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关键词： 神农香菊   萜类合酶   原核表达   功能验证   β-罗勒烯  

摘要： 【目的】神农香菊(Chrysanthemum aromaticum)是重要的野生观赏植物,因其独特的香气而闻名。萜类合酶是催化神农香菊萜类化合物形成的关键酶,因此,本研究对神农香菊中β-罗勒烯合成的关键萜类合酶基因进行功能鉴定。【方法】结合挥发物代谢组学分析、基因表达分析、生物信息学分析、蛋白原核表达和体外酶活技术,对神农香菊的一个萜类合酶基因CaTPS30进行了功能表征。【结果】在神农香菊不同组织中共检测到9种挥发性单萜烯类化合物,神农香菊叶中相对含量最高的单萜烯为β-罗勒烯(1.299%)和γ-松油烯(1.572%)。荧光定量结果显示,候选基因CaTPS30在神农香菊叶中的表达量最高,花中的表达量最低。CaTPS30的表达趋势与β-罗勒烯在不同器官中的含量高度一致。对CaTPS30基因克隆后,发现其编码了由584个氨基酸组成的蛋白质,为不稳定的亲水性蛋白,其分子量为67.55 kDa。系统进化分析表明,CaTPS30属于TPS-b亚家族,含有DDXXD和NSE/DTE保守基序。体外酶活检测结果发现,CaTPS30重组蛋白能够催化香叶基焦磷酸(GPP)产生较高含量的β-罗勒烯和少量的别罗勒烯。【结论】研究结果进一步解析了神农香菊萜类化合物合成的分子机制,为菊花芳香性状的改良提供了一定的理论参考。

关键词： 冷链食品   病原微生物   核酸检测   食品安全  

摘要： 冷链食品的病原微生物污染对食品品质和安全构成严重威胁。核酸检测技术因其高灵敏度和特异性,已成为冷链食品病原微生物检测的重要手段。本文系统综述了近年来冷链食品中病原微生物核酸检测技术的研究进展,包括核酸分子检测技术(聚合酶链式反应、等温核酸扩增、成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白系统和测序技术)、原位核酸分析技术(荧光原位成像、拉曼及红外光学成像技术)、便携式现场检测技术(微流控芯片与纸基检测技术)和人工智能(artificial intelligence,AI)辅助智能化检测技术,并对比分析了不同方法的检出限、耗时、成本及适用场景。同时,重点探讨了当前技术面临的挑战,如低温环境对检测试剂的影响、多病原体同时检测局限及现场实时监测工具的开发。最后,展望了AI与物联网技术辅助在线监测系统等未来发展方向,以期为冷链食品安全的精准监测和高效防控提供理论参考和技术支撑。

关键词： 多房棘球绦虫   Tetraspanin 5   单克隆抗体   包虫病   CAR-T免疫治疗  

摘要： 制备并鉴定针对多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)Tetraspanin 5(TSP5)蛋白的单克隆抗体,评估其在包虫病诊断与免疫治疗中的应用潜力。通过基因合成构建pET-28a-TSP5原核表达载体,诱导表达并纯化重组TSP5蛋白;以该蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术筛选阳性杂交瘤细胞株,经有限稀释法进行亚克隆筛选;通过间接ELISA检测抗体效价,采用免疫荧光法分析抗体与天然组织中TSP5蛋白的结合特性,并对抗体可变区序列进行测序与分析。结果显示,本试验成功构建pET-28a-TSP5表达载体,表达并纯化出大小约为8.6 kDa的重组TSP5蛋白(对应其膜外结构域)。经细胞融合与亚克隆筛选,获得一株稳定分泌抗TSP5单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B7G12。间接ELISA检测显示该抗体效价达1∶243000,免疫荧光检测结果表明该抗体可特异性识别多房棘球蚴组织中原头蚴与囊壁表面的TSP5蛋白。抗体可变区测序结果显示该抗体重链与轻链CDR区序列明确,具备高亲和力结合潜力。本研究成功制备了高效价、高特异性的抗TSP5单克隆抗体,该抗体能够精准结合多房棘球绦虫组织中的TSP5蛋白,为泡型包虫病的分子诊断提供了新型工具,并为后续CAR-T疗法及抗体药物开发提供了重要依据。

关键词： 多星韭   二氢黄酮醇4-还原酶   基因克隆   表达分析   花青素  

摘要： 二氢黄酮醇4-还原酶(Dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是花青素合成通路上的关键酶,其表达与花青素积累及花色呈现密切相关。为了探究DFR基因与多星韭(Allium wallichii)花色形成的关系,以紫花和白花多星韭为研究材料,利用RT-PCR技术克隆其DFR基因,并进行表达分析。结果克隆得到4条DFR等位基因,称作AwDFRs,包括紫花中的AwDFR-P1,AwDFR-P2和白花中的AwDFR-W1,AwDFR-W2;AwDFRs基因的开放阅读框均为1155 bp,编码384个氨基酸。序列比对分析表明,AwDFRs蛋白含有完全相同的NADPH保守结构域和底物特异性结合结构域。系统进化树分析表明,AwDFRs蛋白与洋葱DFR亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示,AwDFRs在花瓣中的表达量显著高于其他组织,且在粉色、紫色和深紫色多星韭花中,随着花瓣发育和着色过程,AwDFRs的表达量逐渐升高;而在白花多星韭的整个花发育阶段,AwDFRs几乎都不表达。以上结果表明,多星韭花色差异形成的原因可能与AwDFRs基因的差异表达有关。AwDFRs在多星韭花青素合成积累过程中可能扮演着重要角色。

关键词： 桦褐孔菌   液态发酵   超声波联合外源因子   协同诱导   高产多糖  

摘要： 本研究旨在通过超声波与外源因子协同诱导桦褐孔菌高产多糖,突破桦褐孔菌多糖产量低,不能满足应用需求的技术瓶颈。以桦褐孔菌胞外多糖为主要优化指标,筛选最佳超声诱导条件(菌龄5 d,超声温度40℃,超声时间15 min,超声功率50 W)与最佳外源因子以及添加质量浓度(VB_(2)60μg/mL),协同诱导桦褐孔菌高产多糖。超声与外源因子单一诱导后桦褐孔菌多糖含量分别为288.534 mg/150 mL和290.396 mg/150 mL,而协同诱导组多糖含量达302.375 mg/150 mL,均高于单一处理组。超声可显著促进营养物质进入细胞,使得桦褐孔菌多糖的产量高达244.149 mg/150 mL,外源因子的添加提高了糖代谢的相关酶活,添加60μg/mL VB_(2)于培养基内,EPS产量可达231.679 mg/150 mL。相比单一处理方式而言,协同诱导可进一步提高细胞通透性、提高GALE酶(UDP-葡萄糖向UDP-半乳糖转化酶)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶等相关酶活性而激活部分糖醛酸通路,EPS含量提高了51.01%。同时,可通过改变协同诱导技术中的葡萄糖、甘露糖、半乳糖参数,优化桦褐孔菌多糖的DPPH自由基清除能力。

关键词： 间充质干细胞源性外泌体   超滤法   试剂盒   形态学特征  

摘要： 外泌体是细胞分泌的30~150 nm双层膜纳米囊泡,含蛋白质、核酸和脂质。间充质干细胞外泌体因来源明确、生物负担低,被用于无细胞治疗。本研究以脂肪间充质干细胞为模型,采用超滤联合试剂盒提取外泌体,并利用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)、纳米颗粒跟踪分析技术(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)、二喹啉甲酸(Bicinchoninic Acid,BCA)进行鉴定。结果显示,蛋白浓度为745~815μg/mL、粒径为(90±5)nm、浓度为(2.3±0.2)×10^(8) particles/mL时提示纯度高,方法稳定可重复,适用于相关研究与质量控制。

关键词： 超声提取   麦冬多糖   热分析动力学  

摘要： 本文旨在分析超声提取麦冬多糖的热分解动力学特性,揭示其热稳定性及降解动力学。采用超声提取法从麦冬中获取粗多糖,并通过色谱柱进行分离纯化,得到麦冬多糖。采用热重分析法分析麦冬多糖的热稳定性,利用Flynn-Wall-Ozawa(FWO)法和Kissinger-Akahira-Sunose(KAS)法计算其在第二步失重过程中的表观活化能(E_(a)),并对非等温动力学数据进行分析。结果表明:在升温过程中,麦冬多糖出现三次显著质量损失;降解初始阶段,E_(a)值较低,随着降解程度加深,E_(a)逐渐升高。FWO法和KAS法计算得到的平均表观活化能分别为105.12和101.64 kJ/mol。通过非等温积分动力学方程拟合,确定最佳动力学模型,其计算得到的E_(a)值与KAS法的结果更为接近。

关键词： 大菱鲆   黄芪多糖   巨噬细胞   免疫调节  

摘要： 为探明黄芪多糖对巨噬细胞的免疫调节机制,体外分离体质量(346.00±95.72)g的6~7月龄大菱鲆头肾巨噬细胞后,经条件筛选确定以800μg/mL的黄芪多糖作用巨噬细胞24h后,通过蛋白质组学技术分析细胞中的差异蛋白及信号通路,用分子对接技术评估黄芪多糖与通路受体蛋白的互作,初步明确黄芪多糖对巨噬细胞的免疫调节机制。试验结果显示:用50~1000μg/mL质量浓度的黄芪多糖刺激巨噬细胞24h,黄芪多糖对巨噬细胞无细胞毒性作用,而具有一定的促细胞生长作用;黄芪多糖可刺激巨噬细胞产生一氧化氮,当质量浓度大于800μg/mL时,一氧化氮分泌量趋于稳定。800μg/mL蛋白质组学结果显示,TNF、PI3K-Akt和NF-κB信号通路相关蛋白表达量上调。分子对接结果显示,黄芪多糖与Toll样受体中的TLR2、TLR3以及TLR22相互作用,分别形成1个、2个、3个氢键。推测TLR22可能是黄芪多糖激活大菱鲆头肾巨噬细胞的核心靶点。本试验初步确定,800μg/mL质量浓度的黄芪多糖通过激活TNF、PI3K-Akt和NF-κB信号通路,调节细胞因子的表达发挥对大菱鲆头肾巨噬细胞的免疫调节作用,TLR22可能参与了黄芪多糖识别过程。

关键词： 鲐鱼   蛋白质   肽   功能特性   功能活性  

摘要： 鲐鱼不仅蛋白含量丰富,且必需氨基酸种类齐全,是优质海洋动物蛋白的重要来源。国内外研究表明:鲐鱼蛋白肽具有抗氧化、抗疲劳、促矿物质吸收和调节免疫等多种功能活性。这些特征使其在功能食品领域展现出巨大的开发潜力。此外,鲐鱼蛋白肽具有溶解性、持水性、起泡性以及乳化性等良好的功能特性,因此成为制备食品乳化剂、泡沫型产品起泡剂的理想原料。笔者系统综述了鲐鱼蛋白肽的制备方式,以及其在功能活性与特性方面的研究进展,以期为鲐鱼蛋白资源的精深加工与综合利用提供研究思路。

关键词： 响应面   南非叶   多糖   抗氧化   自由基清除  

摘要： 天然多糖因具有降血脂、诱导肿瘤细胞凋亡和抗氧化等作用而备受关注,南非叶有药用和食用价值,含多种活性成分,但对其多糖提取优化及抗氧化功能研究较少.研究以南非叶为原料,料液比、提取时间和提取温度为自变量,多糖提取率为响应值,采用Box-Behnken响应面设计,通过Design-Expert软件建立二次多项式模型进行优化提取工艺.南非叶多糖的最佳提取工艺为:料液比1:51 g/mL,提取时间4 h,提取温度86℃,提取率为7.68%.通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基清除实验评估了南非叶多糖的抗氧化能力.结果显示南非叶多糖对DPPH和ABTS自由基清除能力分别相当于维生素C清除能力的73.6%和66.5%,具有较好的抗氧化活性,为南非叶多糖作为天然抗氧化剂的开发利用提供了理论依据.