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关键词： 墨兰   SVP   基因克隆   表达分析  

摘要： 墨兰作为一种重要的观赏花卉,在其花发育过程中需要经历漫长的低温休眠时间才能开花。SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP)基因是植物开花途径中的关键调控因子,在植物休眠开花中发挥着重要作用。本研究以小香墨兰为材料,克隆3个SVP同源基因,分别命名为CsSVP1、CsSVP2和CsSVP3。生物信息学分析结果表明,3个CsSVP基因全长分别为651、687、714 bp,分别编码216、228、237个氨基酸,均含有保守的MADS-box和K-box结构域。氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示,CsSVP1与春兰CgSVP相似性最高,CsSVP2与扇形文心兰EpMADS18相似性最高,CsSVP3与秋石斛DhcSVP相似性最高。CsSVP1与春兰CgSVP亲缘关系较近;CsSVP2与扇形文心兰EpMADS18亲缘关系较近,而CsSVP3与秋石斛DhcSVP亲缘关系较近。启动子顺式元件分析表明,CsSVPs基因含有许多光响应、激素响应及其他元件。qRT-PCR结果表明,3个CsSVPs基因在墨兰根、茎、叶、花、果各组织中均有表达,其中CsSVP1、CsSVP3基因的表达模式相似,均在叶、茎中积累,在花和果中表达量显著下降;而CsSVP2则在果中的表达量最高,其次在叶、茎和花中均有明显表达。同时检测其在不同花器官中的表达情况发现,3个CsSVPs均在萼片中表达量最高。不同花发育时期的表达结果显示,CsSVP2基因在发育早期(S1)阶段表达量最高,随着花器官的发育其表达量下降,在成熟的花朵(S5)时期表达量最低。CsSVP1和CsSVP3在花器官中的整体表达水平不高,其中CsSVP1的表达量在S2时期最高,在S5时期表达量最低;而CsSVP3则在S2时期表达量最低,在花发育后期表达量持续升高。低温处理发现,CsSVP1和CsSVP2在低温处理后的表达量略有提升,CsSVP3则显著下降;而在ABA的处理中,仅CsSVP1的表达受到明显抑制,CsSVP2、CsSVP3则无响应。这些结果表明不同的CsSVP基因其功能存在差异,在兰花低温休眠促进开花过程中可能发挥不同作用,为进一步解析墨兰SVP基因在花发育过程中的具体功能提供实验依据。

关键词： 佛手山药   多糖   纤维素酶   超声波   抗氧化活性  

摘要： 该研究以佛手山药为原材料,采用超声波辅助纤维素酶法提取多糖,通过单因素试验结合响应面优化得出佛手山药多糖最佳提取工艺,利用傅里叶变换红外光谱和紫外可见分光光度计初步探究佛手山药多糖的结构,并且通过测定还原能力、DPPH自由基和羟基自由基的清除率进一步考察其体外抗氧化活性。研究结果显示,最佳提取工艺为料液比1:20(g/mL)、超声时间20 min、超声功率450 W、酶添加量2%,在此条件下,佛手山药多糖提取率为(33.25±0.48)%;经测定,佛手山药提取物中多糖含量为91.42%,蛋白质含量极少,且多糖中存在a-吡喃糖和β-吡喃糖;体外抗氧化实验结果表明,佛手山药多糖的总还原能力、DPPH自由基和羟基自由基清除率随多糖浓度增加而增大,当多糖浓度为2.00 mg/mL时,总还原能力、DPPH自由基和羟基自由基的清除率达到最大,分别为0.459、77.28%、78.58%,该结果表明佛手山药多糖具有较好的抗氧化活性。

关键词： 氨基酸   肠道菌群   代谢互作   吲哚类衍生物   支链氨基酸   免疫稳态   健康调控   膳食干预  

摘要： 氨基酸作为人体生长发育、代谢调控及免疫平衡的关键营养物质,其代谢过程不仅受宿主自身调控,更与肠道菌群的代谢活动密切相关。肠道菌群通过多样化的酶系统和代谢途径,对膳食来源的氨基酸进行特异性转化,形成与宿主代谢既互补又协同的复杂网络,在维系机体健康中发挥重要作用。系统阐述了肠道菌群对芳香族氨基酸、支链氨基酸、精氨酸及赖氨酸的特异性代谢途径,包括脱羧、转氨、氧化还原等关键反应,并特别关注了具有这些代谢功能的益生菌属。重点总结了氨基酸经肠道菌群代谢产生的吲哚类衍生物、支链短链脂肪酸、多胺等生物活性物质在维护肠道屏障、调控免疫稳态、保护神经功能、调节能量代谢及维持心血管与骨骼健康等方面的作用机制。从食品营养与健康的角度,探讨氨基酸与肠道菌群互作的分子机制及生理意义,旨在为开发基于氨基酸-肠道菌群轴的功能性食品、膳食补充剂等精准营养干预策略提供理论依据。

关键词： 白灵菇   多糖   分级醇沉   抗氧化活性  

摘要： 白灵菇是一种珍稀食用菌。此研究首次采用分级醇沉法分离纯化白灵菇多糖,得到5种多糖组分(PNP40,PNP50, PNP60, PNP70和PNP80),对多糖的总糖含量、糖醛酸含量、分子量和单糖组成进行分析,并探究醇沉多糖的抗氧化活性。结果显示:随着乙醇体积分数的增加,醇沉多糖的总糖含量逐渐降低,其中PNP40的总糖含量最高,为25.68±0.35%;PNP40, PNP50和PNP60为酸性多糖,且PNP50的糖醛酸含量最高,而PNP70和PNP80不含有糖醛酸;醇沉多糖组分的相对分子量差异明显,随着乙醇体积分数的增加,多糖组分的分子量逐渐减小;5种多糖的单糖组成和比例不同,其中葡萄糖、半乳糖和甘露糖是主要的单糖组成成分。白灵菇醇沉多糖组分均具有一定的抗氧化活性,其中PNP60和PNP70具有较高的总抗氧化活性、羟自由基和DPPH清除活性,在天然抗氧剂、生物功能性食品领域具有潜在的应用价值。

关键词： 牛蒡   醇氧化酶   基因克隆   表达分析   亚细胞定位  

摘要： 目的:对牛蒡中的醇氧化酶基因AlAOX1进行分析,为后续研究醇氧化酶基因的作用提供理论基础。方法:基于课题组前期转录组数据筛选出的AlAOX1基因,对AlAOX1进行基因克隆、生物信息学分析、系统发育分析与亚细胞定位分析,明确其基因特性和理化性质,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分析牛蒡子萌发过程和不同组织中的基因表达情况,并对不同非生物胁迫条件下的基因表达情况进行分析。结果:成功克隆出AlAOX1基因,并上传至国家生物技术信息中心(NCBI)数据库。AlAOX1基因的序列长度为2214 bp,编码737个氨基酸。AlAOX1蛋白具有亲水性,属于稳定蛋白、无跨膜结构与信号肽,包含75个磷酸位点。系统进化树分析表明该蛋白与菊科植物聚为一支,其中与刺苞菜蓟中的同源蛋白相似性最高。亚细胞定位分析表明AlAOX1定位于叶绿体。Real-time PCR分析表明,AlAOX1基因在种子萌发过程中与不同组织中的表达量存在差异,在第9天的幼苗和根中的表达量最高,分别为(25.62±3.24)(P<0.01)和(1.70±0.11)(P<0.01),显著高于空白组;非生物胁迫实验结果表明,牛蒡根在高盐胁迫(200 mmol·L^(-1))、干旱胁迫(25%PEG)和低温胁迫(4℃)处理下,分别在24、24、12 h表达量达到最高,分别为(2.63±0.93)(P<0.01),(1.58±0.21)(P<0.05)和(2.51±0.44)(P<0.01),均显著高于对照组,具有抗非生物胁迫的作用。结论:该研究成功克隆出AlAOX1基因,确定了AlAOX1基因的分子特征与表达特性,推测其在牛蒡的生长发育及非生物胁迫中发挥调控作用,为进一步研究醇氧化酶基因在牛蒡中的具体作用奠定理论基础。

关键词： 急性肾损伤   甘草多糖   Nrf2信号通路   氧化应激   铁死亡  

摘要： 目的 探讨甘草多糖(Glycyrrhiza polysaccharide,GCP)对顺铂诱导的急性肾损伤(cisplatin-induced acute kidney injury,CI-AKI)模型大鼠和人肾小管上皮细胞HK-2损伤模型的保护作用及作用机制。方法 设置对照组、单纯GCP高剂量(100 mg/kg)组、模型组和GCP低、高剂量(50、100 mg/kg)组。ip顺铂建立大鼠CI-AKI模型,给予GCP干预后,测定血清肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、炎症因子及肾组织还原性谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、亚铁离子(Fe^(2+))水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)和过碘酸雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色观察肾脏病理形态;TUNEL法观察肾组织细胞凋亡情况;Western blotting测定肾组织中肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteine-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌脱氢酶1(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate quinone oxidoreductase 1,NQO1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)、铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)蛋白表达。顺铂处理HK-2细胞建立肾小管损伤模型,设置对照组、模型组、GCP(800μg/mL)组、GCP+Nrf2抑制剂ML385(2μmol/L)组,并通过测定细胞活力、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、Fe^(2+)水平、Nrf2核转位情况以及Bcl-2、Bax、Nrf2、NQO1、HO-1、GPX4、SLC7A11、ACSL4蛋白表达,进一步明确Nrf2在GCP干预CI-AKI中的确切作用。结果 GCP可显著降低CI-AKI模型大鼠SCr、BUN水平(P<0.001),减轻顺铂引起的肾脏病理损伤、恢复肾小管形态,降低KIM-1和NGAL的蛋白表达(P<0.01、0.001);降低CI-AKI大鼠血清中炎症因子水平(P<0.01、0.001),抑制炎症反应;上调Bcl-2/Bax比值(P<0.05),下调cleaved Caspase-3的蛋白表达(P<0.01、0.001),减轻肾小管上皮细胞凋亡。GCP在体内外中能够诱导Keap1与Nrf2解离,促进Nrf2核转位(P<0.01),上调下游蛋白HO-1、NQO1、GPX4、SLC7A11表达(P<0.05、0.01、0.001),提高GSH活性同时下调ACSL4表达(P<0.05、0.01),降低ROS、MDA和Fe^(2+)含量(P<0.05、0.01、0.001),改善CI-AKI模型大鼠脂质过氧化水平、降低铁沉积,抑制铁死亡,而ML385可逆转上述保护作用(P<0.05、0.01、0.001)。结论 GCP能够改善CI-AKI,该保护作用可能通过激活Nrf2信号通路抑制肾脏细胞铁死亡发挥作用。

关键词： 生物物理学   超二级结构   氨基酸含量   Fisher判别法  

摘要： 预测蛋白质超二级结构可以为从一级序列预测三级结构的预测搭建桥梁。本文从氨基酸序列出发,统计分析了两类β-Loop-β模体氨基酸含量,得出一些有助于区分两类模体的信息,并考虑20种氨基酸序列保守性,采用Fisher判别法,区分两种蛋白质超二级结构模体β-Loop-β,取得较好结果。

关键词： 新型超声波快速组织处理   DNA提取   FFPE   穿刺组织  

摘要： 目的评估超声波快速组织处理福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织样本的核酸质量及下游分子病理应用。方法收集临床肿瘤样本,分别采用常规组织处理流程及新型超声波快速组织处理流程。采用进口Q试剂FFPE核酸提取试剂盒提取核酸(DNA/RNA),检测核酸浓度、纯度,生物分析仪检测DNA片段大小分布、RNA质量;采用RT-qPCR、NGS等方案对比核酸质量的影响。结果新型超声波快速组织处理相较常规处理样本核酸质量及下游分子病理应用差异均无统计学意义。结论新型超声波快速组织处理所得核酸(DNA/RNA)质量相对常规组织处理差异无统计学意义,可用于下游分子检测。

关键词： 钙质沉着症   间质干细胞   再生医学   钙化防御   钙性尿毒症性小动脉病  

摘要： 钙化防御是一种罕见的、进行性血管钙化性疾病,其典型病理改变特征为皮下脂肪和真皮层微血管钙化、微血栓形成和内皮损伤,好发于终末期肾病患者。钙化防御进展迅速,伴发溃疡感染患者的1年病死率可达80%,其发病机制尚不明了。目前尚无确切有效的治疗钙化防御的方法,主要治疗手段为多学科对症处理。间充质干细胞具备促进再生、抑制血管钙化、抗感染、调节免疫和改善高凝状态等生物学作用,使其成为近年来疑难复杂疾病的潜在治疗方法。该文就近年来钙化防御的流行病学特征和临床表现、发病机制、治疗现状以及间充质干细胞的潜在应用前景作一综述。

关键词： 侵袭性真菌病   侵袭性真菌感染   血液肿瘤   儿童   诊断治疗  

摘要： 侵袭性真菌病(IFD)是血液肿瘤及造血干细胞移植后患儿中的严重并发症,病死率高,临床诊治面临严峻挑战。曲霉菌、念珠菌和木霉菌是儿童血液肿瘤合并IFD的主要病原体,感染多表现为发热、呼吸困难等非特异性症状,早期诊断困难。侵袭性念珠菌感染可表现为念珠菌血症或慢性播散性感染(如肝脾受累),后者可伴有右上腹压痛和腹痛等局部表现,进一步增加了IFD早期诊断的复杂性。因此,儿童血液肿瘤造血干细胞移植后,IFD的早期诊断和有效治疗需要采用多种诊断方法联合的策略,以实现早期干预和有效治疗并改善预后。