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关键词： 枸杞多糖   视网膜色素上皮细胞   年龄相关性黄斑变性   光损伤   自噬   凋亡   氧化应激   PI3K/AKT/mTOR信号通路  

摘要： 目的研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)基于磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin signaling pathway,mTOR)通路调控细胞自噬对视网膜色素上皮细胞光损伤的保护作用。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞系(adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-19)细胞,构建稳定表达mRFP-eGFP-LC3的ARPE-19细胞,根据光照6、12、24 h,随机分为对照组,光损伤组,LBP低、中、高剂量组。CCK-8法结合流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞增殖活力及凋亡水平;免疫荧光检测ARPE-19细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达;试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;透射电镜观察各组细胞超微结构;激光共聚焦显微镜观察细胞自噬流变化;Western blot法检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、P62、Beclin1、PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平。结果与对照组比较,各光照时间段内,光损伤组细胞存活率明显下降;凋亡率升高;ROS平均荧光强度增加,SOD含量减少,MDA含量增加;自噬小泡增多并簇集分布,自噬流升高;自噬相关蛋白Beclin1的表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的蛋白表达量比值增加明显(均P<0.01),P62蛋白表达量减少(均P<0.01);PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达量下降(除光照6 h中光损伤组PI3K蛋白表达量无统计学意义,p-AKT/AKT的比值在光照12 h时差异有统计学意义P<0.05,余均P<0.01)。与光损伤组比较,LBP低、中、高剂量组细胞存活率增加,凋亡率减少,ROS平均荧光强度降低,SOD含量增加,MDA含量减少;自噬小泡减少,自噬流下降;自噬相关蛋白Beclin1蛋白表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达量比值减少(除6、12 h的Beclin1的表达量差异无统计学意义外,余均P<0.01);P62蛋白表达量增加(光照6 h的LBP中、高剂量组P<0.01,光照12、24 h的H-LBP组P<0.01,余差异无统计学意义);PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达量升高(PI3K和p-AKT/AKT表达量中除6、12 h的LBP低剂量组的无统计学意义外,余均P<0.01;p-mTOR/mTOR中6 h的LBP低剂量组差异无统计学意义,余均P<0.01)。结论LBP可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制ARPE-19细胞发生自噬,减缓细胞凋亡,对抗光照对ARPE-19细胞的氧化应激从而起到保护作用。

关键词： 台蘑   营养成分   矿物质   氨基酸   分析比较  

摘要： 台蘑是五台山地区的特色野生食用菌,具有悠久的食用历史与较高的营养价值,但目前对其不同品种间营养成分的对比研究较为缺乏。为此,该研究以五台山特定区域的白银盘、虎皮、秋露白及水皮4种常见台蘑为研究对象,依据相关国家标准测定各项指标,旨在系统分析其常规营养成分、矿物质、重金属及氨基酸含量的差异。研究结果表明,不同品种的台蘑营养成分存在显著差异。秋露白与虎皮在粗蛋白、多种矿物质及氨基酸总量方面表现优异,综合营养价值高;白银盘则具有极低的钠含量;水皮的碳水化合物含量较高。所有样品重金属含量(除汞含量)均低于国家标准限量,食用安全。综上所述,不同台蘑品种可满足多样化的膳食需求,秋露白和虎皮适用于全面营养补充,白银盘适合低钠饮食,水皮可作为能量补充来源。该研究为台蘑的食用价值评价与针对性开发利用提供了科学依据。

关键词： 肺炎球菌多糖蛋白结合物原液   游离蛋白   4-二甲氨基吡啶   双重定量   分子排阻高效液相色谱  

摘要： 目的建立一种可同时测定肺炎球菌多糖蛋白结合物原液中游离蛋白及4-二甲氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine,DMAP)残留量的分子排阻高效液相色谱(size exclusion-high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法,并对方法进行验证及初步应用。方法通过对DMAP特征性紫外吸收峰的研究及色谱柱分离方法的优化,建立SEC-HPLC法,实现游离蛋白、DMAP在同一色谱柱上的保留与分离,进行游离蛋白、DMAP的定量。对建立的方法进行专属性(系统适用性)、定量限、准确性、精密性、线性和范围、耐用性验证,并利用建立的方法检测供试品中游离蛋白及DMAP残留量。结果确定的色谱条件为:色谱柱为TSKgel G5000PWXL分析柱(7.8 mm×300 mm,10µm),柱温35℃,流动相为0.85%氯化钠溶液,pH为(6.2±0.2),流速0.5 mL/min,检测波长280 nm。游离蛋白白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)或破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)峰及DMAP峰与相邻峰的分离度大于1.5;TT、DT和DMAP的定量限分别为0.50、1.20、0.02µg/mL;TT、DT和DMAP的加标回收率分别为98.11%~104.60%、95.43%~103.26%、97.11%~98.42%;TT、DT、DMAP的中间精密度相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均低于5%;TT和DT在6~24µg/mL范围内,相关系数(R2)>0.9990,DMAP在2~10µg/mL范围内,R2=1.000;TT、DT和DMAP含量在进样温度为30、35、40℃条件下RSD均小于3%。利用建立的方法测定供试品中游离蛋白和DMAP含量均获得快速而精准的结果。结论建立的SEC-HPLC法系统适用性、准确性、精密性、线性关系、耐用性良好,实现了同一试验中对游离蛋白与DMAP的双重定量,可用于对结合工艺中的杂质进行监测。

关键词： 热裂解-气相色谱质谱   电喷雾质谱   月桂酰谷氨酸钠   月桂酰肌氨酸钠   表面活性剂  

摘要： 采用热重分析、红外光谱、热裂解-气相色谱质谱和电喷雾质谱等方法综合研究了月桂酰谷氨酸钠和月桂酰肌氨酸钠2种月桂酰氨基酸表面活性剂结构组成的谱学特征和裂解行为规律。结果表明,月桂酰谷氨酸钠和月桂酰肌氨酸钠在500℃热裂解下分别产生了20种和35种裂解产物,均可裂解出烃类、酮类、月桂腈、月桂酸和烷基酰胺等物质。在电喷雾正离子模式下,可见月桂酰谷氨酸钠和月桂酰肌氨酸钠的加合离子[M+H]^(+)和[M+Na]^(+)。该方法可为日化产品中表面活性剂的鉴定和分析提供依据。

关键词： 胃食管反流病   脾虚湿热证   健脾清化颗粒   TLR4/NF-κB通路   大鼠  

摘要： 目的 探讨健脾清化颗粒治疗胃食管反流病(GERD)脾虚湿热证的可能作用机制。方法 50只SPF级雄性SD大鼠随机取6只为假手术组,另外44只采用改良食管十二指肠侧侧吻合术+饥饱失常+内外因湿热干预建立GERD脾虚湿热证模型。将成模大鼠随机分成模型组、奥美拉唑组、色苷酸钠组和健脾清化颗粒低、中、高剂量组,每组6只,各组分别予相应措施干预。观察大鼠食管组织形态,ELISA测定血清、食管黏膜组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-10含量,Western blot检测食管黏膜组织核因子-κB(NF-κB) p65、肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)、蛋白激酶受体2(PAR2)、Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)蛋白表达,RT-qPCR检测食管黏膜组织MCT、PAR2、TLR4、TRAF6 mRNA表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠食管黏膜上皮增厚,基底细胞增生,细胞间隙增宽,组织水肿,存在炎性细胞浸润;血清及食管黏膜组织IL-1β、TNF-α、 IL-6含量明显升高,IL-10含量明显降低(P<0.01);食管黏膜组织NF-κB p65、 MCT、 PAR2、TLR4、TRAF6、TAK1蛋白表达明显升高(P<0.01),MCT、PAR2、TLR4、TRAF6 mRNA表达明显升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠食管黏膜损伤情况不同程度减轻;血清及食管黏膜组织IL-1β、TNF-α、IL-6含量升高,IL-10含量降低,食管黏膜组织NF-κB p65、MCT、PAR2、TLR4、TRAF6、TAK1蛋白表达有所降低,MCT、PAR2、TLR4、TRAF6 mRNA表达有所降低,其中健脾清化颗粒高剂量组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 健脾清化颗粒能减轻GERD脾虚湿热证大鼠食管黏膜损伤,减轻食管组织炎症反应,其机制可能与抑制脂多糖诱导的TLR4/NF-κB通路活化有关。

关键词： U(VI)还原   生物修复   芽孢杆菌   蛋白组学  

摘要： 为获得铀污染生物修复的高效菌种资源,并探究其在U(VI)生物还原过程中的分子作用机制,本研究通过厌氧富集培养和胰胨蛋白胨酵母膏葡萄糖培养基(peptone tryptone yeast extract glucose medium,PTYG)平板分离,从中国南方某退役铀尾矿库沉积物中分离筛选了3株耐铀菌株(X01、X02、X03)。在厌氧条件下,X02对初始质量浓度100 mg/L U(VI)的还原率高达98.65%,显著高于X01(79.69%)和X03(82.71%)。基于16S rDNA序列的系统发育分析鉴定X02为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),生长动力学分析显示,Bacillus sp.X02在12 h进入对数生长期,且此时代谢活性达到峰值。进一步采用iTRAQ蛋白质组学技术分析了Bacillus sp.X02在U(VI)胁迫下的差异表达蛋白,发现在M/N组间共有229个差异表达蛋白,其中90个上调,139个下调。通路京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析表明,上调蛋白主要富集于糖代谢、氨基酸代谢及应激响应通路,而下蛋白则涉及细胞运动和膜运输功能,这些结果表明Bacillus sp.X02通过调控代谢网络和生理功能来适应铀胁迫。

关键词： 肝癌HepG-2细胞   绞股蓝粗多糖   乙醇分级纯化法   细胞凋亡  

摘要： 检测不同绞股蓝粗多糖(GMP)组分对HepG-2细胞的抑制率,探讨其对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及其机制。以不同组分的GMP-1、GMP-2、GMP-3、GMP-4为材料,使用苯酚—硫酸方法测定其粗多糖含量;用96孔细胞培养板将HepG-2细胞与GMP-1、GMP-2、GMP-3、GMP-4共同在5%CO_(2)、37℃的培养箱中培养,采用MTT法检测不同时间下各醇沉浓度的GMP对HepG-2细胞活力的影响;利用Western Blot法检测GMP对肝癌HepG-2细胞凋亡相关蛋白(即caspase-3、caspase-9、Bax、BCL-2、cyclinD、cyclinE)的影响。结果表明,乙醇浓度为80%时,醇沉得到的GMP-2对HepG-2细胞的抑制率最大;利用Western Blot检测发现,随着绞股蓝粗多糖浓度的增加,凋亡蛋白caspase-3、caspase-9和促凋亡蛋白Bax表达上调,周期蛋白cyclinD和cyclinE表达下降。绞股蓝作为一种食品和药用植物具有很大的开发利用价值。GMP-2能够促进肝癌HepG-2细胞的凋亡,抑制其生长。本研究为利用绞股蓝粗多糖治疗肝癌提供了新的思路,为后续拓展更多研究数据、挖掘更多的治疗肝癌的可能途径提供参考。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒   N蛋白   单克隆抗体   抗原表位  

摘要： 旨在制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白单克隆抗体(mAb)及解析其抗原表位。本研究以原核表达的重组蛋白His-GFP-N为抗原免疫BALB/c鼠,利用间接ELISA筛选获得1株分泌N蛋白抗体的杂交瘤细胞(1F8)。mAb 1F8的亚类为IgG1,轻链是κ链,腹水ELISA效价为1∶10^(9)。IFA显示mAb 1F8能特异性识别PRRSV,Western blot试验表明该mAb能与Ⅰ型和Ⅱ型PRRSV N蛋白发生反应。通过对逐步截短表达的N蛋白进行Western blot鉴定,最终确定mAb 1F8识别的核心抗原表位为^(52)KPH^(54),是一个超短且高度保守抗原表位。本研究为后续研究提供了必要的抗体试剂,也证明了B细胞抗原表位可以短至3个氨基酸。

关键词： 2型糖尿病   睡前加餐   高蛋白质膳食   夜间低血糖   平均血糖波动幅度  

摘要： 目的探究高蛋白质膳食睡前加餐预防老年2型糖尿病(T2DM)患者夜间低血糖的效果。方法选取2022年02月-2024年02月在本院治疗且入院时首次测量睡前(22:00)血糖为4.0~5.6mmol/L的老年T2DM患者96例,采用抽签法将其分为对照组(n=48)和试验组(n=48),对照组睡前予以低蛋白质膳食(含1.3g蛋白质),试验组睡前予以高蛋白质膳食(含6.6g蛋白质),比较两组夜间(22:00-次日06:00)血糖情况、夜间低血糖发生率、次日血糖情况[平均血糖波动幅度(MAGE)、次日血糖目标范围时间(TIR)]及达标情况(MAGE、TIR达标率)。结果两组干预前夜间血糖、MAGE和TIR水平及其达标率比较差异不显著(P>0.05)。试验组干预后睡前(22:00)、次日03:00及06:00血糖高于对照组(P<0.05),夜间低血糖发生率为2.08%(1/48),低于对照组的16.67%(8/48)(P<0.05),MAGE为(3.89±0.98)mmoL/L,低于对照组的(4.70±1.11)mmoL/L(P<0.05),TIR为(75.89±10.12)%,高于对照组的(59.98±9.34)%(P<0.05),MAGE和TIR达标率分别为72.92%(35/48)、85.42%(41/48),均高于对照组的52.08%(25/48)、66.67%(32/48)(P<0.05)。结论高蛋白质膳食睡前加餐可维持老年2型糖尿病患者夜间血糖稳定,降低夜间低血糖发生率,促进次日血糖达标。

关键词： 慈竹   竹秆多糖   加压热水提取   抗氧化活性   结构表征  

摘要： 通过加压热水提取(PHWE)法提取慈竹(Bambusa emeiensis)竹秆多糖,采用响应面法优化提取工艺条件,通过自由基清除力试验评估多糖抗氧化活性,并通过凝胶渗透色谱(GPC)和红外光谱(FT-IR)解析纯化多糖的结构。研究结果表明:提取温度显著影响总糖得率,提取时间显著影响多糖的降解程度(多糖/总糖比)。最佳提取条件为提取温度139.5℃、提取时间32 min,液料比15.5∶1(mL∶g)。在此条件下,慈竹竹秆的总糖提取得率为1.39%,多糖提取得率为0.81%,多糖/总糖比值为0.57。慈竹竹秆多糖具有较好的抗氧化活性,清除DPPH·、·ABTS^(+)、·OH的半数抑制质量浓度(IC50值)分别为1.89、0.86和0.22 g/L。通过DEAE-52纤维素柱分离纯化,得到1个纯化多糖组分PWDP-N,其重均分子质量为14484 u,分散指数为1.00。PWDP-N具有中性多糖的特征红外光谱吸收峰,单糖组成分析显示其由甘露糖、半乳糖、葡萄糖等8种单糖组成。