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关键词： 氢氘交换核磁共振   氢氘交换质谱   蛋白质   结构动力学  

摘要： 氢氘交换核磁共振(HDX-NMR)与氢氘交换质谱(HDX-MS)是研究蛋白质结构与动力学的关键技术,近年广泛应用于解析蛋白质构象变化.HDX-NMR通过检测交换后的核磁共振信号,提供单氨基酸分辨率的动态信息,适用于缓慢交换区域及长时间尺度构象变化研究.HDX-MS整合氢氘交换与高分辨率质谱优势,可在近生理条件下测定蛋白质溶液态结构,适用于大分子复合体、膜蛋白等复杂体系.相较于X射线晶体学、冷冻电镜等传统技术,HDX-MS以高灵敏度和低样品需求量见长,HDX-NMR则在位点分辨率与动力学分析上更优.随着技术与方法的持续优化,二者在蛋白质构象变化、药物筛选等领域应用前景日益广阔.本文综述其原理、流程及分析方法,比较异同,探讨互补性与整合应用,展望未来方向,为相关研究提供参考.

关键词： 安全性   免疫原性   ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗  

摘要： 目的评价ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗(MPCV4)在4~6岁儿童中的安全性与免疫原性。方法采用随机、盲法、同类疫苗对照设计,于2023年9-11月在陕西省山阳县和临渭区招募4~6岁且按照免疫规划程序完成至少2剂次脑膜炎球菌多糖疫苗基础免疫的受试者,按1∶1随机分配到试验组和对照组,分别接种试验疫苗MPCV4或已上市使用的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗(对照疫苗),观察接种后0~30 d不良反应和180 d严重不良事件(SAE),采集免疫前、后30 d血清标本,检测A、C、Y和W135群脑膜炎奈瑟菌杀菌抗体;分析不良反应发生率、抗体GMT、阳转率和阳性率。结果试验组与对照组纳入免疫原性分析分别为462人和466人。免疫后A群抗体阳转率分别为98.05%、94.21%(P=0.002),抗体GMT分别为458.89、123.14(P<0.001);C群抗体阳转率分别为78.57%、60.09%(P<0.001),抗体GMT分别为78.96、17.49(P<0.001);Y群抗体阳转率分别为78.35%、47.00%(P<0.001),抗体GMT分别为118.93、14.29(P<0.001);W135群抗体阳转率分别为87.88%、58.80%(P<0.001),抗体GMT分别为142.82、11.53(P<0.001)。两组免疫后0~30 d总不良反应发生率分别为35.76%、32.19%(P=0.236),其中局部不良反应发生率分别为12.93%、13.68%(P=0.727),全身不良反应发生率分别为24.44%、20.93%(P=0.186)。结论4~6岁儿童接种MPCV4具有良好的安全性及免疫原性。

关键词： 溃疡性结肠炎   黄芩多糖   COX-2/PGE2/Akt通路  

摘要： 目的基于环氧合酶-2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)/蛋白激酶B(Akt)通路探究黄芩多糖对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的影响。方法将30只大鼠随机均分为对照组、UC组、黄芩多糖组。HE染色检测各组大鼠结肠组织的病理变化。Western blotting、qRT-PCR分别检测各组结肠组织COX-2、PGE2、Akt、闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)蛋白和mRNA水平。ELISA试剂盒检测各组血清炎症因子水平。结果UC组大鼠结肠黏膜结构破坏,腺体丢失,炎症细胞浸润,黄芩多糖组大鼠结肠黏膜结构完整,炎症细胞较UC组浸润减少。与对照组比较,UC组大鼠结肠组织COX-2、PGE2、Akt蛋白及mRNA表达水平以及血清炎症因子水平升高(P<0.05),Occludin,ZO-1蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05)。与UC组比较,黄芩多糖组大鼠结肠组织COX-2、PGE2、Akt蛋白及mRNA表达水平以及血清炎症因子水平降低(P<0.05),Occludin、ZO-1蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论黄芩多糖可能通过抑制COX-2/PGE2/Akt信号通路,改善了UC的肠道黏膜屏障功能,减轻了炎性损伤。

关键词： 阿伐替尼   急性髓系白血病   KIT突变   异基因造血干细胞移植   抢先治疗  

摘要： 目的探讨阿伐替尼在伴RUNX1::RUNX1T1和KIT突变阳性的急性髓系白血病(AML)儿童患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后抢先治疗的安全性及有效性。方法回顾性分析2021年7月—2023年8月,6例伴RUNX1::RUNX1T1融合和KIT突变阳性的AML儿童在苏州大学附属儿童医院allo-HSCT后因融合基因阳性接受阿伐替尼抢先治疗的安全性及有效性。结果6例患者中男4例,女2例,在形态学完全缓解后接受allo-HSCT,中性粒细胞植入时间为12(11~13)天,血小板植入时间为11.5(10~13)天。4例患者allo-HSCT后出现RUNX1::RUNX1T1持续阳性(形态学、流式MRD、KIT突变阴性),2例患者allo-HSCT后出现RUNX1::RUNX1T1、流式MRD转阳(1例KIT突变转阳、1例KIT突变阴性,形态学均阴性)。其中5例患者接受去甲基化药物、供体淋巴细胞输注、干扰素抢先干预后,不能获得分子学持续阴性。6例患者在阿伐替尼治疗后RUNX1::RUNX1T1转录水平均明显下降,其中5例患者获得分子学转阴的深度缓解,阿伐替尼干预到基因转阴的中位时间为3(1~9)个月。1例患者阿伐替尼治疗2月后流式MRD转阴,现治疗5月RUNX1::RUNX1T1尚未转阴。随访至2025年5月,6例患者均健康存活。最常见的不良反应是骨髓抑制,包括中性粒细胞减少4例、血小板减少1例。非血液学不良反应包括呕吐1例、面部浮肿2例,经调整药物剂量或观察后均可改善。结论阿伐替尼可用于伴RUNX1::RUNX1T1和KIT突变阳性儿童AML患者allo-HSCT后抢先治疗,且耐受性良好。

关键词： A群猪轮状病毒   VP7蛋白   单克隆抗体   杂交瘤细胞   原核表达  

摘要： 【目的】制备抗A群猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白第208—222位氨基酸处(208—222aa)结构域单克隆抗体,并探究其免疫原性,为建立A群PoRV检测方法提供参考。【方法】利用AlphaFold3软件预测4种主要流行G基因型(G3、G4、G5和G9)PoRV VP7蛋白三聚体结构,对其208—222aa区域的特征性抗原表位进行比对和拟合。设计截短VP7蛋白,并分别与GST、MBP标签融合。通过原核表达系统分别表达重组蛋白GST-VP7和MBP-VP7,利用亲和层析纯化重组蛋白。利用纯化的MBP-VP7重组蛋白免疫小鼠,制备杂交瘤细胞株,采用人工合成208—222aa多肽进行筛选,获得特异性分泌抗体的细胞株。【结果】208—222aa区域结构分析显示,该结构域在不同基因型PoRV VP7蛋白中具有较高的构象保守性。通过原核表达系统,成功获得高纯度可溶性表达的重组蛋白GST-VP7和MBP-VP7。通过208—222aa多肽筛选,获得2株可分泌针对该结构域特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株:10F11G和5F6B。间接免疫荧光检测显示,10F11G和5F6B抗体可有效识别天然PoRV颗粒。【结论】本研究成功获得了2株可稳定分泌针对PoRV VP7蛋白208—222aa结构域特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。试验结果为A群PoRV相关抗体制备和检测方法开发提供了基础材料。

关键词： 醋酸戈舍瑞林   柱前衍生化   氨基酸水解   异硫氰酸苯酯   高效液相色谱  

摘要： 目的建立一种测定醋酸戈舍瑞林的氨基酸组成的柱前衍生化RP-HPLC法。方法醋酸戈舍瑞林在6mol·L^(-1)盐酸溶液、110℃条件下水解24h,水解后的氨基酸与异硫氰酸苯酯50℃加热10min进行衍生化反应。氨基酸衍生物采用WatersSymmetry®C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)进行分析,流动相A为0.1mol·L^(-1)乙酸钠缓冲液(pH6.5)-乙腈(体积比97:3),流动相B为乙腈-水(体积比80:20),梯度洗脱,流速为1.0mL·min^(-1),检测波长为254nm,柱温为35℃,进样盘温度为5℃,进样体积为20μL。结果醋酸戈舍瑞林水解后的8种氨基酸的衍生物能够完全分离(分离度>2.0),且在25~250pmol·μL^(-1)内各氨基酸线性关系良好(r>0.999),重复性实验各峰面积RSD均小于5%,回收率均在90.3%~110.5%之间,供试品衍生化溶液在24h内稳定。用该方法测定3批不同厂家的醋酸戈舍瑞林,样品测定结果均符合欧洲药典的标准。结论经方法学验证,该方法分离效果较好、准确度较高,适用于醋酸戈舍瑞林的氨基酸组成分析。

关键词： 2-甲基喹啉   N-苯亚甲基-4-甲基苯磺酰胺   L-亮氨酸   C(sp^(3))—H键官能团化   工艺优化  

摘要： 针对传统喹啉衍生物C(sp^(3))—H键官能团化反应中存在的催化剂成本高、反应条件严苛等问题,开展了氨基酸介导2-甲基喹啉(2-MQ)与N-苯亚甲基-4-甲基苯磺酰胺(化合物Ⅰ)发生苄基C(sp^(3))—H键官能团化反应的研究。在2-MQ 0.42 mmol,化合物Ⅰ0.3 mmol,L-亮氨酸(L-Leu)0.2 mmol,水2 mL,反应温度90℃条件下,反应24 h后4-甲基-N-(1-苯基-2-(喹啉-2-基)乙基)苯磺酰胺(化合物Ⅱ)的产率可达到71.1%。计算表明,添加L-Leu后的反应活化能为23.89 kJ/mol,较未添加时(88.57 kJ/mol)显著降低,表明添加L-Leu能有效降低反应活化能垒,使反应更易发生。推测是L-Leu参与了2-MQ中甲基C(sp^(3))—H键和化合物Ⅰ中亚胺基的活化,促进烯胺中间体的形成及其对亚胺基的亲核攻击。

关键词： 乳牙牙髓干细胞   miR-26b   成神经分化   成血管分化   牙髓再生   工程化干细胞  

摘要： 背景:人脱落乳牙牙髓干细胞广泛应用于组织修复再生领域,但组织再生效果在实际应用中存在局限性。利用mi RNA干预人脱落乳牙牙髓干细胞的定向分化是未来组织修复再生的重要发展方向。目的:探讨mi R-26b对乳牙牙髓干细胞成神经及成血管分化能力的影响。方法:从人脱落乳牙中分离提取乳牙牙髓干细胞,并将其向神经及血管方向诱导分化,分别检测成神经标志物Nestin、NSE、βⅢ-Tubulin和成血管标志物CD31、VEGFR2、ANG-1及mi R-26b的表达。然后将乳牙牙髓干细胞分为空白对照组、mi R-26过表达组和阴性对照组,RT-q PCR、细胞免疫荧光染色及Western blot检测各组乳牙牙髓干细胞成神经及成血管诱导后相关标志物的表达变化。结果与结论:(1)乳牙牙髓干细胞具有多向分化潜能,能向成骨、成脂、成神经及成血管方向分化;(2)在乳牙牙髓干细胞成神经及成血管分化过程中mi R-26b表达水平升高;(3)相较于空白对照组和阴性对照组,mi R-26b过表达组乳牙牙髓干细胞成神经相关基因βⅢ-Tubulin、Nestin、NSE及成血管相关基因CD31、VEGFR2、ANG-1的m RNA表达显著升高(P<0.01),βⅢ-Tubulin、Nestin及CD31、VEGFR2蛋白表达显著升高(P <0.01)。以上结果表明,miR-26b过表达能促进人脱落乳牙牙髓干细胞成神经和成血管诱导分化。

关键词： 生物矿化   鳞足螺   印度洋热液区   氨基酸   铁硫化合物  

摘要： 本研究通过扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)观察、X射线电子能谱(Energy Dispersive X-ray Spectroscopy,EDS)分析、傅里叶变换红外光谱(Fourier Transform Infrared Spectrometer)分析和氨基酸组成分析等手段对采集自印度洋深海环境龙旂热液区的黑色鳞足螺和天成热液区的白色鳞足螺螺片进行了详细的结构和成分对比分析。结果表明:两种鳞足螺螺片主要组成成分均为蛋白质和水,并且螺片的透明度越低其含水率越低。黑色鳞足螺螺片的透明度越低其蛋白质摩尔分数越低;而白色鳞足螺螺片的透明度越低其蛋白质摩尔分数越高。黑色和白色鳞足螺螺片中大部分种类的氨基酸摩尔分数近似,但两种含硫氨基酸半胱氨酸和甲硫氨酸摩尔分数差异较大。SEM观察的结果表明,两种鳞足螺螺片均由层状组织分布致密且接触海水的外层、层状组织分布非常稀疏且接触组织的内层和两者之间层状组织较为稀疏的中间层构成。EDS能谱分析的结果表明,S元素分布于螺片的整个横截面;Fe、O、N元素在黑色鳞足螺和白色鳞足螺螺片中的分布差异显著。在黑色鳞足螺螺片中N、O和Fe在其外层和内层组织的部分区域存在分布空白,而在白色鳞足螺螺片中这3种元素在其内层和外层组织均有分布,在中间层没有分布。硫单质是鳞足螺螺片中硫的存在形式之一。鳞足螺螺片中的S和Fe可形成不同价态的化合物;含硫氨基酸能与Fe形成的多种类型化合物或复合物。Fe和S在螺片中的存在形式与鳞足螺的栖息环境密切相关。本研究对进一步探究海洋中(特别是深海极端环境中)硫、铁生物矿化物的形成机制具有重要意义。

关键词： 熊果酸   脂多糖   肉兔   生长性能   抗炎   抗氧化   消化酶活性  

摘要： 试验旨在探究饲粮中添加熊果酸(UA)对肉兔生长性能、养分表观消化率及在脂多糖(LPS)诱导下血清抗炎、抗氧化、生化指标和肠道消化酶活性的影响。选取80只健康断奶肉兔,随机分为4组,每组20个重复,每个重复1只。对照组(CON组)饲喂基础饲粮并在屠宰前4 h注射生理盐水,LPS组饲喂基础饲粮并在屠宰前4 h注射200μg/kg LPS,UA组饲喂添加50 mg/kg UA的基础饲粮并在屠宰前4 h注射生理盐水,L-UA组饲喂添加50 mg/kg UA的基础饲粮并在屠宰前4 h注射200μg/kg LPS。预试期7 d,正式试验期35 d。结果显示,与CON组相比,UA组平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)无显著差异(P>0.05)。UA组干物质和钙的表观消化率显著提高(P<0.05)。添加UA逆转了LPS诱导肉兔血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量的提高及白细胞介素-10(IL-10)含量的降低。添加UA逆转了LPS诱导肉兔血清中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的降低及丙二醛(MDA)含量的提高。添加UA逆转了LPS诱导血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量和白球比(AGR)的降低及尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和葡萄糖(GLU)含量的提高。添加UA逆转了LPS诱导回肠中胰蛋白酶和脂肪酶活性的降低。研究表明,饲粮中添加UA能够提高肉兔的ADG和养分表观消化率,有效缓解LPS诱导的炎症反应,提高肉兔的抗氧化能力和消化酶活性。