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关键词： 大熊猫   巴山木竹   竹叶   蛋白质   氨基酸  

摘要： 为探究大熊猫主食竹叶的氨基酸含量和质量对大熊猫随季节和海拔垂直迁移的觅食策略的影响,本研究以分布于陕西佛坪国家级自然保护区大熊猫活动区域的巴山木竹(Bashania fargesii)叶为研究对象,测定不同海拔、季节和龄级竹叶的氨基酸含量,采用氨基酸比值系数法评价竹叶营养价值。结果发现:巴山木竹叶富含大熊猫所需的17种氨基酸。在同一海拔或季节内,氨基酸含量在各海拔段及冬、春和秋季整体呈现出1年生大于2年生和多年生的趋势;粗蛋白与氨基酸含量随叶片成熟度增加而递减,1年生叶片含量显著高于2年生和多年生叶片;同龄级条件下,粗蛋白、总氨基酸、必需氨基酸、非必需氨基酸、滋味氨基酸和功能性氨基酸含量均以分布于海拔1500~1700 m的核心区及冬、春季竹叶中含量最高;巴山木竹叶氨基酸比例合理,不同海拔区域春、秋和冬季氨基酸比例接近或高于WHO/FAO理想氨基酸模式,赖氨酸为第一限制性氨基酸。综上,巴山木竹叶具有较高的氨基酸营养价值,其氨基酸含量与组成特征在季节、海拔及龄级间的差异显著,研究结果对于大熊猫栖息地的保护和管理具有重要意义。

关键词： 蛋白质   骨代谢   骨吸收   骨形成   膳食建议  

摘要： 随着全球老龄化人口的增多,中老年人群中与骨代谢相关的健康问题日益凸显,骨代谢研究逐渐成为当前生命科学与营养学领域研究的热点方向之一。本文旨在探讨蛋白质对骨代谢的调控作用,从植物蛋白、动物蛋白、双蛋白3方面分析其潜在作用机制。针对骨代谢失衡人群提出围绕蛋白质的推荐摄入量和膳食建议,为蛋白质营养干预策略在骨代谢疾病预防与管理中的应用提供科学依据。

关键词： 茭白壳   多糖   热水浸提法   抗氧化活性  

摘要： 以茭白壳为原料,采用热水浸提法提取多糖,以多糖提取率和DPPH自由基清除率为指标,通过单因素与正交实验优化提取工艺;利用HPLC分析多糖的单糖组成及分子量分布,并结合体外抗氧化实验评估其抗氧化活性。结果表明:在料液比1:60 g/mL、提取时间6 h、提取温度90℃的最优条件下,茭白壳多糖提取率达4.18%±0.09%,DPPH自由基清除率为56.65%;该多糖分子量范围为204~39 054 Da,主要由半乳糖、阿拉伯糖等单糖组成。当多糖质量浓度为10 mg/mL时,其FRAP值为(0.1216±0.0011)mmol/L,DPPH自由基和ABTS+自由基清除率分别为60.45%±0.66%和63.66%±0.23%。该提取工艺简便、重复性好,所得多糖抗氧化活性较高。

关键词： 甘蓝型油菜   BnaPUB51基因   表达分析   花粉育性   结实率  

摘要： 为探究U-box E3泛素连接酶家族中PUB51基因在调控甘蓝型油菜花粉发育中的功能,本研究通过同源克隆从甘蓝型油菜中双11中得到BnaPUB51-A10和BnaPUB51-C09 2个基因,采用生物信息学方法和RT-qPCR技术分析BnaPUB51基因家族特征及其在油菜中的表达模式,并通过拟南芥突变体鉴定了BnaPUB51同源基因调控花粉育性的功能。结果表明,甘蓝型油菜4个BnaPUB51的同源基因比较保守,其CDS全长1353~2097 bp,编码450~698个氨基酸,分子量在49.84~78.1 kDa,等电点(pI)预测范围在7.7~9.02,所有蛋白均为碱性;其启动子区存在响应生长发育、激素调控、非生物胁迫等顺式作用元件;RT-qPCR数据分析表明,BnaPUB51的表达具有组织特异性,在雄蕊中特异性高表达;在拟南芥突变体中证实PUB51基因的突变会显著降低结实率。本研究构建了BnaPUB51-A10和BnaPUB51-C09 2个基因的过表达载体,以期过表达BnaPUB51基因提高甘蓝型油菜花粉育性和结实率,为BnaPUB51基因的功能研究和利用提供理论依据。

关键词： 多房棘球绦虫   Nanos蛋白   干细胞   生发层  

摘要： 本研究旨在探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)干细胞相关基因Nanos-1/2(Em-Nos1/2)的分子特征、蛋白表达及其在虫体中的定位。首先对Em-Nos1/2基因进行生物信息学分析,通过构建原核表达载体pET28a-Em-Nos1/2,诱导表达并纯化重组蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体;利用Western blot和免疫荧光技术分别检测抗体的特异性及天然蛋白在虫体中的定位。多房棘球蚴Em-Nos1/2系统进化分析显示,这两个基因在绦虫属中呈现高度保守性,而与吸虫纲物种的分化程度显著,但三维结构存在细微差异。构建原核表达载体pET28a-Em-Nos1/2,经诱导表达与蛋白纯化后,获得高纯度的重组Em-Nos1/2蛋白,并制备兔多克隆抗体,其效价可达1∶204 800。Western blot试验结果证实,所制备的多克隆抗体分别能特异性识别多房棘球绦虫的天然Em-Nos1/2蛋白。免疫荧光定位结果揭示,Em-Nos1/2蛋白均特异性表达于多房棘球蚴生发层。本研究成功制备了能特异性识别天然Em-Nos1/2蛋白的多克隆抗体,并证实其定位于多房棘球蚴生发层,为进一步探究Em-Nos1/2在多房棘球蚴干细胞中的生物学功能提供了关键工具和重要基础。

关键词： 非洲猪瘟病毒   I177L   原核表达   单抗制备  

摘要： 为获得非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)毒力相关蛋白I177L的特异性单克隆抗体,本研究通过构建原核表达质粒pDCP-I177L实现重组I177L蛋白的原核表达与纯化,经Western blot验证结果正确,重组I177L蛋白可被His-tag抗体及ASFV阳性血清特异性识别。以其为抗原免疫BALB/c小鼠,采用ELISA筛选阳性克隆并检测效价、通过间接ELISA和Octet?-R2系统分析抗体与灭活ASFV的特异性与亲和力,最终成功获得9株可特异性识别灭活ASFV的单克隆抗体,其中2号、9号、7号、1号、8号的单克隆抗体与ASFV亲和力较高,能够达到1×10-7 mol/L级别。该结果为后续I177L蛋白功能研究及相关检测技术开发奠定基础。

关键词： 白桦   BpbZIP36基因   基因克隆   抗旱功能  

摘要： 【目的】通过克隆BpbZIP36基因,构建植物表达载体,获得稳定转化白桦转基因植株,对转基因株系进行干旱胁迫,探究BpbZIP36基因抗旱功能。【方法】本研究以白桦c DNA为模板,克隆BpbZIP36基因,对测序获得的BpbZIP36基因序列进行生物信息学分析,构建p ROK2-BpbZIP36植物表达载体后转入白桦苗中,得到稳定转化转BpbZIP36基因白桦,对转BpbZIP36基因过表达白桦植株及对照进行干旱胁迫,研究BpbZIP36基因的抗旱功能。【结果】从白桦基因组数据库中获得一条b ZIP基因,开放读码框全长1 269 bp,编码422个氨基酸。多序列结果显示,白桦b ZIP36蛋白与其他各植物中b ZIP蛋白具有相似性,都具有保守的b ZIP结构域。q RT-PCR研究结果显示,BpbZIP36基因在根、茎、叶中均有表达,在茎和叶中,BpbZIP36基因的表达量在胁迫72 h时达到峰值,而在根中胁迫处理24 h时表达量最高,表明BpbZIP36基因能够被干旱胁迫诱导表达。对转基因白桦植株进行干旱胁迫后,生理指标和组织化学染色分析结果显示:干旱胁迫条件下3个过表达白桦株系的MDA、H2O2含量和相对电导率低于野生型,细胞膜完整性较好;过表达白桦的SOD、POD、CAT含量、相对含水量高于野生型,在过表达的3个株系中DAB染色棕色斑点少着色轻,说明过表达的3个株系中H2O2含量较少,继而反映出细胞受损程度低,过表达白桦抗旱能力强于野生型白桦。【结论】BpbZIP36基因过表达能够提高转基因白桦的抗干旱能力。

关键词： 山药   多糖   分级醇沉   结构表征   降脂活性  

摘要： 使用不同浓度乙醇溶液(40%、50%、60%、70%和80%)分级沉淀得到5组山药多糖(P40、P50、P60、P70和P80),对分级多糖的结构特征和降脂活性进行分析与检测。结果表明,山药分级多糖均是由甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖聚合而成的α-构型低聚糖,具有O—H、C—H、C=O、C—O—C和—NH2等官能团结构。在检测浓度范围内,山药分级多糖呈剂量依赖性体外降脂活性,其中P60的综合降脂能力最强。当浓度为10 mg/mL时,P60对胰脂肪酶活性、胆固醇酯酶活性及胆固醇胶束溶解度抑制率分别达到(14.67 ± 0.74)%、(45.21 ± 1.91)%和(48.61 ± 2.63)%,对牛磺胆酸钠和甘氨胆酸钠的结合率分别达到(50.04 ± 1.23)%和(32.21 ± 1.90)%,具有较好的体外降脂活性。

摘要： 蛋白质是生命功能的主要执行者,其稳定的三维结构是许多蛋白行使催化、运输、结构支撑等功能的分子基础.然而,绝大部分蛋白质本身是脆弱的,高温、机械力、极端pH等环境压力都可能导致其变性失活,这限制了蛋白质在工业催化、生物医学材料及极端环境生物技术等领域的应用.因此,如何设计并制造出比天然蛋白质更稳定、更能耐受苛刻条件的人工蛋白质,一直是化学生物学、合成生物学与生物材料领域的一项核心挑战.

关键词： 红芪多糖   蜜炙   免疫缺陷   差异性研究  

摘要： 旨在通过建立环磷酰胺诱导的免疫缺陷小鼠模型,比较红芪多糖(HPS)与炙红芪多糖(炙红芪多糖)对免疫功能的调节作用差异性,从现代药理学角度探讨“蜜炙增效”传统炮制理论的科学内涵,为临床精准用药提供依据。通过离子色谱法分析红芪蜜炙前后多糖的单糖组成、单糖含量百分比;将90只昆明小鼠随机分为9组(每组10只):空白组,模型组,阳性对照组(盐酸左旋咪唑,20 mg·kg-1),HPS低、中、高剂量组(75、150、300 mg·kg-1)及H-HPS低、中、高剂量组(同前剂量)。除空白组外,其余各组均腹腔注射环磷酰胺(80 mg·kg-1)建立免疫缺陷模型。造模3 d后,各组灌胃给予相应药物,每日1次,连续12 d,期间记录小鼠体质量变化;计算脾脏与胸腺指数;通过苏木精-伊红(HE)染色法观察脾脏和胸腺组织病理形态;采用流式细胞术分析外周血T淋巴细胞亚群比例;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清免疫球蛋白及细胞因子水平。结果显示红芪蜜炙前后多糖的单糖组成均以葡萄糖为主,且蜜炙后葡萄糖与半乳糖醛酸比例上升、半乳糖比例下降、甘露糖未检出。药效结果显示,与空白组相比,模型组小鼠体质量下降,脾脏指数与胸腺指数极显著降低(P<0.01);脾脏红髓与白髓界限模糊,动脉周围淋巴鞘及淋巴小结结构退化,淋巴细胞数量减少;胸腺被膜皱缩,皮质与髓质结构破坏;脾脏CD4阳性T淋巴细胞/CD8阳性T淋巴细胞(CD4+/CD8+)比值、血清免疫球蛋白A(IgA)、血清免疫球蛋白G(IgG)、血清免疫球蛋白M(IgM)水平以及白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)含量均显著或极显著下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,除H-HPS高剂量组外,各给药组均能显著提升小鼠体质量及脏器指数,减轻环磷酰胺所致的脾脏和胸腺组织损伤,提高CD4+/CD8+比值,并升高血清免疫球蛋白及相关细胞因子水平,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。H-HPS各剂量组对免疫指标的改善作用优于相应剂量的HPS组,且表现出“倒U型”剂量效应关系。综上所述,HPS与H-HPS均能有效改善环磷酰胺所致免疫缺陷状态,其中H-HPS对小鼠行为、器官、组织、细胞及分子水平的调节作用均优于HPS,且其作用效果与其单糖组成密切相关。该研究为红芪“蜜炙增效”的传统炮制理论提供了实验依据,支持其在临床中的合理应用。