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关键词： 瘤胃上皮细胞   芦丁   脂多糖   炎症因子   屏障功能  

摘要： 【目的】探究芦丁对脂多糖(LPS)诱导的绵羊瘤胃上皮细胞屏障功能、炎症损伤的影响。【方法】体外培养绵羊瘤胃上皮细胞,用不同浓度LPS(0、1、5、10、50、100μg/mL)刺激建立瘤胃上皮细胞损伤模型,确定LPS的最佳作用浓度和作用时间。以不同浓度芦丁(0、25、50、100、150μg/mL)对瘤胃上皮细胞进行预处理,采用MTT法检测细胞活力,计算细胞相对增殖率,确定芦丁的适宜作用浓度和作用时间。基于筛选的LPS和芦丁作用浓度和时间进行细胞分组处理,分别为对照组(CON)、LPS组、芦丁组(R)以及芦丁干预组(R+LPS)。利用ELISA试剂盒测定细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10含量;通过实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、γ-干扰素(IFN-γ)、CXC趋化因子配体8(CXCL8)、CXCL9、咬合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白-1(Claudin-1)、Claudin-4的mRNA相对表达量。【结果】通过试验筛选,最终确定1μg/mL LPS作用9 h作为建立瘤胃上皮细胞损伤模型的最佳作用条件;100µg/mL芦丁处理8 h作为芦丁在体外对瘤胃上皮细胞预保护的最佳作用条件。与CON组相比,LPS组细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量均显著升高(P<0.05),IL-10含量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,R+LPS组细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.05),IL-10含量显著升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与CON组相比,LPS组瘤胃上皮细胞中IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、IFN-γ、CXCL8、CXCL9 mRNA表达量显著升高(P<0.05),IL-4、IL-10、Claudin-4、ZO-1 mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,R+LPS组瘤胃上皮细胞中IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、INF-γ、CXCL8、CXCL9 mRNA表达量显著降低(P<0.05),IL-4、IL-10、ZO-1、Claudin-4mRNA表达量显著升高(P<0.05)。【结论】本试验条件下,100µg/mL芦丁作用8 h对LPS诱导的瘤胃上皮细胞屏障功能和炎症损伤具有明显的保护作用。

关键词： 乳酸化修饰   蛋白质组分析   肝癌干细胞   干性重塑  

摘要： 肝癌的高异质性是导致其发展和治疗抵抗的关键原因,肝癌干细胞(LCSCs)被认为是肝癌表型和功能异质性的根源,而乳酸衍生的蛋白质赖氨酸乳酸化(Kla)在肝癌进展中发挥重要作用,但其对LCSCs生物学过程的影响尚未明确。湖北中医药大学的王春莉与许康教授科研团队等通过乳酸化组和蛋白质组分析,揭示了乳酸化修饰调控LCSCs干性重塑的关键机制,为肝癌靶向治疗提供了新方向。

关键词： 陇南   夏茶   氨基酸   茶多酚   品质分析   酚氨比  

摘要： 为提高陇南夏茶利用率,本试验以5月10日、6月10日和7月10日采摘的陇南地区龙井43(LJ43)、小叶群体种(XY)、小叶群体种-老树(LXY)和福鼎大白-老树(FD)茶树鲜叶为研究对象,测定其茶多酚、总游离氨基酸、茶氨酸、γ-氨基丁酸含量和6种儿茶素、3种嘌呤生物碱、20种常见游离氨基酸含量,继而采用主成分分析、层次聚类分析和正交偏最小二乘判别分析对数据进行处理,综合评价不同品种夏茶原料的适制性,探究陇南夏茶原料品质的形成机理。结果表明,陇南夏茶中茶多酚含量较高,符合名特优农产品标准,但氨基酸含量略低;不同品种、不同采摘期茶树鲜叶品质成分均存在显著差异。就茶叶适制性来看,7月10日采摘的XY鲜叶的酚氨比最大,为17.68,其次为5月10日采摘的XY和LXY鲜叶;5月10日采摘的LJ43鲜叶酚氨比仅为6.56,且在不同采摘期均低于其他品种,因此,陇南无性系LJ43和FD更适合加工绿茶,当地的群体种更适合加工红茶。就不同生长阶段来看,夏季后期茶叶品质变化较前期大,其中5月10日至6月10日间,小叶群体种总游离氨基酸含量显著升高,茶多酚含量未发生显著变化,因此,就当地的XY和LXY而言,初夏茶叶品质优于末春时期。试验分析的31种化合物中,5月10日至6月10日间,4个茶树品种鲜叶中除GABA、Met和EGC含量水平上调外,其他化合物含量水平均发生显著下调或未发生显著变化;6月10日至7月10日间,仅茶碱含量水平在3个茶树品种中发生显著上调,表明夏季有利于茶碱的合成代谢,而G、EGCG等大部分儿茶素含量水平下调,这可能与盛夏温度高时儿茶素分解加速相关。该研究结果可为陇南地区茶产业高质量发展提供技术参考。

关键词： 新品种   选育   农艺性状   氨基酸  

摘要： 以金顶侧耳品种‘榆黄2号’为亲本,采用组织分离法,并通过初筛、复筛、中试和示范栽培进行金顶侧耳新品种‘金榆1号’的选育。结果表明‘:金榆1号’在PDA平板培养基上的菌丝平均生长速度为(5.40±0.21)mm/d。在示范栽培中,‘金榆1号’的原基形成时间为3.0 d,比亲本提早了0.5 d;菌盖平展不内卷,平均大小为(3.94±0.07)cm,比亲本增加了0.09 cm,平均厚度为(1.26±0.03)cm,比亲本增加了0.05 cm;菌柄平均直径为(1.72±0.68)cm,比亲本增加了0.14 cm,平均长度为(3.62±0.09)cm,比亲本增加了0.07 cm;每丛子实体数为(44.00±3.05)个,比亲本增加了5.00个;第一潮菇平均产量为255.89 g/袋,比亲本(216.45 g/袋)提高了18.22%;第一潮菇生物学效率为51.18%,比亲本提高了7.89%;氨基酸含量较高,尤其是甜味氨基酸,其中的苏氨酸、丝氨酸和组氨酸含量远高于亲本。‘金榆1号’具有产量高、生育周期短和出菇一致性好等优良特性。该品种于2021年12月通过上海市非主要农作物品种认定(沪农品认食用菌2021第002号)。

关键词： TCRβ链恒定区结构域蛋白   T细胞淋巴瘤   意义未明的克隆性T细胞   免疫表型   流式细胞术  

摘要： 目的:分析成熟T细胞淋巴瘤(TCL)和意义未明的克隆性T细胞(T-CUS)的免疫表型及临床特点,探索流式细胞术在TCL与T-CUS鉴别诊断中的应用价值。方法:通过多参数流式细胞术(MFC)分析并比较2019年10月至2024年6月河南省人民医院血液科收治的93例TCL患者(TCL组)、46例检测出反应性克隆性T淋巴细胞患者(T-CUS组)的免疫表型特征,同时收集TCL组与T-CUS组患者的临床及实验室资料。结果:流式流式细胞术检测结果显示,TCL组与T-CUS组患者具有相似的免疫表型,均以CD8^(+)异常表型T细胞最多,CD4^(+)次之,CD4^(+)/CD8^(+)双阳性和CD4^(-)/CD8^(-)双阴性罕见。两组CD3、CD4、CD8的阳性表达率具有明显的统计学差异,TCL组患者的CD3表达率(72.00±42.04)和CD8表达率(56.04±48.22)低于T-CUS组(94.05±21.61,79.86±36.33,P<0.05),而CD4表达率(38.35±48.53)则高于T-CUS组(10.76±31.15)(P<0.01)。TRBC1在所有TCL和T-CUS病例中均呈限制性表达模式,TCL组TRBC1阳性表达率略高于T-CUS组,但两者之间差异无显著统计学意义(P>0.05)。TCL组患者的红细胞平均分布宽度(RDW-CV)和血清乳酸脱氢酶(LDH)水平分别为17.6(11.9-24)、459(129-90704),均明显高于T-CUS组的14.1(10.9-19.1)、310(99-11722)(P<0.05)。统计两组病例可获得的TCR基因重排结果,用Kappa检验统计分析,结果显示,TCL组TCR基因重排阳性率(92.1%)明显高于T-CUS组(52.6%),且差异有统计学意义(P<0.001)。结论:TRBC1可以作为快速检测T细胞克隆性的理想指标,MFC联合TCR基因重排检查对鉴别TCL和T-CUS有较好的临床价值。

关键词： 石斛   多糖   双酶解   抗光损伤  

摘要： 石斛多糖因其相对分子质量较大黏度高限制了其在护肤领域的应用.本文采用水提醇沉结合凝胶层析制备了石斛多糖,用酶E306、E752和E896对石斛多糖进行酶解,发现酶解可降低石斛多糖黏度,且用酶E752和酶E896双酶体系水解石斛多糖的抗光损伤活性最强.利用正交试验优化双酶酶解条件,最佳酶解条件是酶E752(pH 6.0、温度40℃、底物浓度50 mg·mL^(-1)、酶浓度4.0%),酶E896(pH 5.5、温度50℃、底物浓度10 mg·mL^(-1)、酶浓度3.0%).酶解后石斛多糖的单糖组成仍然主要为D-甘露糖和D-葡萄糖,其物质的量之比为64.0∶31.6,甘露糖由77.8%降低至64.0%,葡萄糖由22.2%升高至31.6%,相对分子量从1680k降至277k、1k和0.4k.研究发现优化后低相对分子质量石斛多糖显著提高UVB造成的HaCaT细胞FLG蛋白表达下降和UVA引起NIH/3T3细胞的细胞活力下降,且活性优于优化前;其可逆转UVB诱导的小鼠表皮损伤,降低结痂面积,减少皮肤受损程度,降低表皮厚度,抑制UVA诱导的小鼠皮肤胶原蛋白水平的下降,改善UVA引起的皮肤光损伤;另外,其可通过抑制UVA和UVB诱导中ROS的水平,改善光损伤.本研究建立了低相对分子质量石斛多糖双酶解工艺,并评价其抗光损伤活性,为石斛多糖在美容护肤领域的应用提供了坚实的基础.

关键词： 蛋白质优化   从头合成   疫苗设计   纳米颗粒疫苗   反向疫苗学  

摘要： 疫苗作为防控传染性疾病的有力手段,在发展应用过程中经历了四次重要革命。近年来计算工具的迅猛发展更是推动疫苗研发走向新的阶段,形成以结构为导向,蛋白质优化与计算设计为核心的合成生物学研究范式。本文系统介绍了蛋白质优化设计中定向进化、半理性设计和理性设计三种策略与从头合成技术在疫苗研发中的应用与价值。在免疫原设计层面,介绍了结构稳定性改造、表位聚焦、糖基化修饰调控等策略对提升抗原免疫原性与广谱性等特性方面的潜力。在递送系统层面,介绍了蛋白纳米颗粒凭借高密度抗原展示与几何构象优势,结合“马赛克”多价展示技术,在诱导交叉中和抗体生成方面具有独特的优势。人工智能计算工具的突破性进展实现了从“结构模拟”到“功能定制”的转变,并极大地推动了以抗原-抗体复合物结构为导向的反向疫苗学的发展。整合表位计算筛选与从头蛋白骨架设计,实现了疫苗从天然结构到定制结构的突破。尽管面临高变异病原广谱保护、动态构象模拟等挑战,疫苗设计与计算工具的深度融合加速了新型冠状病毒、呼吸道合胞病毒等疫苗的临床转化,并为未来新发和突发传染病防控提供了通用设计方法。

关键词： 小麦条锈病   E3泛素连接酶   TaPUB23   TaDJA7  

摘要： 为探究小麦品种小偃6号高温全生育期抗条锈性分子机理,基于前期转录组测序结果,筛选到1个在条锈菌侵染及温度双重诱导下表达量显著上调的E3泛素连接酶基因TaPUB23,其序列全长1272 bp,编码423个氨基酸,定位于细胞膜、细胞质和细胞核。病毒介导TaPUB23瞬时过表达能显著降低小偃6号植株对条锈病的抗性。利用酵母双杂交筛选到TaPUB23的互作靶标TaDJA7,TaPUB23可对靶标进行泛素化修饰,进一步通过荧光素酶互补(LCA)、双分子荧光互补(BiFC)及Pull-down试验验证了其互作关系。以上结果说明E3泛素连接酶TaPUB23通过泛素化修饰TaDJA7,从而调控小麦的高温抗锈性过程。

关键词： 在线固相萃取   高分辨质谱   海洋沉积物   D-氨基酸   深海热液喷口  

摘要： 氨基酸(L-氨基酸和D-氨基酸)是海洋沉积环境有机质来源及成岩过程的重要生物标志物,因此,开发精准检测海洋沉积物中主要手性氨基酸的方法尤为重要.本文采用在线固相萃取(SPE)结合液相色谱-飞行时间质谱联用技术(LC-TOF/MS),建立了一种同步测定海洋沉积物中L-和D-氨基酸的新方法.采用C_(18)保护柱为在线SPE柱,填料粒径为1.8μm的超高效反相C18柱为分析柱,基于酸性和碱性双流动相分离体系,实现了海洋沉积物中各种L-/D-氨基酸的高效分离;采用高分辨电喷雾TOF/MS全扫描模式下在线检测.结果表明,海洋沉积物样品经盐酸水解处理后稀释5倍,进行衍生化处理,采用在线SPE-LC-TOF/MS直接进样分析可实现各种L-/D-氨基酸的准确测定.各种氨基酸的加标回收率在66.1%~106.8%之间,相对标准偏差(RSD)为2.40%~12.3%,并且具有较宽的线性范围,相关系数(R2)均大于0.990.与传统的液相色谱法相比,该方法仅需少量(0.01~0.10 g)沉积物样品,是深海及大洋热液区沉积物中手性氨基酸生物标志物检测的有效方法.采用该方法对西印度洋表层沉积物中的L-/D-氨基酸进行了检测,所有样品中均检出了17种L-氨基酸和7种D-氨基酸,总含量在1.69~19.30μmol/g(干重)范围内,并且发现海底热液活动对深海沉积环境中有机碳、氮的循环有重要影响.

关键词： 大豆苷元   牙髓干细胞   增殖   成骨分化  

摘要： 目的:探究大豆苷元(DAI)调节表皮生长因子受体-丝裂原活化蛋白激酶-Runt相关转录因子2(EGFR-MAPK-Runx2)信号通路对牙髓干细胞(hDPSCs)增殖及成骨分化的影响。方法:分离hDPSCs细胞并进行成骨及成脂诱导培养,鉴别其分化潜能;使用不同浓度的DAI(0~160μmol/L)培养hDPSCs细胞,检测细胞增殖活性,筛选最佳药物浓度;将hDPSCs细胞随机分为hDPSCs组(A组)、DAI-L(DAI低浓度,B组)、DAI-M(DAI中浓度,C组)、DAI-H(DAI高浓度,D组)和DAI高浓度+EGFR通路抑制剂Gefitinib(DAI-H+Gefitinib,E组)。采用碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S染色检测各组hDPSCs细胞ALP活性及细胞矿化结节数;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞中骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、骨钙素(OCN)以及EGFR-MAPK-Runx2信号通路相关蛋白表达水平。结果:分离获取的hDPSCs细胞具有典型的间充质干细胞形态,并具有多向分化能力;与A组相比,B组、C组、D组hDPSCs细胞增殖活性、ALP活性、矿化结节数以及细胞中成骨分化相关蛋白OPN、BMP-2、OCN以及p-EGFR/EGFR、p-MAPK/MAPK、Runx2值均逐渐升高(P<0.05);EGFR抑制剂Gefitinib的加入逆转了DAI对hDPSCs细胞增殖及成骨分化的促进作用。结论:DAI能够促进hDPSCs细胞的增殖及成骨分化,其作用机制可能与EGFR-MAPK-Runx2信号通路被激活有关。