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关键词： 中药多糖   肠道菌群   肠道微生物群   非酒精性脂肪肝病  

摘要： 非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种由代谢异常引起的肝脏疾病。NAFLD会导致肝脏结构损伤、功能障碍,严重时还会导致多器官衰竭。目前NAFLD的全球患病率呈上升趋势,亟需安全有效的治疗药物。肠道菌群是一个复杂的微生物生态系统,通过错综复杂的网络与各种身体组织相互作用,其产生的代谢物与NAFLD密切相关。而中药多糖具有调节炎症、免疫反应和肠道微生物群具有改善NAFLD的潜力。该文综述中药多糖和肠道菌群在NAFLD中的研究进展,旨在为NAFLD提供更佳的治疗策略。

关键词： 胚胎干细胞   基因编辑   CRISPR/dCas9   Sox17   细胞转染  

摘要： CIRSPR/dCas9系统是当前较为高效精准的基因编辑工具,在其中加入转录激活因子(如VP64、p65、Rta)即可用于高效稳定激活目标基因。Sox17是SOX家族转录因子,在早期胚胎发育中的胚层分化、细胞命运决定等生物过程中发挥重要调控作用。绵羊胚胎干细胞具有自我更新和多向分化的能力,是用于研究胚胎早期发育过程中细胞分化机制的重要体外模型,但是囿于其生长特性,难以实现外源基因的导入。为了探究激活绵羊胚胎干细胞中的Sox17基因的条件,本研究基于CRISPR/dCas9系统,利用脂质体转染、慢病毒侵染与电转等方法,对绵羊胚胎干细胞中的Sox17基因的进行激活,通过荧光定量PCR检测不同转染方法的Sox17表达量,对比不同条件的转染效果。结果表明电转法组在3种转染方法中转染效果最佳,Sox17表达量最高。高效稳定的基因激活方案可为其他物种尤其是家畜动物的胚胎干细胞研究提供参考,并为后续在绵羊胚胎干细胞中通过调控基因表达研究基因功能和实现精准的细胞命运调控奠定基础。

关键词： 肠膜明串珠菌   胞外多糖   合成路径   生物活性   功能特性  

摘要： 肠膜明串珠菌胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)是肠膜明串珠菌在生长代谢过程中分泌到细菌细胞壁外的一类次级代谢产物,具有良好的生物活性,可应用在食品领域中以改善产品品质及性能。该文概述了肠膜明串珠菌EPS的合成路径、影响因素及其生物活性,论述了其在食品领域中的功能特性和研究进展,旨在对肠膜明串珠菌EPS在食品行业中的进一步开发应用提供理论基础。

关键词： 解聚酶   噬菌体   耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌   荚膜   生物膜   重组蛋白  

摘要： 目的构建K64型荚膜特异性解聚酶重组蛋白Dep44,探讨其在对抗耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)感染中的应用效力。方法分离表达解聚酶的噬菌体(vB_Kpn_HF1013,GenBank:PP803128),分析其基因序列,筛选具有解聚酶活性的候选蛋白,构建重组蛋白Dep44并验证其解聚酶活性。通过滴板法验证Dep44重组蛋白的敏感谱,通过生物膜清除及血清杀菌实验评估Dep44抗菌活性。结果噬菌体vB_Kpn_HF1013尾刺蛋白具有解聚酶活性,能特异性裂解K64型CRKP荚膜。生物膜清除实验结果显示:与对照组比较,2μg/mL与10μg/mL剂量的Dep44重组蛋白均可有效破坏细菌生物膜。血清杀菌实验结果显示:Dep44重组蛋白具有协同血清杀菌能力,但这种作用需要依赖补体系统的存在,Dep44本身不具备直接杀菌活性。结论Dep44重组蛋白能够特异性裂解K64型CRKP荚膜,具备破坏生物膜及协同血清杀菌能力,有望应用于K64型CRKP相关感染的控制及医疗器械表面生物膜的清除。

关键词： 脓毒症   间充质干细胞微囊泡   内皮细胞   铁死亡   铁离子代谢  

摘要： 目的探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)微囊泡通过调控铁离子代谢减轻内皮细胞铁死亡对脓毒症的治疗作用。方法根据对内皮细胞的处理方式的不同,将其分为对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(即LPS组)及MSC微囊泡组。对照组内皮细胞不做处理;LPS组内皮细胞采用1μg/ml LPS刺激24 h;MSC微囊泡组内皮细胞在LPS刺激的基础上,同时加入2×10^(6)MSC微囊泡治疗。通过酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测内皮细胞白细胞介素1β(interleukin 1 beta,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)浓度;采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)试剂盒、铁离子试剂盒检测内皮细胞ROS、铁离子水平;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)检测内皮细胞增殖能力;采用免疫荧光法检测内皮细胞脂质过氧化情况;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测内皮细胞内铁离子代谢相关基因FPN1、FTH1、IREB2表达。结果与对照组比较,LPS组及MSC微囊泡组内皮细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平增加,细胞增殖能力下降(P均<0.05);铁离子含量显著增加,脂质过氧化水平显著上调(P均<0.05);FPN1、FTH1表达均增加,IREB2表达降低(P均<0.05)。与LPS组比较,MSC微囊泡组内皮细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平降低,细胞增殖能力上调(P均<0.05);铁离子含量减少,脂质过氧化水平下降(P均<0.05);FPN1、FTH1表达下降,IREB2表达增加(P均<0.05)。结论脓毒症后内皮细胞发生铁死亡,MSC微囊泡可通过调控铁离子代谢改善内皮细胞铁死亡。

关键词： 预制烤羊腿   复热方式   挥发性风味物质   游离氨基酸   核苷酸  

摘要： 为研究不同复热方式对内蒙古预制烤羊腿特征风味的影响,分别采用微波、蒸汽、烘烤3种方式对产品进行复热。结果表明,采用固相微萃取法结合气相色谱-质谱联用技术共检测出挥发性风味物质48种,包括醛类17种、醇类9种、酮类3种、杂环类3种、酸类4种、酯类4种、烯烃类8种,其中烘烤复热组的己醛、正庚醛含量高达1489.22μg/kg和235.89μg/kg,十三醛、十六醛在蒸汽复热组中含量较高,分别为23.89μg/kg和200.09μg/kg,这些物质均使这两组预制烤羊腿产生了不良气味;1-辛烯-3-醇和2-正戊基呋喃含量在微波复热组中远高于其他组,使产品具有蘑菇风味、发酵香味、肉香和清新气味。滋味物质分析结果显示,3种复热方式均会对预制烤羊腿的游离氨基酸、核苷酸含量产生一定影响,微波复热组游离氨基酸总量下降最少,其中谷氨酸和丙氨酸滋味活性值远高于其他复热方式;微波复热组的次黄嘌呤核苷酸、腺嘌呤核苷酸和鸟嘌呤核苷酸高于其他复热组,结合滋味活性值进行分析可知,微波复热可最大限度地保留内蒙古预制烤羊腿的风味物质。综上所述,微波复热是内蒙古预制烤羊腿较为适宜的复热方式。

关键词： 罗汉果苷   巨噬细胞   M1型极化   骨髓间充质干细胞   炎症反应   成骨分化   高糖  

摘要： 背景:糖尿病微环境会造成巨噬细胞过度M1极化,这种高糖炎症状态会抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而影响糖尿病骨缺损的愈合。研究表明罗汉果苷Ⅴ具有抗炎、抗氧化、降血糖的作用,但其能否调节高糖炎症状态下巨噬细胞M1极化及骨髓间充质干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:探讨罗汉果苷Ⅴ在高糖炎症状态下调节巨噬细胞M1型极化对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:构建糖尿病C57BL/6小鼠模型,从正常和糖尿病小鼠分离骨髓来源巨噬细胞,分别培养于低糖和高糖培养基。使用脂多糖和干扰素γ作为炎症刺激诱导骨髓来源巨噬细胞的M1型极化,同时以160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,用流式细胞术检测F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例,qRT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素1β、白细胞介素6的mRNA表达水平,ELISA检测骨髓来源巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α水平。分离C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,分别使用低糖或高糖成骨诱导液诱导成骨分化,添加M1型巨噬细胞条件培养基作为炎症刺激,以及320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,成骨诱导14 d后采用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关因子2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达水平,成骨诱导21 d后进行茜素红染色及定量分析。结果与结论:①流式细胞术结果显示320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例明显低于高糖炎症对照组(P<0.05);②qRT-PCR结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素6的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05),320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组白细胞介素1β的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);③ELISA结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的肿瘤坏死因子α分泌水平较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);④320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预后,高糖炎症状态下骨髓间充质干细胞的钙盐沉积增加(P<0.05),且碱性磷酸酶、Runt相关因子2和骨桥蛋白的mRNA相对表达量增加(P<0.05)。结果表明,罗汉果苷Ⅴ可通过抑制高糖炎症状态下骨髓来源巨噬细胞的M1型极化及炎症因子表达,促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

关键词： 副溶血性弧菌   重组酶介导核酸扩增   快速检测  

摘要： 副溶血性弧菌是引发食源性疾病的主要致病菌,建立快速准确的检测技术对于预防其引发的食物中毒具有重要意义。本研究基于重组酶介导核酸扩增技术(Recombinase-Aided Amplifcation,RAA),建立适用于副溶血性弧菌的高效检测方法。通过对比传统培养法与RAA技术的灵敏度、特异性,以及优化实验参数,验证RAA方法在副溶血性弧菌检测中的适用性。结果表明,采用RAA技术可直接检测样本,只需2~3 h即可获得结果;对于低菌量样本,经6~8 h增菌预处理后,总检测时间可控制在10 h以内,显著缩短了检测时间;建立的RAA检测方法具有较高的特异性(100%)和灵敏度,适用于水产品等食品中副溶血性弧菌的现场快速检测。

关键词： HLA分型   STR位点   造血干细胞移植   急性淋巴细胞白血病   嵌合体  

摘要： 目的分析1例接受亲缘HLA半相合造血干细胞移植后急性淋巴细胞白血病患者的HLA分型和STR位点嵌合情况。方法采用PCR-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)及2代测序技术(NGS)对患者移植后外周血、口腔粘膜拭子及唾液标本进行HLA分型。同时,采用阅微21位点短串联重复序列(STR)测定试剂盒对外周血、口腔粘膜拭子及唾液标本进行STR位点检测。结果患者移植后外周血以及第2次唾液标本的HLA分型和STR位点结果均与供体(父亲)的检测结果完全一致,而口腔粘膜拭子及第1次唾液标本的HLA分型及STR位点结果均显示供者与受者的嵌合体型。结论移植后的随访和监测中,除了关注外周血标本外,可定期监测患者口腔粘膜和唾液标本的HLA分型和STR位点嵌合情况,以全面评估移植效果和复发风险。

关键词： 分级建构   结构功能观   模型   建模   T4溶菌酶  

摘要： 基于模型与建模的科学思维设计了蛋白质(T4溶菌酶)球棍模型和计算机模型的分级建构活动,帮助学生搭建形象思维和抽象思维之间的桥梁,认识生物大分子蛋白质的微观结构,建立分子水平结构与功能相适应的观念。