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关键词： 低氧   人牙髓干细胞   新生大鼠   缺氧缺血性脑损伤   铁死亡  

摘要： 目的探究低氧预处理人牙髓干细胞(H-hDPSCs)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑神经元铁死亡的影响,为新生儿HIBD的治疗提供新思路。方法选取健康7d Sprague Dawley大鼠64只,随机分为对照(Sham)组、HIBD组、常氧培养hDPSCs(N-hDPSCs)组和低氧预处理hDPSCs(H-hDPSCs)组,每组16只。HIBD模型采用经典Rice-Vannucci法建立,N-hDPSCs或H-hDPSCs建模后24h移植至侧脑室。移植后72h,采用苏木素伊红(HE)与尼氏染色法观察损伤侧大脑皮层组织病理学变化;ELISA法检测血清铁和损伤侧大脑皮层组织铁含量的变化;NeuN/ACSL4、NeuN/GPX4、NeuN/SLC7A11免疫荧光双标染色与Western blot检测ACSL4、GPX4、SLC7A11蛋白在损伤侧大脑皮层神经元的表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测大脑皮层ACSL4、GPX4、SLC7A11 mRNA的表达水平。结果HE及尼氏染色结果显示,与Sham组相比,HIBD组神经细胞排列紊乱,细胞核深染固缩,尼氏小体数量较少,N-hDPSCs组和H-hDPSCs组与HIBD组相比损伤减轻。血清铁和大脑皮层组织铁含量HIBD组最高,N-hDPSCs组次之,Sham组最低(F=79.565、121.065,P<0.001)。免疫荧光染色示Sham组NeuN^(+)GPX4^(+)和NeuN^(+)SLC7A11+细胞数最高,H-hDPSCs组次之,HIBD组最低(F=30.896、75.089,P<0.001);NeuN^(+)ACSL4^(+)细胞数HIBD组最高,N-hDPSCs组次之,Sham组最低(F=87.724,P<0.001)。qRT-PCR和Western blot结果示,H-hDPSCs组和N-hDPSCs组GPX4,SLC7A11的mRNA及蛋白表达水平显著高于HIBD组,且H-hDPSCs组显著高于N-hDPSCs组(F=1008.209、41.765、48.178、43.303,P<0.001);H-hDPSCs组和N-hDPSCs组ACSL4的mRNA及蛋白表达水平显著低于HIBD组,且H-hDPSCs组显著低于N-hDPSCs组(F=234.513、164.942,P<0.001)。结论hDPSCs移植可通过抑制大脑皮层铁死亡相关基因的表达,抑制神经元铁死亡发生,新生大鼠HIBD得以减轻,且H-hDPSCs效果优于N-hDPSCs。

关键词： 孤独症谱系障碍   孟德尔随机化   循环氨基酸   因果关系   遗传工具变量  

摘要： 目的分析循环氨基酸水平与孤独症谱系障碍(ASD)的因果关系,为ASD的精准干预策略提供遗传学证据。方法基于欧洲人群全基因组关联研究(GWAS)汇总数据,采用两样本孟德尔随机化(MR)框架,纳入18381例ASD患者和27969例对照。筛选441个遗传工具变量(SNP),涵盖20种循环氨基酸。采用逆方差加权法(IVW),辅以加权中位数(WME)、MR-Egger回归及加权众数法(WM)评估因果效应,通过Cochran′s Q检验及MR-PRESSO方法验证结果的敏感性和多效性。结果因果分析结果显示,遗传预测的循环氨基酸水平与ASD风险无显著因果关联(IVW P>0.05),这一发现在MR-Egger回归、WME、WM分析中得到验证,经过MR-PRESSO异常值校正同样支持这一结论。但Cochran′s Q检验结果表明赖氨酸(Q=24.037,P=0.045)与亮氨酸(Q=23.713,P=0.049)存在显著异质性。MR-PRESSO检出色氨酸(全局P=0.001)与赖氨酸(全局P=0.046)存在水平多效性,但校正异常值后无显著的因果关联(校正后色氨酸β=-0.07,P=0.21,赖氨酸β=0.12,P=0.09)。色氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、精氨酸、苏氨酸的MR Egger回归或WM 95%CI异常宽泛。结论遗传预测的循环氨基酸水平与ASD无直接因果关系,但色氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、精氨酸、苏氨酸、亮氨酸的结果稳健性不足,结果需谨慎解释。

关键词： 辣椒   果色   LCYB   基因表达分析   新品种选育  

摘要： 以红色辣椒品种‘LJ114’‘LJ82’以及橙色和黄色辣椒品种‘LJ112’‘LJ115’紫色观赏椒品种‘Z1’为材料,采用同源克隆策略扩增不同果实颜色辣椒中LCYB基因并进行序列分析,采用qRT-PCR技术分析LCYB基因在不同材料中的表达特性。结果表明,选用各材料的叶组织中均能克隆到全长为1 497 bp的LCYB基因,编码498个氨基酸,在5个辣椒材料中,其序列无差异;进化树分析表明LCYB蛋白与马铃薯、茸毛烟草,枸杞等具有较高同源性。表达分析结果显示,LCYB基因在辣椒根、茎、叶、花和果组织中均有表达,其中在叶组织中表达量最高,根中最低;在果实发育Ⅱ期和Ⅲ期整体表达量较高,在不同果实颜色材料中,其表达具有显著差异;在红色辣椒果实中,除‘LJ82’外,总类胡萝卜素含量随LCYB基因的表达量的升高而增加,在橙色和黄色辣椒果实中具有相反趋势。说明LCYB基因的差异表达模式可能对类胡萝卜素的合成及辣椒果实颜色的形成具有一定的调控作用,研究结果为进一步解析辣椒果类胡萝卜素生物合成机制及培育高类胡萝卜素辣椒品种提供理论支持。

关键词： 干细胞   干细胞移植   糖尿病,2型   心力衰竭   临床试验  

摘要： 随着医学研究的深入发展,干细胞疗法(stem cell therapy,SCT)已成为现代医学中一种创新型的变革,具有治疗甚至治愈多种疾病的潜力,这是传统药物治疗无法复制的[1]。在成功进行临床前研究的基础上,SCT的临床研究也在不断拓展,有多种产品获批,有众多临床试验正在进行,初步显示出令人鼓舞的安全性与有效性。这也为老年疾病的临床治疗带来了新的希望。本述评将聚焦SCT的基本概念和老年疾病临床研究现状做一简要介绍。

关键词： 蛋白质水解靶向嵌合体   骨肉瘤   溴结构域和超末端结构域   细胞间质上皮转换因子  

摘要： 骨肉瘤是一种高度恶性的原发性骨肿瘤,多发于儿童及青少年,传统疗法存在复发率高和耐药性强等问题。蛋白质水解靶向嵌合体技术通过靶向降解致病蛋白质,为骨肉瘤治疗提供了新策略。本文系统阐述蛋白质水解靶向嵌合体的作用机制、在骨肉瘤中的靶向应用(如溴结构域和超末端结构域)、面临的挑战(包括递送效率不足和脱靶毒性等问题),并结合最新研究提出骨靶向递送(如DNA纳米花作载体)和联合治疗(如靶向治疗或化疗)等优化方向,为临床转化提供理论支持。

关键词： 法医蛋白质组   SAP分型算法   单氨基酸多态性  

摘要： 目的生物物证蛋白质组蕴含着丰富的遗传信息,即蛋白质序列的单氨基酸多态性(SAP)。然而,SAP分析工具的缺乏,严重制约了SAP在公安实战中的应用。本研究是为了满足法医样本蛋白质组SAP数据分析的应用需求。方法分为3个模块设计SAP分型自动化分析软件。模块B内置了东亚人群常见非同义单核苷酸多态性(nsSNP)信息,与输入外显子组新增的nsSNP一起构建SAP蛋白质序列数据库。模块A利用模块B构建的SAP蛋白质序列数据库,调用预装的pFind或Maxquant搜索引擎分析质谱数据。模块C输出参考型与突变型SAP分型结果,反向推导对应的nsSNP分型(称为imputed nsSNP),并与输入的外显子组nsSNP分型结果比较,生成比对报告。使用2名中国个体的外显子组nsSNP数据、每人2根毛干蛋白质组数据,分别使用pFind与Maxquant搜索引擎对软件进行测试。使用文献中1个欧洲人、1个非洲人,每人3根毛干蛋白质组数据,勾选pFind搜索引擎测试软件,并与文献算法结果进行比较。结果该软件以蛋白质组质谱数据与外显子组测序nsSNP结果为输入文件,输出SAP结果报告。测试结果显示,使用两种搜索引擎均可得到SAP结果,并且发现Maxquant得到的SAP数量略少于pFind的结果。使用文献数据测试结果显示,在文献方法完全匹配(即imputednsSNP与外显子组nsSNP分型完全一致)的SAP位点中,SAPTyper得到了部分SAP结果,且分型一致。结论针对东亚人群开发了一种自动化SAP分析算法,并形成软件SAPTyper。该软件为法医蛋白质组SAP进行个体识别与表型推断等方面研究与应用提供了一个便捷、高效的分析工具,具有良好的应用前景。

关键词： 口蹄疫病毒   血清型   VP1   中和抗体   表位鉴定  

摘要： 口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)不同血清型间没有交叉免疫保护作用,但动物在疫苗免疫后所产生的不同血清型抗体存在交叉反应,为制备抗O型FMDV的中和单克隆抗体,建立一种基于mAb区分O型与A型FMDV抗体的方法。采用灭活的O型FMDV免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,在大肠杆菌中表达了一系列GST融合重叠肽和截短肽,确定单抗识别的抗原表位,利用阻断ELISA检测了已知背景的O型和A型FMDV阳性血清、阴性血清各20份,验证筛选单抗在诊断中的可行性。结果显示,共获得5株单克隆抗体;Western blot和间接荧光免疫试验(IFA)结果显示,这5株单抗只与O型FMDV反应,不与A型FMDV反应;病毒微量中和试验(VNT)结果显示这5株单抗均对FMDV/O/MY98/GZBY/2013有中和能力;5株单抗识别同一表位,最小识别表位为^(145)RGDLQVLA^(152),其中Arg^(145)和Gln^(149)为关键氨基酸,序列比对发现该表位在大部分O型FMDV毒株中是保守的,而在所有的A、Asia 1和SAT1~3型FMDV毒株中Gln^(149)都发生突变;阻断ELISA结果显示mAb-8C5 D3可以区分O型和A型抗体。

关键词： 苯丙酮酸   L-氨基酸脱氨酶   蛋白质工程   全细胞催化  

摘要： 苯丙酮酸(phenylpyruvic acid,PPA)可以作为食品、饲料添加剂,同时在制药、化工等领域也有广泛的应用。现阶段,PPA主要通过化学合成法生产。随着制造业的绿色转型,生物转化法将成为PPA生产的一种很好的替代方法。目前已广泛开展用来自奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)的L-氨基酸脱氨酶(L-amino acid deaminase,Pmi LAAD)生产PPA的研究,但较低的产量限制了其进一步工业化生产。为了进一步提高PPA的产量,更好地满足工业化需要,建立一种更为高效的PPA合成方法,本研究首先在大肠杆菌中异源表达了Pmi LAAD。随后建立了一种显色反应方法以筛选高产PPA菌株。对Pmi LAAD进行半理性设计,获得的三位点突变株V18(V437I/S93C/E417A)催化活力较野生型提高了35%。同时研究了V18突变株的N端截短对其催化活性的影响,获得的突变株V18-N7经过全细胞条件优化后,在5 L发酵罐上进行分批补料转化,合成了44.13 g/L的PPA,转化率为88%,具备一定的工业化应用的潜力。本研究为苯丙酮酸的工业化生产奠定了基础,同时也为其他化学品的生物合成提供了参考。

关键词： γ-氨基丁酸   肉鸡   生长性能   肉品质  

摘要： 文章旨在探究γ-氨基丁酸对肉鸡生长性能、肉品质和肌肉氨基酸代谢的影响。试验将756羽1日粮健康雄性AA肉鸡[(41.85±1.26)g]随机分为4组,每组9个重复,每个重复21羽,试验日粮分别添加0、40、80和160mg/kg的GABA,试验共42d。结果表明,与对照组相比,添加80和160mg/kg的GABA组肉鸡末重显著提高5.10%和7.58%(P<0.05),日增重显著提高5.20%和7.74%(P<0.05),采食量显著提高2.90%和4.24%(P<0.05),160mg/kg的GABA组料重比显著降低3.25%(P<0.05)。添加160mg/kg的GABA组腿肌pH24h、a*值显著提高(P<0.05),滴水损失显著降低(P<0.05),添加80和160mg/kg的GABA组腿肌L*值显著降低(P<0.05),b*值和粗蛋白质含量显著提高(P<0.05)。添加160mg/kg的GABA组肉鸡腿肌MyoD和PAX3、MyoG、IGF1R和MRF4的mRNA水平显著提高(P<0.05)。结论:GABA能提高肉鸡生长性能并改善其腿肌肉品质,本试验条件下,以160mg/kg添加量效果最佳。

关键词： 炎性肠疾病   间充质干细胞   免疫调节   外泌体  

摘要： 炎症性肠病(IBD)是一种非特异性的慢性肠道炎症性疾病,发病机制尚不明确,肠道屏障功能受损和肠道免疫失调在IBD的发生发展中起重要的作用。现有IBD的临床治疗仍面临治疗失应答、药物不良反应等风险,而间充质干细胞及其外泌体作为新兴的治疗策略,具备出色的免疫调节潜能,通过不同的作用机制维持肠道的免疫稳态。本文就间充质干细胞通过调节性T细胞、单核/吞噬细胞系统及肠道屏障修复在IBD治疗中发挥的免疫调节机制进行综述,同时介绍外泌体携带的mi-RNA的治疗作用,并总结目前临床应用的困境和挑战,强调间充质干细胞对于IBD治疗的广泛临床应用前景。