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关键词： 杜仲多糖   阿尔茨海默症   神经炎症   小胶质细胞   星形胶质细胞  

摘要： 【目的】研究杜仲多糖对阿尔茨海默症(Alzheimer’s diseas,AD)小鼠神经炎症的改善作用,为中药治疗阿尔茨海默症提供新思路。【方法】采用三相分离技术提取杜仲多糖。使用3月龄5×FAD小鼠作为AD模型小鼠,以3月龄C57BL/6J小鼠作为野生型小鼠。将小鼠分为野生型对照组、AD模型组和AD+杜仲多糖组,野生型对照组和AD模型组小鼠饲喂标准饲料,AD+杜仲多糖组小鼠饲喂添加0.25%(质量分数)杜仲多糖的标准饲料,小鼠饲喂至9月龄时终止。采集各组小鼠脑组织,使用免疫荧光染色对神经炎症相关小胶质细胞进行分析,探究杜仲多糖对AD小鼠神经炎症相关胶质细胞的改善作用。【结果】杜仲多糖可极显著抑制AD模型小鼠大脑海马区小胶质细胞和星形胶质细胞的异常增殖,改善小胶质细胞的形态,并可抑制海马区小胶质细胞的异常激活,逆转阿尔茨海默症小鼠中小胶质细胞形态向促炎表型的异常转变。【结论】杜仲多糖能够显著改善AD小鼠神经炎症相关胶质细胞的状态,具有开发为AD治疗药物的潜力。

关键词： 辣椒粕   组分蛋白   氨基酸   结构   性质  

摘要： 辣椒粕资源利用率低,为提高其综合利用价值,分级提取辣椒粕中的清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,比较4种组分蛋白的氨基酸组成及结构性质。结果表明:每100g辣椒粕中清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白提取量分别为13.45、1.67、0.20g和3.33g,其中清蛋白是辣椒粕蛋白的主要成分;4种组分蛋白的分子量较低(14~40kDa),清蛋白有3条明显亚基条带(40、35kDa和18kDa);氨基酸分析结果显示,清蛋白氨基酸组成较合理,除蛋氨酸外,其余必需氨基酸均满足联合国粮农组织/世界卫生组织推荐值;4种组分蛋白中谷蛋白的热变性温度最高(95.5℃),具有较好的热稳定性;4种组分蛋白的二级结构以β-折叠和β-逆折叠为主;清蛋白的Zeta电位绝对值最高,并表现出较优的乳化性质和起泡性质。

关键词： 生菜   氨基酸微量元素水溶肥   植株性状   根系性状   干物质量  

摘要： 为明确氨基酸微量元素水溶肥对生菜生长发育的影响,以美国大速生菜为试验材料,开展了田间试验。结果表明,氨基酸微量元素水溶肥施用量在0~120 kg/hm^(2)之间时,生菜植株性状(株高除外)、根系性状、生理性状、干物质量等指标均随着氨基酸微量元素水溶肥施用量的增加而上升。基施复合肥750 kg/hm^(2)+冲施氨基酸微量元素水溶肥120 kg/hm2处理较对照基施复合肥750 kg/hm^(2)地上部鲜重提高了96.15%,可溶性糖含量提高了58.47%。在生菜种植过程中,推荐施肥量为基施复合肥750 kg/hm^(2)+冲施氨基酸微量元素水溶肥120 kg/hm^(2)。

关键词： 肾移植   肾纤维化   卵泡抑素样蛋白1   间充质干细胞   缺血再灌注损伤   肌成纤维细胞  

摘要： 目的探索卵泡抑素样蛋白1(follistatin-like 1 protein,FSTL1)对肾组织中间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)向肌成纤维细胞分化演变和肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)诱导的肾纤维化的调节作用。方法动物实验中,采用夹闭左侧肾蒂法构建单侧肾IRI诱导肾纤维化模型(IRI 7 d组,n=3),并设立假手术组(Sham 7 d组,n=3)。取12只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字法分为假手术组(Sham组,n=4)、造模组(IRI组,n=4)和FSTL1治疗组(IRI+FSTL1组,n=4)。Sham组实施开腹假手术,IRI组和IRI+FSTL1组实施单侧肾IRI术;于术前1 d至术后7 d每天腹腔注射磷酸盐缓冲液(Sham组、IRI组)和FSTL1重组蛋白(IRI+FSTL1组)。术后14 d处死小鼠,苏木精-伊红染色(HE)评估肾组织病理损伤,天狼星红染色、马松染色、免疫组织化学染色评估肾间质胶原纤维和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)沉积,免疫荧光双染法检测干细胞抗原-1(stem cell antigen-1,SCA-1)与平滑肌肌动蛋白α(smooth muscle actinα,α-SMA)共表达水平。实时荧光定量聚核酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测纤维化相关基因Col1a1、Col3a1、Fn1和肌成纤维细胞标记基因Acta2的mRNA表达水平。细胞实验中,通过TGF-β1诱导构建小鼠MSC向肌成纤维细胞分化的细胞模型(MSC+TGF-β1组,n=3),并设立空白对照组(MSC组,n=3)。将C57BL/6小鼠骨髓MSC随机分为4组,TGF-β1诱导为MSC+TGF-β1组(n=6)、FSTL1处理为MSC+TGF-β1+FSTL1组(n=6)、转染阴性对照siRNA为MSC-siNC+TGF-β1组(n=6)、转染靶向Fstl1的siRNA为MSC-si Fstl1+TGF-β1组(n=6)。RT-qPCR和免疫印迹法分别检测细胞Col1a1、Col3a1、Fn1、Acta2的mRNA及蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液FSTL1蛋白浓度。结果IRI 7 d组小鼠肾组织Col1a1及Acta2 mRNA表达较Sham 7 d组上调(P值均<0.05),成功建立小鼠肾纤维化模型;IRI 7 d组小鼠肾组织Fstl1 mRNA表达上调(P<0.01);免疫荧光双染结果示肾间质SCA-1和α-SMA及SCA-1和FSTL1共表达增加。术后14 d,HE染色结果示IRI-FSTL1组小鼠肾组织病理损伤较IRI组减轻,天狼星红、马松染色结果示小鼠肾间质胶原纤维堆积量减少,免疫组织化学染色结果示小鼠肾间质FN减少(P值均<0.05)。IRI+FSTL1组小鼠肾组织Col1a1、Col3a1、Fn1及Acta2 mRNA表达比IRI组减少(P值均<0.05),免疫荧光双染结果示肾间质SCA-1和α-SMA共表达减少。细胞实验中,MSC+TGF-β1组细胞Col1a1、Col3a1、Fn1、Acta2基因mRNA表达水平较MSC组高(P值均<0.05),TGF-β1成功诱导MSC的肌成纤维细胞分化;MSC+TGF-β1组细胞内FSTL1蛋白表达水平及细胞上清液FSTL1蛋白浓度均升高(P值均<0.05)。和MSC+TGF-β1组比,MSC+TGF-β1+FSTL1组细胞Acta2和Col1a1基因mRNA水平降低(P值均<0.01),Ⅰ型胶原纤维与α-SMA蛋白表达水平降低(P值均<0.001);和MSC-siNC+TGF-β1组比较,MSC-si Fstl1+TGF-β1组细胞上清液FSTL1蛋白水平降低(P值<0.001),FN和α-SMA蛋白表达水平增加(P值均<0.001),Fn1和Acta2 mRNA表达增加(P值均<0.05)。结论单侧肾IRI诱导小鼠肾纤维化的过程中可能存在肾间质中MSC向肌成纤维细胞的分化演变,FSTL1可能通过抑制MSC的肌成纤维细胞分化减轻小鼠单侧IRI后的肾纤维化。

关键词： 红蓝草   不同部位   多糖提取   抗氧化活性  

摘要： 通过精确的量化手段,评估红蓝草(学名:Peristrophe roxburghiana)不同组织结构,具体指叶与茎部分中多糖成分的含量,同时对比研究其在体外条件下的抗氧化效能。用苯酚-硫酸法测多糖含量,通过清除DPPH自由基和羟基自由基(·OH)来评估抗氧化能力。红蓝草叶中多糖含量高于茎(茎:17.33%;叶:15.12%),茎多糖对DPPH自由基和对羟基两种自由基的清除效果均优于叶多糖。红蓝草茎和叶中多糖均具有一定的抗氧化活性,其中茎部多糖表现突出。

关键词： 安罗替尼   帕博利珠单抗   晚期   子宫内膜癌   肿瘤标志物   免疫功能  

摘要： 目的:探讨安罗替尼联合帕博利珠单抗对晚期子宫内膜癌患者肿瘤标志物、微小核糖核酸(miRNA)表达的影响。方法:选取2021年1月~2023年1月期间某院收治的87例晚期子宫内膜癌患者作为研究对象,采用随机数字表法分为A组、B组和C组,每组29例。A组患者给予盐酸安罗替尼胶囊治疗,B组患者给予帕博利珠单抗注射液治疗,C组患者给予盐酸安罗替尼胶囊联合帕博利珠单抗注射液治疗。比较三组患者肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、糖类抗原199(CA199)、骨桥蛋白(OPN)]、体液免疫指标[免疫球蛋白(Ig)M、IgG、IgA]、miRNA(miR-125b、miR-29a、miR-425-5p)、癌症治疗功能评价系统量表(FACT-G)评分、临床疗效及不良反应发生情况。结果:治疗后,三组患者血清CA125、CA199、OPN水平和miR-425-5p相对表达量均降低(P<0.05),且C组低于A组和B组(P<0.05);血清IgG、IgM和IgA水平均降低(P<0.05),但C组高于A组和B组(P<0.05);血清miR-125b、miR-29a相对表达量、FACT-G各维度评分及总分均升高(P<0.05),且C组高于A组和B组(P<0.05)。C组患者客观缓解率高于A组和B组(P<0.05)。三组患者治疗期间疲劳、高血压、腹泻、手足综合征的发生率及总发生率比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:安罗替尼联合帕博利珠单抗治疗晚期子宫内膜癌患者临床疗效较佳,可有效降低肿瘤标志物水平,改善免疫功能、miRNA表达,提高生活质量,且不增加不良反应的发生风险。

关键词： 氨基酸   鹿茸多肽   抗氧化   创伤愈合   抗衰老  

摘要： 鹿茸多肽是鹿茸中的一种主要活性成分,由赖氨酸、甘氨酸、谷氨酸、亮氨酸和丙氨酸等氨基酸组成,占鹿茸总湿质量的50%~60%。这些多肽不仅具有抗氧化、抗衰老的作用,还对促进创伤愈合、免疫调节、修复神经损伤等具有重要作用。多肽类物质因其分子量适中、易于吸收和代谢等特性,在调节机体生理功能、增强免疫力、促进组织修复等方面展现出巨大的潜力。鹿茸多肽类物质具有独特的结构和多样的生物活性,相比于传统鹿茸的功效,还可能通过其特定的氨基酸序列和结构发挥更精准的作用。

关键词： 慢病毒载体   假病毒   逆转录-实时荧光定量PCR   干细胞   外源病毒检测   流式细胞术  

摘要： 目的:构建含多个RNA病毒(CV2117、HAV和HTLV-2)基因的慢病毒载体假病毒,用于生物制品中外源RNA病毒PCR检测的阳性对照。方法:选用三质粒慢病毒包装体系,即包膜质粒(pMD2.G)、包装质粒(psPAX2)和穿梭质粒(pWPXL-EGFP),合成含多个目的基因片段的穿梭载体,pWPXLCV2117-HAV-HTLV-2-EGFP(pCHH-EGFP质粒),包膜质粒-包装质粒-穿梭质粒按照1∶3∶4转染HEK293T/17细胞包装假病毒,5 h后更换新鲜DMEM完全培养基,培养24 h后加入核酸酶酶解残余质粒DNA,收获转染后48 h和72 h病毒上清液;将病毒上清10倍稀释后加入到HEK293T/17细胞中,感染24 h后更换新鲜培养基,继续培养48 h,荧光显微镜观察病毒感染情况,流式细胞术检测病毒感染滴度,逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测假病毒目的基因拷贝数,具体步骤包括(1)预处理(42℃2 min)、(2)反转录(25℃5 min,1个循环;42℃30 min,1个循环;85℃5 min,1个循环)、(3)PCR扩增(37℃2 min,1个循环;95℃预变性10 min,1个循环;95℃变性15 s,60℃退火1 min,40个循环);获得的假病毒采用人间充质干细胞样品进行样品适用性验证。结果:三质粒慢病毒包装体系转染HEK293T/17细胞的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)阳性率>90%;PCR方法检测假病毒在核酸酶处理后,质粒DNA残留<0.005%;经流式细胞术检测慢病毒感染滴度,表达EGFP阳性细胞数占比为8.06%,病毒感染滴度为6.21×10^(5)TU·m L^(-1);RT-q PCR方法检测目的基因CV2117-1、CV2117-2、HAV-1、HAV-2、HTLV-2-1、HTLV-2-2拷贝数分别为2.99×10^(4)、1.50×10^(4)、2.40×10^(4)、1.09×10^(4)、2.03×10^(4)、1.92×10^(4)copies·μL^(-1)。样品适用性结果显示,慢病毒载体(lentivirus vector,LV)CV2117-HAV-HTLV2(LV-CHH)假病毒可用于间充质干细胞检测的阳性对照,适用性样品回收率为70%~130%。结论:成功构建含多个RNA病毒基因片段的LV-CHH假病毒,经验证可用于干细胞产品等的外源病毒PCR方法检测的阳性对照。

关键词： 脓毒症   急性胃肠损伤   肠道菌群   血必净注射液  

摘要： 目的研究血必净注射液对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的脓毒症小鼠肠道菌群及肠道机械屏障的影响,探讨血必净注射液保护胃肠道的潜在机制。方法选用健康清洁级雄性C57BL/6N小鼠24只,分为对照组、LPS组、LPS+5μl/g血必净注射液组(5μl/g血必净注射液组)、LPS+10μl/g血必净注射液组(10μl/g血必净注射液组),每组6只。腹腔注射10μg/g LPS制备脓毒症模型。造模成功后0及12 h,腹腔注射5或10μl/g血必净注射液,第2次给药后12 h采集血液、回肠和结肠内粪便样本。ELISA检测二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-blood lactic acid,D-Lac)、TNF-α和IL-6水平;HE染色观察回肠局部损伤情况,利用Chiu′s评分进行肠组织损伤程度评分;免疫组化法和Western blot检测回肠紧密连接蛋白1(Claudin-1)、闭锁蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(zona occludins-1,ZO-1)的表达,并进行半定量分析;组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较依据方差齐性采用LSD或Tamhane′s T2检验;使用16S rRNA测序技术进行小鼠粪便菌群多样性分析、物种组成和比较差异分析等。结果LPS组小鼠DAO、D-Lac、TNF-α和IL-6浓度显著高于对照组(P均<0.0001),血必净注射液干预后,其浓度显著降低(P均<0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。与5μl/g血必净注射液组比较,10μl/g血必净注射液降低其浓度的效果更明显(P均<0.05)。LPS组Chiu′s评分高于对照组和10μl/g血必净注射液组(P均<0.05),Western blot结果显示LPS组Occludin、Claudin-1和ZO-1表达水平均低于对照组(P均<0.01),血必净注射液干预后各蛋白质表达水平均升高,明显高于LPS组(P均<0.0001),且与剂量相关;免疫组化结果显示,除10μl/g血必净注射液组的ZO-1表达水平高于5μl/g血必净注射液组,但差异无统计学意义(P>0.05)外,其余与Western blot结果一致。16S rRNA测序结果显示Alpha和Beta多样性指数及肠道菌群组成结构均显示4组间存在差异,血必净注射液组其结构更接近对照组,且与剂量相关。Wilcoxon秩和检验显示,4组小鼠在门水平上有6种肠道微生物群的差异有统计学意义,在属水平上,有32种肠道微生物群的差异有统计学意义(P均<0.05)。结论血必净注射液可以通过保护肠道菌群结构和肠屏障功能两方面来实现对胃肠道的保护作用,保护作用与药物剂量有一定相关性。

关键词： 兔   TRAF4   序列分析   亚细胞定位   转录特性  

摘要： 旨在探究兔肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)的分子特征及转录特性。本研究首次克隆并鉴定了兔TRAF4基因,采用生物信息学的方法对兔TRAF4的分子特征和转录特性进行分子结构预测分析;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了兔在感染肠出血性大肠杆菌(EHEC)后TRAF4基因的转录水平变化,并利用间接免疫荧光技术确定了TRAF4的亚细胞定位。结果:兔TRAF4基因编码区长为1422 bp,编码483个氨基酸残基;通过与系统发育树中其他哺乳动物的氨基酸相似性比对,发现兔TRAF4与其他哺乳动物具有较高的同源性和密切的亲缘关系;亚细胞定位试验显示,TRAF4在细胞质和细胞核中均有表达;在EHEC感染后,脾脏、肾脏和胸腺中TRAF4的转录水平整体呈下调趋势,提示TRAF4基因可能通过负反馈机制参与调控感染后的免疫应答。综上,本研究成功克隆了兔的TRAF4基因并进行了生物信息学分析,阐明了其在细胞中的定位及在细菌感染后的转录水平变化,为进一步研究兔TRAF4在先天免疫中的作用提供了理论基础。