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关键词： 黏多糖贮积症Ⅱ型   IDS基因   半合子突变   呼吸道感染  

摘要： 目的:探讨黏多糖贮积症Ⅱ型的临床表现、基因型及其家系追踪。方法:回顾分析1例黏多糖贮积症Ⅱ型患儿的临床资料及基因检测,对其母系男性后代追踪分析,并复习相关文献。结果:先证者,男,8岁6个月,存在智能、语言、体格发育落后,因反复呼吸道感染入院,伴特殊面容、舟型头、眉毛浓密、鼻梁低、口唇大而厚。基因测序发现患儿IDS基因第9号外显子c.1402C>T核苷酸错义突变,该突变属半合子致病突变,来自患儿母亲;家系分析发现患儿母亲2个胞妹均检测到携带该基因杂合突变,其各所生1名男孩基因型与患儿相同。结论:黏多糖贮积症Ⅱ型为X连锁隐性遗传病,一旦发现先证患儿,建议追踪其家系,以期及早发现致病患儿,尽早开始治疗。造血干细胞移植治疗效果较好。

关键词： 非洲猪瘟病毒   pH124R蛋白   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 首先,通过PCR扩增和同源重组技术构建了pET-28a-H124R重组原核表达质粒。经IPTG诱导,pH124R蛋白在大肠杆菌中高效表达,并通过镍柱亲和层析法纯化获得重组蛋白。随后,用pH124R重组蛋白免疫豚鼠,制备了特异性多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)对其进行检测,结果表明该抗体能够特异性识别ASFV感染细胞中表达的内源pH124R蛋白,且该蛋白主要定位于细胞质病毒工厂区域。本研究成功实现了ASFV pH124R蛋白的原核表达,并制备了可用于Western-blot和IFA试验的特异性多克隆抗体,为深入研究pH124R蛋白的生物学功能提供了重要生物学材料。

关键词： 甜菜   BvATPase4   转基因拟南芥   耐盐性   功能分析  

摘要： 甜菜(Beta vulgaris)是中国主要糖料作物之一,属中度耐盐植物。H^(+)-ATPase在植物盐胁迫响应中发挥重要作用,但其在糖料作物中的耐盐功能研究较为匮乏。为研究BvATPase4基因在甜菜中的耐盐功能,本研究基于转录组数据分离出该基因,进行生物信息学分析,并成功转入拟南芥中分析其在植物响应盐胁迫过程中发挥的作用。结果表明BvATPase4在叶中表达量最高,且被200 mmol·L^(−1)NaCl大量诱导表达。在盐胁迫下,转基因拟南芥的萌发率、存活率、根长、鲜重和叶绿素含量显著高于野生型;转基因拟南芥的Na^(+)/K^(+)较野生型更稳定,且超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性以及可溶性糖、可溶性蛋白、游离脯氨酸(Pro)含量显著增高,同时丙二醛(MDA)、超氧阴离子(O_(2)^(−)·)和过氧化氢(H_(2)O_(2))含量显著降低,表明BvATPase4能通过维持离子稳态、改善渗透调节和抗氧化调节来提升转基因植物对盐胁迫的耐受性。以上结果初步说明BvATPase4基因在甜菜中的耐盐功能,为甜菜耐盐性遗传改良提供重要候选基因。

关键词： 红三叶   干旱胁迫   MYB基因   基因克隆   表达分析  

摘要： 为探讨红三叶TpMYB-like基因干旱胁迫下的生物学功能,以红三叶为试验材料,利用PCR技术成功克隆TpMYB-like基因,并对其进行生物信息学分析和干旱胁迫下红三叶根、茎和叶组织的表达模式分析。结果表明,该基因全长为1269 bp、开放阅读框(ORF)编码626个氨基酸,含有2个MYB结构域,属于R2R3-MYB超家族;该蛋白含有47个磷酸化位点、5个潜在的糖基化位点、不含有信号肽和跨膜结构;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于线粒体;系统进化分析发现红三叶TpMYB-like与狭叶羽扇豆、木豆、绿豆、蒺藜苜蓿4个物种聚为一个分支且同源性为91%;qRT-PCR检测结果显示TpMYB-like在20%PEG-6000模拟干旱胁迫下的红三叶根、茎和叶中均可诱导表达,表达量为叶>根>茎。研究推测,红三叶TpMYB-like基因受干旱胁迫诱导表达,且该基因可能在红三叶抵御干旱胁迫的过程中起重要作用。

关键词： 银耳蒂头多糖   流变特性   黏度   触变性   共混体系  

摘要： 为充分开发银耳加工副产物——银耳蒂头资源,本研究以银耳蒂头多糖为研究对象,探讨不同加工参数对银耳蒂头多糖及共混体系流变学特性的影响;建立银耳蒂头多糖(TFSP)/卡拉胶(KC)共混体系,研究不同配比对体系流变特性的影响,并采用Herschel-Bulkley模型进行拟合分析。结果表明,TFSP在浓度大于0.6%时表现出凝胶特性;TFSP溶液的黏度随温度的升高而降低,且在酸性条件下更易形成凝胶结构;高压均质处理降低了TFSP溶液的黏度,黏度4 MPa对应的溶液向牛顿流体转变;TFSP/KC共混体系中,随着KC比例的增加,体系的流动性增强、触变性降低、假塑性和剪切稳定性得到改善。本研究可为银耳蒂头多糖在液态食品以及新产品开发中的应用提供数据支撑。

关键词： 蛋白质   分离纯化   传统技术   高分子聚合物   纳米材料   生物材料  

摘要： 蛋白质分离纯化是生物化学、生物技术及生物制药等领域中的关键环节,其效率和质量直接影响后续应用。随着生物技术的快速发展,新型材料的不断涌现为蛋白质纯化提供了更高效、更特异的方法,推动了该领域的革新。首先回顾了传统的蛋白质分离技术,如盐析沉淀、萃取、电泳、透析和色谱等,在过去几十年中得到了广泛应用和改进。这些方法虽然成熟且稳定,但仍存在灵敏度低、分辨率较差、操作繁琐等问题。接着,论述了新型蛋白质纯化材料及应用实例。例如,纳米材料(如磁性纳米颗粒、碳纳米管、碳量子点)具有高比表面积和可功能化特性,可提高吸附容量和选择性;高分子聚合物(如分子印迹聚合物、功能化聚合物材料)通过结构可设计性,进一步优化了蛋白质纯化的效率和特异性;生物材料(如多糖、核酸适配体)能实现高度特异性的靶向结合,减少非特异性吸附。此外,还对未来蛋白质纯化技术的发展趋势进行展望,将趋向于智能化、自动化和绿色可持续化,旨在为该领域的进一步发展和创新提供参考。

关键词： 淫羊藿苷   骨髓间充质干细胞   骨向分化   单磷酸腺苷活化蛋白激酶   沉默信息调节因子2同系物1   氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂-1α  

摘要： 目的:探讨淫羊藿苷在促骨髓间充质干细胞骨向分化过程中对单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子2同系物1(SIRT1)/氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂-1α(PGC1α)通路的影响。方法:以第3代骨髓间充质干细胞细胞为研究对象,将其分为对照组(正常培养)、骨向诱导组(在2 mmol/L L-谷氨酰胺、100 nmol/L地塞米松、10 mmol/L β-甘油磷酸酯、50μmol/L L-抗坏血酸-2-磷酸脂中进行骨向诱导)、淫羊藿苷低、中、高剂量组(在骨向诱导的基础上添加0.01,0.10,1.00μmol/L的淫羊藿苷)、抑制剂组(在淫羊藿苷高剂量组的基础上添加10μmol/L AMPK抑制剂Compound C)。CCK-8法检测细胞增殖;茜素红染色检测细胞矿化能力;ELISA试剂盒检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)的表达;Western Blot法检测细胞中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨保护素(OPN)和AMPK/SIRT1/PGC1α通路蛋白表达。结果:对照组无矿化结节形成;骨向诱导组有明显的矿化结节;淫羊藿苷低、中、高剂量组矿化结节直径变大,染色变深,数量增多;抑制剂组矿化结节颜色变浅,结节变少。骨向诱导组OD_(450)值、ALP、BMP-2、OPG、p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC1α表达高于对照组(P<0.05);淫羊藿苷低、中、高剂量组OD_(450)值、ALP、BMP-2、OPG、p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC1α表达高于骨向诱导组(P<0.05);抑制剂组OD_(450)值、ALP、BMP-2、OPG、p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC1α表达低于淫羊藿苷高剂量组(P<0.05)。结论:淫羊藿苷可以促进骨髓间充质干细胞的骨向分化,其机制可能是通过激活AMPK/SIRT1/PGC1α通路实现的。

关键词： 甘薯   IbGSTU7   过表达   花青苷   抗旱性  

摘要： 本研究通过分析前期的薯皮色变异转录组数据,克隆得到IbGSTU7基因,该基因开放阅读框(ORF)全长660bp,编码219个氨基酸。蛋白序列分析表明,IbGSTU7为酸性、亲水性、稳定性蛋白,且与甘薯近缘野生种Ipomoea triloba的亲缘关系最近,定位于细胞质中。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对IbGSTU7基因的表达特征进行分析发现,IbGSTU7在甘薯主要组织中均有表达,且在薯皮中的表达量最高。此外,干旱、盐胁迫以及外源脱落酸(ABA)均可诱导IbGSTU7基因上调表达。通过农杆菌转化法对IbGSTU7在甘薯中进行过表达发现,过表达植株的薯皮花青苷含量以及花青苷合成途径相关基因IbPAL与IbUFGT的表达量均显著提高。同时,PEG模拟干旱胁迫下过表达植株表现出更强的抗旱性,鲜重和根长显著高于野生型对照,过氧化氢(H2O2)含量显著降低,活性氧(ROS)清除相关基因IbMDHAR和IbPOD显著上调表达。本研究为进一步探索IbGSTU7基因在甘薯花青苷积累和干旱胁迫应答中的功能提供了新的理论支撑。

关键词： 蛋白质   递送体系   黄酮类化合物   消化   释放   相互作用  

摘要： 黄酮类化合物具有多种生理功能和健康功效,但仍存在水溶性差、稳定性低、生物利用率低等问题,限制了其在功能食品领域的高效应用。蛋白质具有两亲性,可以有效包载、保护、控释黄酮等活性物质,提高其生物活性和吸收利用率。本综述总结了不同的蛋白递送体系的类型、性质和制备方法产生的不同消化行为及释放特性,讨论了蛋白质-黄酮递送载体在口腔、胃、小肠等各个阶段的稳定性变化、胃肠环境对载体的影响及其与消化酶的相互作用等,将对黄酮等功能因子递送体系的合理构建及有效吸收利用提供科学指导。

关键词： 环状RNA多核苷酸核苷酸转移酶1   微小RNA-345-3p/脂筏特征蛋白2轴   妊娠期糖尿病   糖脂代谢   子代结局  

摘要： 目的探讨环状RNA多核苷酸核苷酸转移酶1(Circ-PNPT1)通过微小RNA-345-3p(mi R-345-3p)/脂筏特征蛋白2(FLOT2)轴,对GDM大鼠糖脂代谢和子代结局的影响及机制。方法将75只雌性妊娠大鼠分为正常对照(NC)组、GDM组、干扰Circ-PNPT1(si-Circ-PNPT1)组及阴性对照(si-NC)组、si-Circ-PNPT1+miR-345-3p抑制剂(si-Circ-PNPT1+miR-345-3p-inhibitor)组,每组15只。检测各组糖脂代谢指标,ELISA检测FIns,比较各组胎鼠存活率及体重,q RT-PCR检测胎盘中Circ-PNPT1、mi R-345-3p、FLOT2 m RNA表达,双荧光素酶报告基因实验验证mi R-345-3p与Circ-PNPT1和FLOT2的靶向关系,Western blot检测胎盘中FLOT2蛋白表达。结果与NC组比较,GDM组FPG、FIns、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、TC、TG、LDL-C、胚胎体重及Circ-PNPT1、FLOT2表达升高(P<0.05),HDL-C、胚胎存活率、mi R-345-3p表达降低(P<0.05)。与GDM组比较,si-Circ-PNPT1组FPG、FIns、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、胚胎体重及FLOT2表达降低(P<0.05),HDL-C、胚胎存活率、mi R-345-3p表达升高(P<0.05)。mi R-345-3p-inhibitor逆转了si-Circ-PNPT1对GDM大鼠的改善作用(P<0.05)。结论敲低Circ-PNPT1可上调mi R-345-3p并靶向下调FLOT2,改善GDM大鼠糖脂代谢和子代结局。