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关键词： 胰高血糖素样肽-1   胰高血糖素样肽-1受体激动剂   糖尿病   间充质干细胞   骨质疏松症  

摘要： 胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)是一种基于肠促胰岛素效应的新型降糖药,近年来在糖尿病合并骨质疏松症(OP)治疗中的应用前景引起广泛关注。除了显著的降糖作用,最新研究表明,GLP-1RA能有效改善糖尿病患者的骨代谢并修复受损的骨微结构,其关键机制在于促进间充质干细胞(MSC)向成骨细胞分化,从而促进骨形成。这一机制已成为OP治疗领域的研究热点。因此,探讨GLP-1RA对MSC成骨的作用及其分子机制对糖尿病合并OP患者的临床药物选择具有指导意义。

关键词： 型草鱼呼肠孤病毒   VP4蛋白   单个B细胞技术   单克隆抗体制备  

摘要： 【目的】Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)严重危害中国草鱼(Ctenoparyngodonidel-lus)养殖业的健康发展。本研究基于单个B细胞抗体制备技术平台,结合哺乳动物表达系统,旨在制备靶向GCRV-ⅡVP4蛋白的基因工程抗体。【方法】通过构建GCRV-ⅡVP4基因表达载体,在真核表达系统中制备重组VP4蛋白;将纯化后的重组蛋白作为免疫原多次免疫新西兰白兔,分离出脾脏单个抗原特异性记忆B细胞;随后通过聚合酶链式反应(PCR)扩增抗体可变区、恒定区基因片段,构建重组表达载体并转染HEK293F细胞进行单克隆抗体表达。最终通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光分析(IF)评估抗体的抗原结合特性。【结果】通过对分离培养的单个B细胞上清液进行筛选,利用ELISA筛选出对VP4蛋白具有较好结合能力的三种B细胞克隆(1D5、1F9、1H1),并结合IF实验验证了其能结合病毒感染组织中的VP4抗原。进一步通过抗体重组表达获得了三株抗VP4重组单克隆抗体(1D5、1F9、1H1),其ELISA效价均达1∶128000。Westernblot分析结果显示,1D5、1F9和1H1单克隆抗体能特异性识别GCRV-YX246感染的脑细胞中65.4kDa的蛋白质条带,该分子量大小与病毒VP4蛋白理论分子量一致。IF实验结果也进一步证实1D5、1F9和1H1可特异性识别GCRV-YX246毒株感染的草鱼头肾组织切片中的病毒抗原。【结论】本研究成功制备并筛选出抗GCRV-ⅡVP4重组单克隆抗体,为GCRV-Ⅱ病毒快速诊断试剂盒的研发和VP4蛋白功能研究奠定基础。

关键词： 人类免疫缺陷病毒(HIV)   实时荧光定量PCR   探针法   假病毒   方法学验证   人间充质干细胞  

摘要： 目的:建立一种多引物对检测HIV-1病毒的逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,用于干细胞产品的病毒安全性质量控制。方法:利用SnapGene软件,选择HIV-1病毒gag-pol基因相对保守位置设计多组模板引物探针,建立RT-qPCR探针法,验证方法的特异性、灵敏度、精密度和耐用性。结果:本方法共设计6组引物探针,可检测到83.0%的HIV-1病毒,hMSCs无明显扩增曲线,加标回收率为70%~130%;检测灵敏度为2 copies·μL^(-1);重复性验证通过检测3个不同拷贝浓度质粒对照品(2×10^(7)、2×10^(5)、2×10^(3)copies·μL^(-1))进行评价,3个浓度的3次重复检测的RSD为2.2%~8.3%;使用不同型号荧光定量PCR系统对上述3个浓度质粒对照品进行耐用性验证,结果显示RSD为0.34%~2.3%。结论:本研究建立的检测HIV-1病毒的方法特异性和重复性好,灵敏度高,经验证可用于生产检定用细胞基质、干细胞制品HIV-1的检测。

关键词： 旋毛虫属   旋毛虫病   虫种鉴定   多重PCR   限制性片段长度多态性  

摘要： 毛形线虫属(Trichinella spp.,又称旋毛虫属)的幼虫可寄生于人和多种脊椎动物,严重危害人体健康和动物肉类食品安全。旋毛虫虫种繁多,不同虫种的感染性及致病性存在较大差异。近年来,新的旋毛虫虫种被陆续发现,但现有的病原学检查方法(肌肉活检压片镜检法或人工消化法)不能有效区分不同虫种。本共识综合国内外研究进展,就旋毛虫虫种检测的核酸鉴定方法进行详细阐述,以期为旋毛虫分类学研究和旋毛虫病的精准诊断提供参考。

关键词： 硬件安全   忆阻器   物理不可克隆函数  

摘要： 随着物联网设备的广泛应用,硬件安全面临日益严峻的挑战.物理不可克隆函数(physical unclonable function,PUF)作为一种基于物理特性的安全技术,通过利用制造过程中的随机微观差异生成唯一的设备标识符,为设备认证提供了安全保障.然而,传统CMOS PUF因功耗及性能表现而难以满足现代应用需求.忆阻器(resistive random-access memory,RRAM)凭借其高密度、低功耗和非易失性的特性,成为轻量级PUF的理想候选技术.本文系统梳理了RRAM PUF的研究进展,首先介绍了PUF和RRAM的理论基础;随后从材料创新和架构设计两方面探讨了RRAM PUF的设计策略,包括新型忆阻材料的开发、RRAM专属性架构设计,以及CMOS通用性架构集成;在安全性提升方面,本文讨论了重构、异或和混排等防御策略.之后概述了RRAM PUF在多个实际场景中的应用部署.最后,本文展望了未来的研究方向,包括多维熵源开发、可重构架构设计以及软硬件协同优化,以促进RRAM PUF技术的科学研究和工业应用.

关键词： 乳铁蛋白   核酸适配体   筛选   快速检测方法  

摘要： 乳铁蛋白是一种铁结合糖蛋白,具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种生理活性。现有乳铁蛋白检测方法存在样品预处理繁琐、仪器要求高、耗时长等问题。近年来,核酸适配体作为“化学抗体”,被广泛应用于乳铁蛋白检测领域。文章综述了基于核酸适配体的乳铁蛋白检测新方法及在乳铁蛋白检测中的应用,概述了乳铁蛋白适配体体外筛选及相互结合作用机制,其中静电、氢键和疏水相互作用是维持乳铁蛋白和适配体复合物的主要作用力,总结了采用核酸适配体进行样品前处理,在建立电泳、比色、荧光、电化学等快速乳铁蛋白检测方法等方面的研究进展,为乳铁蛋白快速检测技术及产品开发提供参考。

关键词： 人工卵巢   干细胞   生育力保存   卵巢早衰  

摘要： 人工卵巢技术,作为一种前沿的组织工程学方法,旨在通过重建和再生卵巢组织来恢复卵巢功能,并为卵巢早衰(POI)及肿瘤治疗后的患者提供支持,从而为他们带来新的治疗希望。干细胞疗法作为再生医学的基石,展现了在人工卵巢构建中的巨大潜力。干细胞与三维支架结合,能够模拟天然卵巢微环境,并在重建卵母细胞及支持细胞功能方面展现出显著效果。本文综述了人工卵巢技术,以及间充质干细胞(MSCs)、脂肪干细胞(ADSCs)、女性生殖干细胞(FGSCs)、卵巢干细胞(OSCs)、诱导多能干细胞(iPSCs)技术在人工卵巢构建中应用的研究进展,为人工卵巢的进一步研发提供理论基础和研究思路。

关键词： 树舌灵芝   多糖   结构   运动疲劳  

摘要： 采用超声波辅助热水浸提树舌灵芝多糖,对分离纯化后的多糖结构进行分析,同时采用小鼠力竭游泳实验考察多糖的抗运动疲劳作用。结果显示:多糖经分离纯化后得到主要组分GAP-A1和GAP-B1,GAP-A1和GAP-B1结构中均含有α、β-糖苷键和吡喃糖环,其中GAP-A1重均分子质量1.38×10^(6)u,主要由Man、Xyl、Fuc、Rha、Ara、Glu、Gal组成,摩尔比为11.31:5.54:4.22:2.52:1.00:82.59:6.70;GAP-B1重均分子质量为3.59×10^(5)u,主要由Man、Xyl、Fuc、Gal-Ac、Rha、Glu、Gal、Glu-Ac组成,摩尔比为12.24:6.12:1.08:1.00:2.42:58.05:42.10:3.00。与空白对照相比,低、中、高剂量的GAP-A1和GAP-B1均显著延长了小鼠力竭游泳时间,提高了小鼠肝糖原、肌糖原含量和血清中抗氧化酶活性,降低了血清中血乳酸、血尿素氮和丙二醛含量。研究表明树舌灵芝多糖具有提高小鼠抗运动疲劳能力,且与多糖剂量呈现明显的依赖关系。

关键词： 杂粕   蛋白质资源   营养价值   氨基酸组成  

摘要： 试验旨在探究浙江省主要杂粕类蛋白质饲料原料的营养特性。省内米糠粕、双低菜籽粕和茶籽粕样品共采集55份,测定其粗蛋白(CP)、粗纤维(CF)、粗灰分(Ash)、干物质(DM)含量及氨基酸组成,并综合评估其营养价值。结果显示,米糠粕、双低菜籽粕和茶籽粕CP含量的平均值分别为14.85%、41.22%和14.21%,CF含量的平均值分别为8.69%、11.78%和10.90%,Ash含量的平均值分别为10.69%、7.68%和7.79%,DM含量的平均值分别为90.48%、92.43%和91.50%,必需氨基酸/总氨基酸(EAA/TAA)分别为0.35、0.38和0.31。研究表明,三种杂粕中,双低菜籽粕CP含量最高、氨基酸组成最为平衡、Ash含量最低、DM含量最高,整体营养价值最优;米糠粕CP含量较高、氨基酸组成较为平衡,营养价值次之;茶籽粕的CP含量最低、氨基酸组成不平衡,营养价值相对较低。因此,在浙江省杂粕类蛋白质资源的开发利用中,建议优先考虑双低菜籽粕和米糠粕。

关键词： 棉铃虫   BMP信号通路   Gbb基因   滞育  

摘要： 棉铃虫是一种分布广泛且危害严重的害虫,滞育现象显著增强了其适应性和抗逆性,增加了防控难度。研究发现,骨形成蛋白(Bone Morphogenetic Protein, BMP)信号通路可能通过调节线粒体活性参与棉铃虫滞育过程,但其发挥作用的配体基因尚不明确。本研究通过PCR技术克隆了棉铃虫BMP信号通路的配体基因Glass bottom boat(Gbb),并对其核苷酸及氨基酸序列进行了生物信息学分析。三级结构预测结果表明,Gbb蛋白主要由无规则卷曲、α-螺旋和β-折叠组成,与斜纹夜蛾的氨基酸序列相似性最高,且与其他鳞翅目昆虫具有较高的同源性。通过原位杂交技术定位了Gbb基因在棉铃虫蛹脑前脑顶部区域的主要表达位点。RT-qPCR分析显示,Gbb基因在棉铃虫发育和滞育蛹中的表达存在显著差异。化蛹0天和2天时,滞育和发育蛹脑中Gbb基因表达量无显著差异,而在第4、6、8天发育蛹中,Gbb基因的表达量显著高于滞育蛹。本研究揭示了Gbb基因在棉铃虫的发育及滞育过程中的重要作用,为深入探究其功能及调控机制提供了基础。