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关键词： 大豆   丙氨酸氨基转移酶   基因克隆   低氧胁迫  

摘要： 为探究AlaAT对大豆耐低氧能力的影响,以“大豆M18”和“吉农74”为试验材料,通过RT-PCR方法从大豆M18中克隆了GmALAAT1基因,片段大小为1611 bp。采用无缝克隆技术和CRISPR/Cas9技术构建了pCAMBIA3301-GmALAAT1过表达载体和pCBSG015-GmALAAT1基因编辑载体。利用农杆菌介导法将重组载体导入大豆品种“吉农74”,经分子检测后获得T2代过表达阳性植株5株,基因编辑阳性植株4株。对2种转基因阳性植株进行7 d和14 d的低氧胁迫,分别测定根长、根表面积、根体积、根平均直径、根尖数和分支数,过表达阳性植株在根长、根表面积、分枝数、根尖数方面均极显著高于未转化受体对照植株。分别测定叶片含水量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量,过表达阳性植株叶片含水量、SOD活性、POD活性、CAT活性显著高于未转化受体对照植株,MDA含量极显著低于未转化受体对照植株。结果表明:初步确定GmALAAT1基因在大豆中过表达可以提高大豆抗氧化保护酶活性,降低有害物丙二醛含量,促进根系发育,进而提高大豆耐低氧能力。

关键词： 间充质干细胞   3D生物打印   牙周组织   再生医学   组织工程  

摘要： 牙周组织疾病是常见口腔疾病,传统机械清创治疗虽可控制炎症,但难以实现牙周组织的完全再生。近年来,3D生物打印技术结合间充质干细胞(MSCs)的研究和应用在牙周组织再生领域迅速发展,该技术通过构建仿生微环境、促进细胞增殖与分化,为牙周组织再生提供新策略。本文综述了3D生物打印技术类型、生物墨水材料特性、MSCs来源及其在牙周组织再生中的应用进展,并分析了当前面临的技术瓶颈与临床转化挑战,旨在为未来研究及临床应用提供参考。

关键词： 茶多酚   肉鸡   肠道炎症   肠道微生物  

摘要： 研究了茶多酚对脂多糖诱导肉鸡肠道炎症应激后的缓解作用,选择1日龄白羽肉鸡240只,随机分为4组:对照组(CK)、脂多糖(LPS)组、茶多酚(TP)组、茶多酚(TP)+脂多糖(LPS)组,其中TP组和TP+LPS组饲喂基础日粮并添加350 mg/kg茶多酚;试验第21天,将LPS组、TP+LPS组腹腔注射脂多糖,试验期为26d。结果显示:LPS刺激了模拟肉鸡肠道炎症,促炎细胞因子和肿瘤坏死因子-α含量得到了显著提高,但添加TP对此具有恢复作用。添加TP和LPS刺激对肉鸡血清单核细胞趋化蛋白-1存在显著的交互作用。LPS刺激显著降低了肉鸡盲肠厚壁菌门、提高了拟杆菌门的丰度,添加TP有助于肉鸡恢复肠道中厚壁菌门和拟杆菌门的比例,同时显著提高了肉鸡盲肠另枝菌属(Alistipes)和拟杆菌属(Bacteroides)的丰度。LPS刺激和日粮TP对提高肉鸡盲肠另枝菌属和降低肉鸡盲肠梭菌属UCG-014存在显著的交互作用。综上所述,茶多酚作为一种绿色饲料添加剂,可有效降低肉鸡肠道炎症指标,恢复肠道菌群微生态,促进肉鸡饲养产业健康发展。

关键词： 马尾松   低磷胁迫   PmGDPD1   亚细胞定位  

摘要： GDPD1基因是调控植物体内磷脂代谢的重要基因,磷脂代谢对于植物的胁迫抵抗机制起着重要作用。克隆马尾松PmGDPD1基因,探究其在低磷胁迫下的表达模式,为研究PmGDPD1的功能提供理论依据。通过RT-PCR方法克隆PmGDPD1基因,通过在线网站分析其生物信息学信息,利用烟草瞬时转化体系对其进行亚细胞定位,利用实时荧光定量PCR分析该基因在马尾松低磷胁迫过程中的时间和植物组织部位的表达模式。PmGDPD1基因最长开放阅读框全长1083 bp,编码361个氨基酸,含有1个GDPD保守结构域,与烟草、小麦和水稻归为一簇;亚细胞定位结果显示该蛋白主要定位在细胞膜,细胞核中少量表达。实时荧光定量PCR结果显示PmGDPD1基因在马尾松幼苗低磷胁迫24,48,60 d后均能被诱导表达,且在不同组织部位均诱导表达。PmGDPD1基因能够响应马尾松低磷胁迫过程,且主要在细胞膜上行使功能,为深入探究马尾松低磷胁迫响应的机制提供参考。

关键词： 成簇规律间隔短回文重复序列/相关蛋白系统   Cas蛋白   核酸检测   病原微生物   诊断  

摘要： 由细菌及病毒等病原体引发的感染性疾病是重大全球公共卫生挑战。精准且高效的检测手段对于感染性疾病的诊疗及防控至关重要。基于成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/相关蛋白(Cas)系统的核酸检测技术凭借高灵敏度、高特异度以及操作简便快捷等优势在病原微生物检测领域中广泛应用。近年来基于CRISPR/Cas系统衍生出诸多便捷高效的病原微生物核酸检测技术及平台,进一步拓宽了病原体核酸检测领域。该文梳理了基于CRISPR/Cas系统的病原体核酸检测技术的研究动态,探讨了这些技术在病原体体外诊断中的价值,并为CRISPR/Cas核酸检测技术的后续发展提供参考。

关键词： 肺炎球菌疾病   肺炎球菌多糖结合疫苗   同时接种   预防接种  

摘要： 自免疫规划实施以来,婴幼儿群体需要接种的疫苗种类越来越多,给免疫接种工作带来了一系列的挑战,同时接种多种疫苗可能是应对此挑战的最佳解决方案。肺炎球菌疾病是造成中国儿童患病和死亡的主要原因之一,已被世界卫生组织列为需“极高度优先”使用疫苗预防的疾病,但目前对肺炎球菌多糖结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccines,PCV)与其他常见儿童疫苗同时接种的建议仍不明确。本文对肺炎球菌与肺炎球菌疫苗、同时接种的概述与获益、同时接种的国内外现状、疫苗同时接种的阻碍及应对策略进行了系统综述,在PCV与儿童常见疫苗同时接种的免疫原性和安全性等方面,供疾病预防控制和预防接种相关工作人员参考。

关键词： 戊酸钠   小鼠   急性肝损伤   脂多糖   保护作用  

摘要： 本试验旨在研究戊酸钠对脂多糖诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其潜在作用机制。将40只小鼠随机分为对照组(CON)、脂多糖组(LPS)、低浓度戊酸钠组(0.1 mmol/L戊酸钠,LSV组)、中浓度戊酸钠组(1 mmol/L戊酸钠,MSV组)和高浓度戊酸钠组(10 mmol/L戊酸钠,HSV组),每组8只,每组一笼进行饲养。LPS组和戊酸钠组小鼠第1天腹腔注射2.5 mg/kg LPS溶液,24 h后戊酸钠组每日灌服相应浓度的戊酸钠溶液0.2 mL,连续7 d,记录体重变化。7 d后处死小鼠,对小鼠肝脏中炎症因子表达以及NF-κB信号通路相关蛋白表达进行测定。结果显示:与CON组相比,其余各组小鼠体重在第1天和第2天均显著降低,第3天开始,MSV和HSV组小鼠体重与CON组无显著差异。MSV组小鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著低于LPS组;与LPS组相比,MSV组肝脏重量显著降低,肝脏指数无显著差异;LPS组小鼠肝脏中炎症细胞因子TNF-α、白细胞介素-6和IL-1β的mRNA相对表达量较CON组均显著升高,而添加戊酸钠后,这些炎症细胞因子的相对表达量均显著降低。与LPS组相比,MSV组小鼠肝脏中p65蛋白表达水平显著下降,而IκB-α蛋白表达水平显著升高。综合以上可知,添加戊酸钠可以抑制小鼠肝脏炎症细胞因子mRNA的表达,调节NF-κB信号通路相关蛋白表达,从而缓解脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤。

关键词： 积雪草   鲨烯环氧酶   基因克隆   生物信息学分析   启动子活性   表达量分析  

摘要： 【目的】克隆积雪草﹝Centella asiatica(L.)Urb.﹞的鲨烯环氧化酶(Squalene epoxidase,SE)基因,分析其启动子序列及表达模式,以探究该基因的功能。【方法】基于课题组前期已发布的积雪草基因组数据库,通过生物信息学分析、β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)组织化学染色与实时荧光定量PCR(qRT-PCR)等技术,分析积雪草CaSE3基因编码蛋白序列以及其启动子活性,并探究其在茉莉酸甲酯(MeJA)、褪黑素(MT)、4℃、聚乙二醇(PEG)不同处理条件下的基因表达模式。【结果】积雪草CaSE3基因开放阅读框(ORF)全长1587 bp,编码1个由528个氨基酸组成的蛋白质。其启动子序列长1310 bp,结合元件预测显示含有多个真核生物启动子核心元件、MYB/MYC转录因子结合元件,以及光响应、植物激素响应有关的顺式作用元件。启动子活性检测表明CaSE3启动子可有效驱动报告基因GUS表达。qRT-PCR分析显示,CaSE3基因表达量在MeJA处理下呈明显的先升高后降低表达趋势,低温处理下仅在9 h后显著诱导表达,而MT和PEG处理则显著抑制其表达。【结论】成功克隆积雪草苷生物合成的关键候选基因CaSE3及其启动子序列,启动子分析表明,CaSE3可能受多种转录因子及植物激素信号的调控,功能验证显示其启动子具备转录活性。上述结果为深入解析CaSE3在积雪草三萜皂苷生物合成中的分子调控机制及其代谢工程应用提供了重要的理论基础。

关键词： 新疆酸李提取物   RAW264.7细胞   抗炎及氧化应激   核因子κB信号通路   磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路  

摘要： 本研究探讨新疆酸李(Prunus cerasifera Ehrhart)提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7炎症模型细胞的抗炎作用及其潜在的分子机制。首先,对新疆酸李提取物进行乙醇梯度洗脱,并分别检测不同体积分数乙醇溶液洗脱部位的多酚和黄酮含量以及抗氧化活性;其次,针对体积分数70%乙醇溶液洗脱组分(PCEE-70),分析其对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞中抗氧化及氧化应激有关生化指标的影响;最后,通过蛋白免疫印迹(Western blot,WB)实验检测核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路有关磷酸化及非磷酸化蛋白的表达水平。结果表明,PCEE-70相较于其他洗脱组分具有较高的多酚和黄酮含量,并具有较强的多种抗氧化活性。PCEE-70能明显降低LPS诱导的RAW264.7炎症细胞中NO、活性氧和丙二醛含量,提高乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力,降低白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)促炎因子的水平。此外,WB结果表明,PCEE-70能明显降低LPS诱导的RAW264.7炎症细胞中TNF-α、p-NF-κB p65、p-NF-κB抑制蛋白、p-PI3K、p-AKT及p-JNK蛋白的表达。综上,PCEE-70能抑制LPS诱导RAW264.7炎症细胞炎性因子的分泌,从而延缓氧化应激反应对细胞的损伤,其作用机制与抑制NF-κB和PI3K/AKT信号通路的激活有关。

关键词： 黔东南州   黄精   多糖   含量测定   影响因子  

摘要： 目的:旨在比较不同产地、不同品种、不同年份、不同大小规格及不同炮制方法下的黄精多糖含量变化。方法:以黔东南州9个县的多花黄精、滇黄精、鸡头黄精的干燥根茎为原料,利用蒽酮-硫酸法测定黄精多糖含量。结果:黔东南州9个县的多花黄精的多糖含量由高到低依次是台江县(14.64%)>雷山县(13.41%)>剑河县(12.83%)>施秉县(11.26%)>丹寨县(9.13%)>黄平县(8.95%)>岑巩县(7.67%)>镇远县(5.84%),黔东南州4个县的鸡头黄精的多糖含量由高到低依次是施秉县(14.12%)>黄平县(12.17%)>岑巩县(11.32%)>丹寨县(10.60%),黔东南州4个县的滇黄精的多糖含量由高到低依次是岑巩县(12.21%)>黄平县(8.31%)>麻江县(7.17%)>镇远县(6.37%)。此外,研究发现同一县份不同品种黄精的多糖含量有一定差异,黄精种植年份与黄精多糖的含量总体呈正相关性,大小规格对多糖含量的影响不大,炮制方法会影响多糖含量,其中炒制法使多糖含量显著下降,清蒸法使多糖含量略有提高,九蒸九晒过程中多糖含量先增长后减小。结论:本研究有望为黔东南州产黄精的质量评价及标准的制定提供依据。