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关键词： 淮山多糖   肠类器官   胃肠模拟消化   单糖组成   肠干细胞   Lgr5   Wnt3  

摘要： 由于淮山多糖（Huaishan polysaccharides）的结构组成、生物活性及其对肠道健康的影响尚不清楚，本研究分析了经体外胃肠模拟消化液消化后淮山多糖的分子量与单糖组成的变化，并使用3维（3D）类器官模型评估了其对肠道细胞增殖和分化的影响。结果表明，淮山多糖的分子量从139.173 kDa下降到1.676 kDa。消化前，d-葡萄糖（89.72%）是主要的单糖，但消化后其水平显著下降，而其他（例如d-甘露糖、d-半乳糖）水平上升。免疫荧光分析证实了3D类器官中的关键肠道细胞标志物，包括Ki67（增殖细胞）、ChromograninA（分泌细胞）、Mucin2（杯状细胞）、Lysozyme（潘氏细胞）、Villim（吸收细胞）和Olfm4（肠干细胞）。淮山多糖处理组显示Ki67和Muc2的mRNA表达水平和免疫荧光信号都明显增强。淮山多糖还上调了1.32倍的Lgr5、1.15倍的Olfm4、1.1倍的Wnt3和1.12倍的Hes1的mRNA表达水平。这些数据表明，淮山多糖通过Wnt介导的Lgr5/Olfm4激活增强肠干细胞的增殖，同时通过Notch抑制促进杯状细胞分化。结果表明淮山多糖在消化过程中的结构及其对肠道增殖和分化的促进作用，为淮山多糖在功能食品中的应用奠定了基础。

关键词： 疟原虫纯化核酸   肝脏炎性反应   氧化应激   NF-κB通路   肝细胞增殖  

摘要： 本研究旨在探究疟原虫纯化核酸（PNA）诱导小鼠肝脏炎症的机制。将25只C57BL/6小鼠随机分为5组：空白对照组、阴性对照组、低、中、高剂量PNA组，每组5只。尾静脉注射PNA，48?h后采集血清和肝脏组织。检测显示，PNA组血清ALT/AST显著升高（P<0.05），肝组织炎性浸润和坏死，IL-6、IL-1β、TNF-α表达上调（P<0.05）。转录组分析发现，高剂量PNA组有1018个差异基因，富集于免疫与氧化应激反应及NF-κB通路。qPCR和Western blot证实TLR9及p-NF-κB p65呈剂量依赖性增加。EdU和CCK-8检测表明PNA显著抑制肝细胞增殖（P<0.05）。结果表明，PNA通过激活TLR9/NF-κB通路，剂量依赖性诱导肝脏炎症与氧化应激，导致肝损伤并抑制增殖，揭示病原体核酸在疟疾肝损伤中的独立作用。

关键词： 革菌属   簇扇菌属   对联三苯   苯并呋喃   甾体   多糖   生物活性  

摘要： 本文系统综述了干巴菌类真菌的种类、天然产物、生物活性及其应用的研究进展，挖掘其潜在的科学价值与应用潜力，以促进珍稀真菌资源的可持续利用。目前对干巴菌类真菌天然产物的研究主要集中于7种真菌，从这些真菌中分离得到的化学成分主要为对联三苯类化合物。此外，还包括苯并呋喃类、甾体类、神经酰胺类、酚酸类、黄酮类、有机酸、挥发油和多糖等天然产物。生物活性研究表明，对联三苯类化合物在抗氧化、抗炎症、抗肿瘤以及抗阿尔茨海默病等方面具有显著活性。本综述总结了干巴菌类真菌的应用开发现状，为其营养保健品的开发提供了理论依据，并为新型天然药物或农药先导化合物的发现奠定了基础。

关键词： 肌源干细胞   PI3K/Akt通路   自噬   压力性尿失禁   盆底功能  

摘要： 目的 探究肌源干细胞能否调控磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路介导自噬促进压力性尿失禁大鼠盆底功能恢复。方法 将40只大鼠随机分为空白组（blank组）、压力性尿失禁（SUI）组、肌源干细胞（MDSCs）组和MDSCs+PI3K/Akt通路激活剂740Y-P组（MDSCs+740Y-P组），每组10只。检测尿动力学、膀胱内亚和盆底功能相关指标；HE染色检测盆底组织和尿道组织病理学变化；Western blot检测尿道组织中PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白1轻链3Ι（LC3Ι）、Beclin1蛋白表达。结果 MDSCs移植显著改善SUI大鼠的尿动力学参数（膀胱最大容积、漏尿点压力等），并促进盆底肌收缩功能恢复；p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值降低，LC3Ⅱ/LC3Ι比值及Beclin1蛋白表达增加。而PI3K/Akt通路激活剂740Y-P可逆转MDSCs的治疗效应。结论 肌源干细胞通过抑制PI3K/Akt信号通路促进自噬，从而改善压力性尿失禁大鼠盆底功能和排尿功能。

关键词： 光催化   非天然氨基酸   杂芳甲醛   酰基自由基   电子顺磁共振  

摘要： 非天然氨基酸是重要的非天然化学中间体，然而其合成依然是一个挑战。我们报道了一种以含氮杂环甲醛构建含氮杂芳环非天然氨基酸的方法，该方法实现了一系列含氮杂芳环非天然氨基酸的合成，机理研究表明该反应是一个自由基历程，同时该方法也适用于合成含氮杂芳环的多肽。

关键词： ApoE   小鼠   蛋白质组   转录组   非酒精性脂肪性肝病   丹参酮ⅡA  

摘要： 目的：通过转录组测序和同位素标记相对和绝对定量（Isobaric tagsfor relative and absolute quantitation，iTRAQ）技术，筛选差异表达的基因与蛋白，初步阐明高脂喂养ApoE -/-小鼠肝脏损伤的病理机制与丹参酮ⅡA的保护作用。方法：8只C57BL/6J小鼠为对照组、16只ApoE-/-小鼠随机分为高脂组和丹参酮组。对照组小鼠予基础饲料，高脂组和丹参酮组予高脂饲料。8周后丹参酮组予丹参酮ⅡA 60 mg·kg-1·d-1体质量灌胃，其他两组予等量生理盐水灌胃给药4周。检测小鼠血清血脂水平，HE与油红O染色观测肝细胞损伤与脂质沉积情况。RNA-Seq技术筛选差异基因，iTRAQ蛋白组学分析筛选差异蛋白，筛选2种测序技术变化趋势一致的差异mRNA与蛋白并进行生物信息学分析，RT-qPCR与WB验证测序结果并探究丹参酮ⅡA干预作用。结果：与对照组相比，高脂组小鼠血清血脂水平显著升高，肝功能受损；与高脂组相比，丹参酮组小鼠血清血脂水平显著降低，肝功能改善。HE染色显示高脂组小鼠肝细胞肿胀变形，存在脂肪空泡与炎性细胞浸润，丹参酮ⅡA干预后肝细胞肿胀减轻，脂肪空泡与炎性细胞减少。油红O染色显示，对照组肝细胞油红着色脂质沉积严重，丹参酮组油红着色的脂质沉积减轻。RNA-Seq共筛选出1164个差异mRNA（550个上调，614个下调），iTRAQ蛋白组学共筛选出480个差异蛋白（310个上调，170个下调）；韦恩图分析获得35个趋势一致的mRNA与蛋白；PPI分析和Cytoscape筛选确定了10个核心靶点；GO主要富集在急性炎症反应、创伤愈合、凝血负性调节与纤维蛋白溶解等生物过程；KEGG富集到补体和凝血级联反应与血小板激活通路。RT- qPCR 验证纤维蛋白原α链（Fibrinogen alpha chain，Fga）、纤维蛋白原β链（Fibrinogen beta chain，Fgb）、纤维蛋白原γ链抗体（Fibrinogen gamma chain，Fgg）与羧肽酶B2（Carboxypeptidase B2，Cpb2）、富含组氨酸糖蛋白（Histidine rich-glycoprotein，Hrg）基因表达与转录组学结果一致，丹参酮ⅡA能下调Fga与 Fgb mRNA表达。Western Blot进一步验证发现丹参酮ⅡA能下调Fga与Fgb蛋白表达。结论：本研究筛选出的10个mRNA或蛋白可能是高脂喂养 ApoE-/-小鼠肝脏损伤病理过程的核心靶点，病理机制可能与炎症反应、创伤愈合、凝血负性调节与纤维蛋白溶解等生物过程相关，丹参酮ⅡA可能通过调控“凝血-纤溶”枢纽分子Fga与Fgb mRNA与蛋白表达改善高脂喂养 ApoE -/- 小鼠肝脏损伤。

关键词： 萝卜干   腌制   品质变化   挥发性风味物质   氨基酸  

摘要： 腌制的上杭萝卜干在长时间贮藏过程中口感、质地、滋味、风味物质等方面会发生变化。该文以贮藏年份为1、2、3、4、5、6、8和10年的腌制上杭萝卜干为研究对象，探究其长期贮藏过程中水分含量、水分活度、pH值、色泽质地、总酸、葡萄糖、果糖、氨基酸、挥发性风味物质的变化。结果显示，不同贮藏年份的上杭萝卜干水分活度、水分含量和pH持续下降；随贮藏时间的延长萝卜干的L*值、b*值、硬度、咀嚼性和弹性明显下降，a*值上升，相关性分析表明，水分活度、水分含量以及pH与L*值、b*值、硬度、咀嚼性和弹性呈正相关，与a*值呈负相关；总酸和葡萄糖、果糖的含量变化不显著；芳香类氨基酸和苦味氨基酸总量下降，甜味氨基酸和鲜味氨基酸的含量变化不明显；分别检出46、52、53、52、49、46、41和39种挥发性风味物质，包括醇类、酸类、酯类、醛类、酮类、含硫化合物和其他类物质，在第3年至第5年，风味物质的种类和含量相对较高，随着贮藏时间的延长，种类和含量降低，整体风味变化由前期的辛辣刺激略带花果香为主，逐渐过渡为焦香醇厚的风味，后期转为以焦糖味、坚果味及土腥味为主。总之，腌制上杭萝卜干在长期贮藏过程应注意水分和pH的控制以保持更好的色泽和质地，控制贮藏时间，以免后期出现较多不愉快的风味物质。

关键词： PD-1单克隆抗体   质量监测   风险评估  

摘要： 目的 以某程序性死亡受体-1（PD-1）单克隆抗体注射液为例，建立该类药品质量监测和风险评估工作模式，为监管部门对风险品种进行监督管理提供参考。方法 依据该品种注册质量标准，结合国内外参考指南，对27批检品开展关键质量属性的检验和质量监测。同时围绕药品的安全性、稳定性和质量标准可控性开展风险评估工作，开展基于高分辨质谱技术的宿主细胞蛋白残留鉴定，低内毒素回收考察、风险物质等多维度研究。结果27批检品关键质量属性检验结果均为合格（100.00%）。各批次检品均检出蛋白磷脂酶B-2，存在宿主细胞蛋白（HCPs）残留风险；各批次单抗检品的可结晶片段（Fc）受体亲和力一致，具有一定的Fc端效应活性，提示质控过程中应对糖基化水平给与关注；该品种存在低内毒素回收（LER）风险；各批次检品中组氨酸含量与处方量接近，生产批间差异较小；未发现本品存在抗生素残留、元素杂质及抗氧剂风险；加速试验结果提示本品生物学活性等关键质量属性无明显变化，稳定性良好。另在质量分析方法方面，将《中国药典》通则3127用于该品种十二烷基硫酸钠毛细管电泳（CE-SDS）纯度的检验，发现其结果在非还原纯度与企业方法有显著性差异；新建高效液相-蒸发光检测器方法作为吐温80含量测定方法的补充。结论 建立了基于风险的某PD-1单克隆抗体注射液的质量监测和风险评估工作模式；该品种质量总体良好，现行质量标准基本可行，但仍需提高和完善。

关键词： 前列腺癌   恩扎卢胺   癌相关成纤维细胞   肿瘤干细胞   固本清源方  

摘要： 目的：探讨固本清源方在延缓前列腺癌恩扎卢胺耐药中的作用及其机制。方法：利用液相色谱-质谱联用技术对固本清源方（苦参、姜黄、人参、黄精、灵芝各15g组成）进行成分分析；建立恩扎卢胺耐药细胞模型，细胞计数试剂盒-8（CellCountingKit-8，CCK8）法检测固本清源方含药血清(2、20、40g·kg-1剂量)逆转耐药的效果，并通过荷瘤小鼠实验结合活体成像评估固本清源方联合恩扎卢胺对肿瘤生长的抑制作用及抑瘤率。进一步采用免疫荧光、Real-timePCR和Westernblot技术，分析肿瘤组织中癌相关成纤维细胞（FAP、α-SMA）及肿瘤干细胞标志物（CD133、CD44）的表达变化。观察固本清源方联合恩扎卢胺含药血清对CAF与前列腺癌干细胞共培养体外成球的影响。结果：与对照组比较，恩扎卢胺耐药细胞对恩扎卢胺的IC50显著升高，提示细胞已形成耐药。固本清源方含药血清干预后，耐药细胞对恩扎卢胺的IC50降至16.31μmol·L-1，逆转倍数达1.73，与耐药对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与恩扎卢胺单药组比较，固本清源方联合恩扎卢胺可显著延缓耐药细胞移植瘤的生长，高、中、低剂量组抑瘤率分别为46.90%、41.44%、29.05%，均高于恩扎卢胺单药组的9.27%。其中，高、中剂量组与恩扎卢胺组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。进一步研究表明，与C4-2B细胞组比较，耐药肿瘤组织中FAP、α-SMA、CD133及CD44的表达均显著上调（P＜0.05）。免疫荧光双染显示，α-SMA与CD133、CD44存在共定位关系，与恩扎卢胺组比较，固本清源方联合恩扎卢胺可显著下调FAP、α-SMA、CD133及CD44 的表达，差异均有统计学意义（P＜0.05）。体外共培养体系显示，耐药细胞在CAF作用下成球能力增强，与恩扎卢胺组比较，固本清源方联合恩扎卢胺显著抑制成球形成（包括球体数目和体积），差异有统计学意义（P＜0.05）结论：固本清源方延缓前列腺癌恩扎卢胺耐药的机制可能与抑制CAF介导的肿瘤干细胞相关。

关键词： 铁皮石斛多糖   胆汁酸   胃黏膜肠上皮化生   组蛋白去乙酰化酶3  

摘要： 为了研究铁皮石斛多糖（Dendrobium officinale Polysaccharide,DOP）是否可以基于组蛋白去乙酰化酶3（Histone Deacetylase3,HDAC3）/肝细胞核因子4α（Hepatocyte Nuclear Factor 4α,HNF4α）通路改善胆汁酸诱导型胃黏膜肠上皮化生（Gastric Intestinal Metaplasia,GIM），选择100μmol·L-1鹅去氧胆酸（Chenodeoxycholic Acid,CDCA）建立胆汁酸诱导型GIM模型（细胞存活率为91.11%），同时给予质量浓度400、200和100μg·mL-1DOP干预，观察一般形态学变化，Ed U染色检测细胞增殖，RT-PCR、Western Blot检测G蛋白偶联受体5（Takeda G-protein-coupled Receptor 5,TGR5）、法尼醇X受体（Farnesoid X Receptor,FXR）、HDAC3、尾型同源框基因（Caudal Type Homeobox Gene 2,CDX2）、黏蛋白2（Mucin 2,MUC2）、HNF4α相关m RNA和蛋白表达水平；构建HDAC3过表达GIM模型，Western Blot、CO-IP检测HDAC3对HNF4α的调控。结果显示DOP对GES-1细胞无毒副作用，高于100μmol·L-1CDCA对GES-1细胞存在明显毒副作用，质量浓度100～400μg·mL-1DOP对CDCA诱导型GIM模型的细胞活力及细胞增殖无明显作用，但有助于维持GES-1细胞的正常表型，DOP能显著下调CDX2、MUC2、HNF4α、TGR5、FXR、HDAC3的基因和蛋白表达水平；此外，HDAC3过表达GIM模型中HDAC3、HNF4α的蛋白表达分别提高52.52%、62.94%，均明显增加，DOP干预后蛋白表达均降低，且HDAC3与HNF4α存在相互作用。综上所述，DOP可基于HDAC3/HNF4α通路降低组蛋白去乙酰化酶、胆汁酸受体、肠化生标志物的表达，改善胆汁酸诱导型胃黏膜肠上皮化生，为胃癌前病变的治疗提供理论基础。