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关键词： 成体干细胞   周围神经损伤   毛囊神经嵴干细胞   嗅干细胞   牙外胚层干细胞   骨髓间充质干细胞   脐带间充质干细胞   羊水间充质干细胞   皮肤干细胞   肌肉间充质干细胞  

摘要： 背景:成体干细胞疗法是周围神经损伤修复与再生领域的研究热点之一。中胚层被视为成体干细胞的理想来源,间充质干细胞具有获得率高、来源广、增殖快等优异性能。而外胚层来源成体干细胞,尤其是神经嵴干细胞,具有神经源性,越来越受到研究人员的关注。目的:对来自外胚层和中胚层的多功能成体干细胞在周围神经损伤修复与再生中的作用及机制进行简要综述,探究不同来源成体干细胞的研究进展与应用前景,并结合临床研究,探讨成体干细胞疗法潜在的应用价值以及亟待解决的问题。方法:第一作者于2024年2月应用计算机在PubMed和SinoMed数据库检索2001年12月至2024年2月相关文献,以“ectodermal stem cells,mesenchymal stem cells,peripheral nerve injury,repair,regeneration”为英文检索词,以“外胚层干细胞、间充质干细胞、周围神经损伤、修复、再生”为中文检索词,最终纳入69篇文献进行分析论述。结果与结论:①外胚层来源成体干细胞具有优异的分化和再生潜能,尤其是毛囊神经嵴干细胞、嗅干细胞、牙外胚层干细胞等,具有神经源性,可在体外表达神经特异性标志物,但目前缺少临床试验研究。②中胚层来源成体干细胞种类多、易获得及纯化,其中骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞在周围神经损伤修复的应用疗效及安全性方面有相关临床试验支持,能改善感觉及运动神经传导,且在随访中未出现并发症和明显不良反应。骨髓间充质干细胞的获取需行侵入性外科手术且要求患者与捐赠者骨髓配型吻合,应用受到一定限制;而脐带间充质干细胞虽无需侵入性获取,但分离较困难且表型不稳定。③内胚层来源成体干细胞常难以在体外生长,应用受限,目前应用于临床的可能性低。④综合来看,骨髓间充质干细胞仍为周围神经损伤干细胞治疗的首选细胞,适用于无外科手术禁忌且符合配型要求的情况,其次为脐带间充质干细胞,辅以分离方法的改进和表型稳定性的提高策略。⑤牙外胚层干细胞以及脂肪间充质干细胞具有较高应用潜能,有待进一步临床试验,其他外胚层、中胚层来源成体干细胞各以其优异特性在动物及细胞实验研究中具有显著优势。

关键词： 玉竹   多糖   抗氧化活性   降脂活性  

摘要： 目的:通过响应面法优化玉竹多糖的提取工艺,考察不同产地玉竹多糖的体外抗氧化作用及降脂活性。方法:以提取温度、提取时间和料液比为自变量,以玉竹多糖得率为响应值,采用响应面分析法优化超声提取工艺;考察不同产地玉竹多糖对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子的清除能力来评价体外抗氧化活性;通过考察对牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠的吸附能力来评价不同产地玉竹多糖的体外降脂活性。结果:利用响应面设计对提取工艺进行优化,得最佳提取工艺为提取温度为77℃,提取时间为52 min,料液比1∶32 g/mL。在此条件下,湖南玉竹多糖得率最高为9.75%,其次山东、云南、陕西、广西玉竹多糖的得率分别为8.94%、8.41%、7.36%、6.94%。不同产地玉竹多糖对DPPH自由基的清除能力从大到小依次为湖南、山东、陕西、云南、广西,对羟基自由基的清除能力从大到小依次为湖南、云南、山东、陕西、广西,对O-2的清除能力从大到小依次为湖南、山东、云南、陕西、广西,对牛磺胆酸钠和甘氨胆酸钠结合能力从大到小依次为湖南、云南、山东、陕西、广西。结论:优化的玉竹多糖提取工艺方法可行,5个产地的玉竹多糖均具有一定的抗氧化和降脂活性。

关键词： Creutzfeldt-Jakob disease(CJD)   Mendelian randomization   quantitative trait locus(QTL)   syntaxin 6(STX6)   protein disulfide isomerase family A member 4(PDIA4)  

摘要： Creutzfeldt-Jakob disease(CJD)is a rare neurodegenerative disorder characterized by abnormalities in the prion protein(PrP),the most common form of human prion *** Genome-Wide Association Studies(GWAS)have identified numerous risk genes for CJD,the mechanisms underlying these risk loci remain poorly *** study aims to elucidate novel genetically prioritized candidate proteins associated with CJD in the human brain through an integrative analytical *** datasets from Protein Quantitative Trait Loci(pQTL)(NpQTL1=152,NpQTL2=376),expression QTL(eQTL)(N=452),and the CJD GWAS(NCJD=4110,NControls=13569),we implemented a systematic analytical *** pipeline included Proteome-Wide Association Study(PWAS),Mendelian randomization(MR),Bayesian colocalization,and Transcriptome-Wide Association Study(TWAS)to identify novel genetically prioritized candidate proteins implicated in CJD pathogenesis within the *** PWAS,we identified that the altered abundance of six brain proteins was significantly associated with *** genes,STX6 and PDIA4,were established as lead causal genes for CJD,supported by robust evidence(False Discovery Rate<0.05 in MR analysis;PP4/(PP3+PP4)≥0.75 in Bayesian colocalization).Specifically,elevated levels of STX6 and PDIA4 were associated with an increased risk of ***,TWAS demonstrated that STX6 and PDIA4 were associated with CJD at the transcriptional level.

关键词： 犬细小病毒   VP2蛋白   单克隆抗体   制备与鉴定  

摘要： 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。

关键词： 花魔芋   氨基酸水溶肥   生长   产量   品质  

摘要： 以四川省木里县黑秆花魔芋为材料,探索不同浓度氨基酸水溶肥对花魔芋生长、产量和品质的影响。结果表明:1.08 g/L氨基酸溶液对花魔芋产量和品质等具有显著影响,膨大期株高、叶盘直径和叶柄长度分别较CK增加了8.18%、14.49%、12.76%,单株产量增加了52.1%,葡甘聚糖含量增加了118.13%。

关键词： 促肾上腺皮质激素释放激素   脂多糖/D-氨基半乳糖   急性肝损伤   低温  

摘要： 目的 探讨CRHR1受体拮抗剂对低温条件下脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 将40只小鼠随机分为5组,每组各8只。实验分两部分先后进行。第一部分实验小鼠被分为常温肝损伤组(NLD组)和低温肝损伤1组(LLD1组)。第二部分实验均在4℃条件下进行,小鼠被分为低温对照组(LC组)、低温肝损伤2组(LLD2组)和低温Antalarmin治疗组(ANT组)。比较NLD组、LLD1组及LC组、LLD2组、ANT组的肝功能指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)]、肝脏指数、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]、炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β]水平。观察各组小鼠肝组织的变化。结果 LLD1组ALT、AST、肝脏指数、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β高于NLD组,SOD、GSH-PX低于NLD组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LLD2组ALT、AST、肝脏指数、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β高于LC组、ANT组,SOD、GSH-PX低于LC组、ANT组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与NLD组比较,LLD1组肝充血、坏死、肝细胞肿胀、变性程度均更严重。与LC组比较,LLD2组肝组织结构排列相对更加紊乱,炎细胞浸润更加明显;与LLD2组比较,ANT组的肝细胞核呈现出较圆且清晰的特征,同时炎性细胞的浸润现象减轻,肝细胞的肿胀程度也有所减少。结论 低温会明显加剧LPS/D-氨基半乳糖(D-GalN)引起的急性肝损伤,而在低温条件下CRHR1受体拮抗剂Antalarmin可减轻LPS/D-GalN引起的肝损伤,对肝起保护作用。

关键词： 鞘氨醇单胞菌   胞外多糖   提取   分离纯化   糖脂代谢紊乱   HepG2细胞  

摘要： 【目的】以鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas echinoides)1K04342为研究对象,提取、分离纯化其胞外多糖(extracellular polysaccharide,EPS),并探究纯化后的多糖对油酸(oleic acid,OA)诱导人肝癌细胞(HepG2)糖脂代谢紊乱的改善作用及机制。【方法】选取超声功率、超声时间和培养时间3个因素进行响应面试验设计,确定超声辅助法提取***1K04342胞外多糖的最佳工艺条件;对提取后的粗EPS进行脱蛋白处理,随后通过DEAE-琼脂糖凝胶FF(DEAE-Sepharose Fast Flow)阴离子柱分离,研究分离纯化后的EPS对HepG2细胞增殖活性、葡萄糖消耗率、α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶抑制率的影响,筛选出能减轻OA诱导胰岛素抵抗-HepG2(insulinresistance-HepG2,IR-HepG2)细胞糖脂代谢紊乱的最佳活性组分,并对所得组分进行理化分析和进一步活性分析。【结果】EPS的最佳提取工艺为:超声功率59.39W;超声时间42.08s,培养时间9.24h,该条件下EPS的理论提取量为2.13g/L。根据实际试验条件,将提取参数调整为超声功率60W,超声时间42s,培养时间9.2h,在此条件下进行试验得到EPS的提取量为2.10g/L,与理论提取量(2.13g/L)差异不显著。经过活性筛选得到降低IR-HepG2细胞糖脂代谢紊乱的最佳组分是EPS-2。同时,对EPS-2进行理化分析,EPS-2的总糖含量为74.3%,单糖组成包括岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖。EPS-2减轻了OA诱导的IR-HepG2细胞糖脂代谢紊乱。EPS-2能够逆转OA对HepG2细胞活力所产生的负面作用。EPS-2可能通过激活IR-HepG2中IRS-1/PI3K/AKT信号通路,上调下游GSK3β和FoxO1蛋白表达,下调PEPCK和G6PasemRNA和蛋白表达,进而缓解糖代谢紊乱。EPS-2可能通过激活IR-HepG2中AMPK/ACC1/SREBP-1C信号通路降低甘油三酯(triacylglycerol,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)水平,提高高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein,HDL)水平,进而缓解OA诱导的脂质代谢紊乱。【结论】***1K04342胞外多糖EPS-2在IR-HepG2细胞中能有效改善糖脂代谢紊乱。

关键词： 精液   冷冻保存   蛋白质   耐冻标志物  

摘要： 精液冷冻保存技术在种质资源保护和人工授精应用方面意义重大,但精子冻融后存在活率下降等问题,限制了该技术的推广应用。由于不同个体精子耐冻性存在差异,可通过耐冻标志物筛选耐冻性高的精液来提高冷冻效率。该文对现有的水通道蛋白、热休克蛋白等耐冻蛋白标志物的特性和应用情况展开系统综述,剖析其在精子冷冻过程中的作用机制,旨在为深入理解精子冷冻损伤的机制提供参考资料,进而为提高精液冷冻保存的效率提供理论支持与实践指导。

关键词： 人胚胎干细胞   巨核细胞   巨核细胞微囊泡   人脐静脉内皮细胞   血管新生  

摘要： 目的 建立人胚胎干细胞(hESCs)来源巨核细胞(MKs)及其衍生微囊泡的制备体系,评价巨核细胞微囊泡(MKMPs)对血管新生的促进作用。方法 (1)干细胞来源MKs的制备:将hESCs接种于基质胶包被的培养板中,通过贴壁培养法进行诱导,添加第一阶段诱导培养基培养2 d后将细胞诱导至中胚层祖细胞,添加第二阶段诱导培养基培养3 d后将细胞诱导至生血内皮/造血祖细胞。随后将细胞消化成单细胞并接种至低吸附孔板,通过悬浮培养再诱导8 d。通过细胞形态观察、流式分析各阶段特征分子标志物[hESCs:TRA-1-60、唾液酸糖脂阶段特异性胚胎抗原4(SSEA4);中胚层祖细胞:brachyury;生血内皮细胞/造血祖细胞:CD34、CD43;MKs:CD41a、CD42b],细胞免疫荧光染色β微管蛋白(β1-tubulin)、血管性血友病因子(VWF)、Friend白血病病毒整合位点1(FLI1)、CD42鉴定MKs的特征蛋白;(2) MKMPs收集和验证:通过差速离心法收集MKMPs,利用纳米颗粒跟踪分析实验(NTA)检测粒径,透射电镜观察形态及超微结构,蛋白免疫印迹法检测特征蛋白CD41、肿瘤易感基因101(TSG101)及CD9的表达水平;(3) MKMPs生物学功能分析:将MKMPs和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别用CD41a-PE及CD34-APC抗体标记后进行孵育,结合活细胞成像观察培养3 h后细胞吞噬MKMPs的现象;以HUVECs为实验对象分别开展管腔形成实验和细胞迁移实验,以血小板微囊泡(PMPs)作为阳性对照,评估MKMPs对内皮细胞迁移及血管新生的作用。实验分为未添加微囊泡组(0 mg·L^(-1),对照组)及添加不同浓度微囊泡组(1、5、10和20 mg·L^(-1),实验组),对细胞在基质胶内培养5 h后形成管腔的结点数量进行计数,并分析6 h细胞迁移率;ELISA检测微囊泡中血管内皮生长因子(VEGF)浓度。结果 (1)流式检测结果表明分化前细胞表达多能性标志物SSEA4及TRA-1-60,诱导至第2 d的细胞表达中胚层祖细胞标志brachyury;诱导至第5 d的细胞表达生血内皮标志CD34和早期造血细胞标志物CD43;诱导至第13 d的细胞表达MKs标志物CD41a和CD42b。分化第13 d细胞表达MKs特征蛋白CD42、β1-tubulin、VWF及FLI1;(2) MKMPs具有典型双层膜状结构,NTA分析表明该囊泡粒径为(164.3±14.0) nm,且表达TSG101、CD9及CD41等标志蛋白;(3)荧光标记的MKMPs与HUVECs共培养3 h后,HUVECs能够摄取MKMPs;与对照组相比,添加MKMPs能够显著提高HUVECs的管腔形成能力及迁移能力,其中MKMPs 5 mg·L^(-1)处理促进管腔形成及细胞迁移能力最强,其促进细胞迁移及管腔形成的能力均显著高于5 mg·L^(-1)的PMPs处理组;与PMPs相比,MKMPs中VEGF的含量显著升高。结论 hESCs来源MKs具备产生微囊泡的能力,MKMPs具有促进血管新生的作用。

关键词： 参附注射液   急性肺损伤   脓毒症   多糖包被   syndecan-1   HS  

摘要： 目的 观察参附注射液对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及作用机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参附注射液低剂量组、参附注射液高剂量组,每组10只。采用盲肠结扎法(CLP)制备脓毒症大鼠模型,假手术组只行开关腹手术。假手术组及模型组每6 h给予尾静脉注射液0.9%氯化钠溶液10 mL/kg,参附注射液低、高剂量组相同时间点分别给予尾静脉注射5 mL/kg参附注射液+5 mL/kg 0.9%氯化钠溶液及10 mL/kg参附注射液,成膜后72 h处死大鼠,留取腹主动脉血及组织标本,行pH、PO_(2)、PCO_(2)、Lac等血气分析,电镜观察大鼠肺组织血管内皮,Western Blot法测定肺组织syndecan-1、HS含量,免疫组织化学法检测肺组织syndecan-1、HS的表达。结果 血气分析提示:参附注射液低剂量组、高剂量组均较模型组pH、PO_(2)显著升高(P<0.01,P<0.000 1),Lac显著降低(P<0.000 1)。参附注射液高剂量组较低剂量组pH值显著升高(P<0.000 1),PO_(2)明显升高(P<0.05),PCO_(2)及Lac无显著性差异;电镜观察显示:模型组肺血管内皮肿胀明显,线粒体破坏。低剂量组肺血管内皮损伤肿胀,血管内皮肿胀程度较模型组减轻,细胞器破坏。高剂量组内皮肿胀程度较模型组及低剂量组轻微,细胞器结构相对完整;Western显示:与模型组相比,低剂量组syndecan-1水平显著提高(P<0.01),HS无显著性差异(P>0.05)。与模型组比较,高剂量组syndecan-1、HS水平均显著提高(P<0.001,P<0.000 1)。与低剂量组比较,高剂量组syndecan-1、HS水平均明显提高(P<0.05,P<0.01);免疫组织化学检测结果显示:与模型组相比,低剂量组及高剂量组syndecan-1、HS水平均显著升高(P<0.01,P<0.001,P<0.000 1)。与低剂量组相比,高剂量组syndecan-1表达显著升高(P<0.01),HS表达明显升高(P<0.05)。结论 参附注射液可减轻脓毒症大鼠肺损伤,其作用机制可能与减少肺组织多糖包被降解有关。