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关键词： 红景天多糖   酶解-超声   工艺优化   响应面法   抗氧化活性  

摘要： 以红景天为原料,采用酶解-超声复合法提取红景天多糖。以多糖得率为指标,在单因素试验的基础上通过响应面法优化提取工艺,并对红景天多糖的抗氧化活性进行分析。结果表明:提取红景天多糖的最佳工艺条件为液料比23∶1(mL/g)、酶解时间79 min、酶解温度52℃、pH 4.2、超声时间45 min,在此条件下红景天多糖的得率为9.12%。抗氧化试验结果显示,红景天多糖对DPPH、ABTS自由基均具有较好的清除能力,表明其具有较强的抗氧化能力。

关键词： 重症急性胰腺炎   间充质干细胞(MSCs)   诱导多能干细胞(iPSCs)   iPSCs来源的MSCs(iMSCs)   炎症因子   氧化应激   BALB/c小鼠  

摘要： 目的探讨诱导多能干细胞来源的间充质干细胞(iMSCs)对重症急性胰腺炎(SAP)的抗炎及保护效能研究。方法诱导培养获得iMSCs,经流式细胞术鉴定,并经分化潜能及炎症趋向性验证。将18只BALB/c小鼠随机平均分成正常对照组(CON组)、SAP模型组(SAP组)和SAP+iMSCs治疗组(SAPiMSCs组)。CON组不做处理;SAP组向小鼠腹腔内注射雨蛙肽(CAE)50μg/(kg·次),每间隔1 h注射1次,共7次,最后1次同时注射脂多糖(LPS)诱导SAP;SAP-iMSCs组诱导SAP的方法同SAP组,在最后1针CAE和LPS注射后立即注射0.1 mL浓度为5×106/mL的iMSCs细胞混合液。于最后1次注射后24 h处死小鼠,并采取血液和组织样本,检测血清中淀粉酶及炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-10),检测胰腺和肺组织MPO活性、组织病理等。结果iMSCs经流式细胞术鉴定符合MSCs表型,具备分化潜能和炎症趋向性。CON组、SAP组和SAP-iMSCs治疗组的血清淀粉酶水平差异有统计学意义[(1917.33±266.06)U/dL vs(7416.00±1259.43)U/dL vs(3301.00±527.73)U/dL,F=76.1,P<0.05]。三组的炎症因子水平差异有统计学意义[TNF-α:(19.10±3.82)pg/mL vs(76.99±7.19)pg/mL vs(54.77±6.68)pg/mL,F=138.42,P<0.05;IL-1β:(22.37±3.27)pg/mL vs(91.66±3.06)pg/mL vs(53.88±4.46)pg/mL,F=542.55,P<0.05;IL-10:(10.06±1.46)pg/mL vs(102.22±3.02)pg/mL vs(225.80±5.59)pg/mL,F=4961.86,P<0.05]。三组间胰腺和肺组织MPO活性较SAP组差异有统计学意义。SAP-iMSCs治疗组小鼠血清淀粉酶、炎症因子水平以及胰腺和肺组织MPO活性都有明显下降(均P<0.05)。结论iMSCs符合间充质干细胞典型的干性特征,对SAP模型有抗炎及保护作用,其机制可能是通过减轻炎症反应和下调氧化应激来实现。

关键词： 正交试验   异丙肾上腺素   气阴两虚证   缺血性心脏病   小鼠模型   蛋白质组学  

摘要： 目的:探索腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)建立缺血性心脏病(IHD)气阴两虚证小鼠模型的最佳构建方法及其生物学基础。方法:将144只雄性C57BL/6J小鼠按照体质量随机分为3个正常组和9个模型组,每组12只。以ISO腹腔注射剂量(5、10、15 mg·kg^(-1)·d^(-1)),注射周期(4、7、14 d)为因素,建立L9(3~2)正交表,3个正常组分别于相应时间内注射等量生理盐水。造模结束后检测各组小鼠体质量、24 h食水量、抓力、自主活动情况,采用超声心动图检测小鼠心功能,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中去甲肾上腺素(NE)、环磷酸腺苷(cAMP)及环磷酸鸟苷(cGMP)水平,生化法检测心肌组织中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量,结合苏木素-伊红(HE)染色观测心肌组织病理变化;采用正交试验直观分析与方差分析,筛选IHD气阴两虚证小鼠模型的最佳造模条件。采用数据依赖型质谱采集(DDA)蛋白质组学技术定量检测最佳模型组与正常组间的心肌组织差异蛋白,结合生物信息学分析,探索IHD气阴两虚证模型潜在的生物学机制。结果:正交结果显示,注射周期对模型建立影响较大,最佳造模方式为腹腔注射ISO 15 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续14 d;此条件下与正常组比较,模型组体质量、摄食量及摄水量、抓力、运动总路程及平均速度、射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)、血清中NE和cGMP水平、心肌组织中ATP含量均显著下降(P<0.01),不活动时间、cAMP含量及cAMP/cGMP值明显升高(P<0.05,P<0.01);HE染色结果显示,模型组心肌组织细胞排列紊乱、炎性细胞浸润、心肌纤维断裂、纤维组织增生。蛋白质组学结果显示,与正常组比较,模型组共有141个差异蛋白,其中52个上调,89个下调;基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集显示,细胞组分(CC)主要与线粒体及线粒体内膜相关,生物过程(BP)与补体激活、血小板激活、对金属离子的反应等相关,作用通路可能与补体与凝血级联反应、卟啉代谢信号通路关联。结论:ISO 15 mg·kg^(-1)连续腹腔注射14 d能够建立IHD气阴两虚证小鼠模型,相关机制可能与补体C3、C5与Cp对铁离子的调控有关,并通过补体激活、血小板激活、对金属离子的反应等BP及补体与凝血级联反应、卟啉代谢两条信号通路发挥调控作用。

关键词： 粳米   蛋白质   脂质   糊化特性   老化特性  

摘要： 以粳米米粉为原料,利用快速黏度分析仪、流变仪、差示扫描量热仪、质构仪、电子显微镜、傅里叶红外光谱仪和X射线衍射仪等仪器分析内源性脂质和蛋白质对粳米粉糊化特性和老化特性的影响。结果显示,与空白组相比,脂质和蛋白质的脱除使粳米米粉的峰值黏度、谷值黏度显著提升为:3 376.33 cp和2 565.00 cp,糊化温度降低为70.70℃,约降低了24.50%。此外,糊化后的样品,随着贮藏时间的延长,硬度、弹性、内聚性、胶着性、咀嚼性、R1047/1022和相对结晶度增加,其中脱除脂质和蛋白质的样品老化程度最高,硬度达到1 761.02 g,弹性达到0.96,相对结晶度达到7.58%,表明存在内源性脂质和蛋白质,可抑制淀粉链的相互靠近,减缓粳米粉凝胶老化。本研究结果为粳米粉基食品的研究提供一定的参考,有利于开发品质更好的粳米粉基产品。

关键词： 大豆肽   慢性疾病   氨基酸   血糖调控   糖尿病  

摘要： 目前,糖尿病已成为影响人类健康的主要慢性疾病之一,全球范围内已有数亿成年人被糖尿病所困扰,并且患病的人数依然呈上升趋势。大豆肽以其自身独特的调控血糖的优势走进公众视野,被称为糖尿病患者的“隐形助手”。1什么是大豆肽?大豆蛋白经过水解处理后便会形成大豆肽,其属于小分子活性肽,平均分子量不超过1 000 u。与大分子蛋白质相比较,大豆肽不仅生物活性较高,同时还具有较高的消化吸收率。大豆肽的构成为2~10个氨基酸,其中包含多种人体必需的氨基酸,如缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等,这些氨基酸都是维持机体正常功能必不可少的物质。除此之外,由于大豆肽为小分子结构,可被肠道快速吸收,所以在营养补充、疾病防治中的应用较为广泛。

关键词： 黄精多糖   TLR4   特异性免疫反应   OVA   淋巴细胞   IgG   炎症因子   干扰素  

摘要： [目的]评价黄精多糖对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的激活作用,并明确其增强小鼠体内特异性免疫反应的作用。[方法]用稳定转染了人TLR4基因和分泌型胚胎碱性磷酸酶报告基因的HEK-Blue^(TM) h TLR4细胞模型快速评价滇黄精中性水提多糖(Polygonatum kingianum NP H_(2)O,PKNH)、滇黄精碱提多糖(Polygonatum kingianum AP H_(2)O,PKAH)、滇黄精水提醇洗多糖(Polygonatum kingianum NP 5%Et OH,PKNEt)、滇黄精碱提醇洗多糖(Polygonatum kingianum AP 5%Et OH,PKAEt)4种不同黄精多糖对TLR4的激活作用;采用C57BL/10Sc NJ(TLR4^(-/-))小鼠确认药物作用与TLR4的关系;采用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)免疫小鼠模型评价药物对特异性免疫反应的增强作用;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中血清免疫球蛋白G1(immunoglobulin G1,Ig G1)抗体及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、干扰素诱导蛋白-10(interferon-γ inducible protein-10,IP-10)等TLR4信号通路相关细胞因子的水平,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-5-(3-羧甲基苯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑内盐(5-[3-(aarboxymethoxy)phenyl]-3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium inner salt,MTS)法评价脾脏淋巴细胞增殖;逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测与TLR4信号通路相关的细胞因子m RNA表达水平。[结果]PKNH作用24 h对TLR4的激活率最高(P<0.001)。与野生型比较,PKNH对C57BL/10Sc NJ (TLR4^(-/-))小鼠脾脏淋巴细胞增殖以及TNF-α、IL-6、IP-10等细胞因子表达的促进作用明显减弱(P<0.001)。PKNH灌胃能显著提高OVA免疫小鼠血清Ig G1水平(P<0.01),并促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05)。[结论]黄精多糖PKNH能通过激活TLR4,增强小鼠特异性免疫反应。

关键词： 马   克隆技术   商业化   运动性能   争议  

摘要： 动物克隆是一种通过体细胞核移植过程进行无性繁殖的技术。文章介绍了动物有性生殖与克隆、克隆马的历史,以及有关克隆运动马在技术、商业化、运动性能等方面的争议,并指出需要在技术应用与道德责任之间建立平衡,克隆马技术才能可持续发展并为公众所接受。

关键词： 广藿香   广藿香酮   PcAAE2基因   启动子   转录因子  

摘要： 广藿香酮是广藿香(Pogostemon cablin)的重要活性成分,广藿香酰基激活酶2(Pogostemon cablin acyl-activating enzyme 2,PcAAE2)作为参与广藿香酮生物合成途径上的关键酶,对广藿香酮的合成具有重要意义。本研究设计特异引物对PcAAE2基因启动子区域进行克隆,获得1912 bp启动子DNA序列,命名为PcAAE2Pro,并进行顺式作用元件分析。将截短的启动子片段PcAAE2P1(位于PcAAE2Pro的-1138~-261 bp)连接到诱饵质粒载体中,转化得到诱饵酵母菌株,再对其进行自激活检测,结果表明100 ng/mL的金担子素A(aureobasidin A,AbA)可以抑制诱饵菌株的自激活。利用广藿香cDNA酵母文库,筛选与PcAAE2P1结合的转录因子,并通过酵母回转验证确定PcNAC048、PcCOL4和PcbZIP13共3个转录因子与PcAAE2P1具有结合互作关系。进一步通过双荧光素酶分析实验揭示了转录因子PcNAC048、PcCOL4抑制PcAAE2的转录表达,而PcbZIP13促进PcAAE2的转录作用。本研究为深入挖掘PcAAE2基因的转录调控网络及广藿香酮的生物合成途径奠定了基础。

关键词： 水稻   恶苗病   藤仓赤霉复合种   蛋白质组   抗病性  

摘要： 恶苗病是危害性强的水稻常见真菌性病害,严重影响水稻产量。为明确高抗品种响应恶苗病菌的上调差异蛋白质,采用TMT (tandem mass tag)定量蛋白质组学技术比较感染恶苗病菌前后的蛋白质组,筛选P≤0.05且差异倍数(fold change,FC)>1.2或<0.83的显著差异表达蛋白质。结果表明,共筛选出124个上调差异表达蛋白质和75个下调差异表达蛋白质。将上调表达的124个蛋白质进行GO(gene ontology)富集分析,得到88个富集条目,其中显著性富集条目4个,包括生物过程2个、分子功能2个,分别为对应激的反应、对氧化应激的反应及过氧化物酶活性、血红素结合,有利于清除水稻芽组织内过氧化物,对细胞起保护作用。KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)富集分析共得到45条通路,其中上调差异蛋白质显著富集通路3条,分别为苯丙素生物合成、次生代谢物的生物合成和苯丙氨酸代谢,有利于提高水稻抗病性。在显著性GO富集的4个条目和KEGG显著性富集的3条通路中,共有的上调差异蛋白质有3个(Os01t0327400-01、Os12t0112000-01、Os01t0963000-04),推测这3个上调差异蛋白质是抗恶苗病的关键蛋白。以上研究结果为抗病研究工作提供科学的基础理论依据。

关键词： 中华绒螯蟹   肝细胞核因子4(HNF4)   基因克隆   脂质代谢  

摘要： 为探究肝细胞核因子4(hepatocyte nuclear factor 4,HNF4)在中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的脂质代谢及长链多不饱和脂肪酸(long-chain polyunsaturated fatty acid,LC-PUFA)生物合成中的调控作用,本研究使用RACE技术克隆中华绒螯蟹Hnf4基因,qPCR检测Hnf4基因在多个组织中的表达情况,并通过RNA干扰、添加其抑制剂和激动剂处理后分析脂质代谢相关基因的表达变化。结果显示,中华绒螯蟹Hnf4基因全长3554 bp,其中5ʹ非编码区长度为569 bp,3ʹ非编码区为1179 bp,开放阅读框为1806 bp,编码601个氨基酸。HNF4蛋白总平均亲疏水性为-0.177,推测HNF4蛋白为亲水性蛋白。同源性分析发现中华绒螯蟹HNF4与克氏原螯虾(Procambarus clarkii)、拟穴青蟹(Scylla paramamosain)、三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)等虾蟹类具有较高的序列同一性和氨基酸同源性,且在系统进化树中与拟穴青蟹和三疣梭子蟹HNF4聚为一支。qPCR结果显示,Hnf4在多个组织中均有表达,但在肝胰腺中表达量最高。使用dsRNA干扰Hnf4基因的表达后,中华绒螯蟹肝胰腺中Fas、Scd、Fad6、Fad9以及Elovl4基因的表达显著降低,Hsl基因表达显著上调(P<0.05);注射抑制剂BI-6015与RNA干扰结果相似,而注射激动剂Benfluorex得到了相反的结果,这提示Hnf4基因对中华绒螯蟹的脂质代谢及LC-PUFA生物合成调控有一定作用。上述研究结果可以为进一步探究HNF4的生物特异性作用及其对中华绒螯蟹脂质代谢等生理调控机制提供参考。