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关键词： 艾司氯胺酮   缺氧诱导因子-1α/血红素氧合酶-1信号通路   肺泡上皮细胞   脂多糖   铁死亡  

摘要： 目的探讨艾司氯胺酮(Esket)调控缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺泡上皮细胞铁死亡的影响。方法用10μg/mL LPS处理小鼠肺泡上皮细胞MLE-12,建立内毒素急性肺损伤离体模型。将MLE-12细胞分组并作相应处理:对照(Control)组、LPS组(给予10μg/mL LPS处理)、LPS+Esket组(给予Esket 25μmol/L和LPS 10μg/mL处理)、HIF-1α小干扰RNA(siRNA)+LPS+Esket组(细胞转染HIF-1α siRNA后给予Esket 25μmol/L和LPS 10μg/mL处理)、HO-1 siRNA+LPS+Esket组(转染HO-1 siRNA后给予Esket 25μmol/L和LPS 10μg/mL处理)、阴性对照(NC)siRNA+LPS+Esket组(细胞转染NC siRNA后给予Esket 25μmol/L和LPS 10μg/mL处理)。采用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;使用还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)试剂盒检测细胞GSH和GSSG水平;使用FerroOrange试剂盒检测细胞亚铁离子(Fe^(2+))水平;采用蛋白质印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、HIF-1α、HO-1蛋白表达水平。结果与Control组比较,LPS组、LPS+Esket组、NC siRNA+LPS+Esket组细胞IL-6、TNF-α、GSSG、Fe^(2+)水平均升高,GSH水平、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平均降低(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+Esket组、NC siRNA+LPS+Esket组IL-6、TNF-α、GSSG、Fe^(2+)水平均降低,而GSH水平、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平均升高(均P<0.05);与LPS+Esket组比较,HIF-1αsiRNA+LPS+Esket组、HO-1 siRNA+LPS+Esket组细胞IL-6、TNF-α、GSSG、Fe2+水平均升高,GSH水平、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。结论Esket通过调控HIF-1α/HO-1信号通路抑制肺泡上皮细胞铁死亡,减轻LPS导致的肺泡上皮细胞炎症和氧化应激反应。

关键词： 艾滋病病毒   抗体确证检测   核酸   补充试验  

摘要： 目的 分析HIV-1抗体阴性和不确定样本核酸检测结果,为艾滋病确证实验室的补充试验策略提供参考。方法 对宜宾市2022-2024年HIV-1抗体确证检测结果为阴性和不确定的样本进行HIV-1病毒载量检测。结果 2022-2024年共收到1 355例筛查阳性样本。三代抗体试剂初筛和复检有1 051例,其中确证结果阴性59例、不确定60例、阳性932例;四代抗原抗体试剂初筛和复检有304例,其中确证结果阴性42例、不确定38例、阳性224例。对145例确证结果阴性和不确定样本开展了病毒载量检测,其病毒载量结果 102例为阴性(未检出),2例在40~5 000拷贝/mL,41例(28.67%)为阳性(>5 000拷贝/mL,其中15例>1×10~7拷贝/mL)。HIV-1抗体确证阴性样本核酸检出率为19.28%,不确定样本核酸检出率为41.67%,差异有统计学意义(χ2=8.536,P<0.05)。结论 第四代抗原抗体试剂筛查HIV抗体阴性和不确定率均高于第三代试剂,宜宾市HIV确证阴性和不确定样本核酸阳性率较高,通过核酸检测作为补充手段尽可能地发现了急性期感染者。在进行补充试验时,建议对于HIV-1抗体阴性和不确定样本及时进行病毒载量检测,以尽早发现感染者,遏制疫情传播。

关键词： L-羟基脯氨酸   L-脯氨酸   氨基酸固定相   亲水相互作用液相色谱  

摘要： 以亲水性L-羟基脯氨酸和L-脯氨酸为改性剂,采用连续固液反应,成功制备了两种氨基酸型亲水相互作用液相色谱(HILIC)固定相,并通过红外光谱分析、热重分析、元素分析对其结构进行了系统表征。结果表明,两种功能化色谱固定相制备成功,键合量分别为0.193 mmol/g和0.178 mmol/g,均具有良好的热力学稳定性。在HILIC模式下,以磺胺、杂环胺、核苷、植物生长调节剂、黄酮、胺类物质为溶质,考察了两种固定相的色谱分离性能,结果表明,L-脯氨酸固定相和L-羟基脯氨酸固定相与分析物之间均存在亲水、π-π等相互作用,并且L-羟基脯氨酸固定相还存在氢键相互作用。L-羟基脯氨酸固定相对磺胺、植物生长素、黄酮等极性小分子具有良好的分离效果,证明该固定相可用于极性化合物分离。该研究拓展了氨基酸在色谱分离领域的应用,也为HILIC固定相的开发提供了新思路。

关键词： 杨树   PagNAC47   表达模式   次生木质部   光合作用   IAA  

摘要： 以84K杨(Populus alba×Populus glandulosa)为试材,克隆得到PagNAC47基因及其启动子。PagNAC47编码区全长1107 bp,编码368个氨基酸,具有NAC转录因子家族典型的NAM结构域,与毛果杨(***)PtrNAC47蛋白的同源性最高,为92.2%;PagNAC47启动子序列长度为1794 bp,含TATA-box和CAAT-box启动子基本元件及生长素(IAA)响应元件等。RT-qPCR分析表明,PagNAC47在老根、次生茎和成熟叶中的表达水平显著高于在幼根、初生茎和幼叶中的表达水平,且在成熟叶中表达水平最高。通过PagNAC47特异启动子驱动GUS报告基因的检测,揭示PagNAC47主要在器官的维管组织和成熟叶中表达。将35S启动子连接PagNAC47转入84K杨发现,与野生型相比,过表达株系的株高、茎粗、次生木质部宽度与层数、导管和纤维细胞面积及形成层层数均显著增加,根中次生木质部也有类似的现象,净光合速率和叶绿素含量显著增加,光合性能增强。PagNAC47的表达受IAA抑制,且抑制作用随IAA浓度的增加逐步增强。

关键词： 辣椒   CaSGR基因   VIGS技术   叶绿素   β-胡萝卜素  

摘要： 滞绿基因(STAY-GREEN,SGR)是一个调控植物叶绿素降解的关键基因,在调控植物衰老方面发挥着重要作用。为研究SGR基因在辣椒果实着色过程中的调控作用,采用同源基因克隆法,利用PCR技术从辣椒果实cDNA中扩增出CaSGR基因,对其蛋白序列进行生物信息学分析,并构建病毒诱导基因沉默(VIGS)载体,初步验证基因功能。结果表明:CaSGR基因的ORF为792 bp,编码263个氨基酸;生物信息学分析发现,茄科作物SGR基因相对保守,克隆的CaSGR蛋白与番茄、马铃薯的SGR蛋白进化关系较近;构建CaSGRVIGS载体并注射辣椒叶片,成功获得沉默植株,沉默植株叶片白化,果实颜色改变,CaSGR基因的表达量显著降低,果实中叶绿素与β-胡萝卜素含量明显增高。本研究为深入解析CaSGR基因在辣椒果实着色中的分子调控机制提供基础,并为培育高类胡萝卜素含量的辣椒新品种提供理论依据。

关键词： 一测多评   乙醇-水系统   青梅菌   核苷酸  

摘要： 建立了乙醇-水系统的一测多评法检测青梅菌中5种核苷酸含量,并基于核苷酸含量对青梅菌的储藏条件进行研究。以水作为提取溶液,乙醇作为流动相,试验对部分条件优化后进行了方法学验证,在此基础上建立了一测多评法并考察其耐受性。结果显示:该方法流速为0.8 mL/min、柱温为40℃;5种核苷酸的定量限在0.343〜0.900 mg/kg;加标水平在0.4〜10.0 mg/kg时,5种核苷酸回收率为94.7%〜98.4%,精密度为1.1%〜2.9%。校正因子分别为ƒ_(胞苷/鸟苷)为0.8573;ƒ_(肌苷/鸟苷)为0.9558;ƒ_(尿苷/鸟苷)为1.1774;ƒ_(腺苷/鸟苷)为1.2858;色谱峰定位依次为t_(胞苷/鸟苷)=-2.494、t_(肌苷/鸟苷)=2.251、t_(尿苷/鸟苷)=2.624、t_(腺苷/鸟苷)=5.763。试验表明校正因子及色谱峰定位耐受性较好,一测多评法与外标法测定结果无显著性差异。青梅菌建议在冷冻(-18℃)条件下储存。因此,该方法具有稳定性好、准确度高、经济、环保等特点,适合青梅菌中5种核苷酸的测定。

关键词： 白术多糖   提取方法   结构表征   抗氧化   免疫活性  

摘要： 目的本研究以白术多糖为研究对象,探究其最佳提取方法,并对其进行初步结构表征、抗氧化及免疫活性的探究。方法白术中的多糖含量通过苯酚硫酸法进行测定,并通过多糖含量作为考察指标以探究白术中多糖成分提取的最佳方法;结构主要通过红外光谱(IR)、高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)、高效液相色谱法(HPLC)等手段对其官能团、分子量及单糖组成进行表征;通过对DPPH·及·OH自由基的检测来探究白术多糖的抗氧化活性;以RAW264.7细胞为研究对象,采用MTT法及流式细胞术探究白术多糖的免疫活性。结果白术通过热水浸提法所得的多糖含量最高;通过红外光谱发现白术多糖含有O-H键、C-H键、C-O键等,且白术多糖的糖苷键可能具有α和β两种构型;HPGPC结果发现白术多糖是一个单一对称峰,表明是均一多糖,且分子量为3011.5 Da;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)-HPLC结果表明白术多糖的单糖组成主要包括Man、Rha、GalA、Glc、Xyl、Ara,其摩尔比为1.00∶1.38∶4.88∶51.88∶6.88∶8.00。白术多糖具有一定的DPPH·和·OH清除效果,发挥显著的抗氧化活性;且白术多糖能显著促进RAW264.7细胞的增殖及吞噬活性,具有显著的免疫活性。结论通过热水浸提法可以得到均一的白术多糖,并表现出显著的抗氧化及免疫活性。

关键词： 低蛋白平衡氨基酸日粮   猪   生长性能   繁殖性能   肉品质  

摘要： 随着饲料行业快速发展,蛋白资源短缺已成为业界高度关注的问题。畜禽粪便处理过程中释放的二氧化氮(NO2)是造成环境污染的主要因素,降低氮排放量是养殖行业面临的一大难题。面对以上两大挑战,低蛋白平衡氨基酸日粮得到了学界的广泛关注。低蛋白平衡氨基酸日粮应用于猪生产中,有利于节约蛋白饲料资源、环境保护,还能够降低仔猪腹泻率、提升母猪繁殖性能、改善育肥猪生长性能及肉品质等。低蛋白平衡氨基酸日粮应用于猪生产的主要作用机制包括提高氮利用率、改善肠道健康、增强抗氧化能力、调控肉质相关基因表达等。文章综述了低蛋白平衡氨基酸日粮在猪生产中的应用及影响机制,并给出不同生长阶段猪日粮适宜低蛋白水平与氨基酸平衡种类,以期为低蛋白平衡氨基酸日粮在猪生产中的应用提供参考。

关键词： 布鲁菌   外膜囊泡   蛋白质组学   免疫原性  

摘要： 旨在提取羊布鲁菌生物3型外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)并分析其蛋白组成成分,制备OMVs亚单位疫苗,评价OMVs疫苗的免疫原性。本研究利用差速离心法提取了OMVs,通过SDS-PAGE、透射电镜和ZeTA纳米粒径对OMVs进行鉴定;利用Label free液相质谱技术鉴定OMVs蛋白质组成成分,并进行GO聚类分析和KEGG富集分析;OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后,对小鼠脾脏进行病理检测和T细胞亚群分类检测;对小鼠血清进行IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A炎性细胞因子水平检测和IgG 1、IgG 2a和IgG 2b免疫球蛋白含量检测,评价OMVs免疫后小鼠的病理变化和细胞免疫水平。结果显示:成功提取了OMVs,其粒径大小为20~200 nm,相对分子质量在10~130 ku之间。蛋白质组学鉴定结果显示,OMVs中含有1612种蛋白质,其中包括Omp2b、Omp25、Omp31、Omp19和Bp26等多种外膜蛋白,以及脂蛋白和ABC转运体相关蛋白质。OMVs亚单位疫苗免疫小鼠后,小鼠脾脏未见明显的淋巴细胞排列疏松及坏死;诱导小鼠产生高水平IgG免疫球蛋白含量;同时诱导小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-17A和TNF-α炎性细胞因子表达量上升,IL-10和IL-4炎性细胞因子表达量下降;CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值增加。本研究证明OMVs中含有多个有效的免疫原性抗原,能诱导小鼠产生较好的细胞免疫水平,为明确布鲁菌OMVs蛋白成分和布鲁菌亚单位疫苗研发奠定了理论基础。

关键词： 猫爪草多糖   超声   酶解   低共熔溶剂   抗氧化活性  

摘要： 采用超声-酶法协同低共熔溶剂法对猫爪草多糖进行提取。在单因素试验基础上,以猫爪草多糖提取率为指标,通过响应面试验优化其提取工艺,并分析猫爪草多糖的抗氧化活性。结果表明:最佳提取工艺为氯化胆碱与乙二醇摩尔比1∶1、含水量30%、液料比25∶1(mL/g)、超声功率300 W、超声时间40 min、超声温度30℃、纤维素酶添加量2%(以猫爪草的质量为基准),在此条件下猫爪草多糖提取率为(282.48±16)mg/g。抗氧化活性分析结果表明,猫爪草多糖具有较好的抗氧化活性,其对ABTS自由基、DPPH自由基、羟基自由基的IC_(50)值分别为1.85、1.57、2.85 mg/mL。