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关键词： 氨基酸营养液   人工饲料   家蚕   肠道微生物   群落  

摘要： 为研究在家蚕人工饲料中添加氨基酸营养液对家蚕生长、抗病能力和肠道微生物群落结构的影响,以家蚕品种川蚕30号的5龄幼虫为研究对象,分别用氨基酸营养液血海(CAA-Ca-D)和血魂(CAA-D)进行添加处理,以不添加氨基酸营养液组为对照(CK-D),同时添加细菌性软化病病原,调查家蚕个体质量、抗病性和肠道微生物群落组成。结果表明,不同配方氨基酸营养液对家蚕体重和健康状况的影响并不同,与对照相比,CAA-Ca-D处理能够增加家蚕体重并提高家蚕对细菌性软化病的抗病能力,而CAA-D处理则影响家蚕生长,降低家蚕体重。肠道微生物多样性结果表明,添加氨基酸营养液对家蚕肠道微生物的多样性无显著影响,但添加不同配方氨基酸营养液对家蚕肠道细菌群落结构的影响存在显著差异,CAA-D处理下肠球菌属的相对丰度最高(18.29%),其次是魏斯氏菌属(13.46%)和克雷伯氏菌属(12.19%),CAA-Ca-D处理和CK-D处理下魏斯氏菌属的相对丰度最高,均在28%以上,而肠球菌属和克雷伯氏菌属的相对丰度较低。相关性分析表明,家蚕肠道中魏斯氏菌属相对丰度与家蚕生长呈正相关,而肠球菌属和克雷伯氏菌属相对丰度与家蚕生长呈负相关。上述研究结果说明,在家蚕人工饲料中添加CAA-Ca-D氨基酸营养液能够提高蚕体体重,增强蚕体免疫力。

关键词： 黄精   多糖   酒制工艺   肠道免疫调节  

摘要： 目的基于环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型探讨黄精酒制前后多糖对肠道免疫调节作用的影响。方法通过水提醇沉法分别得到黄精和酒黄精多糖。采用环磷酰胺(80 mg/kg×3 d)建立免疫抑制BALB/c小鼠模型,随机分为正常组、模型组、阳性药组、黄精多糖组和酒黄精多糖组,连续灌胃20天。计算脾脏/胸腺指数评估免疫器官功能;ELISA法测定肠道冲洗液分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、白细胞介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ水平;16S rRNA测序技术解析肠道菌群结构,结合主成分分析法(PCA)、线性判别分析法(LEfSe)分析菌群多样性和标志物种。结果与正常组相比,模型组的胸腺指数和脾脏指数均显著下降(P<0.05),表明免疫抑制模型小鼠造模成功。肠道SIgA浓度降低(P<0.05),IFN-γ/IL-4比值显著升高(P<0.05),肠道菌群α多样性显著下降,Verrucomicrobia和Cyanobacteria的丰度增加,Saccharibacteria的丰度降低。与模型组相比,酒黄精多糖组的脾脏指数显著升高(P<0.05),肠道SIgA浓度显著回升(P<0.05),IFN-γ/IL-4比值显著降低(P<0.01),菌群α多样性显著提升,Verrucomicrobia和Cyanobacteria的丰度降低,Saccharibacteria的丰度增加。结论酒制黄精多糖可通过改善免疫抑制小鼠的脾脏和胸腺萎缩,下调Th1/Th2水平,调节肠道菌群,增强其肠道免疫调节作用,为黄精的临床应用和炮制工艺优化提供了科学依据。

关键词： 黑米酒   杀菌   风味物质   氨基酸  

摘要： 为探究不同杀菌方式对鱼腥草黑米酒品质的影响,选择巴氏杀菌、微波杀菌和超声波杀菌3种杀菌方式对其进行处理,并对杀菌前后的样品进行检测。研究结果表明,不同杀菌方式处理后的鱼腥草黑米酒的氨基酸种类基本无变化,含量存在明显差异,经超声波处理的样品氨基酸总量更高;鱼腥草黑米酒中共检出33种挥发性风味物质,其中酯类物质占比最高,经杀菌处理后样品中酯类物质含量均有下降,且经巴氏杀菌处理后的样品下降幅度最大。综合考虑挥发性风味物质和氨基酸组分的变化情况,发现超声波杀菌法能够最大限度地保留鱼腥草黑米酒的独特风味成分和较多的氨基酸,更适用于鱼腥草黑米酒的杀菌处理。该研究结果可为黑米酒杀菌方式的选择提供理论依据。

关键词： 单细胞蛋白质组学   单细胞转录组学  

摘要： 单细胞转录组技术(scRNA-seq)虽能有效解析细胞状态异质性并重建分化路径,但仅依赖mRNA检测可能导致重要生物学信息丢失。本研究利用单细胞质谱蛋白质组学(scp-MS)的最新技术成果,生成了包含2500多个人类CD34+造血干细胞和祖细胞的体内分化谱系的scp-MS数据集。

关键词： 斑马鱼   seipin   肝脏   脂质代谢  

摘要： 【目的】探究鱼类脂滴相关seipin蛋白在肝脏脂质代谢中的作用。【方法】本实验选择斑马鱼为研究对象,克隆得到斑马鱼seipin的编码基因进行序列分析,并在在体和离体实验中敲降和过表达seipin后通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测斑马鱼肝脏和肝细胞甘油三酯(TG)代谢相关基因表达变化。【结果】斑马鱼seipin编码序列长1 053 bp,共编码350个氨基酸。生物信息学分析表明,斑马鱼seipin蛋白属于碱性、不稳定、疏水性跨膜蛋白。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,干扰seipin表达24 h后,斑马鱼肝脏和肝细胞TG合成相关基因dgat1b的表达量显著升高,TG转运相关基因mttp表达量显著升高,TG分解相关基因lpl表达量呈升高趋势,atgl表达量呈下降趋势。干扰seipin表达36 h后,斑马鱼肝脏和肝细胞TG合成相关基因dgat1a的表达量呈升高趋势,TG转运相关基因mttp表达量显著降低,TG分解相关基因lpl表达量显著降低。过表达seipin 24 h后斑马鱼肝细胞TG合成相关基因dgat1a表达量显著降低,TG转运相关基因mttp表达量显著降低,TG分解相关基因lpl表达量无显著差异。过表达seipin 36 h后斑马鱼肝细胞TG合成相关基因dgat2表达量显著升高,TG转运相关基因mttp表达量显著升高,TG分解相关基因lpl表达量无显著差异。【结论】seipin可以通过影响TG代谢相关基因表达参与斑马鱼肝脏脂质代谢。本研究可为进一步研究seipin调控斑马鱼脂质存储与代谢的机制提供基础。

关键词： 水稻   耐冷性   图位克隆   基因编辑   单倍型分析  

摘要： 【目的】挖掘鉴定水稻耐冷基因,创制耐冷种质。【方法】对粳稻品种笹锦进行了甲基磺酸乙酯(EMS)诱变,筛选发芽期耐冷性显著提高的突变体,通过遗传分析、精细定位、转基因验证、表达模式分析和单倍型分析对候选基因进行克隆和功能分析。【结果】筛选到一个发芽期耐冷性显著提高的突变体M34。遗传分析表明耐冷性状由隐性单基因控制,精细定位将目标基因锁定为Cold6。通过CRISPR/Cas9基因编辑构建Cold6敲除突变体验证Cold6参与发芽期耐冷性调控。Cold6在水稻各组织器官均有表达,其中穗部表达最高,编码SNF2等多个结构域。进化树分析显示Cold6可能存在籼粳分化,单倍型分析鉴定出Cold6可分为10个单倍型,其中单倍型Ⅰ~Ⅲ为主要单倍型,单倍型Ⅰ主要为粳稻,单倍型Ⅱ和Ⅲ主要为籼稻。【结论】本研究克隆了Cold6,一个新的水稻发芽期耐冷性调控位点,编码SNF2蛋白,对Cold6分子机理的研究不但可以加深水稻中SNF2家族基因功能的认知,还可为北方粳稻耐冷分子育种提供理论线索和种质资源。

关键词： 锁阳   锁阳多糖   吸湿保湿性   抑菌活性   透皮吸收   敷料  

摘要： 目的为研究锁阳多糖作为二类器械敷料的潜在性,该研究系统探究其作为核心功能原料的吸湿保湿、体外抑菌及透皮吸收特性。方法采用湿度控制法(43%RH、81%RH)测定吸湿率,干燥环境(25℃)评估48 h保湿率;通过牛津杯法考察5~20 mg/mL锁阳多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性;利用Franz扩散池法结合苯酚-硫酸显色法,探究其体外透皮吸收特性。结果锁阳多糖吸湿能力呈湿度依赖性,43%RH和81%RH环境下48 h吸湿率分别达到49.35%±1.18%、71.35%±1.98%,均优于海藻酸钠;干燥环境中48 h保湿率为54.18%±0.36%,高于丙三醇(49.85%±0.19%)和海藻酸钠(45.97%±0.35%);5~20 mg/mL浓度范围内对目标菌株无体外抑菌活性;5 mg/mL溶液经猪皮透皮24 h后,接收液中未检出目标成分(低于检出限0.0028 mg/mL)。结论锁阳多糖兼具优异的吸湿与保湿性能,无针对目标菌株的抑菌活性及单独透皮吸收能力,可作为天然保湿原料应用于二类医疗器械敷料领域,该研究为其精准开发提供了科学依据。

关键词： 尿源干细胞   运动训练   原代培养   取材时间   细胞增殖   干性维持  

摘要： 目的:评估运动训练对尿源干细胞(USCs)原代产量及早期生物学特性的影响,并考察晚间固定时段采样的可行性,为无创、标准化获取USCs提供实验依据。方法:通过设计自身对照,即同一志愿者于晨醒后(6:00—7:00)、上午(9:00—10:00)、下午(14:00—15:00)、晚间(20:00—21:00)4个时点留尿,通过比较原代克隆形成数以确定最佳采样时段;在最佳采样时段内,先静息7 d,再连续7 d进行固定强度跑步(2.8 km,16~18 min),运动后即刻留尿。两组尿液按统一流程分离培养USCs。通过形态学观察评估运动训练对USCs细胞形态的影响,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测USCs生长活力并绘制7 d生长曲线,采用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测USCs干性基因OCT4、C-MYC、SOX2、NANOG mRNA的表达水平,Western blot法检测OCT4、C-MYC蛋白的表达。结果:与其余时段相比,晚间(20:00-21:00)采样可稳定获得USCs克隆,克隆形成率更高。在晚间时段内,与静息对照组相比,运动组的USCs细胞形态更为均一,胞质更透亮,细胞间连接更紧密;细胞活力增殖曲线第7天D(570)显著升高(P<0.01),表现出更持久的增殖活力;干性基因OCT4、C-MYC mRNA的表达水平上调(P<0.05或P<0.01),SOX2、NANOG mRNA表达水平无显著差异(P>0.05);OCT4、C-MYC的蛋白表达水平上调(P<0.01)。结论:晚间(20:00-21:00)取材联合运动训练可显著提升USCs提取效率并优化其早期生物学特性,为后续的规模化扩增与临床转化提供了简单、可行的干预策略。

关键词： 神经胶质瘤   肿瘤干细胞   抗药性   肿瘤   MAP激酶信号系统  

摘要： 目的探讨丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)抑制剂PD98059调控MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路逆转人脑胶质瘤干细胞(GSC)多药耐药(MDR)性的分子机制。方法按照CD133免疫磁珠分离试剂盒说明书分离CD133阳性人脑胶质瘤SHG44细胞, 采用无血清的干细胞培养液进行培养。将GSC分为对照组(正常培养)、抑制剂组(200 μmol/L PD98059处理)、激活组(25 μmol/L芥酸精处理)和MDR1敲除组(200 μmol/L PD98059处理+MDR1基因敲除)。采用CCK-8法检测0、25、50、100、200、300、400 μmol/L浓度的PD98059处理后的GSC增殖情况。采用TUNEL染色法检测各组分别经化疗药物多柔比星或长春新碱处理后的GSC凋亡情况。实时定量PCR定量分析各组GSC MEK、ERK、MDR1 mRNA的水平, 蛋白质印迹法检测p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、MDR1蛋白表达情况, CCK-8法分析各组细胞对化疗药物的敏感性。结果 0、25、50、100、200、300、400 μmol/L浓度的PD98059处理GSC, 不同时间点(24、48、72、96 h)吸光度(A)450值差异均有统计学意义(F=56.22, P<0.001;F=42.69, P<0.001;F=34.19, P<0.001;F=60.28, P<0.001);与0 μmol/L相比, 25、50、100、200、300、400 μmol/L浓度A450值差异均有统计学意义(均P<0.05), 200 μmol/L与300、400 μmol/L浓度比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。对照组、抑制剂组、激活组、MDR1敲除组经多柔比星处理后GSC细胞凋亡率分别为(18.21±0.33)%、(27.73±1.86)%、(20.11±2.06)%、(25.77±2.61)%, 4组经长春新碱处理后GSC细胞凋亡率分别为(22.07±1.51)%、(33.89±3.12)%、(25.41±2.65)%、(30.19±3.08)%, 差异均有统计学意义(F=36.46, P<0.001;F=40.14, P<0.001);与对照组相比, 抑制剂组、激活组、MDR1敲除组均升高(均P<0.05);激活组均明显低于抑制剂组(均P<0.05);MDR1敲除组均明显高于激活组(均P<0.05)。4组GSC MEK mRNA分别为1.00±0.00、0.29±0.05、0.68±0.07、0.33±0.03, ERK mRNA分别为1.00±0.00、0.35±0.06、0.74±0.07、0.38±0.04, MDR1 mRNA分别为1.00±0.00、0.51±0.08、0.89±0.09、0.56±0.06, 差异均有统计学意义(F=30.26, P<0.001;F=22.59, P<0.001;F=18.75, P<0.001);与对照组相比, 抑制剂组、激活组和MDR1敲除组均下降(均P<0.05);激活组均明显高于抑制剂组(均P<0.05);MDR1敲除组均低于激活组(均P<0.05)。4组GSC p-MEK/MEK蛋白水平分别为0.90±0.09、0.29±0.05、0.47±0.05、0.32±0.04, p-ERK/ERK蛋白水平分别为1.19±0.13、0.37±0.06、0.55±0.06、0.40±0.04, MDR1蛋白水平分别为1.08±0.12、0.62±0.07、0.73±0.07、0.65±0.06, 差异均有统计学意义(F=51.74, P<0.001;F=42.30, P<0.001;F=36.58, P<0.001);与对照组相比, 抑制剂组、激活组和MDR1敲除组均下降(均P<0.05);激活组均明显高于抑制剂组(均P<0.05);MDR1敲除组均明显低于激活组(均P<0.05)。4组GSC多柔比星半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.88、0.23、0.79、0.56 mg/L, 长春新碱IC_(50)分别为0.84、0.18、0.75、0.51 mg/L, 差异均有统计学意义(H=17.84, P<0.001;H=15.43, P<0.001);抑制剂组均低于对照组(均P<0.05);激活组均高于抑制剂组(均P<0.05);MDR1敲除组均低于激活组(均P<0.05)。结论 MEK抑制剂PD98059可通过抑制MEK/ERK信号通路降低GSC MDR1 mRNA水平, 提高其对多柔比星、长春新碱化疗药物敏感性。

关键词： 氨基酸叶面肥   设施连作番茄   品质   抗氧化酶活性   根系土壤酶活性  

摘要： 为明确叶面喷施不同氨基酸肥对设施连作番茄品质及根际土壤酶活性的影响,以番茄品种‘亚蔬12号’为试验材料,以叶面喷施清水为对照(CK),设置叶面喷施复合氨基酸(处理AAF)、赖氨酸(处理KF)、缬氨酸(处理VF)和苏氨酸(处理TF)水溶肥5个处理,测定不同处理下的番茄叶片叶绿素含量、果实品质、叶片及根系抗氧化酶活性,以及根系活力及根际土壤酶活性,并通过相关性分析、主成分分析探究番茄品质、根系活力与根际土壤酶活性、叶片及根系抗氧化酶活性的相关性。结果表明,处理AAF的番茄叶片叶绿素含量、果实可滴定酸含量、POD活性、根系活力较CK分别提高222.70%、62.18%、774.65%、843.01%;处理KF的可溶性蛋白质含量较CK提高32.00%;处理VF的蔗糖酶活性较CK提高12.4 mg/g,但对氮代谢相关酶活性有抑制作用;处理TF的维生素C含量较CK提高40.49%,硝酸盐含量较CK降低24.59%。相关性分析表明,可溶性蛋白含量与叶片CAT活性、根系活力与根系CAT活性呈正相关,可滴定酸与根系MDA含量呈负相关。综合来看,叶面喷施复合氨基酸(处理AAF)的综合效果最优,能够明显提升番茄叶片叶绿素含量、改善果实品质、增强抗氧化能力并促进根系活力,是兼顾光合性能、果实品质和抗逆性的理想选择。本文为番茄优质高效栽培提供参考。