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关键词： 多角度静态光散射   分子量   生物大分子表征   影响因素   dn/dc   第二维里系数(A_(2))   检测器间体积   外推形式   荧光干扰  

摘要： 多角度静态光散射技术是生物大分子领域重要的表征手段之一,能够获得生物大分子丰富的结构信息,如分子量、分子量分布、均方根旋转半径、第二维里系数、分子链构象等,但该技术原理较为复杂,表征的准确性受多种因素影响。本文介绍了生物大分子稀溶液中多角度静态光散射的基本原理,针对该技术准确表征的影响因素,从dn/dc、第二维里系数(A_(2))、延迟体积、外推形式、荧光干扰等方面进行文献综述和经验总结。本文可以帮助分析工作者更好地理解并掌握这一技术,以获得准确的表征数据。

关键词： 骨质疏松症   骨髓间充质干细胞   细胞衰老   中医药   信号通路   自噬  

摘要： 骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种全身骨代谢障碍疾病。基于国内外研究,探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSC)衰老与OP的关系,阐述中药、单体活性成分及复方中药对BMMSC衰老的干预机制及对OP的防治作用。列举了白藜芦醇和姜黄素调控氧化应激,黄芪、金匮肾气丸及蒙花苷等调控细胞信号通路,牛膝甾酮、白藜芦醇和淫羊藿苷等调控靶向自噬途径,延缓BMMSC衰老;中药复方二仙汤、右归丸通过调控BMMSC防治OP。

关键词： 肺腺癌   顺铂耐药   肿瘤细胞干性   钙蛋白酶小亚基1  

摘要： 目的:探讨钙蛋白酶小亚基1(CAPN4)调控肺腺癌顺铂耐药性及肿瘤干细胞干性的作用机制,为通过靶向干性逆转耐药提供实验依据。方法:收集2023年1月至2024年1月期间在福建省肿瘤医院手术切除的10例肺腺癌患者的组织标本,通过免疫组织化学(IHC)法检测5例对顺铂耐药与5例敏感肺腺癌组织中CAPN4的表达差异,并进行组织化学评分(H评分)。利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达谱交互分析(GEPIA)平台进行肺癌CAPN4基因表达相关的生存分析。另收集2例对顺铂耐药、2例敏感的肺腺癌组织标本,建立肺腺癌类器官(PDO)模型,采用H-E、IHC染色评估PDO与原发肿瘤形态学的一致性。采用慢病毒介导的shRNA技术敲减CAPN4基因表达,运用qPCR和WB法检测PDO中干细胞标志物ALDH1A1、CD133、Nanog和SOX9的基因和蛋白表达水平。通过腺苷三磷酸(ATP)法检测CAPN4下调后肺腺癌PDO对顺铂的敏感性变化,使用半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性检测法评估CAPN4下调的肺腺癌PDO经顺铂处理后的凋亡情况。结果:IHC检测结果表明,耐药肺腺癌患者组织中CAPN4蛋白的表达水平显著上调(P<0.05)。在TCGA数据库肺腺癌患者队列中,CAPN4的高表达与肺腺癌患者的不良预后(OS缩短)显著相关(HR=1.4,P<0.05)。耐药患者来源的PDO中CAPN4蛋白表达、干细胞标志物的基因和蛋白表达水平均显著上调(均P<0.05)。在顺铂敏感性测试中,耐药患者来源PDO的IC50值显著高于敏感患者来源的PDO(P<0.05)。敲低CAPN4后,耐药患者来源的PDO的干细胞标志物表达显著降低,顺铂敏感性增强(P<0.05)。结论:敲低CAPN4可降低肺腺癌PDO的干细胞标志物表达,显著增强其对顺铂的敏感性,为逆转肺癌顺铂耐药提供了潜在治疗靶点。

关键词： SERPINC1基因   rs2227589位点   易栓症   妊娠   单核苷酸多态性  

摘要： 目的研究SERPINC1基因rs2227589单核苷酸多态性位点与温州籍和非温州籍孕妇易栓风险的关联性。方法选取2022年12月—2023年11月温州籍孕妇354例及非孕妇514例,非温州籍孕妇184例及非孕妇91例。采集外周血,提取基因组DNA,利用MassARRAY SNP基因分型平台检测rs2227589位点多态性,利用SPSS 26.0软件进行统计学分析。结果SERPINC1基因rs2227589位点在温州籍、非温州籍女性人群中均存在CC、CT、TT 3种基因型,其中在温州籍妊娠组和非妊娠组中的分布频率分别为42.1%和39.5%,42.9%和48.4%,15.0%和12.1%,在非温州籍妊娠组和非妊娠组中的分布频率分别为44.6%和48.4%,45.1%和37.4%,10.3%和14.3%,均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。SERPINC1基因rs2227589的CC基因型在非温州籍非妊娠组人群的检出频率高于温州籍非妊娠组人群,但差异无统计学意义(P>0.05),在妊娠组中温州籍与非温州籍人群间差异无统计学意义(P>0.05)。共显性遗传分析模型显示3种基因型在温州籍妊娠组和非妊娠组、非温州籍妊娠组和非妊娠组人群中的差异均无统计学意义(均P>0.05)。进一步对非温州籍女性人群中各基因型的独立效应进行回归分析,显示TT基因型在非妊娠组中的分布频率高于妊娠组,但差异无统计学意义(P>0.05,OR=0.691,95%CI:0.325~1.470)。结论SERPINC1基因rs2227589单核苷酸多态性位点与温州籍、非温州籍孕妇易栓风险的发生、发展无显著相关性。

关键词： 芍药汤   细胞凋亡   溃疡性结肠炎   肿瘤坏死因子(TNF)受体超族成员6(Fas)/Fas配体(FasL)信号通路   人结直肠上皮腺癌细胞(Caco-2细胞)  

摘要： 目的:探讨不同浓度芍药汤含药血清激活肿瘤坏死因子(TNF)受体超族成员6(Fas)/Fas配体(FasL)信号通路抑制细胞凋亡对脂多糖(LPS)诱导人结直肠上皮腺癌细胞(Caco-2)炎症的影响。方法:将Caco-2细胞分为对空白组,模型组(LPS,10 mg·L^(-1)),芍药汤含药血清5%、10%、15%、20%组,Fas抑制剂组(KR-33493,20 mmol·L^(-1))。除空白组外,其他组用10 mg·L^(-1)LPS刺激培养24 h制备细胞炎症模型,造模成功后,空白组、Fas抑制剂组和模型组给予空白血清,芍药汤含药血清组分别加入相应浓度含药血清处理24 h,Fas抑制剂组给予KR-33493预处理1 h。细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测各组细胞存活率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、IL^(-1)β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;流式细胞术检测细胞凋亡水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测组织Fas、FasL、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测组织Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果:实验结果中,与空白组比较,模型组细胞存活率显著下降(P<0.01);与模型组比较,5%芍药汤含药血清组差异无统计学意义,10%、15%、20%芍药汤含药血清组细胞存活率显著增高(P<0.01)。由于5%芍药汤含药血清组与模型组差异无统计学意义,故后续研究选取10%、15%、20%芍药汤含药血清进行实验。与空白组比较,模型组IL-6、IL^(-1)β、TNF-α含量均显著增高(P<0.01);细胞凋亡率显著升高(P<0.01),模型组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL^(-1)β、TNF-α含量均显著降低(P<0.01),Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率显著降低(P<0.01),Fas抑制剂组及各芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),与10%芍药汤含药血清组比较,15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL^(-1)β、TNF-α含量均降低(P<0.05,P<0.01),15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01),15%、20%芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论:芍药汤含药血清能减少LPS干预下Caco-2细胞炎症因子的含量,下调Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白及mRNA表达水平,上调Bcl-2蛋白及mRNA表达水平,其作用机制可能与其调控Fas/FasL信号通路,抑制溃疡性结肠炎肠上皮细胞凋亡有关。

关键词： 灵孢多糖   双环己酮草酰二腙   多发性硬化   髓鞘修复与再生   炎症   JAK2/STAT3信号通路  

摘要： 目的探究灵孢多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLPS)促进双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的慢性脱髓鞘小鼠髓鞘修复与再生的作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为4组:Normal+NS、Normal+GLPS、CPZ+NS和CPZ+GLPS。通过0.2%CPZ建立慢性脱髓鞘模型,并采用旷场和高架十字迷宫实验观察小鼠的行为变化;免疫荧光染色Western blot检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达;ELISA法测定脑匀浆中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10的含量变化;免疫荧光染色观察离子化钙结合适配分子1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)和神经胶质抗原2(neural-glial antigen 2,NG2)的表达;RT-qPCR和Western blot分析MBP、iNOS、COX-2、JAK2、STAT3的mRNA及蛋白表达。结果CPZ+NS组小鼠体质量明显下降,认知行为异常,髓鞘再生受阻,促炎因子表达上升,抗炎因子水平下降,Iba1和NG2表达增加,JAK2/STAT3信号通路被激活。GLPS干预后,小鼠体质量回升,髓鞘再生现象出现,认知行为改善,炎症因子表达下降,抗炎因子增加,NG2表达进一步升高,抑制小胶质细胞增殖及JAK2/STAT3信号通路激活。结论GLPS能够改善慢性脱髓鞘小鼠的认知行为异常及炎性反应,抑制JAK2/STAT3信号通路,促进髓鞘的修复与再生。

关键词： 微小RNA-221   心力衰竭   磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号通路   炎症因子   纤维化  

摘要： 目的:探究微小RNA-221(miR-221)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞炎症和纤维化的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路的调控作用。方法:将体外培养的大鼠心肌H9C2细胞分为对照组(不做干预)、LPS组(10µg/ml LPS)、实验组(10µg/ml LPS+10、20、40、80µmol/L黄芩苷)、mimics NC组(10µg/ml LPS+转染mimics NC)、miR-221 mimics组(10µg/ml LPS+转染miR-221 mimics)、inhibitor NC组(10µg/ml LPS+转染inhibitor NC)、miR-221 inhibi‐tor组(10µg/ml LPS+转染miR-221 inhibitor)、10+miR-221 mimics组(10µg/ml LPS+10µmol/L黄芩苷+转染miR-221 mimics)、10+miR-221 inhibitor组(10µg/ml LPS+10µmol/L黄芩苷+转染miR-221 inhibitor),干预24 h。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、ELISA、CCK-8、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)和Transwell小室法测定miR-221表达水平、炎症因子水平、细胞活力、细胞增殖与迁移能力,Western blot测定上皮-间质转化(EMT)相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(FN)]和PI3K/AKT通路相关蛋白水平。结果:实验组中的10µmol/L黄芩苷组中黄芩苷提高了LPS诱导的细胞活力(P<0.05),因此选择LPS+10组进行后续实验。miR-221 mimics组中miR-221水平高于mimics NC组(P<0.05),在miR-221 inhibitor组中miR-221水平低于inhibitor NC组(P<0.05),证明miR-221 mimics组和miR-221 inhibitor组转染成功。与对照组比较,LPS组细胞增殖率、E-cadherin蛋白表达水平显著下降(P<0.05),miR-221表达水平、细胞迁移数、IL-6和TNF-α水平及p-PI3K、p-AKT、N-cadherin、FN和Vimentin蛋白表达水平显著升高(P<0.05);LPS+10组较LPS组显著扭转了上述指标的变化(P<0.05);10+miR-221 mimics组较LPS+10组miR-221 mimics削弱了黄芩苷在LPS诱导细胞中的上述作用(P<0.05),而10+miR-221 inhibitor组中的miR-221 inhibitor增强了黄芩苷在LPS诱导细胞中的上述作用(P<0.05)。结论:黄芩苷通过下调miR-221表达抑制心肌细胞H9C2的迁移、炎症并促进其增殖,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号转导相关。

关键词： 子宫内膜异位症   妊娠结局   微小核糖核酸-34a-5p   胰岛素样生长因子结合蛋白质3   腹腔镜检查   预测  

摘要： 目的:探讨血清微小核糖核酸-34a-5p(miR-34a-5p)、胰岛素样生长因子结合蛋白质3(IGFBP3)表达水平变化对子宫内膜异位症患者腹腔镜手术后妊娠结局的影响。方法:选取2020年6月至2022年6月共106例行腹腔镜手术的子宫内膜异位症患者为观察组,根据妊娠结局46例自然妊娠成功者为妊娠组,51例自然妊娠失败者为未妊娠组,另选择106例健康体检志愿者为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应测定血清miR-34a-5p含量;酶联免疫吸附法测定血清IGFBP3浓度;双荧光素酶报告实验验证miR-34a-5p与IGFBP3基因靶向关系;Pearson法分析患者血清miR-34a-5p、IGFBP3表达水平相关性;多因素Logistic分析患者术后妊娠结局的影响因素;受试者工作特征曲线评估血清miR-34a-5p、IGFBP3水平对患者术后自然妊娠结局的预测价值。结果:与对照组相比,观察组血清miR-34a-5p表达水平下降,IGFBP3表达水平升高(P<0.05),未妊娠组血清miR-34a-5p表达水平低于妊娠组,IGFBP3表达水平较高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示,miR-34a-5p靶向调控IGFBP3表达;Pearson分析结果显示,子宫内膜异位症患者血清miR-34a-5p、IGFBP3表达水平呈负相关(r=-0.549,P<0.001)。多因素Logistic分析表明血清抗精子蛋白17抗体、抗顶体蛋白酶抗体、糖类抗原125、miR-34a-5p、IGFBP3是术后妊娠结局的影响因素(P<0.05);受试者工作特征曲线表明,血清miR-34a-5p、IGFBP3水平联合预测患者术后自然妊娠失败曲线下面积为0.969,大于miR-34a-5p(曲线下面积=0.876,Z=2.206,P=0.027)与IGFBP3(曲线下面积=0.863,Z=2.691,P=0.007)单独预测。结论:子宫内膜异位症患者血清miR-34a-5p表达水平下降,IGFBP3表达水平升高,与腹腔镜手术后妊娠结局具有相关性。

关键词： 藜麦   氨基酸含量   主成分分析   方差分析  

摘要： 为探究3种颜色藜麦的氨基酸含量差异,从而为藜麦品种选育及营养价值评价提供理论支撑。本研究以红色、黑色、白色藜麦为研究对象,运用氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量,并进行主成分分析、方差分析、相关性分析。结果显示,3种藜麦籽粒均富含氨基酸,其中苯丙氨酸含量最高。主成分分析表明,4个主要成分对氨基酸变异的累计贡献率高达95.26%。方差分析结果表明,3种藜麦的谷氨酸、天冬氨酸等8种氨基酸差异不显著;苯丙氨酸、丝氨酸等10种氨基酸含量差异显著(P<0.05)。此外,三种藜麦的黄酮含量差异达显著水平(P<0.05)。研究结果为品种的进一步营养评价奠定了基础。

关键词： 大口黑鲈   大口黑鲈双RNA病毒   VP2蛋白   多克隆抗体  

摘要： 【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1024000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。