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关键词： 多花黄精   植物多糖   诱导植物抗性   小麦白粉病  

摘要： 【目的】探究多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)须根多糖对小麦白粉病抗性的影响,为多花黄精资源的有效利用提供理论依据。【方法】以多花黄精品种“川精1号”须根为材料,分离纯化后分析其多糖含量、单糖组成和初级结构;通过离体培养及对小麦白粉病植株喷施多糖,评估其对小麦白粉病的生物防治效果;通过测定不同时期小麦叶片检测防御酶指标,探究多花黄精须根多糖对小麦白粉病的影响。【结果】纯化后的多花黄精须根酸性多糖(P70S)总糖、蛋白质和多酚含量分别为99.02%、0.24%和0.37%,重均分子量为71.598 kDa,各单糖占比为葡萄糖:鼠李糖:岩藻糖:葡萄糖醛酸:半乳糖醛酸:半乳糖:木糖:甘露糖:阿拉伯糖=83.700:4.421:3.250:2.393:1.881:1.773:1.073:0.913:0.596。300 mg/LP70S为最佳诱导小麦白粉病抗性浓度,但未对离体白粉菌孢子萌发产生影响。300 mg/L P70S处理小麦后,可显著降低小麦白粉菌孢子萌发率,增加小麦叶片细胞和白粉菌接触位点的细胞死亡率,显著提升孢子芽管畸形率及防御酶CAT、POD、SOD、PAL和PPO活性。【结论】纯化后的多花黄精多糖作为激发小麦植株诱导抗性的激发子,能够通过调节小麦叶片内CAT、SOD、POD、PAL和PPO等防御相关酶的活性,有效减轻小麦白粉菌对小麦的病害影响。

关键词： 酵母多糖   生猪养殖   生物学功能  

摘要： 酵母多糖属于生物活性饲料添加剂的一种,具有安全性和高效性的特征,并且生物学功能十分丰富,在生猪养殖中运用酵母多糖,有助于增强生猪免疫力,同时,还能使其微生物菌群区系结构被有效调整。本文首先介绍酵母多糖的生物学功能,然后分析酵母多糖在生猪养殖中的具体应用,最后得出相应的结论,希望通过本文研究,为相关行业提供借鉴。

关键词： 无偿献血者   血液安全   核酸检测   质量指标   实验室  

摘要： 目的本研究基于徐州地区2020—2024年核酸检测数据,根据相关质量监测指标回顾性评估两套核酸筛查系统的检测能力。方法剔除酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双边阳性标本,采用核酸检测系统(nucleic acid test,NAT)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)进行三联6混样,混样反应性标本进行单人份拆分检测,并对结果进行分析。结果2020—2024年徐州地区无偿献血者血液检测整体安全可控,HBV不合格占绝对主导地位。罗氏作为主力检测系统混检反应率更低,拆分反应率更高,科华作为备用系统,检测量较小但不合格率略低。无效批次、无效结果和设备故障率均在2022年达到峰值,其余年份整体运行稳定。结论徐州核酸实验室近5年运行总体稳定,阳性结果主要集中于HBV,两套核酸系统协同工作,有效降低输血相关疾病传播风险,保障输血安全。

关键词： 有限稀释法   细胞计数   血清浓度   病毒效价  

摘要： [目的]为提升猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的培养效价,本试验旨在通过克隆筛选获得一株优势VERO细胞株。[方法]采用有限稀释法对VERO细胞进行两轮克隆,经显微镜下观察初步筛选细胞形态良好且生长迅速的克隆株。通过绘制细胞生长曲线比较克隆株与亲本细胞的增殖能力;利用PEDV感染试验评估克隆株的病毒敏感性;并通过设置不同血清浓度培养试验,筛选克隆株的最佳培养条件。[结果]初步筛选获得两株VERO细胞克隆株(HB9株和HA3株)。其中,VERO(HB9株)的增殖速度显著优于亲本细胞及HA3株,产生的PEDV病毒效价高达8.00 log10TCID_(50)/mL,较亲本细胞和HA3株均显著提高。此外,VERO(HB9株)在6%血清浓度下即可维持高病毒产量,较原培养浓度10%降低了4%。[结论]本试验成功筛选获得一株优势VERO细胞克隆株(HB9),并优化了其培养条件,为高效价PEDV抗原的规模化生产奠定了基础。

关键词： 息半夏   多糖   大孔树脂   热力学   动力学   纯化  

摘要： 采用大孔树脂吸附法对息半夏多糖进行纯化,并对其吸附热力学和吸附动力学进行了研究,对其纯化工艺进行了优化。通过对比9种大孔树脂对息半夏多糖的静态吸附和解吸效果,选择大孔树脂HPD-600来纯化息半夏多糖;吸附热力学结果表明,该吸附过程符合Langmuir和Freundlich等温吸附模型,为自发进行的物理吸热过程;吸附动力学结果表明,该吸附过程符合一级动力学模型和颗粒内扩散模型;息半夏多糖的最优纯化工艺为:选择大孔树脂HPD-600、上样液质量浓度0.6mg·mL^(-1)、上样液pH值4.0、上样速率2.0BV·h^(-1)、上样量170mL、洗脱剂乙醇体积分数70%、洗脱剂pH值5.0、洗脱速率3.0BV·h^(-1)、洗脱剂用量4.0BV,在此条件下,息半夏多糖纯度由17.25%提高至68.86%,提高了4倍,回收率为59.12%。该纯化工艺简单稳定,为息半夏多糖的开发利用提供了理论基础。

关键词： 克罗恩病   疗效   影响因素   安全性   乌司奴单克隆抗体  

摘要： 目的分析乌司奴单克隆抗体(UST)治疗中重度克罗恩病(CD)的疗效和安全性以及影响临床结局的相关因素。方法回顾性收集2020年11月-2023年5月于浙江中医药大学附属第一医院和杭州市中医院使用UST治疗的中重度CD患者,根据既往是否使用生物制剂治疗分为一线治疗组(未使用生物制剂治疗,n=68)与二线治疗组(使用生物制剂治疗,n=66)。比较两组患者的基线特征(包括年龄、性别、吸烟状况、病程、确诊年龄、病变部位、疾病行为、肛周疾病、肠道手术史和CD相关药物使用情况等);于基线、第14周、第52周记录患者克罗恩病活动指数(CDAI),评估第14、52周的临床疗效;于基线和第52周行内镜检查,评估第52周的内镜疗效、药物持续治疗率、治疗期间药物安全性;采用单因素和多因素logistic回归分析探讨第52周临床缓解和治疗失应答的影响因素。结果共纳入134例CD患者,UST治疗第14周的临床应答率和临床缓解率分别为75.4%(101/134)和33.6%(45/134);一线治疗与二线治疗的临床疗效比较差异无统计学意义(临床应答率:77.9%vs.72.7%,P=0.484;临床缓解率:38.2%vs.28.8%,P=0.247)。UST治疗第52周的临床应答率和临床缓解率分别为79.9%(107/134)和56.0%(75/134),内镜应答率和内镜缓解率分别为70.9%(95/134)和38.8%(52/134);一线治疗与二线治疗的临床疗效(临床应答率:80.9%vs.78.8%,P=0.763;临床缓解率:60.3%vs.51.5%,P=0.306)和内镜疗效(内镜应答率:76.5%vs.65.2%,P=0.149;内镜缓解率:42.6%vs.34.8%,P=0.354)比较差异无统计学意义。UST治疗第52周的药物持续治疗率为85.8%(115/134),药物不良反应发生率为4.5%(6/134)。二线治疗组采取剂量优化治疗者的比例明显高于一线治疗组(45.5%vs.22.1%,P=0.004)。多因素logistic回归分析显示,第14周临床应答是第52周临床缓解的独立影响因素,肛周疾病和肠道手术史是治疗失应答的独立影响因素(P<0.05)。结论UST可有效改善CD患者的临床疗效及内镜表现,具有较好的药物安全性。第14周临床应答与第52周临床缓解存在相关性,且有肛周疾病和肠道手术史的患者易出现治疗失应答。

关键词： 弱精子症   少精子症   蛋白质组学   差异表达蛋白质  

摘要： 目的筛查弱精子症患者精子差异表达蛋白特异性候选标志物,探讨其在弱精子症发生过程中作用和生殖生物学意义。方法收集96例少精子症(O组)、136例弱精子症(A组)、83例少弱精子症(OA组)和189名健康志愿者(N组)精液标本,对其进行精液常规、精子形态学、DNA完整性检测。随机取N组和A组患者精子标本各30例,串联质谱标签技术(Tandem mass tag,TMT)筛查差异表达蛋白,并结合(Ingenuity pathway analysis,IPA)生物信息学分析筛选出弱精子症患者精子候选标志物,并构建通路。通过免疫荧光和免疫印迹方法检测其在N组、A组、O组及OA组的表达情况。结果A组和OA组前向运动精子百分率和精子总活力均显著低于N组和O组(P<0.05);O组和OA组中精子浓度和精子总数显著低于N组和A组(P<0.05);精液液化异常率在A、O和OA组中均较N组显著升高。A、O及OA组正常精子形态百分率显著低于N组(P<0.05),头部畸形比例显著高于N组(P<0.05),A组患者精子颈部畸形比例显著高于N组(P<0.05);DNA完整性检测结果为,O组、OA组高绿色荧光可染性精子显著高于A组及N组(P<0.05);A组DNA碎片化指数显著高于N组、O组及OA组(P<0.05)。蛋白质组学结果显示,SLPI、S100A14均为上调差异蛋白;免疫荧光和免疫印迹结果显示,A组、OA组中SLPI、S100A14的表达显著高于N组(P<0.05),NF-κB p65在O组、A组、OA组中的表达显著高于N组(P<0.05),STAT3在A组、OA组中的表达显著低于N组(P<0.05)。结论(1)液化程度降低、精子存活率降低、精子形态异常以及精子DNA完整性异常等与弱精子症的发生与发展相关;(2)初步确定SLPI、S100A14为弱精子症患者精子潜在蛋白标志物,但需进一步扩大样本验证;(3)SLPI、S100A14参与弱精子症发生的具体机制可能与SLPI、S100A14蛋白的升高,调控NF-κB p65和STAT3的表达,从而影响炎症反应和免疫调节过程等有关。

关键词： 预制菜   蛋白质   蛋制品   功能性   原料  

摘要： 据行业协会统计,当前我国预制菜市场规模已突破5000亿元,年均增速超20%。产业高速发展的背后,原料功能性成为决定产品品质稳定性的关键因素。蛋制品作为天然蛋白质来源,凭借其独特的理化特性,在预制菜原料体系中占据不可替代的地位。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒   非结构蛋白1α   原核表达   多克隆抗体   生物学特性  

摘要： 【目的】制备非结构蛋白1α(non-structural protein 1α,NSP1α)多克隆抗体,为深入研究NSP1α蛋白功能提供物质基础,并为猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)防控靶点的选择提供新思路。【方法】以pCAGGS-NSP1α-HA质粒为模板,聚合酶链式反应扩增NSP1α基因,利用相关生物信息学在线软件分析PRRSV SD16毒株NSP1α基因和其他PRRSV毒株NSP1α基因序列同源性、蛋白的理化性质、氨基酸亲-疏水性、跨膜结构域、信号肽序列、磷酸化位点、二级和三级结构。通过EcoR I和Xho I酶切位点将NSP1α克隆至pET-28a-His原核表达载体。测序正确的pET-28a-NSP1α-His质粒转化至大肠杆菌*** BL21(DE3)表达感受态细胞,将诱导表达、纯化复性后的NSP1α蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定制备的多克隆抗体的反应原性,通过Western blot和激光共聚焦分析NSP1α蛋白亚细胞分布。【结果】信息学分析结果表明,SD16毒株NSP1α蛋白有501个氨基酸,为不稳定的疏水性蛋白,其序列与HLJ毒株序列同源性最高,与I型PRRSV序列同源性最低;NSP1α蛋白无信号肽序列,无跨膜结构域,存在13个磷酸化位点;二级结构主要包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲。将获得的高纯度并且有活性的NSP1α蛋白进行小鼠免疫,检测其血清抗体效价可达1∶64000。Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体特异性识别PRRSV NSP1α蛋白。Western blot和激光共聚焦结果显示,NSP1α蛋白主要定位在细胞核内。【结论】成功表达、纯化了PRRSV NSP1α蛋白并制备了鼠源多克隆抗体,该多克隆抗体与PRRSV NSP1α蛋白具有良好的反应活性和特异性。

关键词： 抗狂犬病病毒单克隆抗体   狂犬病   暴露预防   专家共识  

摘要： 抗狂犬病病毒单克隆抗体(RmAb)是利用现代基因工程技术开发和生产的一种新型狂犬病被动免疫制剂,其可以特异性地与狂犬病病毒表面G蛋白上的抗原位点结合,阻断病毒与细胞表面受体的结合,从而起到预防作用。与传统的狂犬病免疫球蛋白相比,RmAb具有产量可控、质量稳定、安全性高、比活性好等优势。目前,全球已有4种RmAb产品获批上市。针对临床医生对RmAb认识相对不足的现状,中华预防医学会狂犬病预防控制工作委员会、中国医学救援协会动物伤害救治分会组织中国专家,收集最新证据,参考国内外相关规范、指南和共识,结合专家临床经验等,撰写本共识,为临床工作提供科学和规范的建议。