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关键词： 猪IL-15   单克隆抗体   双抗体夹心ELISA   定量检测  

摘要： 旨在制备猪白细胞介素-15(IL-15)的单克隆抗体(McAb),建立IL-15-ELISA定量检测方法。首先构建猪IL-15原核表达载体pET-28a-IL-15,应用大肠杆菌原核表达系统表达该重组蛋白,随后用其免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,在加强免疫后第3天,分离小鼠脾细胞,将脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞,并对其分泌的IL-15单克隆抗体进行鉴定;然后基于单克隆抗体建立IL-15夹心ELISA方法。结果显示:获得9株分泌抗IL-15 McAb的杂交瘤细胞(1E8、1F4、2D3、2C10、2F3、2D10、3F4、3D4、3D5),分泌的抗体均为IgG2bκ型。以制备的单抗2D10和2C10分别为捕获抗体及酶标抗体建立的夹心ELISA最低可检测31.25 ng·mL^(-1)的IL-15蛋白,与其它细胞因子或蛋白(IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、Gzms-B、IFN-γ、TNF-α)无交叉反应,批内和批间重复的变异系数分别为2.56%和3.39%。该夹心ELISA可定量检测血清、组织液和细胞培养物等样品中的IL-15。综上,成功制备了猪IL-15单克隆抗体,建立了定量检测IL-15的双抗体夹心ELISA方法,为IL-15相关研究提供了重要工具。

关键词： 亚临界水   神经网络   工艺优化   抗疲劳  

摘要： 目的探究神经网络-遗传算法(genetic algorithm-neural network,GA-NN)优化松花粉多糖的亚临界水提取工艺,并进一步探究其抗疲劳活性。方法以破壳松花粉为原料,在单因素基础上,通过Box-Behnken试验设计响应面试验,并利用GA-NN算法构建网络神经模型及优化工艺,在最佳工艺条件下,通过小鼠负重游泳试验评价多糖的抗疲劳作用。结果所构建的神经网络模型相对误差和决定系数(R^(2))为0.03267和0.98476,遗传算法对亚临界水提取多糖工艺迭代60次后,得到最佳参数为:温度148℃,时间28 min,液料比40:1(mL:g),压力5MPa,多糖得率为23.7893mg/g,经验证,实际值与预测值不存在显著性差异,模型准确度良好。抗疲劳活性研究表明与空白组相比,高剂量组小鼠体重有一定程度的增加,其他组无显著性差异(P>0.05)。相比空白组,多糖组小鼠游泳时间延长(P<0.05),血乳酸、尿素氮含量降低,肌糖原、肝糖原储备量均显著增加(P<0.05)。结论GA-NN能够有效优化松花粉多糖的亚临界水提取工艺,且该多糖具有一定的抗疲劳作用。

关键词： 凯氏定氮   蛋白质   消化   消化定氮一体化装置  

摘要： 为了探究消化时间最短的消化剂组合和装置,采用三因子消化剂(硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸)的三水平组合,设计正交试验1,和另外三因子(双氧水、双氧水滴加次数、浓硫酸)的三水平组合,设计正交试验表2,用凯氏烧瓶消化雀巢奶粉,结果表明:0.35 g硫酸铜、9.0 g硫酸钾、15.0 mL浓硫酸的用量为正交设计1的优化组合,消化时间为80 min;5.0 mL双氧水、一次滴加、11.0 mL浓硫酸为正交设计2的优化组合,消化时间为25 min;分别采用这两种消化剂的优化组合,进一步探究采用不同的消化装置(进口消化装置、凯氏烧瓶、消化定氮一体化装置-烧瓶及三角瓶)、对样品进行浸泡处理等对不同奶粉消化时间的影响,结果显示:采用正交试验1的消化剂优化组合,消化快慢顺序依次为进口消化装置(72 min)>凯氏烧瓶(80 min)>消化定氮一体化装置-三角瓶(103 min)>消化定氮一体化装置-烧瓶(126 min);采用正交试验2的消化剂优化组合,使用进口消化装置和凯氏烧瓶消化时间均为25 min,消化定氮一体化装置-烧瓶和三角瓶消化效果不好。消化变蓝以后,继续消化30 min较好,消化剂是否浸泡过夜对消化时间影响不大。该研究还显示,消化时间和样品、消化剂及消化装置相关。

关键词： 脓毒症   微小核糖核酸-122a   核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3   经颅多普勒超声   相关性脑病   诊断价值  

摘要： 目的 探讨经颅多普勒超声(transcranial Doppler,TCD)、微小核糖核酸(microribonucleic acid,miR)-122a、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)及其联合检测在脓毒症相关性脑病(sepsis-associated encephalopathy,SAE)中的诊断价值。方法选取2022年2月至2024年2月期间,由河南大学第一附属医院收治的共计89例脓毒症患者作为观察对象,根据是否发生SAE,将其划分为脓毒症脑病组(n=29)与非脓毒症脑病组(n=60)。所有入选患者接受TCD检查,同时检测了其血清中miR-122a以及NLRP3炎症小体的表达水平。采用Pearson相关性分析法和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线对这些指标在脓毒症患者SAE诊断中的价值进行评估。结果脓毒症脑病组急性生理与慢性健康评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分、平均血流速度(mean flow velocity,Vm)、搏动指数(pulsatility index,PI)值、血清NLRP3炎性小体、miR-122a水平均较非脓毒症脑病组偏高,格拉斯哥昏迷量表(Glasgow coma scale,GCS)评分、收缩期峰值流速(peak systolic velocity,Vs)、舒张末期流速(end-diastolic velocity,Vd)值均较非脓毒症脑病组偏低,差异有统计学意义(P<0.05)。SAE患者Vd、Vs及Vm与APACHEⅡ评分均呈负相关,PI、血清miR-122a及NLRP3炎性小体水平与APACHEⅡ评分均呈正相关(P<0.05);Vd、Vm、Vs、NLRP3炎性小体及miR-122a水平均与GCS评分均呈正相关,PI与GCS评分呈负相关(P<0.05)。Vm、PI、NLRP3炎性小体及miR-122a水平均是影响脓毒症患者并发脑病的独立危险因素(P<0.05),Vm、PI、血清miR-122a及NLRP3炎性小体水平单独检测诊断脓毒性相关脑病的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.763(0.655~0.872)、0.809(0.712~0.907)、0.754(0.642~0.866)和0.844(0.753~0.935),其敏感度分别为0.626、0.812、0.555和0.844;特异度为0.801、0.680、0.751和0.751。联合检测的AUC为0.902(0.832~0.971),其敏感度和特异度分别为0.938和0.755。结论TCD联合血清miR-122a和NLRP3炎性小体水平检测对SAE具有较高的诊断价值,可为临床早期筛查脓毒症相关性脑病提供新思路。

关键词： 多糖   热可逆   凝胶特性   淀粉  

摘要： 热可逆凝胶在蛋糕、糖果、果冻、肉冻、流沙包等烘焙制品、肉制品及零食的加工中应用广泛。目前应用效果最佳的热可逆凝胶为明胶,其能与水结合形成透明凝胶,并且在接近人体口腔温度时即可融化,但明胶存在价格昂贵的问题。因此研究者将目光投向多糖类凝胶,期望获得更多具有不同性质的热可逆食品原料。作者综述了植物、藻类、微生物等天然来源及通过物理、化学和酶法改性获得的具有热可逆性的多糖凝胶,并对多糖凝胶的来源、结构、凝胶机制及产品应用情况进行总结,旨在为食品工业开发新型热可逆多糖原料提供参考,促进新型热可逆多糖凝胶在食品工业中的应用。

关键词： 佐窝尼昂   藏药   急性肺损伤   核因子-κB   丝裂原活化蛋白激酶  

摘要： 目的:探讨藏药佐窝尼昂对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型的影响。方法:54只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、ALI模型对照组、佐窝尼昂0.615、1.23、2.46 g/kg组、醋酸地塞米松5 mg/kg组,每组9只。各组灌胃相应药物或水,1次/d,连续给药7 d。末次给药1 h后,除正常对照组外,其余小鼠尾静脉注射15 mg/kg LPS 10 mL/kg造模,正常对照组尾静脉注射等体积生理盐水。小鼠造模24 h后处死,取小鼠肺脏、脾脏、胸腺称质量并计算脏器系数;取肺组织HE染色观察肺病理损伤情况;ELISA法检测血清和肺泡灌洗液(BALF)中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β的含量;全自动血液分析仪测定BALF中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞计数,中性粒细胞、淋巴细胞的百分率;RT-qPCR法检测肺组织中细胞外调节蛋白激酶(Erk)、核因子抑制蛋白(Ikbα)、IκB激酶α(Ikkα)、髓样分化因子88(Myd88)、核因子-κB p65(Nfkb p65)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mapk)、Toll样受体4(Tlr4)mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠肺脏指数、胸腺指数明显增加(P<0.05),小鼠肺泡上皮细胞增生,间质伴有炎性细胞浸润,病理损伤评分明显升高(P<0.05),血清中TNF-α、IL-6和IL-1β和BALF中的TNF-α含量显著增加(P<0.01),中性粒细胞百分率明显降低(P<0.05),肺组织Iκbα、Ikkα、Myd88、Nfkb P65、P38、Tlr4 mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,佐窝尼昂各组ALI模型小鼠肺指数显著降低(P<0.01),间质炎性细胞浸润减少,肺水肿减轻,佐窝尼昂2.46 g/kg组ALI模型小鼠血清中TNF-α、IL-1β的含量明显降低(P<0.05),佐窝尼昂0.615、2.46 g/kg组BALF中的TNF-α含量显著降低(P<0.01);佐窝尼昂1.23、2.46 g/kg组中性粒细胞百分率和淋巴细胞绝对值明显升高(P<0.05或P<0.01);佐窝尼昂2.46 g/kg组肺组织Erk、Ikkα、Iκbα、Myd88、Nfkb P65、P38、Tlr4 mRNA的表达明显下调(P<0.05或P<0.01),佐窝尼昂1.23 g/kg组Iκbα、Myd88、Tlr4 mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:佐窝尼昂能改善LPS诱导的ALI,具体机制可能与其减少间质炎性细胞浸润,抑制NF-κB和MAPK炎症信号通路激活从而抑制炎症因子释放有关。

关键词： 野西瓜茎叶   多糖   微波   超声波   正交试验  

摘要： 目的:对野西瓜茎叶多糖的提取工艺进行优化。方法:选用超声波微波双辅助提取新疆野西瓜茎叶中多糖,采用苯酚-硫酸比色法对其进行含量测定,单因素试验考察4个因素:料液比、微波功率、超声功率和超声时间,再利用正交试验优化野西瓜茎叶多糖的提取工艺。结果:超声波微波双辅助提取野西瓜茎叶多糖的最佳工艺条件为料液比1∶30(g∶mL)、微波功率400 W、超声功率350 W、超声时间40 min,在此条件下,野西瓜茎叶多糖的平均提取率为6.22%。结论:本实验优化的提取工艺稳定可行,对野西瓜茎叶资源的进一步开发利用提供了参考依据。

关键词： 樱桃红蟑螂   抗菌肽   果蝇霉素   基因表达   溴氰菊酯   细菌  

摘要： 【目的】本研究旨在鉴定樱桃红蟑螂Shelfordella lateralis的抗菌肽果蝇霉素基因,并探究其发育和组织表达特性及其在细菌与杀虫剂诱导下的表达情况。【方法】基于樱桃红蟑螂转录组数据对樱桃红蟑螂的果蝇霉素基因进行鉴定,并通过RT-PCR进行验证;利用RT-qPCR测定樱桃红蟑螂不同发育阶段(1龄若虫、4龄若虫及6日龄雌成虫和雄成虫)、4龄若虫不同组织(头、胸、肠道、足、脂肪体、血淋巴和体壁)及注射大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和溴氰菊酯(1×10-5 mg/L)后4龄若虫中果蝇霉素基因的表达量。【结果】克隆得到了樱桃红蟑螂果蝇霉素基因SlDros的cDNA序列(GenBank登录号:PQ464795),其开放阅读框长201 bp,编码66个氨基酸。SlDros在樱桃红蟑螂6日龄雄成虫中大量表达;SlDros在4龄若虫头、体壁、胸和血淋巴中的表达量较高;注射大肠杆菌后12,24和48 h时4龄若虫中SlDros的表达量显著高于对照组(注射蒸馏水);注射金黄色葡萄球菌后6,12,24和72 h时4龄若虫中SlDros的表达量都显著高于对照组(注射蒸馏水);注射溴氰菊酯96 h时4龄若虫中SlDros的表达量显著高于对照组(注射丙酮)。【结论】樱桃红蟑螂中存在抗菌肽果蝇霉素基因,并且细菌和杀虫剂胁迫均能诱导其表达。研究结果可为研究樱桃红蟑螂抗菌肽的功能及其进一步开发新型抗菌药物打下基础。

关键词： 凋亡小体   间充质干细胞   细胞外囊泡   糖尿病创面  

摘要： 糖尿病创面愈合困难,一直以来是困扰临床医师的难题。近年来,间充质干细胞来源的细胞外囊泡逐渐成为治疗各种疾病的研究热点,尽管研究大部分集中于外泌体和微囊泡,但凋亡小体作为一种独特的细胞外囊泡,其在调节炎症反应、促进组织再生等方面的潜在治疗作用正逐渐被揭示,特别是在糖尿病创面治疗领域显示出良好的应用潜力。该文综述了间充质干细胞衍生的凋亡小体治疗糖尿病创面相关的研究进展,旨在为糖尿病创面治疗提供新的治疗思路。

关键词： 造血干细胞   异基因   原发中枢神经系统淋巴瘤  

摘要： 原发中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)是一种少见的结外非霍奇金淋巴瘤,目前缺乏针对其难治/复发的标准方案,其中异基因造血干细胞移植可能是一种有效的治疗方案,但其疗效缺乏大样本及前瞻性研究的证据。我们报道了1例减低强度预处理亲缘间单倍体相合非体外去T细胞外周血造血干细胞移植治疗自体造血干细胞移植后复发的PCNSL的诊治经过,并进行文献复习,为此类患者的治疗提供临床经验。