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关键词： bone marrow mesenchymal stem cells   exosomes   TLR4/NF-κB signaling pathway   oxidative stress  

摘要： AIM:To investigate the therapeutic effects of bone marrow mesenchymal stem cell-derived exosomes(BMSC-Exos)on diabetic retinopathy(DR)in rats,with a focus on their ability to modulate oxidative stress and inflammatory responses through the TLR4/NF-κB signaling pathway.METHODS:Streptozotocin(STZ)-induced diabetic Sprague-Dawley(SD)rats were randomly divided into four groups:Group 1[normal+phosphate-buffered saline(PBS)],Group 2(normal+Exos),Group 3(DR+PBS),and Group 4(DR+Exos).At the 8 th week after modeling,BMSC-Exos or PBS were injected intravitreally.Retinal tissues were collected at the 16 th week for histological analysis[hematoxylin and eosin(HE)staining],apoptosis detection(TUNEL).Oxidative stress markers[8-OHdG,superoxide dismutase(SOD),and glutathione(GSH)]were assessed,and inflammatory cytokines[enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)for interleukin(IL)-6 and tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)],and molecular profiling[quantitative polymerase chain reaction(qPCR)for TLR4,NF-κB,and VEGF]were measured.RESULTS:The BMSC-Exos treatment significantly suppressed the activation of the TLR4/NF-κB pathway in DR rats(P<0.01),which was accompanied by reduced retinal vascular leakage(Evans blue assay,P<0.001),decreased apoptosis(TUNEL,P<0.05),and attenuated oxidative stress(elevated SOD and GSH,reduced 8-OHdG,P<0.05).The levels of inflammatory cytokines(IL-6 and TNF-α)were markedly decreased(P<0.01).CONCLUSION:BMSC-Exos alleviate DR by suppressing the TLR4/NF-κB axis,thus reducing oxidative damage,inflammation,and microvascular dysfunction.This research offers a novel therapeutic approach for early-stage DR.

关键词： 铁皮石斛叶   多糖提取   茉莉花爽肤水   制备工艺   得率计算   响应面法  

摘要： 以干燥铁皮石斛叶为原料，经粉碎过筛等预处理后，依次通过石油醚脱脂、无水乙醇脱色，再以蒸馏水提取多糖，经透析、乙醇沉淀、离心洗涤等步骤得到铁皮石斛多糖成品，计算多糖得率为10.65%。随后，以铁皮石斛多糖提取液为主要成分，搭配茉莉花精油、丙三醇等成分，经相溶液制备、均质、杀菌灌装等流程，成功复配出含铁皮石斛叶多糖-茉莉花爽肤水。该爽肤水具有良好的保湿性能和抗氧化活性，产品pH值为6.2，符合化妆品行业标准要求，在常温条件下放置30天未出现分层、变色等不稳定现象。该研究为铁皮石斛叶中多糖的提取及相关化妆品的开发提供了实验依据与技术参考。

关键词： 玉米   干旱胁迫   ZmbHLH54基因   活性氧清除机制  

摘要： 【目的】克隆碱性螺旋-环-螺旋蛋白(basic Helix-Loop-Helix,bHLH)转录因子家族中应答干旱胁迫的新基因ZmbHLH54,探究该基因在干旱胁迫环境中的响应机制。【方法】采用生物信息学方法分析该基因结构、蛋白质性质,分析其系统进化关系、保守基序和启动子顺式作用元件;并通过干旱胁迫下对该基因突变体材料进行表型鉴定、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化物酶(peroxidase,POD)活性测定,以及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测相关基因表达水平变化,初步解析其干旱胁迫响应机制。【结果】ZmbHLH54基因具有典型的bHLH结构域,属于bHLH转录因子家族;编码区全长690 bp,编码229个氨基酸;启动子区域存在多个与激素和干旱胁迫响应有关的元件;ZmbHLH54蛋白为亲水蛋白,无跨膜螺旋结构;干旱胁迫5 d后,阴性对照植株出现明显的叶片卷曲萎蔫现象,而大部分突变体幼苗仍保持叶片舒展状态或仅有轻微卷曲;干旱胁迫条件下,zmbhlh54突变体中的SOD和POD活性显著高于阴性对照,且zmbhlh54突变体中活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除相关基因(ZmSOD3和ZmSOD4)的表达上调,ROS生成相关基因(Zm00001d036557)的表达被抑制。【结论】bHLH转录因子基因家族ZmbHLH54蛋白可能主要通过调节干旱胁迫下的ROS清除机制应答干旱胁迫,增强突变体苗期抗旱性。

关键词： SHP2   糖尿病肾病   肾小管上皮细胞   NLRP3   细胞焦亡  

摘要： 目的 探讨同源磷酸酪氨酸磷酸酶2(SHP2)在糖尿病肾病细胞焦亡中的调控作用。方法 通过高糖(HG)培养肾小管上皮细胞(HK-2),使用蛋白印迹法(Western blot)检测HK-2细胞中SHP-2与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的表达。通过慢病毒转染技术敲除SHP2、过表达NLRP3后，采用Western blot和流式细胞术评估焦亡相关蛋白表达，NLRP3炎症小体活化及细胞焦亡情况。结果 高糖培养的HK-2细胞中SHP2和NLRP3表达均升高。敲除SHP2后，HG诱导的HK-2细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、焦孔素D(GSDMD)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及NLRP3、ASC蛋白和半胱天冬酶-1前体(pro-caspase-1)等炎症小体组分的上调减弱，敲除SHP2显著减少了HG诱导的HK-2细胞焦亡。NLRP3过表达恢复了caspase-1、IL-1β、ASC和GSDMD的表达，并部分抑制了SHP2沉默细胞中观察到的抗焦亡效应，NLRP3过表达部分逆转了SHP2敲除所介导的保护作用。结论 SHP2基因敲除通过抑制NLRP3炎症小体介导的焦亡，减轻肾小管上皮细胞损伤。

关键词： 根尖牙乳头干细胞   分化   N6–甲基腺苷   甲基转移酶样蛋白3  

摘要： 目的：探讨甲基转移酶样蛋白3（METTL3）介导的N6–甲基腺苷（m6A）修饰对根尖牙乳头干细胞（SCAPs）向成牙本质细胞分化的调节作用机制以及METTL3介导的m6A对SCAPs中核转录因子I–C（NFIC）表达的调控作用。方法：分离SCAPs，采用流式细胞术检测细胞表面标记分子，茜素红染色和油红O染色检测细胞的分化能力。采用瞬时转染法构建沉默METTL3的SCAPs作为SCAPs METTL3（–）组，并设置空载对照组SCAPs（Ctrl）组。2组细胞矿化诱导1周和2周后，Western blotting分析成牙相关蛋白碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）、牙本质涎磷蛋白（DSPP）的表达。比色法分析2组中m6A RNA甲基化水平。MeRIP–qPCR和Western blotting分析NFIC的mRNA和蛋白表达水平。结果：流式细胞术分析分离的SCAPs表面标记分子CD44（89.8%）、CD90（92.0%）表达呈阳性，茜素红染色和油红O染色镜下见矿化结节和脂滴形成。SCAPs METTL3（–）组METTL3蛋白水平明显低于SCAPs（ctrl）组（P<0.01）。矿化诱导1周和2周后，SCAPs METTL3（–）组矿化量及ALP、OCN、DSPP蛋白水平低于SCAPs（ctrl）组（P<0.05～P<0.01）。比色法结果显示，SCAPs METTL3（–）组中m6A mRNA甲基化水平明显低于SCAPs（Ctrl）组（P<0.01）。Western blotting结果显示，SCAPs METTL3（–）组中NFIC的蛋白表达水平明显低于SCAPs（Ctrl）组（P<0.01）。结论：METTL3介导的m6A修饰可以调节SCAPs向成牙本质细胞分化以及能够通过NFIC发挥调节SCAPs的作用。

关键词： 马铃薯   3%马铃薯甲虫核酸干扰素可溶液剂   苏云金杆菌   产量  

摘要： 为明确3%马铃薯甲虫核酸干扰素可溶液剂（简称dsRNA制剂）对马铃薯的调控作用，以马铃薯品种青薯2号为供试材料，设置4个dsRNA制剂不同浓度处理，并以苏云金杆菌和清水喷施作为对照进行试验，分析其对马铃薯生长及产量的影响。结果表明，马铃薯初花期每667米2施用dsRNA制剂50～150毫升，可降低叶片被害指数，提高单株薯重，实现产量提升，其中以每667米2施用150毫升dsRNA制剂处理产量最高，可达1 512千克，较清水对照增产84.39%。综上，推荐每667米2施用150毫升dsRNA制剂，以有效促进马铃薯生长、提升产量与品质。

关键词： 湘江   鳤   营养评价   氨基酸   脂肪酸   矿质元素  

摘要： 长江十年禁渔计划实施后,极濒危物种鳤的资源量逐步得到恢复。为阐明其肌肉营养成分组成,于2024年从湘江采集6尾体质量为(200±50) g的鳤,对其肌肉中的常规营养成分、氨基酸、脂肪酸和矿质元素含量进行分析测定。测定结果显示:鳤肌肉中水分含量为78.23 g/100 g,粗蛋白含量为17.33 g/100 g,粗脂肪含量为1.23 g/100 g,钙、磷、钾等矿质元素含量丰富,计算其能量值为375.33 kJ/100 g;鳤肌肉中共检测出18种氨基酸,含量为15.256 1 g/100 g,必需氨基酸指数为97.64,必需氨基酸占总氨基酸及非必需氨基酸的比率分别为44.82%和81.23%,与联合国粮食及农业组织/世界卫生组织提出的理想蛋白质模型相符;鳤共检测出15种脂肪酸,其中二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸的含量为0.147 6 g/100 g,饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量的比值为1.00∶0.86∶1.14,多不饱和脂肪酸中n-6和n-3系列含量比值为0.40∶1.00,基本符合中国营养学会及世界卫生组织推荐的健康膳食模式理想比例。测定结果表明,鳤肌肉的氨基酸和脂肪酸组成较为均衡,含有丰富的矿质元素,属于少脂鱼类,是较为优质的蛋白来源,在功能食品开发等方面具有较好前景。

关键词： 猪血清   猪血清培养基   胎牛血清替代   猪肌肉干细胞   细胞培养肉   低成本培养体系  

摘要： 【目的】探究猪血清替代胎牛血清构建低成本猪肌肉干细胞体外培养体系的可行性，及其对细胞增殖、干性维持和肌源性分化能力的影响，为降低细胞培养肉生产成本、优化猪源肌肉干细胞规模化扩增体系及推动培养肉产业化应用提供理论依据和技术支持。【方法】对猪肌肉干细胞进行分离、鉴定、纯化，并通过筛选优化适用于猪肌肉干细胞高效增殖的猪血清培养基组成，整合细胞活力检测、细胞生长曲线分析、传代观察、群体倍增时间测定以及免疫荧光染色等方法，比较猪血清与胎牛血清培养体系对猪肌肉干细胞增殖能力及肌管融合效率的影响，并系统评估猪血清培养基的性能及经济效益。【结果】基于RPMI 1640培养基、添加10%PS并联合补充CEE、Glu、NEAA和FGF-2构建的10%PS+培养体系，能够有效支持pMuSCs的体外功能。RPMI1640+PS组相对细胞活力达到76.92%±1.00%，显著优于其他PS培养基组合（P<0.05），且与RPMI 1640+FBS组（81.62%±1.35%）差异不显著（P>0.05）。进一步优化后，10%PS+培养基可显著提升细胞增殖水平（P<0.05），并在P2–P8代长期传代过程中维持较高的增殖活性和肌源性分化能力，整体性能与FBS完全培养基pMuSC-CM相当。经济性分析显示，10%PS+培养基成本为1 560.78元/L，较胎牛血清培养基成本降低63.63%，具有显著的低成本培养优势。【结论】猪血清作为替代传统胎牛血清的培养基组分，能够显著提高猪肌肉干细胞的增殖能力，并有效维持其干性，且具有与传统培养基相当的肌源性分化效果。该低成本培养体系为大规模细胞培养肉的生产提供了强有力的技术支持，具有重要的产业化应用前景。

关键词： 煤焦油   氨基酸基低共熔溶剂   选择性萃取   氢键作用   COSMO-RS模型  

摘要： 针对煤焦油洗油馏分中酚类化合物、含氮化合物和中性芳烃共存导致分离困难的问题，本文以原料来源广、成本较低并具有较好的生物相容性的氨基酸作为氢键受体，构建并优化了氨基酸基低共熔溶剂（AADESs）体系，用于酚类化合物的选择性萃取。首先，采用COSMO-RS（conductor-like screening model for real solvents）对15种氨基酸进行初步筛选，并进一步评估其中5种效果较好的氨基酸与5种氢键供体（水、乙二醇、二甘醇、乙醇胺和甲酰胺）构建的25种AADESs的萃取性能。结果表明，在所构建的AADESs中，赖氨酸-乙醇胺形成的AADES的萃取性能最优。在此基础上，对优选体系的组成和操作条件进行了进一步优化。结果表明，在常温条件下，当乙醇胺与赖氨酸的摩尔比为3:1时，体系对萘酚的萃取率约为99.0%，同时喹啉和甲基萘的夹带率分别降至12.2%和3.3%。此外，考察了温度、剂油比和萃取剂含水量对于萃取性能的影响，结果表明，常温、剂油比0.5:1-1:1以及AADES含水量小于4.0%的条件能更好地兼顾萃取效率与分离选择性。机理分析表明，AADES与萘酚之间的氢键作用是实现选择性萃取的主要驱动力。总体而言，赖氨酸-乙醇胺形成的AADES在复杂体系中表现出良好的酚类选择性分离潜力。

关键词： 紫花苜蓿   MsSPL3   耐盐   功能验证  

摘要： 土壤盐渍化是制约我国农业可持续发展的关键非生物胁迫因子。紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是重要的优质豆科牧草，在盐渍化土地的改良与高效利用中具有重要价值。SPL（SQUAMOSA promoter binding protein-like）转录因子在植物生长发育及响应非生物胁迫中发挥着重要调控作用。本试验克隆了紫花苜蓿MsSPL3基因，结合生信分析、表达模式分析以及酵母功能验证，初步探究了MsSPL3在紫花苜蓿盐胁迫应答中的功能。结果表明，MsSPL3开放阅读框（Open reading frame，ORF）全长420 bp，编码139个氨基酸，具有典型的SBP结构域，属于SPL转录因子家族。其蛋白定位于细胞核；在茎中表达水平最高，花中表达水平最低；受盐碱、脱落酸（abscisic acid，ABA）及模拟干旱等非生物胁迫显著诱导；过表达MsSPL3能够显著增强酵母对盐胁迫的耐受性。综上，研究结果推测MsSPL3参与了紫花苜蓿对盐胁迫的响应，为后续紫花苜蓿耐盐分子育种提供了理论依据。