过程中的作用机制,重点探讨不同miRNA对巨噬细胞极化的调控作用及其在RA中的潜在应用价值。

关键词： 菊粉   放射性肠损伤   肠道干细胞   小鼠   电离辐射   益生元   肠道上皮再生   肠道干细胞标志物  

摘要： 目的 探讨菊粉对放射性肠损伤的防护作用及其相关机制。方法 选取6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常组、单纯照射组、50g/kg菊粉干预组、100g/kg菊粉干预组、150g/kg菊粉干预组、50g/kg菊粉干预+照射组、100g/kg菊粉干预+照射组和150g/kg菊粉干预+照射组,每组8只。经5周菊粉喂养后,小鼠接受全腹部10GyX射线照射(照射野覆盖胸骨剑突至耻骨联合),剂量率为1.17Gy/min。每日监测小鼠体质量,照射后第5日收集小鼠小肠组织,通过测量结肠长度评估肠损伤程度;采用HE染色观察肠道组织形态,PCNA与Ki-67免疫组织化学染色检测肠隐窝细胞增殖能力;采用免疫荧光共定位染色检测肠道干细胞标志物Lgr5、Ascl2与增殖标志物Ki-67的共表达;并采用qRT-PCR及Westernblotting检测辐射及正常状态下肠道干细胞标志物的mRNA和蛋白表达水平。结果 与单纯照射组相比,50g/kg菊粉显著减缓小鼠体质量下降(P<0.05),50g/kg(P<0.01)和100g/kg(P<0.05)菊粉缓解结肠缩短,改善肠道绒毛损伤(P<0.01)及隐窝损伤(P<0.01,P<0.05),并上调PCNA(P<0.01,P<0.05)、Ki-67表达(P<0.05);免疫荧光结果显示,辐射显著降低Lgr5+、Ascl2+干细胞数量并抑制Ki-67增殖信号,隐窝结构破坏明显;菊粉干预可显著恢复干细胞荧光信号强度与阳性细胞比例,提高干细胞与增殖指标的共定位水平,其中50g/kg、100g/kg菊粉改善效果较好;qRT-PCR显示菊粉上调受照射小鼠肠道干细胞相关基因表达(P<0.05);在正常小鼠中,不同剂量菊粉对干细胞标志物呈差异性调控,可适度提升健康小鼠肠道干细胞的干性。结论菊粉可通过恢复肠道干细胞数量、增强其增殖活性及上调干细胞标志物表达,促进电离辐射诱导的肠道损伤修复,并能够调控正常小鼠的肠道干细胞稳态。

关键词： 灵芝   多糖   分离纯化   结构   生物活性   构效关系  

摘要： 灵芝多糖是从灵芝属真菌中提取的、具有不同结构特征及活性的大分子化合物。本文综述了其结构特征、提取纯化方法及生物活性,并重点探讨了结构类型与生物功能之间的构效关系。首先,基于现有研究系统归纳了灵芝中包括β-(1→3)-葡聚糖、β-(1→6)-葡聚糖及半乳聚糖等在内的各类多糖的结构特点。其次,梳理了从传统水提、酸碱提取到超声、微波、酶辅助及深共熔溶剂等新型提取技术的发展,并分析了提取方式对多糖得率、结构及活性等方面的影响。在此基础上,阐述了灵芝多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、代谢调节和神经保护等方面的生物活性,并从构效关系角度剖析了β-(1→3)骨架、三股螺旋构象及适度支化等结构特征对其功能的基础性作用。本文通过整合现有研究成果,构建了灵芝多糖构效关系的关联框架,为其在功能食品、药物开发及相关领域的精准设计与系统利用提供了理论依据与重要参考。

关键词： Aggregation-induced emission   Calix[41 arene   Chiral recognition  

摘要： Two chiral AIEgens derived from calix[41arene were synthesized, which exhibited prominent enantiose & hybull;lective recognition capabilities. Experimental results demonstrated that these AIEgens could efficiently discriminate between 12 types of chiral acids and amino acids. Notably, upon interaction with D-serine and L-serine, the fluorescence intensity ratio of the system reached 42.0, indicative of exceptional chiral recognition performance. The morphologies of the systems before and after identification were characterized using scanning electron microscopy (SEM). It was found that different enantiomers induced distinct morphological structures, revealing the intrinsic relation & hybull;ship between the chiral-dependent assembly behavior and the fluorescence response.

关键词： 手性   构象   构型   动态外消旋   隐手性   柱芳烃  

摘要： 手性是指物体与其镜像不能重合的现象。手性分子与其镜像互为对映异构体。在立体化学研究中,手性可分为构型手性和基于构象的手性。其中,构型手性基于原子连接的固定空间排列,而构象手性则是由单键旋转引起的瞬时不对称导致的。与构型手性相比,基于构象的手性是一种特殊的动态手性,是指分子虽无构型手性,但在特定构象下呈现手性的现象。本文主要介绍meso-酒石酸、联苯及柱[5]芳烃的手性构象;并结合实验结果,阐述柱[5]芳烃的手性构象在隐手性氨基酸检测中的应用。

关键词： 手性   电子圆二色谱   理论计算   氨基酸  

摘要： 为适应现代学科交叉发展趋势的本科课程建设,本创新实验将电子圆二色光谱(ECD)仪器表征与量子化学计算结合,测定手性氨基酸图谱、筛选优化优势构象并计算理论光谱,通过对比实验与理论结果判定其绝对构型,并深入分析跃迁性质。本实验可以帮助学生掌握大型分析仪器的使用和ECD的理论计算方法,提升学生科研能力。

关键词： 鹰嘴豆芽素A   帕金森病   自噬   溶酶体   NLRP3炎性小体   脂多糖  

摘要： 目的 探究鹰嘴豆芽素A(biochanin A,Bioch A)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠的神经保护作用及机制。方法 首先,取40只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术(Sham)组、LPS 1 d组、LPS 3 d组、LPS 7 d组(n=10)。模型组小鼠黑质立体定位注射LPS溶液(2 g·L-1)构建PD模型,Sham组小鼠注射生理盐水。旷场、抓力实验检测小鼠的行为变化;免疫荧光检测黑质TH阳性神经元数量及LC3B表达;Western blot检测黑质TH及自噬-NLRP3炎性小体蛋白表达水平。随后,取50只雄性C57BL/6小鼠随机分为Sham组、LPS 7 d组、LPS + Bioch A(16、32、64 mg·kg-1)组(n=10)。造模后,Bioch A组小鼠灌胃Bioch A溶液,Sham组与LPS 7 d组小鼠灌胃超纯水,持续7 d。采用相同的检测方法,检测上述指标。结果 与Sham组相比,LPS组小鼠出现行为功能障碍(P<0.01),黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元损伤(P<0.01)、LC3B荧光信号增强(P<0.01)、自噬相关蛋白(LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin-1、P62、CTSB)及NLRP3炎性小体相关蛋白表达均升高(P<0.01)。与LPS 7 d组相比,Bioch A干预可缓解上述变化(P<0.01)。结论 Bioch A可通过改善自噬溶酶体功能障碍,抑制NLRP3炎性小体激活,对LPS诱导的PD模型小鼠发挥神经保护作用。