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关键词： 纳米羟基磷灰石/胶原复合材料   骨髓间充质干细胞   软骨细胞   共培养   软骨分化  

摘要： 目的探讨仿生纳米羟基磷灰石/胶原复合材料(nHAC)负载骨髓间充质干细胞(BMSCs)和软骨细胞(ACs)共培养修复关节软骨全层缺损的可行性,评价修复效果,为扩大其应用范围提供实验依据。方法2022年1月至2023年12月,取浓度为4×105/ml的第二代新西兰兔BMSCs和ACs,按3∶1比例混匀接种在仿生nHAC共培养9周,扫描电镜(SEM)和细胞化学及细胞免疫化学染色检测共培养细胞在仿生nHAC上的黏附、形态学变化和二型胶原(COL2)表达。数字表法随机选取30只新西兰兔制备关节软骨全层缺损模型,将仿生nHAC负载BMSCs和ACs共培养植入关节软骨全层缺损为实验组、仿生nHAC为对照组和不处理为空白对照组,每组10只动物。移植术后18周经ICRS大体评分和组织学分级评分及免疫组织化学染色对修复组织进行评价。数据以均数±标准差表示,多组比较采用单因素方差分析。结果随着仿生nHAC负载BMSCs和ACs共培养,共培养细胞由长梭形逐渐变为多角形和圆形或类圆形,形态类似软骨细胞。第9周SEM检测大量共培养细胞黏附在nHAC,番红O染色浓染呈红色,COL2表达阳性。术后18周实验组修复组织呈乳白色,表面平整有弹性,与周围软骨整合紧密;而对照组由薄层灰暗组织覆盖,表面不平明显低于周围软骨,平均ICRS评分明显低于实验组[(3.20±1.23)分比(11.10±1.10)分,t=15.14,P<0.01];空白对照组未见修复组织,周围呈虫蚀样改变,平均ICRS评分明显低于对照组[(0.80±0.79)分比(3.20±1.23)分,t=5.20,P<0.01]。实验组修复组织平均评分明显低于材料对照组[(10.20±1.48)分比(1.80±1.32)分,t=-13.43,P<0.01];空白对照组平均评分明显高于对照组[(13.90±0.32)分比(10.20±1.48)分,t=-7.75,P<0.01]。差异均有统计学意义。结论仿生nHAC负载BMSCs和ACs体外共培养具有软骨分化活性,体内植入能有效修复关节软骨全层缺损,完全满足软骨组织工程对支架材料的要求。

关键词： 氨基酸   细胞因子   列线图预测模型   抑郁障碍   儿童  

摘要： 目的基于血清氨基酸和细胞因子构建预测儿童抑郁障碍风险的列线图模型,并评价其临床效能。方法选取2024年1—10月上海市精神卫生中心抑郁障碍患儿103例(抑郁障碍组)和同期上海市儿童医院健康体检儿童54名(正常对照组)。分别采用流式细胞术法和液相色谱串联质谱法检测所有研究对象血清中10种细胞因子和23种氨基酸的水平。采用LASSO回归分析和多因素Logistic回归分析筛选变量。根据筛选出的变量建立列线图预测模型。采用受试者工作特征(ROC)曲线、Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和临床决策曲线评估模型的临床效能。结果抑郁障碍组和正常对照组之间血清色氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、精氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、鸟氨酸、5-羟色胺(5-HT)、犬尿氨酸、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、α-干扰素(IFN-α)、白细胞介素(IL)-5、IL-1β、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10、IL-6、IL-2水平差异均有统计学意义(P<0.1)。采用LASSO回归分析筛选出5个变量(精氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、5-HT、IL-2)。精氨酸、天冬酰胺、5-HT降低和谷氨酸、IL-2升高均是儿童发生抑郁障碍的独立危险因素(P<0.05)。基于筛选出的5个变量构建的列线图预测模型诊断抑郁障碍的曲线下面积(AUC)为0.961,内部验证的AUC为0.939。列线图模型的预测概率与实际概率拟合度良好(Hosmer-Lemeshow检验P=0.5106),在阈值概率0.02%~98.00%范围内有较高的净获益率,净获益率最大值为0.6。结论基于精氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、5-HT、IL-2构建的列线图预测模型在儿童发生抑郁障碍的诊断中有较高的效能,或可作为儿童抑郁障碍辅助诊断的工具。

关键词： 间充质干细胞移植   脊柱骨折   脊髓功能恢复  

摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞移植对脊柱骨折后大鼠脊髓功能恢复的影响。方法2023年3月至2024年3月,将45只SD大鼠按照随机数表法分为假手术组、模型组、治疗组,每组15只,简单随机法从45只大鼠中选取30只大鼠构建脊柱骨折合并脊髓损伤模型。采用脊髓损伤运动功能(BBB)评分评价各组大鼠后肢运动功能;苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠脊髓组织损伤情况;检测各组大鼠的运动诱发电位(MEP),蛋白免疫印迹检测各组大鼠脊髓组织中脑源性神经生长因子(BDNF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。两组之间的比较采用t检验,多组之间的比较则通过单因素方差分析(ANOVA)。结果治疗组大鼠BBB评分[(14.24±0.56)分]高于模型组[(6.52±0.23)分],低于假手术组[(21.00±0.00)分],差异有统计学意义(t=49.388、46.752,P<0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠脊髓组织病理损伤明显,出现明显的炎性浸润,损伤脊髓周围附着大量炎性纤维组织;与模型组比较,治疗组大鼠脊髓组织病理损伤显著改善,炎症浸润明显减少。治疗组大鼠运动诱发电位潜伏期[(8.43±0.36)ms]短于模型组[(14.76±0.85)ms],长于假手术组[(5.20±0.21)ms],差异有统计学意义(t=26.558、30.015,P<0.01);治疗组大鼠运动诱发电位波幅[(0.85±0.05)mV]大于模型组[(0.36±0.02)mV],小于假手术组[(1.52±0.07)mV],差异有统计学意义(t=35.240、30.165,P<0.01)。治疗组大鼠脊髓组织内BDNF和NSE蛋白水平(3.64±0.12、3.07±0.10)高于模型组(1.55±0.04、1.83±0.06),差异有统计学意义(t=28.618、18.416,P<0.01);低于假手术组(5.42±0.21、4.88±0.18),差异有统计学意义(t=12.746、15.224,P<0.01)。结论骨髓间充质干细胞移植对脊柱骨折后大鼠脊髓功能恢复具有明显的治疗作用,其机制可能与调控脊髓组织内BDNF和NSE表达有关。

关键词： 羔羊睾丸细胞   eIF3i基因   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 为制备羊源eIF3i基因编码蛋白的多克隆抗体,本试验利用PCR技术从羔羊睾丸(lamb testicular, LT)细胞中扩增eIF3i基因,并将其克隆至pCold载体,构建pCold-eIF3i质粒,通过质粒PCR、双酶切和序列测定进行验证;将其转化至宿主表达菌BL21(DE3)中,在优化表达条件(IPTG浓度、温度、时间)下诱导eIF3i重组蛋白,利用SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白表达及反应原性;以纯化的eIF3i重组蛋白作为抗原,联合弗氏完全/不完全佐剂免疫新西兰大白兔,经3次免疫后采集血清,采用间接ELISA检测抗血清效价,Western blot分析抗体特异性,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)检测抗体应用效果。结果显示,PCR扩增出LT细胞eIF3i基因大小为978 bp;eIF3i重组蛋白的最佳表达条件:IPTG浓度为0.2 mmol/L,温度为37℃,时间为8 h;eIF3i重组蛋白以包涵体形式表达,其大小约为36 kDa;制备的eIF3i蛋白多克隆抗体效价1∶51 200。Western blot和IFA结果显示,制备的eIF3i蛋白多克隆抗体具有良好的反应原性及特异性。综上所述,本研究成功制备了兔抗eIF3i蛋白多克隆抗体,并证实其能特异性识别内源性eIF3i蛋白,为进一步研究eIF3i蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词： 急性呼吸窘迫综合征   肺损伤   呼吸衰竭   肺类器官   干细胞  

摘要： 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种常见的危及人类健康的呼吸危重症,其发病机制复杂,为相应的药物开发及治疗方法的探索带来了极大困难。肺类器官技术相较二维细胞培养及实验动物模型能更真实模拟人类肺部微环境,缩短研究周期,在近年来针对肺部疾病的研究中得到了快速发展,并且在ARDS的相关研究中取得了许多成果。本文系统性综述了肺类器官在ARDS研究中的应用,分析其目前的局限性和未来主要的应用方向。

关键词： 新生儿坏死性小肠结肠炎   发病机制   单核苷酸多态性  

摘要： 新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)是一种严重的胃肠道疾病,主要影响早产儿,其发病率和死亡率都较高。近年来,随着分子生物学技术的发展,对NEC的发病机制有了更深入的了解,特别是单核苷酸多态性(SNP)在NEC发病中的作用逐渐受到关注。本文就近几年有关SNP与NEC发病机制关系的研究进展作一综述,旨在为进一步研究NEC发病机制提供新的思路,同时期望能更好地指导NEC的临床诊疗工作。

关键词： 腹膜纤维化   核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3炎症小体   腹膜炎  

摘要： 腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)现已成为终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)患者的重要治疗选择之一。然而,腹膜炎导致的腹膜纤维化往往是患者停止腹膜透析的主要原因。在腹膜纤维化的发展过程中,核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)作为先天免疫系统的关键感应器,能够识别外源性病原体入侵及内源性细胞损伤,其激活后会促使白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18的成熟与释放,从而引发强烈的炎症反应,并在多种非细菌性炎症中扮演着重要角色。深入探究NLRP3的激活调控机制,为控制腹膜透析患者的腹膜纤维化提供理论依据。

关键词： 椎间盘原位修复   SDF-1CXCR4信号轴   归巢   内源性干细胞  

摘要： 腰痛(low back pain,LBP)与椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)密切相关,严重影响患者生活质量并带来经济负担[1]。椎间盘的代谢稳态在年龄增长和外界损伤下逐渐破坏,导致椎间盘结构和生物力学性质变化[2]。目前,传统治疗难以根治IDD,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在椎间盘再生中的应用前景广阔,但仍面临细胞获取困难、处理技术复杂、成本高昂及移植效果不确定等问题[3、4]。

关键词： EPS   蛋白质   Cu(Ⅱ)   胁迫/诱导   吸附  

摘要： 以3种不同浓度Cu(Ⅱ)化合物(Cu(NO_(3))_(2)、CuSO_(4)和CuCl_(2))胁迫/诱导Pseudomonas aeruginosa(***),探究了胁迫/诱导前后EPS组分变化以及对Cu(Ⅱ)的吸附性能的变化.结果表明,当Cu(Ⅱ)胁迫浓度为30 mgL^(-1)时胁迫效果最好,Cu(NO_(3))_(2)、CuSO_(4)和CuCl_(2)胁迫下EPS产量分别为333.23、280.82和181.26 mg·g^(-1).同时,Cu(NO_(3))_(2)-EPS对于Cu(Ⅱ)的吸附效果最好,为346.50 mg·g^(-1),较胁迫前提高了86.79%.Langmuir等温模型可以很好地拟合EPS对Cu(Ⅱ)的吸附,理论最大吸附量达到2012.76 mg·g^(-1),且吸附过程符合二级动力学规律.3D-EEM和UV-vis分析结果表明,EPS中蛋白质如类色氨酸、芳香蛋白类物质含量较胁迫前明显增加;FTIR分析表明,胁迫后C=O、C-N、C-O-C等官能团大量增加;XPS分析表明,Cu(NO_(3))_(2)胁迫/诱导后,EPS中C-N、C=O等官能团增加.本研究在生物处理重金属废水的应用方面具有巨大潜力.

关键词： 抗生素   生物活性物质   中草药   生长性能   舍饲模式  

摘要： 目前,我国羊的养殖模式逐渐趋向规模化与集约化,饲养管理方式大多采用舍饲,这使得羔羊的运动量有所减少。相较于放牧模式下日粮的多样性,舍饲模式的基础日粮较为单一,导致羔羊的生长性能呈现下降趋势,对羊养殖业的健康发展造成了影响。随着消费者对畜产品品质的要求日益提高,近年来,中草药作为绿色饲料添加剂替代抗生素,在畜禽养殖业中得到了广泛应用。黄芪是我国的传统中草药,富含黄芪多糖、氨基酸、胆碱、黄酮等多种生物活性物质。黄芪多糖是从黄芪根部提取的中药单体,具有抗病毒、抗炎、抗氧化以及调节免疫功能等多种生物学功能。有研究表明,黄芪多糖作为添加剂能够调节水产动物和禽畜的免疫功能,并增强其抗氧化能力。然而,目前关于黄芪多糖在羔羊养殖方面的研究和应用相对较少。本文旨在探究在基础日粮中添加黄芪多糖对羔羊生产性能和免疫功能的影响,为将黄芪多糖用作羔羊饲料添加剂提供参考。