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关键词： 细胞分裂素   LpLBD4   B型RRs   体细胞胚发生   百合  

摘要： 以8种野生百合为试材进行体细胞胚诱导,明确了生长素类物质毒莠定(picloram, PIC)能够诱导7种野生百合体细胞胚发生。从体细胞胚发生能力最强的细叶百合(Lilium pumilum)中克隆了LpLBD4基因,LpLBD4编码一个包含180个氨基酸、具有保守LOB结构域的核定位转录因子,系统发育分析显示其与海枣等棕榈科单子叶植物的LBD4处于同一分支上。RT-qPCR分析表明LpLBD4在百合体细胞胚发生早期显著上调表达,且其表达受细胞分裂素诱导。对LpLBD4启动子序列的分析鉴定出大量细胞分裂素响应因子(response regulators, RRs)结合元件。进一步研究表明, B型RRs蛋白LpRR1和LpRR11能够直接结合LpLBD4启动子, LpLBD4可能受细胞分裂素信号通路的B型RRs调控。在拟南芥中过表达LpLBD4显著促进了愈伤组织形成,表明LpLBD4在植物再生中起正向调节作用。

关键词： 无花果叶   双水相体系   多糖   响应面设计   抗氧化   胰脂肪酶抑制率  

摘要： 以无花果叶为原料,通过用双水相体系(Aqueous two-phase system,ATPS)结合超声技术对无花果叶多糖的提取工艺进行优化以提高其多糖得率,并对其体外抗氧化活性分析。首先考察了不同ATPS的分配行为得出最佳ATPS溶剂,再采用单因素对料液比、超声处理时间、温度和功率进行了考察,在此基础上用响应面法对无花果叶多糖的提取工艺优化,并分析其体外抗氧化活性和降血脂能力。最佳ATPS溶剂为质量分数12%聚乙二醇6000(PEG6000)和16%(NH4)2SO4,最佳提取工艺条件为料液比1:22 g·mL^(-1),超声提取功率360W,超声提取时间25 min,超声波提取温度50℃。在此条件下,多糖得率最高可达13.36±0.08%,与预测值接近。无花果叶多糖抗氧化能力及胰脂肪酶抑制能力随着浓度提高而增强,其清除DPPH·和·OH的IC_(50)值分别为0.33和0.32 mg·L^(-1),其对胰脂肪酶抑制率的IC_(50)值分别为0.94 mg·mL^(-1),说明具有较好的抗氧化性能和体外降血脂活性。双水相法提取工艺稳定、可行,可用于无花果叶多糖的提取,为进一步纯化植物多糖奠定了基础,也为植物多糖的提取提供了一种有价值的替代方法。

关键词： 香草醛   半胱氨酸   缓蚀剂   碳钢  

摘要： 采用无溶剂法合成香草醛-L-半胱氨酸席夫碱缓蚀剂,通过红外光谱表征其结构,并运用失重法、电化学测试及扫描电镜分析其缓蚀性能。结果表明:单一使用时该缓蚀剂对碳钢的缓蚀效率达65.20%,与十六烷基三甲基溴化铵复配后提升至95.98%。电化学分析显示,单一体系为阴极主导的混合型缓蚀剂,复配后转为阳极主导型。吸附行为符合Langmuir模型及Arrhenius方程,表明其通过物理化学吸附机制在金属表面形成保护膜。

关键词： 液体核磁   蛋白质   数据采集   结构分析  

摘要： 核磁共振(NMR)波谱技术是解析蛋白质溶液态三维结构和动态过程的关键工具。相较于其他技术,NMR能有效研究蛋白质的构象变化、动力学特性及与配体的弱相互作用。本文综述概述了NMR技术的基本原理、样品制备要求、数据采集与结构解析流程,并介绍了饱和转移差谱(STD)、滴定实验等研究蛋白质-配体相互作用的常用方法,为测试人员利用NMR开展蛋白质研究提供了基础参考。

关键词： 多糖   富硒平菇   酶解法   分离纯化   抗氧化活性  

摘要： 以富硒平菇中的多糖提取率为考察指标,采用酶解法,设置了料液比、酶解浓度、酶解时间和酶解温度共四个因素并选择其中三个有显著影响的因素(料液比、酶浓度、酶解温度)进行了响应面分析优化富硒平菇多糖的提取工艺条件.结果表明:酶解法提取富硒平菇中的多糖,在料液比为1∶52(g∶mL),酶浓度为160 mg/g,酶解温度为62℃,酶解时间为70 min,此条件下多糖提取率为9.46%,测得其中硒含量为50.76μg/g.进一步分离纯化得到Se-POP、Se-POP-1、Se-POP-2、Se-POP-3四个组分,组分中的总糖含量都较粗多糖有所提高.对各组分的抗氧化活性进行检测,结果表明提取出的硒多糖各组分对DPPH自由基和ABTS+自由基都有比较优良的清除能力,且清除率都随着浓度的增加而上升,同浓度下Se-POP-1对自由基有着更强的清除能力.

关键词： 幽门螺杆菌   Yes相关蛋白   自噬   胃癌干细胞   胃癌转移和侵袭  

摘要： 目的研究幽门螺杆菌(H.pylori)协同YAP调控自噬和胃癌干细胞干性对胃癌转移和侵袭能力的影响机制。方法H.pylori、自噬抑制剂氯喹(CQ)单独或联合与转染过表达YAP基因的HGC-27胃癌细胞(H2)或转染空载体的HGC-27胃癌细胞(HN2)共培养,划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的变化情况。所有体外实验每组设3个技术复孔并独立重复3次,采用ImageJ量化并以单因素方差分析或三因素方差分析分析差异。尾静脉注射法构建无特定病原体(SPF)级BALB/c-nu雌鼠的H2细胞和HN2细胞肝转移模型,8周后收集肝脏,苏木精–伊红染色观察组织病理变化,免疫组化检测EpCAM/CD326、Claudin 18、LC3BⅡ及P62蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR方法检测胃癌干细胞标志物CD133、Lgr5和CD44的mRNA转录水平。结果H.pylori感染显著增强了胃癌细胞的迁移和侵袭能力,划痕实验显示HN2+H.pylori组细胞迁移率较对照组增加26.88%,Transwell实验显示迁移细胞数增加34.91%。YAP过表达进一步放大了H.pylori的促转移效应,H2+H.pylori组较HN2+H.pylori组迁移率增加48.59%,侵袭细胞数增加85.00%。自噬抑制剂CQ处理可显著逆转这一效应,使H2+H.pylori+CQ组迁移率降至(32.39±1.19)%,侵袭细胞数降低24.68%,证实自噬在该过程中的核心调控作用。在动物模型中,免疫组化结果显示,除对照组外,其余各组肝组织中均检测到不同程度的EpCAM/CD326和Claudin 18阳性表达,提示胃癌细胞肝转移模型构建成功。免疫组化结果进一步表明,H.pylori感染显著增强了胃癌细胞的转移潜能,其中HN2+H.pylori组中CD326和Claudin 18表达分别达到38.39%和19.73%,较对照组显著升高。YAP过表达进一步放大了该促转移效应,H2+H.pylori组的EpCAM/CD326和Claudin 18表达分别升至60.85%和66.80%,较HN2+H.pylori组显著升高。CQ干预可部分逆转该效应,H2+H.pylori+CQ组中EpCAM/CD326和Claudin 18的表达分别降至44.17%和16.66%,较未处理组下降显著。H.pylori感染显著加重肝组织病理损伤,表现为肝窦扩张、炎症浸润和细胞排列紊乱。YAP过表达联合H.pylori感染组表现出更严重的肝组织结构破坏,包括肝窦显著扩张充血、大量炎症细胞浸润以及明显的坏死变性。通过自噬抑制剂CQ干预可有效改善这些病理改变,显著减轻肝窦扩张和炎症浸润程度。LC3BⅡ和P62蛋白的免疫组化结果显示,H.pylori感染和YAP过表达协同促进自噬过程,表现为LC3BⅡ表达上调和P62表达下调。自噬抑制剂CQ处理可有效阻断自噬流,进一步证实了YAP依赖性自噬通路在H.pylori促胃癌转移中的核心调控作用。此外,H.pylori感染和YAP过表达协同上调了胃癌干细胞标志物(CD133、Lgr5和CD44)的mRNA表达水平,而CQ处理可部分逆转这一效应。2×2×2三因素析因分析显示YAP、H.pylori与CQ在全部10项指标上均具有显著主效应,YAP与H.pylori的交互作用显著提升划痕迁移率、Transwell迁移数、Transwell侵袭数以及CD133、Lgr5、CD44、EpCAM/CD326、Claudin 18、LC3BⅡ、P62等指标;H.pylori与CQ的交互作用在侵袭能力及Lgr5、CD44、CD133和Claudin 18的表达上均表现出显著影响;三因素交互作用则在划痕迁移率、侵袭能力以及Claudin 18、EpCAM/CD326和P62的表达上呈现显著差异。结论H.pylori协同YAP调控胃癌细胞的自噬水平并增强胃癌干细胞干性,最终促进胃癌的转移和侵袭。

关键词： 肝癌干细胞   肝细胞癌   DNA甲基化   组蛋白修饰   非编码RNA调控   染色质重塑  

摘要： 原发性肝癌是世界上第六大常见癌症,也是导致癌症死亡的第三大常见原因。肝癌干细胞(liver cancer stem cell, LCSC)在调节肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发生、自我更新、致瘤性、复发、继发性肿瘤、治疗耐药等方面发挥关键作用。目前已有大量文献对LCSC进行综述,但大部分文献局限于介绍LCSC的来源、表面标志物,以及侧群细胞、信号通路和生长微环境与LCSC的关系,而该综述重点从表观遗传学角度介绍DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA调控及染色质重塑与LCSC的联系,将近年来相关研究进展进行总结、归纳,希望对今后深入研究表观遗传修饰在LCSC中的作用机制提供参考和理论依据。

关键词： 骨髓间充质干细胞   颌骨   髂骨   成骨分化   HOXA10   颅颌面骨修复   生物支架   工程化干细胞  

摘要： 背景:自体骨或人工骨移植在临床上已广泛应用于颌面骨缺损修复,但这些方法仍存在成骨效果不佳等问题。骨髓间充质干细胞在骨形成过程中发挥关键作用,其中,外胚层来源的颌骨骨髓间充质干细胞与中胚层来源的髂骨骨髓间充质干细胞相比,具有更强的增殖和成骨分化能力,阐明其中的关键机制,有望为颅颌面骨缺损修复提供新策略。目的:比较人颌骨骨髓间充质干细胞与髂骨骨髓间充质干细胞的生物学差异,并找出其中的关键调节基因。方法:(1)收集3例牙槽突裂患者的颌骨和髂骨,分离培养出原代骨髓间充质干细胞,通过集落形成实验检测细胞增殖能力,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况,Western blot检测衰老和成骨相关蛋白表达,成骨诱导液处理后茜素红染色检测成骨能力;(2)对颌骨骨髓间充质干细胞和髂骨骨髓间充质干细胞进行转录组和差异基因表达分析,找到差异表达最大的20个基因,鉴定出关键调控因子;(3)在髂骨骨髓间充质干细胞中敲低HOXA10基因,比较分析髂骨骨髓间充质干细胞自我更新、抗衰老和成骨能力变化;(4)将基因编辑的髂骨骨髓间充质干细胞装入β-磷酸三钙支架中,并植入裸鼠背部皮下,8周后对植入物进行Masson染色和免疫荧光染色,观察成骨能力差异。结果与结论:(1)与髂骨骨髓间充质干细胞相比,颌骨骨髓间充质干细胞具有更强的增殖、抗衰老和成骨分化能力;(2)通过转录组分析,鉴定出HOXA10是髂骨骨髓间充质干细胞中高度上调的核心转录因子;(3)在髂骨骨髓间充质干细胞中敲低HOXA10后,细胞增殖、抗衰老和成骨分化能力显著增强;(4)HOXA10敲低的髂骨骨髓间充质干细胞/β-磷酸三钙植入裸鼠背部皮下后,成骨形成能力更强;(5)上述结果表明,HOXA10是决定骨髓间充质干细胞增殖、抗衰老和成骨分化能力的关键调节基因。HOXA10基因修饰的髂骨骨髓间充质干细胞移植可作为颌面骨缺损修复的潜在应用策略。

关键词： 鸽   NDRG3基因   基因克隆   序列特征分析   组织表达模式  

摘要： 该试验采用RACE技术克隆银王鸽NDRG3基因全长cDNA并对其进行生物信息学分析;通过qRT-PCR探究NDRG3基因在90日龄银王鸽心脏、肺脏、脾脏、肾脏、胸肌及肝脏组织中的表达模式。结果显示:鸽NDRG3基因全长cDNA序列2575 bp,包含115 bp的5'端非翻译区(5'Untranslated Region,5'UTR),1335 bp的3'UTR和1125 bp的编码区(CDS),共编码374个氨基酸。蛋白质二级结构分析结果显示,鸽NDRG3蛋白由α螺旋、β折叠和无规卷曲3种类型组成,占比分别为37.43%、9.09%和53.48%。序列比对分析结果显示,鸽NDRG3基因编码的氨基酸序列与其他动物的同源性超过75%,表明该基因在进化过程中具有高度保守性。qRT-PCR结果显示,鸽NDRG3基因在心脏、肺脏、脾脏、肾脏、胸肌及肝脏组织中均有表达,肺脏NDRG3基因mRNA相对表达量显著高于其他组织(P<0.05)。该研究成功克隆银王鸽NDRG3基因全长cDNA序列,该基因进化保守,且在心脏、肺脏、脾脏、肾脏、胸肌及肝脏组织中均有表达。

关键词： 天麻多糖   学习记忆障碍   分离纯化  

摘要： 目的 从天麻(Gastrodia elata Blume)中提取、纯化多糖组分,通过东莨菪碱诱导衰老小鼠模型,研究天麻多糖对学习记忆障碍的改善作用,为天麻多糖在现代医学中的研究、开发和应用提供理论基础。方法 采用水提醇沉法提取天麻粗多糖(GEP),样品经Sevage法反复萃取脱蛋白后,进行纯化;通过DEAE纤维素、Sepharose CL-6B、Sephadex G-25分离纯化GEP,得多糖组分GEP-A-a-1;利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)和高效液相色谱法(HPLC)测定多糖组分GEP-A-a-1的分子量及单糖组成。腹腔注射东莨菪碱建立小鼠学习记忆障碍模型,通过小鼠行为学试验(自主活动、避暗、高架十字迷宫、水迷宫)和生化指标检测,验证GEP对小鼠学习记忆的改善作用;收集血清和脑组织样本,检测血清中氧化应激(SOD、MDA、GSH-Px)及脑组织中神经递质(ACh、AChE、GABA、ChAT、Glu)相关生化指标水平。结果 通过水提醇沉法和Sevage法脱蛋白,成功从天麻中提取得到粗多糖GEP,得率为4.87%。通过分离纯化GEP得到多糖组分GEP-A-a-1,相对分子质量约为9.512 kDa;HPLC分析结果显示,GEP-A-a-1主要由甘露糖(Man, 0.2%)、葡萄糖醛酸(GlcA,0.2%)、半乳糖醛酸(GalA,0.1%)、葡萄糖(Glc, 99.6%)构成。动物试验表明,天麻多糖可通过提高SOD、GSH-Px和Glu、ACh、ChAT水平,降低MDA、GABA、AChE水平,改善学习记忆能力,作用机制可能与增强抗氧化能力、调节神经递质水平有关。结论 天麻经水提醇沉和Sevage法脱蛋白得到天麻粗多糖GEP,本研究表明,GEP可改善小鼠学习记忆能力。