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关键词： β-半乳糖苷酶   固定化   蛋白质工程  

摘要： β-半乳糖苷酶是一类重要的糖苷水解酶,能够催化合成低聚半乳糖以及水解乳糖。在食品工业特别是乳制品生产中扮演着至关重要的角色,同时在疾病诊断领域也得到了广泛应用。然而,大多数β-半乳糖苷酶面临着转糖基化效率低下、底物抑制性强和热稳定性不足等局限,这些缺点显著制约了其在工业上的广泛应用。为克服这些难题,固定化技术和蛋白质工程策略已被广泛研究和应用,以优化这些酶的催化性能。文章综述了固定化和蛋白质工程策略改善β-半乳糖苷酶的酶学性质(如热稳定性和低聚半乳糖产率)的研究进展,旨在为该酶的进一步工程化研究提供明确的方向,并推动其在工业中的更广泛应用。

关键词： 免疫球蛋白重链可变区基因   体细胞高突变   Sanger测序   高通量测序  

摘要： 目的比较高通量测序(NGS)与Sanger测序在评估免疫球蛋白重链可变区(IGHV)基因体细胞高突变(SHM)状态中的应用差异,并着重探讨导致两种技术结果不一致的关键因素(尤其在复杂克隆背景下)。方法回顾性分析2016-2021年于北京大学人民医院收集的Sanger测序结果显示为非单克隆(43例)和单克隆(10例)的淋系肿瘤样本,并采用NGS对其进行IGHV SHM检测。将两种方法的结果进行系统性比对,并从克隆丰度量化、引物设计差异及解读标准等角度,对结果不一致的病例进行分析。结果53例同时进行Sanger测序及NGS检测的患者中,男36例,女17例,中位年龄64(33~88)岁。慢性淋巴细胞白血病35例(66.0%)、弥漫大B细胞淋巴瘤9例(17.0%)、滤泡性淋巴瘤3例(5.7%)、套细胞淋巴瘤3例(5.7%)、其他3例(5.7%)。在43例Sanger测序结果为非单克隆背景的样本中,NGS检测结果显示23例为双克隆或多克隆,17例为单克隆,3例未检出克隆性。Sanger与NGS结果的主要差异体现在克隆性评估、IGHV基因重排类型以及突变率方面。在10例Sanger测序结果为单克隆的病例中,NGS检测出2例双克隆,另有4例的IGHV重排类型与Sanger结果差异明显。尽管两种方法在SHM比例检测上存在细微差异,但对突变状态的整体判断无实质影响。结论与Sanger测序相比,NGS在IGHV SHM的复杂克隆背景中更具优势,尤其在识别亚克隆成分和精确量化克隆比例方面更具敏感性和准确性,可为慢性淋巴细胞白血病等淋系肿瘤的精准诊断及预后评估提供更为精准的分子依据。

关键词： 金花葵   AmCHI   基因克隆   生物信息学分析  

摘要： 该实验以金花葵叶片为实验材料,通过分子克隆技术成功获得了金花葵类黄酮生物合成途径中的关键基因AmCHI的编码区序列(coding sequences,CDS)及起始密码子ATG前1111bp的启动子区序列,运用生物信息学方法对其序列进行分析。结果表明:在金花葵叶片中克隆得到的AmCHI基因包含882bp的CDS,编码293个氨基酸残基,预测其相对分子质量为31.65kDa,等电点为4.78,通过对AmCHI进行系统进化树分析发现AmCHI与木槿HsCHI的同源性最高。在AmCHI启动子区域包含转录起始的基本元件、响应激素和非生物胁迫以及与组织特异性表达相关的顺式作用元件。该研究为阐明AmCHI基因在金花葵黄酮类化合物合成中的功能及调控机制奠定了基础,也为通过分子育种手段提高金花葵黄酮含量提供了理论依据。

关键词： EB病毒血症   异基因造血干细胞移植   风险因素  

摘要： 目的:对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后EB病毒血症的发生情况及风险因素进行分析,旨在为allo-HSCT后EB病毒血症的防治提供依据。方法:回顾性分析2021年11月—2024年12月于云南省第一人民医院血液内科行allo-HSCT的162例患者的临床资料,统计移植后EB病毒血症的发生情况,对EB病毒血症的相关风险因素进行分析。结果:162例患者中男99例,女63例,中位年龄32.5(2.0~63.0)岁,其中129例出现EB病毒血症(79.6%),发生中位时间为46(9~775)d。其中EB病毒相关性疾病9例(7.0%),移植后淋巴组织增殖性疾病5例(3.9%)。单因素分析,亲缘半相合移植、预处理中抗胸腺球蛋白(ATG)的使用、移植后巨细胞病毒(CMV)感染、aGVHD是allo-HSCT后EB病毒血症的相关风险因素。多因素分析则提示ATG的使用、移植后CMV感染可能是allo-HSCT后EB病毒血症的独立风险因素。结论:Allo-HSCT患者移植后EB病毒血症的发生与ATG的使用、移植后CMV感染密切相关。

关键词： 供血者   人群监测   核糖核酸酶类   病毒   性别因素   年龄因素  

摘要： 目的统计汉中地区无偿献血者在不同时间段、不同性别和不同年龄段、不同血型、不同丙氨酸氨基转移酶(ALT)结果和初、复次献血情况等人群中,病毒[人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)]核酸检测结果的差异,减少酶联免疫吸附试验(ELISA)血清学窗口期和隐匿性血液传播疾病感染对血液安全的影响,为高效、精准招募合格献血者,进一步提升血液质量,确保采供血安全,提供参考依据。方法分别统计2020—2023年汉中地区无偿献血者不同人群的ELISA血清学无反应性核酸筛查有反应性结果、反应阳性率、拆分阳性率等进行统计学分析。结果剔除ELISA血清学有反应性的样本数后,2020—2023年共收集核酸检测结果149334份,反应阳性率为0.09%(138/149334),拆分阳性率57.81%(137/237)。其中,男性反应阳性率0.11%(98/88704)高于女性的0.06%(39/60630),差异有统计学意义(χ^(2)=8.37,P<0.05);18~25岁、>25~35岁、>35~45岁、>45~56岁、>56~60岁者反应阳性率分别为0.04%(10/23744)、0.06%(19/32420)、0.09%(35/39738)、0.14%(64/46130)、0.12%(9/7302),差异有统计学意义(χ^(2)=22.22,P<0.001);A型血、B型血、AB型血、O型血献血者反应阳性率分别为0.10%(48/46475)、0.09%(35/40201)、0.06%(8/14080)、0.09%(46/48578),差异无统计学意义(χ^(2)=2.69,P>0.05);血清ALT≤50 U/L者反应阳性率[0.09%(134/148483)]低于血清ALT>50 U/L者反应阳性率0.35%(3/851),差异有统计学意义(χ^(2)=6.35,P<0.05);初次献血者反应阳性率[0.08%(48/59472)]和复次献血者反应阳性率[0.10%(89/89862)],差异无统计学意义(χ^(2)=1.31,P>0.05);罗氏检测系统反应阳性率0.07%(63/86555)和华益美检测系统反应阳性率0.12%(75/62779),差异有统计学意义(χ^(2)=8.58,P<0.05);罗氏检测系统拆分阳性率56.36%(62/110)和华益美检测系统拆分阳性率59.06%(75/127),差异无统计学意义(χ^(2)=0.17,P>0.05)。2020年、2021年、2022年、2023年反应阳性率分别为0.09%(33/35790)、0.09%(31/35130)、0.13%(46/34397)、0.06%(28/44017),差异有统计学意义(χ^(2)=10.38,P<0.05),其中2022年、2023年反应阳性率分别为0.13%(46/34397)、0.06%(28/44017),差异有统计学意义(χ^(2)=10.07,P<0.05);2020年、2021年、2022年、2023年拆分阳性率分别为56.90%(33/58)、55.36%(31/56)、65.22%(45/69)、51.85%(28/54),差异无统计学意义(χ^(2)=2.49,P>0.05);罗氏检测系统2020年、2021年、2022年、2023年拆分阳性率分别为51.72%(15/29)、63.64%(14/22)、62.07%(18/29)、50.00%(15/30),差异无统计学意义(χ^(2)=1.60,P>0.05);华益美检测系统2020年、2021年、2022年、2023年拆分阳性率分别为62.07%(18/29)、50.00%(17/34)、67.50%(27/40)、54.17%(13/24),差异无统计学意义(χ^(2)=2.67,P>0.05)。结论献血者ELISA血清学无反应性而核酸有反应性与献血人群的性别、ALT合格与否、年龄段存在一定的相关性。核酸检测对ELISA血清学及ALT合格的献血者起到互补作用,缩短病毒窗口期,降低经输血传播病毒的风险。

关键词： 可哀悼性   朱迪斯·巴特勒   别让我走   石黑一雄  

摘要： 石黑一雄的小说《别让我走》揭示了克隆人在权力规范驯化下,失去被哀悼资格的悲惨境遇,并依此呼吁对哀悼资格主体性的关注。文章以朱迪斯·巴特勒的哀悼理论为研究进路,将其核心概念“可哀悼性”划分为三个特质:生命“承认”、社会“依存性”和“认知公正”,并探究权力框架如何剥夺克隆人可哀悼性,凯西的讣告式叙述如何重新赋予克隆人可哀悼性,以及石黑一雄对现实可哀悼性平等分配的伦理启示。以巴特勒的哀悼思想为视域考察《别让我走》,不仅拓展了这部作品研究的理论维度,还通过呈现权力规范下个别群体的悲惨处境,揭示了维护生命平等权利的重要意义。

关键词： 凝胶电泳   在线荧光成像   特异性检测   蛋白质定量分析  

摘要： 蛋白质的特异性检测在生物分析和临床诊断中具有重要意义。现有方法如免疫固定电泳和蛋白质印迹法,需要手工染色和脱色等步骤,操作繁琐,耗时久且定量能力有限。本文结合在线荧光成像技术开发了一种蛋白质免疫聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)定量检测方法。该方法首先采用荧光标记抗体结合目标蛋白质,使用甲醛交联免疫复合物后进行电泳和在线成像,最终通过计算凝胶电泳图像中游离抗体的荧光信号强度实现定量分析。整个检测流程可在1.5 h内完成。本文以人转铁蛋白(transferrin,TRF)为模式蛋白进行方法学验证,结果显示该方法的线性范围为5.0~200.0 mg/L,线性相关系数(R2)为0.9930,制作标准曲线的标准溶液中荧光信号强度的最大相对标准偏差(RSD)为1.65%,检出限为0.5 mg/L,加标回收率为98.2%~105.0%,表明该检测方法具有良好的精密度、灵敏度和准确度。相较于传统的PAGE方法,该方法利用实时荧光成像技术实现了对目标蛋白质的在线定量检测,具有分辨率高、特异性强、操作简便、分析快速以及重现性好等优点。该方法具有普适性,可应用于其他蛋白质的定量检测,在药物制备和临床诊疗等领域具有重要的应用价值。

关键词： 小鼠肝炎病毒   CRISPR   等温扩增   核酸检测  

摘要： 为建立一种快速、灵敏、特异的小鼠肝炎病毒(MHV)核酸检测新方法,通过分析27条MHV M基因序列,选择保守性区域设计具有强特异性的RT-RAA引物和CRISPR RNA(crRNA)序列,建立了可快速检测MHV核酸的基于RT-RAA的CRISPR-Cas12a方法。采用系列稀释的阳性核酸标准品及其他相关小鼠疫病病毒核酸,对该方法的灵敏度和特异性进行验证和评价。结果显示:本研究建立的基于RT-RAA的CRISPR-Cas12a方法检测灵敏度可达10^(1) copies/μL,与RT-PCR方法相当,且与仙台病毒(SV)、鼠肺炎病毒(PVM)、汉坦病毒(HV)、小鼠细小病毒(MVM)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、鼠痘病毒(EV)和呼肠弧病毒Ⅲ型(Reo3)无交叉反应。使用本研究建立的方法和荧光RT-PCR方法对66份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率达100%。此外,本研究建立方法的检测时长可控制在1 h 15 min以内。结果表明,本研究建立的基于RT-RAA的CRISPR-Cas12a技术耗时短、特异性强、灵敏度高,为MHV感染的快速检测提供了新的技术手段,具有良好的应用前景。

关键词： 阿尔茨海默病   β‑淀粉样蛋白   单克隆抗体   临床应用建议  

摘要： 近年来阿尔茨海默病免疫治疗领域迎来重要突破,中国已与国际同步批准至少2种抗Aβ单克隆抗体上市,并应用于临床。其中,仑卡奈单抗、多奈单抗分别于2024年6月和2025年4月正式应用于国内临床。基于以上背景,为促进抗Aβ单克隆抗体在国内阿尔茨海默病治疗中的规范、合理和安全应用,本文结合作者团队及国内同行对上述单抗的临床试验数据及临床应用经验,在2024年版本的基础上,继续总结更新抗Aβ单克隆抗体的临床应用建议,包括临床用药指征、用药前评估与准备、用药时医嘱及注意事项、用药后临床监测,旨在为临床医师提供翔实的用药指导和建议。

关键词： 枣树(Ziziphus jujuba)   Cu/Zn-SOD   盐胁迫  

摘要： 枣树是中国北方重要的果树,主要分布在干旱半干旱盐碱地区,长期受逆境胁迫的影响。超氧化物歧化酶(SOD)是植物重要的抗氧化的酶,能高效地清除受到逆境胁迫细胞内产生的活性氧,与植物的多种抗逆性关系密切。为了明确SOD酶基因在枣树抗盐胁迫中的分子机理,本研究基于骏枣全基因组序列注释结构,筛选出枣Cu/Zn-SOD(ZjCSD)基因并设计引物,以骏枣cDNA为模板克隆了ZjCSD基因的全长。生物信息学分析结果表明,ZjCSD基因全长660 bp,编码219个氨基酸,其理论相对分子质量为22.3 kD,理论等电点(pI)为6.08;含有37个磷酸化位点,属于疏水性蛋白,无信号肽,不存在跨膜结构域;亚细胞定位于叶绿体;其二级结构由21.92%的α-螺旋,30.59%的延伸链,6.39%的β-转角,41.10%的无规卷曲结构区组成。进化树分析表明,ZjCSD蛋白与核桃、荔枝的亲缘关系最近。转录组以及实时荧光RT-qPCR定量分析表明,用100 mmol/L NaCl处理3、8 d时,ZjCSD基因均上调表达,而当盐浓度达到200 mmol/L时,则抑制ZjCSD基因的表达,推测ZjCSD基因参与枣非生物逆境胁迫,该研究结果为进一步分析该基因对枣树的抗盐性提供重要参考。