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关键词： CD300e   巨噬细胞   肝切除   肝再生   多克隆抗体   转录组测序   空间转录组测序   门静脉高压症  

摘要： 目的 制备并鉴定兔源抗鼠CD300e多克隆抗体，探讨其在小鼠肝再生模型中识别和定位CD300e+单核/巨噬细胞的应用价值。方法 设计并合成小鼠CD300e胞外区+Fc tag重组蛋白，抗原免疫新西兰大白兔后采血分离血清，间接ELISA测定血清抗体效价，流式细胞术验证抗体有效性。通过生信分析挖掘Cd300e+单核/巨噬细胞肝内分布特点，使用流式细胞术和免疫荧光染色探索CD300e+细胞在小鼠肝切除后的肝内浸润程度的改变。结果 终末免疫兔血清抗体的ELISA效价大于1.6×105，部分肝切除后小鼠受损肝叶内CD300e+巨噬细胞浸润增加。结论 本研究成功制备了兔源抗鼠CD300e多克隆抗体，并在小鼠受损肝叶内的血管周围鉴定出了CD300e+巨噬细胞，为后续进一步挖掘其促进肝再生的作用奠定基础。

关键词： 儿童   造血干细胞移植   肠道血栓性微血管病   循证理论指导   预防性护理  

摘要： 目的 探讨循证理论指导下的预防性护理预防儿童造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，HSCT）后肠道血栓性微血管病（thrombotic microangiopathy，TMA）的效果。方法 选取2022年1月—2024年3月北京京都儿童医院接诊的HSCT-TMA患儿80例，以信封法分组，将分组结果密封于不透光信封中，由不参与研究的项目助理保管，在患儿入组时开封分配，对照组采用常规护理，研究组采用循证理论指导下的预防性护理，每组40例，分析两组临床护理效果。结果 研究组满意度高于对照组（P＜0.05），研究组舒适水平高于对照组（P＜0.05），研究组TMA发生率低于对照组（P＜0.05）。结论 循证理论指导的预防性护理能有效降低儿童HSCT后肠道TMA发生率，同时提升患儿舒适度及家属满意度。

关键词： 蛋白质结构质量评估   冷冻电镜密度图   多尺度特征融合   迁移学习  

摘要： 冷冻电镜(cryo-EM)已成为蛋白质结构解析的重要手段之一。然而，由于密度图质量有限及结构预测误差的存在，构建的原子模型仍可能包含显著偏差。因此，准确评估蛋白质结构模型质量对于后续模型优化与功能研究至关重要。现有多数结构质量评估方法主要依赖模型自身的几何与理化特征，难以有效利用冷冻电镜密度图中蕴含的实验信息。本文提出了一种融合冷冻电镜密度图信息的蛋白质结构质量评估方法CryoQA。该方法联合提取结构特征与结构-密度相关性特征，采用多尺度卷积与扩张残差网络对残基对几何关系进行建模，并据此推导残基级质量评分及模型级整体评分。实验结果表明，CryoQA在残基级和模型级多项评价指标上均优于仅依赖结构特征的主流方法，验证了引入密度约束能够有效提升对局部结构误差的识别能力。

关键词： 清解口服液   脂多糖   鸡   发热   炎症  

摘要： 试验旨在探究清解口服液对脂多糖（LPS）诱导鸡发热的清热抗炎作用。试验选用15日龄健康海兰褐公鸡180只，随机分为正常组、模型组及清解口服液0.03 mL/kg、0.06 mL/kg、0.1 mL/kg、0.2 mL/kg剂量组。除正常组外，均腹腔注射3.5 mg/kg LPS构建动物发热模型，各剂量组在造模同时灌服对应剂量清解口服液，连续给药7 d，于第8天宰杀。试验通过测量泄殖腔温度、制作血涂片分析白细胞数量，以及采用ELISA法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，以评估炎症反应程度。另采用qRT-PCR检测分泌型免疫球蛋白A(ChlgA)、TLR4、NF-κB、闭锁小带蛋白（ZO-1）、闭合蛋白1(Claudin-1)和闭合蛋白（Occludin）mRNA表达量，并利用16S rDNA测序分析肠道菌群变化。结果显示：LPS诱导后模型组鸡体温显著升高（P<0.05）、白细胞比值显著增多（P<0.05）、炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α含量显著升高（P<0.05）;ChIgA、ZO-1、Claudin-1和Occludin mRNA相对表达量显著降低（P<0.05），而TLR4和NF-κB mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。清解口服液0.2 mL/kg、0.1 mL/kg、0.06 mL/kg治疗可明显抑制LPS诱导的体温上升，并加快体温下降，与模型组相比差异显著（P<0.05）；血清IL-1、IL-6和TNF-α含量与模型组相比显著降低（P<0.05），白细胞比值以及TLR4和NF-κB mRNA相对表达量均显著低于模型组（P<0.05）,ChIgA、ZO-1、Claudin-1和Occludin mRNA相对表达量均显著高于模型组（P<0.05）；清解口服液0.2 mL/kg剂量组放线菌门相对丰度和空肠微生物菌群多样性均显著高于模型组（P<0.05）。结果表明，清解口服液可通过抑制LPS诱导的炎症信号通路激活，减少促炎因子表达发挥清热抗炎作用，且具有保护肠道黏膜屏障，改善肠道菌群的作用。

关键词： 低氧   肺动脉平滑肌细胞   人脐带间充质干细胞   增殖   表型转化   外泌体  

摘要： 目的 探讨低氧预处理人脐带间充质干细胞来源的外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,hUCMSC-Exos）对低氧诱导的雄性大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）增殖、迁移及表型转化的影响。方法 将PASMCs作饥饿处理12 h后随机分为常氧对照（C-con）组、低氧模型（H-con）组、低氧+常氧hUCMSC-Exos(H-cexo)组和低氧+低氧预处理hUCMSC-Exos(H-hexo)组。采用组织块贴壁法分离培养原代hUCMSCs，用超滤法提取hUCMSC-Exos并鉴定；采用Ⅱ型胶原酶消化法培养大鼠原代PASMCs，以免疫细胞化学染色法鉴定PASMCs；采用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU）法检测各组细胞增殖情况；采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况；采用免疫荧光和WB法检测各组PASMCs增殖及表型转化相关蛋白表达情况。结果 低氧处理PASMCs 48 h可诱导其增殖、迁移及表型转化。与C-con组相比，低氧上调细胞增殖、迁移能力及合成型相关蛋白表达（P<0.05），下调收缩型相关蛋白表达（P<0.05）；与H-con组相比，低氧预处理hUCMSC-Exos可抑制细胞增殖、迁移，下调细胞周期蛋白及合成型相关蛋白表达（P<0.05），上调收缩型相关蛋白表达（P<0.05）。结论 hUCMSC-Exos具有抑制低氧诱导的PASMCs增殖、迁移和表型转化的能力，且低氧预处理的hUCMSC-Exos的抑制效果更明显，提示低氧预处理可进一步增强hUCMSC-Exos对低氧诱导的PASMCs增殖、迁移和表型转化的抑制作用。

关键词： 汉麻   CsOLS基因   启动子   酵母文库筛选   转录因子  

摘要： 汉麻中大麻素具有丰富的药理活性，汉麻橄榄醇合酶（CsOLS）基因是催化合成大麻素前体物质橄榄酸（OA）合成的关键酶。为进一步研究CsOLS基因的表达调控，克隆CsOLS基因的启动子序列（CsOLSp），生物信息学分析其转录起始位点（TSS）和顺式元件；克隆约500bp的CsOLSp截断片段CsOLSp1、CsOLSp2、CsOLSp3，构建诱饵载体，转化酵母细胞及自激活检测。以汉麻雌株花、叶等组织构建的cDNA文库为材料进行酵母单杂交筛库，对获得的转录因子进行一对一互作验证，结构域分析和分子对接分析。结果表明，克隆获得1 500bp的CsOLSp启动子，包含多种激素响应元件、光响应元件及转录因子结合位点。自激活检测表明CsOLSp1和CsOLSp3可进行后续酵母文库筛选。经初筛与复筛，分别获得与CsOLSp1和CsOLSp3互作的蛋白数量为5，7个，其中转录因子各一个，分别为CsAHL14和CsAHL15。一对一互作验证结果表明，CsAHL14可与CsOLSp1发生互作，CsAHL15可与CsOLSp3发生互作。结构域分析显示，CsAHL14属于AHL家族B类成员，而CsAHL15属于AHL家族A类成员。分子对接分析结果表明，CsAHL14与TTATTTTTTAT序列具有较强的结合能力。推测转录因子CsAHL14可能通过特异性结合CsOLSp启动子中的TTATTTTTTAT顺式作用元件参与CsOLS 基因的表达调控，在汉麻大麻素生物合成过程中发挥重要作用。

关键词： 马粪海胆   粗多糖   理化性质   抗氧化活性   免疫调节活性  

摘要： 为促进海胆功能性多糖的开发及副产物的高值化利用，以马粪海胆为研究对象，采用酶解-醇沉法提取多糖，分别测定生殖腺粗多糖与壳棘粗多糖提取物的相对分子质量、单糖组成等理化性质，对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、羟基和2，2’-联氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐[2，2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)， ABTS]阳离子自由基清除能力，以及对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力、吞噬功能及NO释放水平的影响。结果表明二者均为以葡萄糖为主的α-吡喃多糖，热稳定性良好；但在相对分子质量、提取率及纯度、微观形貌等方面存在一定差异。在浓度为10 mg/mL时，生殖腺粗多糖对3种自由基的清除率分别为82.35%、68.96%和34.29%，壳棘粗多糖分别为89.37%、51.77%和44.68%。在浓度为50～200 μg/mL时，二者对RAW264.7无毒性并可极显著促进NO生成，但不增强细胞的吞噬能力。两种海胆粗多糖均体现出良好的体外抗氧化潜力与免疫调节能力。

关键词： 修饰   功能化磁性Fe   O   纳米材料   蛋白质提取  

摘要： 本研究选取氨基和羧基作为官能团，合成了此2种官能团修饰的磁性Fe3O4纳米颗粒Fe3O4-NH2和Fe3O4-COOH。以该磁性纳米颗粒作为磁珠，测试了其对蛋白质的提取性能，并考察了磁性纳米颗粒尺寸和浓度以及提取时间对提取蛋白质的影响。将Fe3O4-COOH磁性纳米颗粒用于提取实际样品藏野驴骨骼中的蛋白质，提取量是商品化磁珠的4.1倍，表明本研究合成的磁珠在蛋白质提取方面具有显著优势。

关键词： 黄瓜   CsAGL62b   基因克隆   表达特性分析  

摘要： 基于黄瓜（Cucumis sativus L.）小叶突变体cpa1与野生型（WT）的转录组差异表达分析，发现MADS-box转录因子基因CsAGL62b（CsaV3＿3G045410）在cpa1突变体中的表达显著下调。已知cpa1突变体的目标基因为CsHLS1，其编码蛋白的同源基因在植物顶端弯钩发育及逆境胁迫响应中发挥重要调控作用。为进一步解析CsAGL62b的功能，本研究以黄瓜野生型（WT）为材料，利用RT-PCR技术克隆获得了CsAGL62b基因全长序列。生物信息学分析表明，该基因编码蛋白含225个氨基酸，具有典型的MADS结构域；系统进化分析显示其与甜瓜CmAGL62b亲缘关系最近。启动子顺式作用元件预测发现其包含光信号与多种植物激素〔茉莉酸甲酯（MeJA）、赤霉素（GA）、水杨酸〕的相关元件。基因表达模式分析结果表明CsAGL62b在根部表达量最高，其次在侧芽和叶片中高表达。此外，该基因在弱根中的表达量显著高于其他根系类型；其在根系成熟区可响应外源GA与脱落酸（ABA）的诱导，诱导后基因表达水平显著上调；同时，幼苗叶片中的CsAGL62b对ABA表现出快速响应并上调表达，在ABA处理6 h后表达量达到峰值。逆境胁迫试验结果表明，CsAGL62b基因的表达在干旱、盐、高温胁迫中均表现出“先升后降”的趋势；在低温处理下，该基因的表达量显著下调，表明CsAGL62b可能在多种非生物胁迫响应过程中发挥重要作用。综上，本研究首次系统解析了黄瓜CsAGL62b的分子特征，也为进一步阐明该基因在黄瓜根系生长发育及抗逆过程中的生物学功能奠定了坚实的分子基础。

关键词： 乳酸菌   比较基因组学   碳水化合物活性酶   碳源利用  

摘要： 为阐明乳酸菌碳源利用差异的遗传基础，对30株乳酸菌进行全基因组比较分析并结合表型验证。采用基于MUMmer的平均核苷酸一致性（average nucleotide identity based on MUMmer，ANIm)和平均氨基酸一致性（average amino acid identity，AAI）进行分类确认，开展泛基因组、蛋白质直系同源群簇（clusters of orthologous groups of proteins，COG）、碳水化合物活性酶（carbohydrate-active enzymes，CAZy）、次级代谢产物合成簇、前噬菌体及成簇的规律间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）阵列分析，并进行碳源利用实验。结果表明，30株菌可稳定分为唾液联合乳杆菌（Ligilactobacillus salivarius）、植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）和发酵粘液乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum）3类，且均呈开放型泛基因组特征。L. plantarum具有更大的泛基因组规模、更丰富的碳水化合物代谢相关COG功能及更高的CAZy基因储备。次级代谢产物合成簇、前噬菌体和CRISPR阵列分析显示，不同物种在潜在代谢功能、移动遗传元件整合及外源核酸防御方面存在差异。碳源利用结果表明，L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、海藻糖和低聚半乳糖是区分不同菌株的重要底物，且GH13＿29、GH42、araA和rhaA与相应利用表型具有较好一致性。该研究从基因组与表型两方面揭示了乳酸菌碳源利用差异的潜在分子基础，可为食品发酵工业中乳酸菌的筛选与应用提供参考。