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关键词： 无患子   细胞周期蛋白   性别分化   基因克隆   功能研究   基因表达  

摘要： 【目的】探究无患子SmCYCD3;2基因在花性别分化过程中的作用,为提高无患子花雌雄比提供有价值的参考基因,进而为通过分子设计育种提高无患子果实产量奠定理论基础。【方法】克隆无患子SmCYCD3;2基因,对其进行多序列比对和系统发育进化分析,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析其在不同器官中的表达模式。构建过表达载体并异源转化拟南芥,对比观察其生长表型,并对其成熟花药进行亚历山大染色,采用花粉萌发法观测花粉活力和体外花粉萌发情况,借助扫描电镜观察花药及花粉的形态及表面特征。【结果】(1)SmCYCD3;2基因序列全长为1092 bp,编码364个氨基酸,与毛果杨亲缘关系较近。(2)RT-qPCR分析发现,SmCYCD3;2基因在无患子雌花中表达量最高,叶片次之,雄花中表达量较低。(3)与野生型植株相比,转基因拟南芥表现出一系列显著的生长表型变化:生长速度减慢,株高明显降低,叶片出现卷曲现象,且每个茎节处略有弯曲。此外,其花器官表型也发生了显著变化,具体表现为雌蕊伸长,雄蕊数量减少且变短,花粉活性降低,果荚短小。(4)在转基因拟南芥植株中,细胞周期相关基因(AtCYCDs)和促进雌蕊伸长发育的基因(AtCRC)的表达水平显著上调,与雄蕊发育相关的基因(AtAP3、AtPI、AtAMS和AtDEL)以及与茎、叶发育相关的基因(AtPIN)的表达水平显著下调。【结论】SmCYCD3;2基因能够调控茎、叶发育,促进雌蕊伸长,抑制雄蕊发育,在无患子性别分化过程中发挥重要作用,研究结果为CYCD3基因的功能解析提供了新的见解,为提高无患子花雌雄比、提高果实产量奠定了前期理论基础。

关键词： 蚕卵   家蚕微孢子虫   高丰度蛋白   单克隆抗体  

摘要： 家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,NB)感染家蚕后可通过蚕卵垂直传播,是蚕种生产中的唯一法定检疫对象。鉴定蚕卵中家蚕微孢子虫的高丰度蛋白,可为该病原的检测提供潜在靶点。制备带毒蚕卵,利用RIPA强裂解液提取不同催青时间的蚕卵总蛋白并开展非标记蛋白定量质谱鉴定,根据蛋白质表达水平筛选得到高丰度病原蛋白NBO_76g0007。生物信息学分析表明NBO_76g0007由211个氨基酸组成,预测蛋白质分子质量约为23 kD,等电点约为8.63,存在1个跨膜结构域,推测它是一种膜蛋白。利用原核表达的NBO_76g0007免疫Balb/c小鼠,制备了其单克隆抗体。Western blot显示该单抗特异性识别带毒蚕卵以及孢子中的NBO_76g0007蛋白。免疫定位结果表明,在成熟孢子中NBO_76g0007蛋白主要定位于极膜层和后极泡;在孢原质中NBO_76g0007蛋白集中定位于膜上;此外,孢子发芽后,NBO_76g0007蛋白可定位于极管。综上,本研究系统性地分析了带毒蚕卵中家蚕微孢子虫的蛋白类型和丰度,鉴定到的高丰度蛋白NBO_76g0007及其特异性单抗为带毒蚕卵中家蚕微孢子虫的检测奠定了基础。

关键词： C反应蛋白   原核表达   分子伴侣   单克隆抗体  

摘要： [目的]本研究旨在制备猪C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的单克隆抗体,为建立监测猪血清中CRP浓度的血清学方法提供生物材料。[方法]优化CRP基因并克隆至原核表达载体pET28a,再将分子伴侣质粒pTF16与重组质粒共转化并表达重组CRP,将该蛋白作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合、间接ELISA筛选,得到分泌抗重组CRP的杂交瘤细胞,制备单克隆抗体,进行效价测定及亚型鉴定;采用Western blot检测其特异性,进行生物素标记,制备生物素标记单克隆抗体。[结果]成功构建重组质粒及重组表达载体,经细胞融合和亚克隆成功获得2株分泌抗重组猪CRP单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为CRP-Mab1和CRP-Mab2,2株杂交瘤细胞上清液效价分别为1∶409600和1∶204800。Western blot结果显示,2株单克隆抗体均能与重组猪CRP进行特异反应。亚型鉴定结果显示,CRP-Mab1抗体轻链属于κ型,重链属于IgG1型;CRP-Mab2单克隆抗体轻链属于κ型,重链属于IgM型。获得生物素标记的单克隆抗体CRP-Mab1-Bio,其效价可达1∶12800。[结论]成功制备2株针对重组猪CRP的单克隆抗体,并进行生物素标记,为猪血清CRP浓度检测及炎症监测方法的开发提供了重要的生物材料。

关键词： 肠道干细胞   生态位   肠道稳态   饮食模式  

摘要： 位于肠隐窝底部的肠道干细胞(intestinal stem cells,ISCs)是驱动肠上皮修复与快速更新的关键因素,其增殖和分化功能受生态位微环境的精细调控。ISCs作为膳食营养的感受器,可通过响应不同饮食信号调节肠道稳态。作者总结了调控ISCs的主要信号通路,综述了高脂饮食、间歇性禁食、热量限制及生酮饮食等饮食模式对ISCs稳态的影响和作用机制,旨在为靶向ISCs的膳食干预策略的开发及其维持肠道健康和机体稳态中的应用提供理论依据。

关键词： 巨噬细胞表型极化   代谢调控   葡萄糖   脂肪酸   氨基酸  

摘要： 巨噬细胞作为人体固有免疫细胞之一,主要发挥抗原提呈和吞噬的作用。巨噬细胞分为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。其中M2型巨噬细胞在不同的微环境中又分为M2a、M2b、M2c和M2d四型。M1型巨噬细胞由IFN-γ及LPS激活,具有促炎、抑制微生物和肿瘤生长的作用;M2型巨噬细胞则由IL-4或IL-13激活,具有抗炎活性和维持组织稳态、免疫调节、吞噬、促血管生成及影响肿瘤形成和进展的作用。巨噬细胞各表型的特殊功能主要由极化信号控制,极化信号可通过上调不同的转录程序来激活巨噬细胞。该文聚焦糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢3种代谢途径与不同巨噬细胞的极化关系进行综述,并为与巨噬细胞极化相关的疾病提供新的解决思路。

关键词： 小麦加工   新技术   蛋白质结构  

摘要： 本文研究了小麦加工过程中,超高压处理、微波技术、酶工程技术等新技术对小麦蛋白质结构与功能特性的影响。首先从一至四级结构的变化,阐述了新技术对小麦蛋白质结构的影响,包括酶解技术致使肽键断裂改变一级结构,超高压和微波处理导致三级结构构象改变以及亚基解离与聚合引起的四级结构变化等。同时,分析了新技术对小麦蛋白质溶解性、乳化性、发泡性等功能特性的影响,旨在为小麦加工产业现代化转型提供有力支撑。

关键词： 胃癌   中药多糖   机制   研究进展  

摘要： 胃癌是一种恶性程度高且死亡率高的恶性肿瘤。中药多糖是一种天然高分子化合物,来源广泛,在治疗胃癌方面,具有多靶点、不良反应少等优点。通过总结中药多糖通过调节PI3K/Akt、EMT、Wnt/β-catenin、Fas/FasL和线粒体凋亡途径及肿瘤微环境等信号通路抑制胃癌的发生发展,为中药多糖治疗胃癌提供理论依据,同时也为治疗胃癌提供新的选择。

关键词： 党参   总氨基酸   含量测定   UV-VIS  

摘要： 目的:建立党参中总氨基酸含量的测定方法。方法:收集12批不同产地的党参。以L-精氨酸为对照品,采用茚三酮显色体系,建立用紫外可见分光光度法(UV-VIS)测定党参中总氨基酸含量方法。结果:确定茚三酮比色法的最佳反应条件为:缓冲液pH 7.2,用量0.5 mL,茚三酮显色剂用量0.8 mL,沸水浴加热15 min;L-精氨酸在7.3~16.9μg/mL范围内与吸光度线性关系良好,回归方程为A=77.155c-0.293(R^(2)=0.9995,n=6),平均加样回收率为99.4%(RSD=2.0%,n=6),12批党参中总氨基酸含量为27.0~54.2 mg/g。结论:本研究建立的方法操作简单、专属性强、重复性良好,可用于党参药材中总氨基酸的含量测定。

关键词： 镉   黄芪多糖   维生素C   Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路  

摘要： 目的 探究Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路在黄芪多糖联合维生素C对镉致雌性大鼠生殖系统损伤的保护作用。方法 24只SD雌鼠随机分4组(每组6只):对照组腹腔注射0.9%氯化钠溶液,Cd组腹腔注射Cd Cl2,给药2组给予灌胃Aps+Vc(高低剂量)处理。试验结束后,检测血清E2、P4含量,观察卵巢病理及细胞凋亡,检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果 腹腔注射Cd Cl2,经黄芪多糖联合维生素C干预后,Aps+Vc低、高剂量组体毛光泽、进食量和取水量、对外界刺激反应均有明显改善,腹部未出现硬块、坏疽等现象;体重增长率、卵巢指数相对升高。ELISA结果显示,Aps+Vc低、高剂量组E2、P4水平显著提高。HE染色结果显示,Aps+Vc低、高剂量组卵巢组织微环境得到明显改善。TUNEL结果显示Aps+Vc低、高剂量组卵巢组织细胞凋亡率显著下降。IHC结果显示,Bax和Caspase-3蛋白在Aps+Vc低、高剂量组卵巢组织细胞中表达率显著降低;Bcl-2蛋白在卵巢组织细胞中表达率显著升高。Western blot结果显示,Aps+Vc低、高剂量组卵巢组织细胞中Bax和Caspase-3蛋白相对表达量下调、Bcl-2蛋白相对表达量上调,Bax/Bcl-2比值降低。结论 黄芪多糖联合维生素C可通过调控镉染毒雌性大鼠卵巢组织细胞中Bax/Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达抑制镉促进卵巢组织细胞的凋亡,调整卵巢组织细胞的凋亡过程,有效减少闭锁卵泡的生成,恢复雌性大鼠血清雌性激素水平,减少镉对卵巢的损伤,改善卵巢微环境并恢复卵巢功能,对临床上卵巢受到镉损伤后的治疗具有重要价值。

关键词： 植物乳杆菌N1   黑木耳多糖   PI3K/AKT信号通路   葡萄糖代谢  

摘要： 为探究植物乳杆菌N1发酵对黑木耳多糖的影响,采用乙醇沉淀提取多糖,经Sevage法脱蛋白,并从发酵前后的黑木耳液中分别分离出两种水溶性多糖,即黑木耳多糖(Auricularia auricula polysaccharide,AAP)和黑木耳发酵多糖(Fermented Auricularia auricula polysaccharide,FAAP),对AAP和FAAP的理化性质和生物活性进行了研究。实验结果表明:FAAP中D-甘露糖、D-岩藻糖、D-木糖、D-阿拉伯糖和D-葡萄糖醛酸的比例分别增加了6.7‰,1.4‰,1.8‰,34.3‰和31.2‰。主要多糖组分的分子质量从1.98×10^(6) Da(AAP)降低到1.45×10^(6) Da(FAAP),且三螺旋结构增加。利用胰岛素诱导HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模型,发现FAAP可以增加8.69%的细胞葡萄糖消耗量,调整糖尿病相关基因PI3K,AKT,GSK 3β和GLUT 2的相对表达量,PI3K/AKT信号通路的恢复可有效改善糖尿病斑马鱼的葡萄糖代谢紊乱,并增强其胰岛素抵抗。