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关键词： AMD3100   骨髓动员   干细胞  

摘要： 目的使用AMD3100对小鼠实施骨髓动员,剖析骨髓动员后不同时间点外周血中各细胞群含量的改变。方法30只Balb/c小鼠按随机数字表法分为五组,每组6只,其中0 h组为对照,予以麻醉后心脏穿刺取血;其余四组,按不同时间点分为0.5 h组,1.0 h组,1.5 h组和2.0 h组,予以腹腔注射AMD31005 mg/kg干预,分别在注射后0.5、1.0、1.5、2.0 h进行麻醉后心脏穿刺取血。所取血液制备流式标本,进行趋化因子受体CXCR4(CXCR4)、CD34、干细胞抗原-1(Sca-1)、CD14单标流式分析及CD71/CD90双标流式分析,并绘制动员效果图。结果AMD3100对小鼠动员速度迅速,各种类型骨髓细胞在1.0 h左右可达到动员高峰,随后动员数量开始减少。CXCR4阳性细胞在1.0 h左右达到动员高峰,各时间点与0 h组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。CD34阳性细胞同样在1.0 h达到动员高峰,随后开始下降,1.0 h组与0 h组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Sca-1阳性细胞在1.5 h达到动员高峰,1.0 h组和1.5 h组与0 h组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。CD14阳性细胞0.5 h组、1.0 h组和1.5 h组与0 h组比较,差异有统计学差异意义(P<0.01)。CD90/CD71阳性细胞在0.5 h达到动员高峰,随后缓慢下降,1.0 h组和1.5 h组与0 h组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论AMD3100对小鼠具有高效的动员作用,作用时间短暂,能够使外周循环内多种干细胞亚群数量显著增高,适合用于干细胞动员治疗或干细胞移植。

关键词： 翼状胬肉   翼状胬肉分离   自体角膜缘干细胞移植术   疗效   并发症  

摘要： 目的探究翼状胬肉分离联合自体角膜缘干细胞移植术对翼状胬肉的治疗效果及安全性。方法选取2020年1月至2022年12月焦作煤业(集团)有限责任公司中央医院接收的108例翼状胬肉患者,采用随机数表法分为观察组(55例,翼状胬肉分离联合自体角膜缘干细胞移植术)和对照组(53例,翼状胬肉分离),对比两组治疗前后疼痛程度及视觉参数,统计并发症与复发情况。结果观察组术后3、12、48 h的视觉模拟评分法评分(VAS)低于对照组(P<0.05),术后3个月的视力、角膜垂直/水平曲度均大于对照组(P<0.05),术后第30天时观察组泪膜破裂时间(BUT)长于对照组(P<0.05)。观察组术后6个月角膜刺激征发生率、复发率低于对照组(P<0.05)。结论翼状胬肉分离联合自体角膜缘干细胞移植术可有效改善翼状胬肉患者视力,降低术后并发症和复发率。

关键词： 黄芪多糖   肠微血管内皮细胞   细胞增殖   VEGFA   PERK   大鼠  

摘要： 探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)是否通过调控VEGF/VEGFR影响大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(rat intestinal mucosal microvascular endothelial cells,RIMMVECs)的增殖活性。从新生大鼠中分离RIMMVECs并进行纯化鉴定,随后稳定传代并以0.1、1.0、10.0、100.0、1000.0和10000.0 mg/L的APS处理RIMMVECs,应用MTT法研究APS对RIMMVECs增殖的影响并筛选APS最佳作用的质量浓度;利用流式细胞术检测细胞周期变化,评估APS对RIMMVECs细胞周期的作用阶段;用ELISA试剂盒检测细胞上清中VEGFA含量变化,评价细胞增殖诱导血管生成的潜力;用荧光显微镜观察Fluo-8AM负载的细胞内荧光强度变化,评估细胞内Ca^(2+)水平;用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测RIMMVECs中PERK蛋白表达水平,分析APS可能的作用机制。结果显示,100 mg/L APS显著增强RIMMVECs增殖活性,增加细胞上清中VEGFA含量,增加细胞Ca^(2+)水平,升高细胞PERK蛋白表达量。表明APS具有促进RIMMVECs增殖的作用,该作用可能与促进细胞VEGFA表达以及激活ERK通路相关。

关键词： 牙髓再生   甲基丙烯酸酐改性明胶   牙本质基质   复合支架   牙髓干细胞   成骨   成牙本质  

摘要： 背景:甲基丙烯酸酐改性明胶(gelatin-methacryloyl,Gel-MA)与经处理牙本质基质(treated dentin matrix,TDM)在一定比例下经过紫外线交联后形成的复合水凝胶支架具有良好的孔隙率、机械性能、溶胀性能及生物降解率,这为临床上年轻恒牙的牙髓再生提供了新的思路和方法。目的:探究1∶2质量比Gel-MA/TDM复合光交联水凝胶支架对人牙髓干细胞增殖能力及成骨/成牙本质分化能力的影响。方法:将第3代牙髓干细胞接种至1∶2质量比Gel-MA/TDM复合水凝胶支架中,采用CCK-8实验检测人牙髓干细胞在复合水凝胶支架中的增殖能力。将第3代牙髓干细胞接种至1∶2质量比Gel-MA/TDM复合水凝胶支架中并进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色及茜素红染色观察矿化结节的形成情况,采用RT-PCR检测成牙相关因子(牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白)和成骨相关因子(骨钙素、Runt相关转录因子2)的基因表达。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,前7 d的牙髓干细胞增殖能力明显升高,第10天时速度减缓;②碱性磷酸酶染色及茜素红染色结果显示,Gel-MA/TDM复合水凝胶组牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性及矿化结节生成强于单纯Gel-MA水凝胶组(P<0.05);③RT-PCR结果显示,Gel-MA/TDM复合水凝胶组牙髓干细胞中牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白、骨钙素、Runt相关转录因子2的基因表达量明显高于单纯Gel-MA水凝胶组(P<0.05),且14 d基因表达量明显高于7 d(P<0.05)。结果表明,培养在1∶2 Gel-MA/TDM复合水凝胶支架上的牙髓干细胞表现出较好的增殖能力,能够强化牙髓干细胞的成骨、成牙本质分化能力。

关键词： 低盐   N-酰基氨基酸表面活性剂   电渗析  

摘要： 介绍了使用电渗析装置制备低盐椰油酰肌氨酸钠(CS-30S)、椰油酰谷氨酸钠(CG-30S)、椰油酰氨基丙酸钠(CA-30S)和椰油酰甘氨酸钾(GCK-30K)的方法,对每种氨基酸表面活性剂的电流、制备时间等参数进行了探究和优化。结果表明,制备低盐CS-30S的最佳条件为最大电流3 A、时间5 min,含盐量为0.81%、活性物损失率为0.91%;制备CG-30S的最佳条件为最大电流3 A、时间7 min,含盐量为0.83%、活性物损失率为12.07%;制备CA-30S的最佳条件为最大电流3 A、时间6 min,含盐量为0.84%、活性物损失率为1.16%;制备GCK-30K的最佳条件为最大电流3.5 A、时间5 min,含盐量为0.73%、活性物损失率为3.54%。导致最优制备条件不同的原因可能与离子大小和所带电荷有关,离子越大、电荷越少,活性物损失越少;反之,活性物损失会更多。影响最大的是电荷数量。

关键词： NFIC   β-catenin   增殖   迁移   干细胞  

摘要： 目的:探索NFIC介导的β-catenin信号在人根尖牙乳头干细胞(SCAPs)增殖及迁移中的作用。方法:分离培养并鉴定人SCAPs;慢病毒转染方法构建过表达NFIC的SCAPs(Lv-NFIC),并设立正常对照组(CON),空载组(Lv-empty);Western印迹鉴定过表达效果;Western印迹分析过表达NFIC对SCAPs中β-catenin信号的调节作用;CCK8和跨孔实验分析Lv-NFIC和CON组增殖及迁移能力;通过DKK1抑制Lv-NFIC组SCAPs中的β-catenin后,CCK8和跨孔实验分析Lv-NFIC+DKK1和Lv-NFIC组细胞增殖和迁移能力的变化。结果:QPCR和Western印迹证实通过慢病毒转染成功构建了过表达NFIC的SCAPs(P<0.05);过表达NFIC后,该细胞中β-catenin表达显著上升(P<0.05);CCK8和跨孔实验显示NFIC促进SCAPs增殖和迁移(P<0.05);抑制Lv-NFIC组SCAPs中的β-catenin信号后,发现NFIC对SCAPs增殖和迁移的促进作用明显被削减,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:NFIC通过β-catenin调节SCAPs的增殖及迁移。

关键词： 盆底肌功能   仿生物电刺激   间充质干细胞   骨骼肌细胞   含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶-2   环磷腺苷效应元件结合蛋白  

摘要： 目的 探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/含Src同源2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP-2)/蛋白激酶B(AKT)信号通路在人骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为骨骼肌细胞中的作用,以及该信号通路对产后盆底康复的影响。方法 于2022年11月—2023年4月在石家庄市第三医院实验室进行实验。利用人骨髓干细胞成骨分化数据集上的各种分析技术,揭示不同的基因表达模式和调控关系。使用人骨髓间充质干细胞系CP-H166进行实验,将细胞分为对照组(NC组)、5-氮胞苷组、5-氮胞苷+电刺激组、5-氮胞苷+电刺激+CREB抑制剂组和5-氮胞苷+电刺激+CREB激动剂组。通过Western blot、Fura-2钙离子荧光染色和免疫荧光染色等方法,检测各组细胞中相关蛋白和钙离子浓度的表达和分布。结果 在成骨分化的3或4 d与1或2 h的时间点比较中,火山图和平均差图分析显示CREB、SHP2、MyoD、MyoG、MYHC和TPM1等基因显著下调。Western blot检测结果显示,与对照组相比,5-氮胞苷和电刺激处理提高了CREB、SHP2、AKT、MyoD、MyoG、TPM1蛋白的表达水平(P<0.05)。加入CREB抑制剂后,SHP2和AKT的表达降低(P<0.05),进而减少MyoD、MyoG和TPM1的表达;而加入CREB激动剂后,上述蛋白含量升高(P<0.05)。Fura-2钙离子荧光染色结果表明,5-氮胞苷和电刺激可提高钙离子浓度(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,5-氮胞苷和电刺激处理增加了p-CREB和MyoD的表达和分布(P<0.05),加入CREB激动剂进一步增加了这些蛋白的表达(P<0.05),而加入CREB抑制剂则降低了其表达(P<0.05)。结论 CREB/SHP2/AKT信号通路在BMSCs分化为骨骼肌细胞过程中具有重要作用。调控该信号通路可以显著影响细胞的分化过程,促进产后盆底康复。

关键词： 代谢相关脂肪性肝病   体外模型   干细胞   类器官   药物筛选  

摘要： 代谢相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)是一种与代谢紊乱紧密相关的全球性健康问题,其特征是肝脏内脂肪过度积聚,且可能进展为更严重的肝脏疾病,如代谢相关脂肪性肝炎(metabolic dysfunction-associated with steatohepatitis,MASH)、肝纤维化和肝细胞癌。随着MAFLD患病率的持续上升,其致病机制的研究及治疗方案的开发成为当前临床和基础医学领域的迫切需求。然而,目前MAFLD的治疗手段仍然有限,且尚未有经过验证的特效药物。本综述深入探讨了MAFLD体外模型的建立与药物筛选的研究进展,重点评述了二维细胞培养与三维类器官培养技术在模拟MAFLD病理状态中的各自优势与局限。而且,本文进一步分析了基于不同细胞来源的MAFLD模型在揭示药物作用机制、识别潜在治疗靶点以及提供临床前药物筛选平台方面的应用前景。本文旨在为未来MAFLD的临床治疗和药物开发提供新的思路和实验依据。

关键词： 造血干细胞移植   伏邪”理论   EB病毒   中医药  

摘要： 造血干细胞移植后EB病毒(EBV)再激活是指患者移植后机体免疫功能尚未完全恢复,使潜伏感染的EBV再次激活并发展为EBV血症、EBV病甚至移植后淋巴细胞增殖性疾病(PTLD)等并发症的感染性疾病。因其具有隐匿潜藏、遇感而发、反复发作、病程缠绵等特点,与伏邪极为相似,故本文基于中医“伏邪”理论探讨造血干细胞移植后EBV再激活的中医病因病机、致病因素和临证治疗,提出移植后EBV再激活的基本病机是正虚邪伏、痰瘀毒化、药毒积聚,热、痰、瘀、毒是EBV再激活的主要病理特点,其中痰邪是贯穿EBV感染病程的关键发病因素。同时,根据疾病进展分为前驱期、急性期和恢复期三期,提出三期治疗方法,前驱期应扶正祛邪、调和阴阳、未病先防,急性期应驱邪外出、顾胃护中、既病防变,恢复期应益气养阴、调护情志、瘥后防复,为从中医药治未病角度防治移植后EBV再激活提供新思路。

关键词： 藤茶   多糖   超声辅助酶法提取   响应面   单糖组成   抗氧化活性  

摘要： 为优化藤茶多糖超声辅助提取工艺条件,并测定提取物的抗氧化活性。以恩施藤茶为原料,通过响应面法和超声波辅助酶法优化藤茶多糖的提取工艺条件,运用高效液相色谱-电喷雾检测(HPLC-CAD)法分析藤茶多糖的单糖组成,并研究其抗氧化活性。结果表明,藤茶多糖的最佳提取工艺条件为:料液比1∶15 g/mL,复合酶添加量3%,超声时间30 min,超声温度50℃,藤茶多糖得率达到12.01%±0.13%,藤茶多糖由6种单糖组成,其中蔗糖、葡萄糖含量较高。藤茶多糖具有较强的抗氧化活性,20 mg/mL的藤茶多糖对·OH的清除率为(89.12±0.21)%,对ABTS+·的清除率为(94.50±0.15)%。