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关键词： 糖尿病肾脏病   马齿苋多糖   铁死亡  

摘要： 探究马齿苋多糖对2型糖尿病小鼠肾脏的保护作用及其可能存在的分子机制。C57BL/6雄性小鼠采用多次腹腔注射STZ建立糖尿病动物模型,马齿苋多糖喂养组分别按照25, 50和100 mg/kg的剂量每日灌胃给予马齿苋多糖。8周后,检测各组小鼠尿微量蛋白、血肌酐、肾脏SOD、肾脏MDA的水平,通过HE、MASSON、PAS染色观察肾脏形态学变化。利用Western blot检测相关蛋白的表达情况。结果表明,与对照组相比,模型组小鼠的尿微量白蛋白、血肌酐水平升高,肾组织的形态异常, GPX4表达下调、ACSL4表达上调。与模型组相比,马齿苋多糖组小鼠的尿蛋白含量、血肌酐水平降低,肾脏病理形态改变明显减轻,且GPX4的表达上调ACSL4表达下调。马齿苋多糖可通过上调CPX4、下调ACSL4发挥肾脏保护功能。

关键词： CD82蛋白   单克隆抗体   原核表达   流式细胞术  

摘要： 为研究CD82蛋白在猪病中的功能,提供一种针对猪CD82蛋白的单克隆流式抗体,本研究通过原核表达系统制备猪CD82蛋白大细胞外环结构域(EC2)重组抗原,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠。通过4次免疫和ELISA筛选,获得抗体效价最高的小鼠,用其脾细胞进行细胞融合。对融合细胞上清用流式细胞术进行筛选,选取效果最好的1株杂交瘤细胞株11G3制备腹水并纯化,其抗体亚型为IgG2a型。通过间接ELISA和流式细胞术对纯化后的CD82 mAb进行验证,显示出高亲和力和特异性,能有效标记表达CD82蛋白的猪肺巨噬细胞(PAM)。本研究结果为CD82蛋白在猪病中的功能研究提供了重要的生物学工具,为进一步探索其在免疫调节和抗病毒反应中的作用奠定了基础。

关键词： 梅毒螺旋体   OmpH蛋白   生物信息学分析   蛋白表达与纯化   免疫原性  

摘要： 目的利用生物信息学方法分析预测梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)TpOmpH蛋白的生物学性质,并纯化获得目的蛋白且制备得到多克隆抗体。方法2024年1月至2025年2月湖南中医药高等专科学校附属第一医院(湖南省直中医医院)医学检验科等团队利用生物信息学及动物实验等方法从国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)中获得TpOmpH蛋白的编码序列,使用Protparam、Protscale、SignalP 6.0、NetNGlyc-1.0、TMHMM2.0、NetPhos-3.1、SOPMA、AlphaFold3、IEDB、STRING、C-immsim等生物信息学工具预测TpOmpH的生物学特性。构建重组质粒pET28a-TpOmpH,纯化目的蛋白。将TpOmpH蛋白免疫小鼠,获得抗血清并检测抗体滴度。结果TpOmpH是一个相对分子质量为19.7 kDa的疏水性外膜蛋白,稳定性较强。TpOmpH蛋白定位在细胞膜外,含有11个丝氨酸、4个苏氨酸和1个酪氨酸磷酸化位点,但是无糖基化位点。TpOmpH蛋白二级结构77.91%的氨基酸为α-螺旋,8.72%的氨基酸为β片层结构,10.47%的氨基酸为无规卷曲,2.91%的氨基酸为β转角。AlphaFold3预测得到的三级结构处于最佳状态。TpOmpH蛋白有4个细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位、4个线性表位和5个空间表位。TpOmpH蛋白可能与Tp92、MutS、SurA、TPANIC_0600等蛋白发生相互作用,可能参与了Tp入侵。TpOmpH蛋白能够诱导B细胞数量增加、抗体含量升高、Th细胞数量增加、NK细胞数量上升以及能够诱导各种细胞因子表达。通过Ni 2+亲和层析获得了较高纯度的TpOmpH蛋白,与理论相对分子质量相符合。TpOmpH蛋白能诱导小鼠分泌多克隆抗体,抗体滴度高于1∶10000。结论TpOmpH蛋白是一种定位在Tp外膜的疏水性蛋白,能诱导小鼠分泌高滴度抗体,为Tp的致病机制以及疫苗研发提供了实验基础。

关键词： 布顿大麦   HEMG基因   内生真菌   基因克隆   相对表达量  

摘要： 试验旨在探究内生真菌对宿主植物原卟啉原氧化酶的非同源性同源功能酶基因(HEMG)的影响。试验使用逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)克隆布顿大麦HEMG基因的蛋白质编码区(CDS)并完成测序;对得到的基因序列进行生物信息学分析,通过亚细胞定位技术确定HEMG蛋白的位置;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测新疆温宿县和甘肃临泽地区带内生真菌(GI、WI)和不带内生真菌(GF、WF)的布顿大麦,以及甘肃菌植入温宿的布顿大麦(HE2)和温宿菌植入甘肃的布顿大麦(HE3)中的HEMG基因的相对表达量。结果显示,克隆的HEMG基因CDS长度为927 bp,编码308个氨基酸残基。HEMG蛋白可能定位于细胞核,且无跨膜结构域和信号肽。布顿大麦HEMG基因与乌拉尔图小麦的HEMG基因同源性最高,达98.04%。GI的HEMG基因相对表达量显著高于GF(P<0.05),WI的HEMG基因相对表达量显著低于WF(P<0.05),HE3的HEMG基因相对表达量显著高于WI(P<0.05),HE2的HEMG基因的相对表达量显著低于GI(P<0.05)。研究表明,甘肃临泽地区菌株能够提高HEMG基因相对表达量,新疆温宿县菌株则起到抑制作用。

关键词： 肉瘤   干细胞   干性指数   铁死亡   生存预后   免疫浸润  

摘要： 背景:干性指数可能与肉瘤预后、免疫浸润有关,但具体调控机制与特征基因尚不清楚。目的:利用基因干性指数模型探究肉瘤干细胞与患者预后和免疫浸润的关系,并识别肉瘤干细胞铁死亡特征基因。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)中获取肉瘤RNA测序数据及相关临床信息。利用肉瘤干性指数,对获取的肉瘤RNA测序数据进行分组。利用生存数据进行组间预后情况分析,获取组间差异表达基因后进行通路富集和免疫浸润分析。获得铁死亡相关差异基因,构建蛋白互作网络并进行预后相关性分析。培养横纹肌肉瘤细胞系,分为贴壁细胞组和干细胞组,贴壁细胞组不予任何干预,干细胞组通过无血清培养处理以诱导横纹肌肉瘤干细胞富集,qRT-PCR验证干细胞相关标志物、铁死亡相关差异基因以及铁死亡相关标志物的mRNA表达。结果与结论:①以干性指数中位数为界将患者分成高干性指数组和低干性指数组,通过患病风险预测显示高干性指数组患者的无进展生存期低于低干性指数组,提示预后不佳;②GO、KEGG分析显示肉瘤高、低干性指数组差异表达基因参与不同的细胞通路;高干性指数组和低干性指数组之间免疫浸润存在差异;差异基因中有23个铁死亡相关基因,其中9个可构成相关性较强的蛋白互作网络,其中IDO1、IFNG、AQP5高表达的肉瘤患者预后更好,CA9高表达的肉瘤患者预后不佳;③qRT-PCR结果显示,与贴壁细胞组相比,干细胞组干细胞相关标志物NANOG、SOX2和OCT4 mRNA表达显著升高(P<0.05);与贴壁细胞组相比,干细胞组铁死亡相关标志物SLC7A11的mRNA表达显著降低(P<0.05),ACSL4、GPX4、FTH1和COX2的mRNA表达显著升高(P<0.05);与贴壁细胞组相比,干细胞组差异基因CA9的mRNA表达显著降低,IDO1、IFNG、AQP5的mRNA表达显著升高(P<0.05)。经上述生物信息学分析与实验验证,干细胞与肉瘤生存、铁死亡过程密切相关,CA9、IDO1、IFNG、AQP5在肉瘤干细胞中异常表达,可能成为肉瘤诊断标志物和治疗新靶点。

关键词： 氧化鱼油   丝兰多糖   肝脏损伤   抗氧化通路   凋亡信号通路  

摘要： 本研究旨在探讨摄入氧化鱼油引发的氧化应激对大鼠肝脏的损伤,并评估丝兰多糖B(YPB)在缓解氧化鱼油引发的肝脏损伤中的保护作用及可能机制。选用32只健康、体重相近的21日龄断奶雄性Wistar大鼠,经过3 d的适应期后,空腹称重并根据体重相近的原则随机分为2组,即对照组和YPB组,每组16只(n=16)。YPB组大鼠每日以20 mg/kg BW的剂量灌胃YPB,对照组大鼠每日灌胃等体积的双蒸水。试验第1~8天,所有大鼠均饲喂基础饲粮(含7%正常鱼油);从试验第9天开始,各组中随机选取8只大鼠改为饲喂氧化鱼油饲粮(含7%氧化鱼油),其余大鼠继续饲喂基础饲粮,持续饲喂至第26天。结果显示:氧化鱼油的摄入显著降低了大鼠的平均日增重(P<0.05);显著提高了大鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性和尿素氮(UN)含量及肝脏中GPT和GOT活性(P<0.05);显著降低了大鼠血清中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)活性及肝脏中过氧化氢酶(CAT)、SOD和GSH-Px活性(P<0.05),显著提高了血清中丙二醛(MDA)和脂质过氧化物(LPO)含量及肝脏中MDA、LPO和羰基化蛋白质(PC)含量(P<0.05);显著上调了肝脏中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的mRNA相对表达量(P<0.05),显著下调了肝脏中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的mRNA相对表达量、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)的蛋白相对表达量、Bcl-2/B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)的比值和磷酸化核因子-E2相关因子2(PNrf2)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)的比值(P<0.05)。在饲喂含氧化鱼油饲粮的大鼠中,灌服YPB显著降低了血清和肝脏中GPT和GOT活性(P<0.05);显著提高了血清和肝脏中T-AOC及CAT、SOD和GSH-Px活性(P<0.05);显著降低了血清中MDA和LPO含量及肝脏中MDA和PC含量(P<0.05);显著下调了肝脏中Bax的mRNA相对表达量(P<0.05),显著上调了肝脏中Bcl-2的mRNA相对表达量和Bcl-2/Bax的比值(P<0.05)。综上可知,YPB可通过提高抗氧化能力减轻氧化鱼油饲粮诱导的大鼠肝脏氧化损伤,这一过程涉及到其调节了Bcl-2/Bax/Caspase3凋亡信号通路和Nrf2/Keap1抗氧化信号通路。

关键词： 沙门菌亚属   肠炎   新发   沙门菌双相亚利桑那亚种   多重耐药   序列型   克隆  

摘要： 分析新发腹泻型沙门菌双相亚利桑那亚种(S.Ⅲb)50:z52:z35/ST8433克隆的基因组学特征。回顾性分析因"发热、腹泻"就诊于复旦大学附属儿科医院肠道门诊、最终诊断为"细菌性肠炎"的2例患儿的临床资料,患儿粪便样本培养均为沙门菌感染阳性,全基因组测序结果显示菌株均为S.Ⅲb 50:z52:z35/ST8433,国内外数据库无收录。药物敏感性试验显示病例1沙门菌分离株属抗菌素敏感株,对28种抗菌药物敏感;病例2沙门菌分离株属多重耐药株,仅对11种抗菌药物敏感,而β-内酰胺类、喹诺酮类和大环内酯类抗生素耐药。全基因组测序结果显示耐药基因检测病例1分离株携带氨基糖苷类aac(6′)-Iaa和喹诺酮类parC(T57S)耐药基因,病例2分离株携带β-内酰胺类blaCTX-M-65、喹诺酮类因parC(T57S)、gyrA(S83Y)和qnrS1、红霉素mph(A)、mph(E)、erm(B)、msr(E)等8类药物耐药基因,病例2分离株染色体上独有小肠结肠炎耶尔森菌的Ⅲ型分泌系统(T3SS)。毒力基因检测显示病例2的沙门菌Ⅰ型毒力岛(SPⅠ-1)的分泌侵袭蛋白基因有9个,比病例1多2个;肠毒素的类伤寒沙门菌毒素和黏附蛋白基因数量也比病例1分别多1个。本次发现的2株沙门菌分离株为同血清型、同序列型和同T6SS的克隆,但耐药性不同,且腹泻幼儿间无共同暴露史,提示S.Ⅲb 50:z52:z35/ST8433克隆具有高度重组性和高毒力性特征。

关键词： 间充质干细胞   细胞因子   体细胞   菌落  

摘要： 为研究奶牛脐带间充质干细胞治疗奶牛乳房炎的效果,该试验利用细胞分离技术培养奶牛脐带间充质干细胞,将干细胞与抗生素分别注入患乳房炎奶牛体内,通过比较二者血清中IL-6、CRP、8-OHdG、SOD、TNF-α含量变化和乳汁组成变化,探究脐带间充质干细胞对奶牛乳房炎的治疗效果。结果显示,注射干细胞奶牛血清中IL-6降低11.74%,CRP升高11.02%,8-OHdG降低3.17%,SOD升高3.83%,TNF-α降低10.61%,乳汁中菌落数和体细胞数均下降明显;与注射抗生素奶牛血清中IL-6、CRP、8-OHdG、SOD、TNF-α含量变化存在差异。试验证明脐带间充质干细胞具有治疗奶牛乳房炎效果,且在抑制炎症、恢复乳汁品质、降低组织损伤和修复乳腺组织方面均具有一定功效。

关键词： PLGA   桑枝多糖   脂多糖(LPS)   十二指肠   肠炎  

摘要： 为探究聚乳酸-羟基乙酸桑枝多糖(PR)纳米粒对脂多糖(LPS)诱导小鼠十二指肠炎症的预防作用,本研究以60只8周龄ICR小鼠为试验材料,以生理盐水灌胃和腹腔注射为对照(CON),分别进行生理盐水灌胃+LPS腹腔注射(LPS)、地塞米松腹腔注射+LPS腹腔注射(DEX)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)桑枝多糖纳米粒灌胃+LPS腹腔注射(PR)、桑枝多糖灌胃+LPS腹腔注射(RMP)、聚乳酸-羟基乙酸灌胃+LPS腹腔注射(PLGA)处理,处理6 h后,记录小鼠体重变化,并进行疾病活动指数(DAI)评分,检测血清和十二指肠中炎性因子白介素-1β(IL-1β)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)含量和丙二醛(MDA)含量,观察肠形态及肠屏障变化,检测黏蛋白2(MUC2)和闭合蛋白(Occludin)mRNA相对表达水平,综合评价PR纳米粒对LPS诱导十二指肠炎症的预防作用。结果显示,与对照(CON)相比,LPS处理小鼠腹泻明显,DAI指数极显著升高,小鼠体重极显著下降;小鼠血清及十二指肠IL-1β含量、TNF-α含量和NO含量极显著升高,血清T-AOC和SOD活性极显著降低,MDA含量极显著升高;小鼠十二指肠形态结构异常,肠绒毛长度和隐窝深度降低,杯状细胞减少;小鼠十二指肠肠道MUC2和Occludin的mRNA相对表达水平极显著降低。与LPS处理相比,PR处理及RMP处理小鼠临床症状明显减轻,肠道组织结构紊乱状况显著改善,炎性细胞因子分泌量降低,血清抗氧化能力提高,肠道MUC2和Occludin mRNA相对表达水平提高,LPS诱导的十二指肠炎症状况明显缓解,且PR纳米粒处理效果优于RMP处理。总之,PLGA桑枝多糖纳米粒对LPS诱导肠炎具有较好的预防作用,可以作为抗肠炎的一种多糖类纳米粒候选药。

关键词： 姜黄属   多糖   分离纯化   结构特征   药理活性   抗肝纤维化   抗肿瘤   抗溃疡   降血糖  

摘要： 姜黄属Curcuma隶属于姜科,常用中药姜黄、莪术、郁金及片姜黄均来源于该属植物。姜黄属中药的主要药效成分为姜黄素类和挥发油类,近年来姜黄属中药的多糖成分因具有多种药效活性而备受关注。现代药理学研究表明,多糖作为姜黄属中药的主要活性成分之一,具有抗氧化、抗肝纤维化、抗肿瘤、抗溃疡、降血糖、增强免疫、抗炎、抗凝血等药理活性,已成为姜黄属中药开发应用研究的热点之一。基于国内外对姜黄属中药多糖的研究报道,系统地总结了姜黄属中药多糖的植物来源、提取、分离和纯化方法、结构特征、药理活性及其潜在机制,为姜黄属中药多糖的进一步研究和开发提供一定的科学依据。