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关键词： 牛冠状病毒   N蛋白   单克隆抗体   间接ELSIA  

摘要： 旨在制备牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)单克隆抗体(MAb),为BCoV疫苗制备和建立免疫胶体金等特异性检测方法奠定基础。使用原核表达系统制备重组BCoV N蛋白,BCoV灭活全病毒液免疫BALB/c小鼠;以N蛋白和全病毒为抗原,通过间接ELISA法检测抗体效价。经细胞融合与5轮亚克隆,筛选出分泌目标抗体的单克隆细胞株。采用腹水法制备单克隆抗体并纯化,通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证抗体反应性与特异性。结果:筛选出3株针对BCoV N蛋白的杂交瘤细胞株(2D12C、3D6E、4D1F),分泌的单克隆抗体轻链均为Kappa链,2D12C与4D1F重链为IgG2a亚型,3D6E重链为IgG1亚型;IFA试验表明3株单克隆抗体均能与BCoV发生特异性结合;Western blot证明3株单克隆抗体与BCoV和重组表达BCoV N蛋白均反应良好,且3株单克隆抗体与感染牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒及牛副流感病毒3型的细胞均不发生特异性反应。综上,制备了3株特异性较高、生物学活性良好的BCoV单克隆抗体,为后续疫苗制备及检测方法研究奠定了基础。

关键词： 辣椒   染色质甲基化酶基因   克隆   表达   生物信息学  

摘要： 染色质甲基化酶(chromomethylase,CMT)是植物体中DNA甲基转移酶的一种类型,主要负责维持CHG和CHH甲基化。为揭示辣椒染色质甲基化酶基因CaCMT1的结构特征及功能,本研究以一年生辣椒(Capsicum annuum L.)栽培种‘遵辣1号’(Zunla-1)为试验材料,克隆CaCMT1基因全长,对其进行生物信息学分析及组织特异性表达分析。结果表明,Ca CMT1编码序列全长2253 bp,含有一个完整开放阅读框(ORF),编码750个氨基酸,蛋白分子量为84.54 kD,理论等电点4.92,不稳定系数为31.08,总平均亲水指数(GRAVY)为-0.344,为亲水稳定性蛋白。CaCMT1蛋白质二级结构包含α-螺旋(29.20%)、β-折叠(6.00%)、延伸链(17.87%)和无规卷曲(46.93%)。同源性分析表明Ca CMT1与茄子SmCMT1、本氏烟草NbCMT1、三裂叶薯ItbCMT1-like和拟南芥AtCMT1的序列相似性分别为70.85%、68.65%、67.68%和47.20%,均含有BAH结构域和Cyt-C5-DNA-methylase结构域,且都有自身的高度保守性。预测CaCMT1基因启动子中含有激素响应元件、光响应元件、胁迫型响应元件等共27个作用元件。荧光定量表达分析表明,辣椒Ca CMT1在不同组织中均有表达,但花中表达量最高且与其他组织有极显著差异,说明Ca CMT1基因参与辣椒花器官的生长发育。本研究获得了辣椒CaCMT1基因序列及其表达情况,为探讨DNA甲基化调控辣椒花器官发育机制提供了有力的支持。

关键词： 异基因造血干细胞移植   机化性肺炎   激素  

摘要： 目的探讨异基因造血干细胞移植(allo⁃HSCT)后发生的机化性肺炎(OP)对激素治疗的效果。方法回顾性分析河南省人民医院2022年3月收治的1例费城染色体阳性(Ph+)急性淋巴细胞白血病(ALL)患者行allo⁃HSCT后发生OP的诊治过程,并复习相关文献。结果患者为29岁女性,以咽痛、牙龈出血入院,经相关检查确诊为Ph+ALL,经标准方案化疗后骨髓象达到缓解,1年后疾病复发,行allo⁃HSCT,骨髓象缓解。+80天后出现咳嗽、咳痰、胸闷症状,完善胸部CT检查提示肺部感染,给予抗细菌、抗病毒和抗真菌治疗后效果均欠佳,各种病原学检查均阴性,排除细菌、病毒、真菌感染,最终诊断为OP。给予激素治疗2周,复查胸部CT提示肺炎较前明显好转。结论对行allo⁃HSCT后发生OP的患者,激素治疗可能是一个较好的选择。

关键词： 山薯   蛋白质   氨基酸   营养组成  

摘要： 山薯是我国四大山药品种之一,对其营养构成鲜有报道。本研究分别以山薯块茎的皮、肉和全山薯为对象,对其营养成分质量分数、氨基酸构成以及蛋白质营养价值进行了评价。结果表明:山薯皮、肉和全山薯中蛋白质质量分数分别为12.54%、6.92%和7.59%,淀粉质量分数为49.04%、82.48%和80.34%。山薯皮除淀粉质量分数较低外,其总膳食纤维、蛋白质、矿物质、脂肪和还原糖质量分数均高于山薯肉和全山薯;山薯块茎3个部位水解氨基酸总含量为8.58~15.95 g/100 g,其中必需氨基酸质量分数为29.84%~33.10%,各部位支链氨基酸、药用氨基酸等功能性氨基酸质量分数均较高。氨基酸评分和化学评分分析结果表明,山薯各部位蛋白质必需氨基酸组成与FAO/WHO推荐的模式蛋白基本相当,但山薯肉和全山薯的苏氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸质量分数与参考蛋白质全鸡蛋蛋白还有一定差距。山薯各部位蛋白质的必需氨基酸指数为79.58~81.85,表明山薯为可利用蛋白资源,但不能达到优质蛋白源的水平。

关键词： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸   男性生殖   氧化应激   前列腺癌  

摘要： 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))是细胞内重要的辅酶,参与细胞能量代谢、DNA修复、细胞生长和细胞死亡等生理过程,可通过调节氧化应激、维持氧化还原平衡以及通过其依赖性酶(如Sirtuins家族和聚ADP-核糖聚合酶等)调控生殖功能。近年来研究发现,NAD^(+)前体补充剂在预防和治疗男性生殖系统疾病方面,如少精子症、弱精子症、衰老过程中和糖尿病引起的生殖功能障碍,以及精子冻融过程中的氧化损伤等,均有较好效果。此外,NAD^(+)在前列腺癌的预防和治疗中也显示出潜在的应用价值。本文就NAD^(+)在男性生殖健康中的作用作一综述,并为开发新的男科疾病治疗策略提供科学依据。

关键词： 高内涵筛选技术   干细胞   药物筛选  

摘要： 干细胞凭借其优良的自我更新能力和多向分化潜能,在疾病细胞模型构建和药物筛选等领域得到了广泛应用。高内涵筛选(high content screening,HCS)作为基于细胞表型的高通量筛选技术,凭借其高分辨率、大信息量、智能化等特点,在干细胞研究领域展现出了广阔的应用前景。文章系统梳理HCS在不同类型干细胞研究中的应用,为加速推进干细胞的基础研究和临床应用提供参考。

关键词： 普安盘江乌鸡   胸肌   营养价值   氨基酸   脂肪酸  

摘要： 为了分析普安盘江乌鸡公母鸡胸肌的营养成分并评价其氨基酸营养价值,试验随机选择150日龄、体重均匀的健康普安盘江乌鸡60只(公母鸡各30只),屠宰后采集胸肌组织,对其常规营养成分(水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪)、胆固醇、肌苷酸、脂肪酸和氨基酸含量进行测定,并对其氨基酸营养价值进行评价,比较上述指标在公母鸡之间的差异。结果表明:普安盘江乌鸡胸肌水分含量为73.67 g/100 g,灰分含量为1.12 g/100 g,粗蛋白含量为24.28 g/100 g,粗脂肪含量为1.30 g/100 g,胆固醇含量为47.02 mg/100 g,肌苷酸含量为1.75 mg/g;公母鸡胸肌中均检测到5种脂肪酸(棕榈酸、硬脂酸、棕榈油酸、油酸和亚油酸),其中油酸相对含量最高(41.80%),不饱和脂肪酸相对含量为62.38%;共检测到16种氨基酸,总氨基酸含量为22.57 g/100 g,其中谷氨酸含量最高(3.35 g/100 g),总必需氨基酸/总氨基酸(EAA/TAA)、总鲜味氨基酸/总氨基酸(UAA/TAA)和总必需氨基酸/总非必需氨基酸(EAA/NEAA)分别为40.94%、41.02%和80.13%。除(甲硫氨酸+半胱氨酸)外,普安盘江乌鸡胸肌中其余必需氨基酸含量均超过氨基酸模式谱中对应的氨基酸标准含量;氨基酸比值系数分(SRC)为79.16。公鸡胸肌水分含量、硬脂酸相对含量、亚油酸相对含量、EAA/TAA和EAA/NEAA显著或极显著高于母鸡(P<0.05或P<0.01),粗蛋白含量、油酸相对含量、总不饱和脂肪酸相对含量和脯氨酸含量显著或极显著低于母鸡(P<0.05或P<0.01),且SRC略高于母鸡。说明普安盘江乌鸡胸肌具有高蛋白、低脂肪、高营养价值的特点,且营养成分存在性别差异。

关键词： 江西铅山红芽芋   烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型   基因克隆   生物信息学分析  

摘要： 通过铅山红芽芋和铅山青秆芋转录组数据库筛选到其烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型基因的核心片段,利用RT-PCR技术成功克隆了红芽芋烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型基因,并对其进行生物信息学分析。结果表明:红芽芋烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型基因的cDNA总长度为885碱基对(base pair,bp),G+C含量为45.88%。红芽芋烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型的相对分子量为33626.15道尔顿(dalton,Da),理论等电点为9.49,带负电荷的残基总数为17个,带正电荷的残基总数为29个,原子总数量为4855个,不稳定性指数为33.46,脂肪族指数为125.88,总平均亲水性为0.705,属于疏水性蛋白。红芽芋烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型的二级结构由α-螺旋、延伸链及无规则卷曲构成,以α-螺旋和无规则卷曲为主。红芽芋烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型的三级结构为单体,其亚细胞定位为细胞质膜或液泡膜。红芽芋烟草病毒增殖蛋白1-like X1亚型与橡胶树烟草病毒增殖蛋白1(tobamovirus multiplication protein 1,TOM1)、可可TOM1、枣TOM1、茶TOM1、葡萄TOM1、阿拉比卡咖啡TOM1、加州白栎TOM1类蛋白(TOM1-like,TOL)、蓝星睡莲TOM1 X2亚型、侏儒睡莲TOM1及沉水樟TOM1的亲缘关系较远,但其蛋白同源性较高,存在较多的保守结构域。

关键词： 甲烷水合物   复配体系   活性炭   成核条件  

摘要： 活性炭复配氨基酸体系通过“吸附-诱导双向纳米对流”及分子微搅动机制,显著钏进甲烷水合物成核动力学,提升储气性能。研究显示,L-甲硫氨酸在0.2%体积分数下使储气量提升9.8%、诱导时间缩短33.3%,而L-亮氨酸因疏水性侧链优势,在其0.5%体积分数下实现储气量13.5%的增幅及41.7%的诱导时间缩短。该体系通过稳定水合物笼型结构、减少晶体缺陷。相较于单独使用活性炭,和氨基酸复配后的体系在缩短诱导时间和提升储气量方面均有明显优势。在天然气储运、温室气体封存及海水淡化领域展现具有应用潜力。然而,过量氨基酸可能导致溶液黏度升高,需优化复配比例与反应条件。

关键词： 呼吸道感染   多病原   核酸检测  

摘要： 目的:分析2024年佳木斯市呼吸道感染病原学特征及流行情况,探究呼吸道多病原的流行特征,为佳木斯市呼吸道传染病防控提供科学依据。方法:收集2024年佳木斯市呼吸道感染病例样本,应用多重实时定量聚合酶链式反应法检测呼吸道15种病原体,并对结果进行分析。结果:2024年呼吸道多病原核酸检测阳性样本318份,阳性率为31.49%,检测出14种病原体,单病原感染253份;阳性率较高的月份为2月、3月和12月,不同月份阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=81.187,P<0.05);男性和女性阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=1.731,P>0.05)。≤5岁年龄组和6~14岁年龄组阳性率较高,分别为43.90%和43.93%,不同年龄组阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=12.648,P<0.05);流感样病例和严重急性呼吸道感染病例病原体检出率差异无统计学意义(χ^(2)=5.346,P>0.05)。结论:佳木斯市呼吸道感染的病原体呈多样性,全年均有发病,感染率与性别无关,好发于婴幼儿期,学龄前期和学龄期,冬春季为高发季节,提示呼吸道多病原防控重点关注14岁以下人群,针对重点人群开展呼吸道多病原防控的科普与宣教。