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关键词： 紫球藻胞外多糖   水产饲料   脂质氧化   抑菌活性   贮藏稳定性  

摘要： 试验旨在探究紫球藻胞外多糖(EPS)对高脂水产饲料贮藏稳定性的影响。试验分别在水产基础饲料中添加0.05%、0.10%、0.20%、0.30%和0.40%的紫球藻EPS,并设置了空白对照组及传统防腐剂组(0.02%丁基羟基甲苯+0.10%丙酸钙,阳性对照组),测定了饲料的过氧化值(POV)和硫代巴比妥酸反应物(TBARS)等脂质氧化指标、微生物菌落总数(霉菌、酵母菌)、挥发性盐基氮(TVB-N)含量及感官品质变化。结果显示,在标准贮藏条件下,添加0.30%和0.40%紫球藻EPS能够显著抑制饲料脂质氧化,减少霉菌繁殖,并有效延缓TVB-N积累,同时维持饲料良好的感官评分。0.30%紫球藻EPS在不同贮藏条件下均表现出稳定的保鲜效果,尤其在高温高湿环境中。研究表明,紫球藻EPS是一种安全、高效且经济的天然饲料防腐剂,可以提高高脂水产饲料的贮藏稳定性。

关键词： mRNA疫苗   生产现场检查   人员   厂房设施和设备   物料管理   确认与验证  

摘要： 随着信使核糖核酸(mRNA)疫苗相继获批上市,对其生产现场检查更加重视。生产现场检查包括人员、厂房设施和设备、物料管理、确认与验证、质量控制和质量保证检查。对mRNA疫苗生产现场检查要点进行分析,并对生产企业检查的典型缺陷,如确认与验证、生产管理和厂房设施设备、质量控制和质量保证、物料管理、机构人员和文件管理进行分析和举例,以便提升生产质量管理水平,保障药品安全。

关键词： 草莓   游离氨基酸   主成分分析   聚类分析  

摘要： 为了评估草莓果实中游离氨基酸状况和质量,采用HPLC法检测了8个品种的17种组分,并结合多元统计方法分析评价。结果显示:所有品种均检出包括7种必需氨基酸在内的17种游离氨基酸,组分特征存在差异。含量前五的氨基酸均为Asp、Thr、Ala、Glu和Ser,但排序各异。总游离氨基酸、必需氨基酸和非必需氨基酸含量范围不同。氨基酸指标间相关系数不尽相同,主成分分析结果与聚类分析结果一致,综合评价显示得分前2名的品种为JDH和YX,后2名为YXF和FY。研究表明Asp、Thr、Ala、Glu、Ser等5种是草莓果实中主要游离氨基酸,JDH和YX为优质品种。该研究结果为草莓品种引种推广、新品种选育和综合开发利用等方面提供技术参考。

关键词： 肌醇半乳糖苷合成酶基因   基因克隆   表达   桑树  

摘要： 肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase,GolS)是植物合成棉子糖寡糖等相容性溶质的关键酶,在植物应对非生物胁迫中起重要作用。本研究以桑树为材料,克隆获得桑树肌醇半乳糖苷合成酶基因MaGolS1,其ORF全长1014 bp,编码337个氨基酸的亲水性蛋白,分析其主要定位于细胞质,在进化上与紫花毛蕊VpGolS1亲缘最近。该基因主要在成熟桑叶中表达,参与ABA、MeJA及生长素等的调控响应,为今后进一步探究MaGolS1在桑树生长发育及逆境胁迫响应中的功能机制奠定了生物学基础。

关键词： 虹鳟   氨基酸   脂肪酸   主成分分析   聚类分析   盐碱水  

摘要： 为探究盐碱水养殖和淡水养殖条件下虹鳟(Oncorhynchus mykiss)的营养成分差异,测定盐碱水和淡水水质情况,分析测定不同养殖条件下虹鳟及其白化变异种甘肃金鳟(Gansu golden strain)肌肉中水分、灰分、蛋白、粗脂肪等常规营养成分,氨基酸及脂肪酸的组成和含量,并利用主成分分析方法分析了不同养殖条件下的氨基酸和脂肪酸组成。结果显示,盐碱水养殖的虹鳟和甘肃金鳟在灰分、蛋白质含量上与淡水养殖的无显著性差异(P>0.05),盐碱水养殖的虹鳟和甘肃金鳟的粗脂肪含量均极显著高于淡水养殖组(P<0.01)。各组均检测到17种氨基酸,淡水养殖的虹鳟和金鳟的氨基酸总量分别为(51.08±4.13)%和(60.01±0.65)%,均显著高于盐碱水养殖组(P<0.05)。淡水甘肃金鳟氨基酸评分最高(69.87),淡水虹鳟最低(65.80), 4组均为优质蛋白质来源。各试验组均检测到28种脂肪酸,其中淡水养殖的虹鳟和甘肃金鳟的单不饱和脂肪酸显著高于盐碱水养殖组(P<0.05),而盐碱水养殖的虹鳟和甘肃金鳟的多不饱和脂肪酸含量分别为(42.917±0.016)%和(47.802±0.021)%,显著高于淡水养殖组(P<0.05)。主成分分析和聚类分析结果显示,脂肪酸可以有效区别不同养殖环境的虹鳟和甘肃金鳟。研究表明,淡水养殖的虹鳟具有较高的氨基酸含量和蛋白质质量,而盐碱水养殖的虹鳟表现出更高的脂肪含量和更丰富的PUFA谱,脂肪酸可以作为鉴别水产养殖环境的一个可靠的生物标志物。本研究将为盐碱水产品品质评价体系的构建提供数据支撑。

关键词： 金针菇抗冻多糖   分离纯化   牛肉   反复冻融   抗冻   品质特性  

摘要： 抗冻多糖具有抑制冰晶生长的活性,对冷冻食品的质量保存具有一定的保护作用。为探究具有冰重结晶抑制活性的金针菇抗冻多糖(Flammulina velutipes antifreeze polysaccharide,FVAP)对冷冻牛肉品质的影响,通过差示扫描量热法(differential scanning calorimetry,DSC)测定冷驯后FVAP的热滞活性,确定抗冻活性最优的为FVAP-1,并测定FVAP-1的单糖组成、分子量以及对新鲜牛肉在冻融过程中的色差、解冻损失、蒸煮损失、水分分布、质构和微观结构等指标。结果表明,FVAP-1由55.7%葡萄糖、21%甘露糖、17.1%半乳糖、0.9%岩藻糖和5.3%葡萄糖醛酸组成,数均相对分子质量(Mn)为3.73×10^(5) Da,重均相对分子质量(Mw)为5.90×10^(5) Da,峰值相对分子质量(Mp)为1.68×10^(5) Da,其热滞活性为0.47℃,冰晶含量为19.62%。FVAP-1处理的牛肉5次冻融后,其解冻损失(26.22%)和蒸煮损失(33.56%)优于海藻糖(28.76%、35.14%)的保护效果。同时,经过FVAP-1处理的牛肉TBARS值为0.718 mg/kg,而海藻糖和抗冻蛋白处理的牛肉TBARS分别为0.766、0.741 mg/kg,FVAP-1抑制脂肪氧化能力最强。之后通过扫描电镜观察,经过FVAP-1处理的牛肉,肌原纤维更紧密,结构较完整。综上所述FVAP-1可以提高牛肉的持水性,改善牛肉冻藏后的色泽、硬度等性质,为金针菇抗冻多糖作为抗冻剂的应用提供参考。

关键词： 复合益生菌   对虾加工副产物   蛋白质回收   资源化利用  

摘要： 本研究利用复合益生菌对对虾加工副产物(虾头、虾壳)进行发酵处理,确定制备对虾加工副产物发酵液的最佳工艺。通过正交试验,筛选出复合益生菌中嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和产朊假丝酵母(Candida utilis)最优的混合比例;对接种量、初始pH、发酵温度、发酵时间、固液比、葡萄糖添加量分别进行单因素试验,然后在单因素试验结果的基础上采用响应面法对接种量、发酵温度、发酵时间进行优化,确定复合益生菌发酵对虾加工副产物的最佳工艺。将对虾加工副产物发酵液与配合饲料进行1∶1混合,分析营养成分变化。结果表明:1)正交试验筛选出的3种菌株的最优混合比例为嗜酸乳杆菌∶枯草芽孢杆菌∶产朊假丝酵母=2∶1∶2。2)通过单因素试验及响应面试验,复合益生菌发酵对虾加工副产物的最优工艺为接种量16%,初始pH 6.5,温度38.5℃,发酵时间48 h,固液比1∶1.5,葡萄糖添加量15%。3)对虾加工副产物发酵液的蛋白质回收率达到(94.7±0.3)%,与配合饲料进行1∶1混合后,可使饲料中粗蛋白质的含量提升9.16%,17种氨基酸总量增加2.63%。本研究结果对提高对虾副产品的利用价值和促进其高值化加工具有参考价值。

关键词： 人表皮干细胞(hESCs)   3D生物打印   生物医学工程   皮肤组织   屏障功能  

摘要： 目的:对利用人表皮干细胞(Human Epidermal stem cells,hESCs)进行3D生物打印的皮肤组织进行初步研究。方法:分离人皮肤样本的表皮层与真皮层,胰酶消化,快速贴壁法分离ESCs,细胞免疫荧光染色及流式细胞仪鉴定其标志分子;MTT法检测完全DMEM培养基、无血清KGM2培养基中ESCs增殖情况;制备3D打印支架材料,以ESCs为种子细胞,采用微挤压3D生物打印技术打印皮肤组织,HE染色观察不同ESCs浓度的3D打印皮肤组织厚度,MTT法检测不同纤维蛋白原浓度对3D打印皮肤组织中细胞活性的影响;HE染色、免疫荧光染色观察3D打印皮肤组织的结构;透皮水分散失(Transepidermal water loss,TEWL)法、甲苯胺蓝渗透法检测3D打印皮肤组织的屏障功能。结果:细胞免疫荧光染色显示,第2代ESCs中β_(1)整合素、角蛋白19阳性表达率>90%;流式细胞仪检测显示,CD71低表达的同时α6整合素高表达的细胞>90%。与完全DMEM培养基比较,ESCs在无血清KGM2培养基中的组24、48、72 h吸光度值均升高(P<0.05)。与2×10^(6)/ml比较,4×10^(6)/ml、6×10^(6)/ml时打印组织厚度增加,4×10^(6)/ml、6×10^(6)/ml打印组织厚度比较,差异无统计学意义(P>0.05),选用4×10^(6)/ml作为后续ESCs浓度用于打印皮肤。当纤维蛋白原作为支架材料,浓度为5~20 mg/ml时,对ESCs的活性无明显影响。免疫荧光染色显示,3D打印皮肤组织的表皮层、真皮层分层良好。正常皮肤、3D打印皮肤的表皮层厚度、TEWL值、甲苯胺蓝的渗透厚度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:以人ESCs作为种子细胞,培养于无血清KGM2培养基,5 mg/ml纤维蛋白原作为支架材料,微挤压3D生物打印技术打印皮肤组织,获取的皮肤组织与正常皮肤具有类似的表皮层厚度与屏障功能。

关键词： 蒺藜   多糖   超声提取   抗氧化  

摘要： 目的优化蒺藜多糖提取工艺,并研究其单糖组成,考察其体外抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以液料比(A)、超声时间(B)、超声温度(C)、醇沉浓度(D)为影响因素,多糖提取率(Y)为评价指标,响应面法优化超声提取工艺。采用HPAEC-PAD法测定生蒺藜多糖的单糖组成,并考察多糖体外抗氧化活性。结果提取工艺最佳条件为液料比20∶1(mL∶g)、超声时间51min、超声温度62℃,醇沉浓度95%,多糖提取率为2.182%。蒺藜多糖主要由岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等9种单糖组成,其比例为6∶82∶327∶397∶75∶40∶48∶13∶23。蒺藜多糖浓度为2.5 mg/mL时,对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的清除率分别为(67.8±0.51)%、(88.9±0.69)%、(90.7±0.57)%,具有明显的抗氧化活性。结论该方法稳定可靠,可用于超声提取具有抗氧化活性的蒺藜多糖。该分离纯化工艺高效绿色,可直接用于蒺藜多糖的提取,促进蒺藜多糖在医药领域的开发应用。

关键词： 禽网状内皮组织增生症病毒   囊膜蛋白gp90   原核表达   杂交瘤细胞   单克隆抗体  

摘要： 为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞分选技术筛选鉴定阳性杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体腹水,对单克隆抗体的亚型、效价进行测定;并初步测试单克隆抗体在Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)中检测gp90蛋白和REV中的应用效果。结果显示:REV囊膜蛋白gp90获得成功表达和纯化,获得3株能稳定分泌REV gp90单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,该单克隆抗体亚型均为IgG1、Kappa,腹水效价均可达1∶64000;该单克隆抗体不仅可用于Western blot或IFA检测gp90原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可用于IFA检测REV的TCID50效价。研究表明,成功制备的REV gp90单克隆抗体为进一步的REV检测方法建立和gp90蛋白功能研究提供了重要工具。