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关键词： 化妆品   氨基酸   超高效液相色谱-质谱法   生物发酵原料  

摘要： 采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时对生物发酵原料中的20种氨基酸进行含量检测。选用MicroPulite PHS tC_(18)色谱柱,多反应正离子监测模式进行扫描,优化了液相和质谱条件。结果显示20种氨基酸在质量浓度0.5~5μg/mL线性关系良好(R^(2)>0.99),回收率为91.9%~115.0%。方法检出限为0.05μg/mL,定量限为0.5μg/mL。该方法精密度好,前处理操作简单,结果准确,快速高效。为生物发酵化妆品原料中的氨基酸类成分的含量测定提供了技术参考。

关键词： 氢氧化钠   液化   核酸   聚合酶链反应   三羟甲基氨基甲烷盐酸盐  

摘要： 目的探讨呼吸道样本NaOH处理对核酸检测效率的影响及优化方法选择,为呼吸道样本核酸提取前处理流程提供科学依据。方法从北京协和医院检验科收集16份鼻咽拭子(NPS)样本和24份痰液样本。将浓度为1×106copies/ml的肺炎支原体(MP)DNA国家标准品分别用病毒保存液和痰液稀释,制备成模拟阳性鼻咽拭子样本和模拟阳性痰液样本。临床鼻咽拭子样本和模拟鼻咽拭子样本分别按照1∶1比例使用生理盐水、1mol/L NaOH,胰酶进行液化处理。模拟痰液样本按照1∶1比例分别用胰酶和1mol/L NaOH液化处理。模拟痰液样本用1mol/L NaOH液化后,加不同浓度三羟甲基氨基甲烷盐酸盐[Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride,Tris-HCl]优化处理。所有样本均使用普通磁珠法核酸提取和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增。运用t检验比较不同液化试剂处理样本后核酸Ct值的组间差异。结果与生理盐水相比,1mol/L NaOH处理显著抑制鼻咽拭子中甲型流感病毒(IFVA)和呼吸道合胞病毒(RSV)RNA的检测,结果由阳性转为阴性;而处理前后MP和腺病毒(ADV)DNA的Ct值差异无统计学意义(t=2.644、2.862,均P>0.05)。在模拟鼻咽拭子样本中,1mol/L NaOH液化处理对2000和1000 copies/ml MP DNA无影响(t=0.946、1.925,均P>0.05),但对低载量(200和500 copies/ml)的检测具有显著抑制作用(t=3.085、2.566,均P<0.05)。胰酶处理对DNA和RNA病原体核酸检测均无显著影响(均P>0.05)。模拟痰液样本经1mol/L NaOH液化后,MP DNA Ct值相比胰酶组显著升高(t=3.935,P<0.05),使用不同浓度(1、0.5和0.25 mol/L)Tris-HCl(pH=7)中和后Ct值差异无统计学意义(t=0.333、1.984、0.182,均P>0.05)。结论1mol/L NaOH液化痰液对PCR检测具有抑制作用,可能导致假阴性结果。通过添加Tris-HCl可以一定程度缓冲NaOH的抑制,提高PCR检测的准确性。

关键词： 南酸枣叶   不同发育时期   多糖   抗氧化活性   单糖组成  

摘要： 该研究选取8个发育时期的南酸枣叶片作为试验材料,通过超声辅助提取多糖,并通过测定多糖含量、单糖组成和抗氧化活性来探究南酸枣叶片在不同生长阶段的动态变化规律。结果表明:南酸枣叶片总糖含量为22.41%~34.16%,随发育进程整体呈先下降后上升的趋势,而糖醛酸含量在各时期无显著差异(P>0.05);多糖的单糖组成以甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖为主,其中葡萄糖的相对物质的量比最高,且其含量变化最为显著;甘露糖和木糖含量变化相对稳定。抗氧化活性分析显示,t1时期(萌芽期)和t8时期(衰老期)的多糖表现出较强的抗氧化能力。

关键词： 脓毒症   干细胞   免疫反应   炎症  

摘要： 目前对于脓毒症的治疗多以非特异性治疗为主,因此迫切需要新的治疗策略。干细胞因其独特的生物学特性,已成为多种疾病治疗的研究热点。近年研究表明,干细胞可通过降低宿主细菌负荷、调控炎症稳态、改善多器官功能障碍等多种途径,提高脓毒症患者生存率;其衍生物外泌体也能缓解脓毒症患者体内失衡的免疫反应。本文综述了干细胞治疗脓毒症的最新研究进展。

关键词： 青绿苔草   SH4基因   亚细胞定位   表达分析   靶点筛选   落粒性  

摘要： 青绿苔草(Carex breviculmis)是一种节水抗旱的重要乡土物种,具有绿期长、耐阴、结实率高等优点。但在实际采收过程中,种子极易落粒的问题限制了种子机械化收获和大规模生产应用。为探究SH4基因在青绿苔草落粒过程中的功能,进一步利用基因编辑技术创制低落粒新种质,本研究克隆青绿苔草CbSH4基因并进行基因编辑靶点筛选。结果表明,CbSH4编码319个氨基酸残基,其编码产物是亲水性蛋白,与康藏嵩草(Carex littledalei)亲缘关系最近。CbSH4含有1个高度保守的Myb4 DNA结合域,属于典型的MYB转录因子。烟草瞬时表达结果显示,CbSH4定位于细胞核和细胞质。实时荧光定量结果表明,CbSH4在穗中的相对表达量显著高于根和叶,在不同发育时期的离区中均有表达。同时,为了在青绿苔草中实现高效的基因编辑,本研究设计了3个特异性靶点,利用sgRNA体外转录和筛选,获得切割效率58.3%的sgRNA1,可用于后续青绿苔草基因编辑。本研究成功克隆了CbSH4并完成初步功能分析,筛选出了高效基因编辑靶点,为创制低落粒的青绿苔草新种质提供了基础。

关键词： YTHDF3   敲低   三阴性乳腺癌   蛋白质组学   差异分析  

摘要： 目的分析三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞敲低YTHDF3(YT521-B homology domain family 3)前后的蛋白质表达差异,探究YTHDF3调控TNBC细胞蛋白质功能的可能机制。方法利用分子克隆、靶点设计和病毒载体包装技术构建YTHDF3稳定敲低的MDA-MB-231细胞系并采用Western blot法进一步验证。裂解细胞蛋白,采用超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)和液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法获取因敲低YTHDF3而出现的差异表达蛋白。使用String数据库及Cytoscape 3.10.1软件,绘制并分析蛋白质互作网络(protein-protein interaction,PPI)并筛选核心靶点。通过David数据库对核心靶点进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路和基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析。采用RNA干扰技术分别敲低MDA-MB-231和HS-578T细胞中的YTHDF3或UUbiquitin(BBB)基因,Western blot法验证YTHDF3敲低的两种TNBC细胞中核心靶蛋白的表达,并采用Transwell法检测UBB敲低对TNBC细胞侵袭和迁移的影响。结果成功构建了YTHDF3稳定敲低的TNBC细胞模型,并在该细胞中定量到2295个蛋白,筛选出261个差异表达蛋白(126种下调和135种上调)。GO分析结果显示,差异下调蛋白主要涉及翻译和蛋白质稳定性,而对细胞群体增殖的负调控蛋白则是上调表达。KEGG结果表明,差异下调蛋白主要富集于剪接体相关信号通路,而差异上调蛋白主要与凋亡通路相关。PPI分析表明有6个核心靶点(RPS27A、UBA52、UBC、UBB、RPL4和RPS2)下调。Western blot分析揭示YTHDF3敲低的MDA-MB-231和HS-578T细胞中YTHDF3和UBB蛋白表达均降低。Transwell结果指出UBB缺失抑制TNBC细胞侵袭和迁移水平。结论本文以全新视角的研究,揭示了YTHDF3通过调控下游核心靶点UBB在TNBC细胞侵袭转移中发挥着重要作用。

关键词： 黑木耳   多糖   提取工艺   抗氧化活性   降糖活性  

摘要： 本研究利用酶解法提取黑木耳多糖.以黑木耳粗多糖提取率为指标,并通过单因素实验和响应面试验对黑木耳粗多糖的提取工艺条件进行优化;通过DEAE纤维素柱分离出两种多糖组分,分别命名为AAP-1和AAP-2,并对其总糖、蛋白质、糖醛酸及总酚含量进行测定;通过DPPH自由基、OH自由基、O_(2)^(-)自由基清除率比较AAP-1和AAP-2的抗氧化能力,通过α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制率比较AAP-1和AAP-2的降糖能力.结果表明:黑木耳多糖的最佳提取条件为:酶解pH=5、酶解温度50℃、酶解时间90 min、酶浓度40 mg/g.与粗多糖相比,洗脱后的AAP-1和AAP-2总糖含量明显提高,蛋白质、糖醛酸及总酚等杂质均减少.其中0.8 mg/mL的AAP-1和AAP-2对于DPPH自由基清除率分别为49.05%和62.69%,对于OH自由基清除率分别为34.04%和45.02%、对于O_(2)^(-)自由基清除率分别为38.62%和39.98%.同时,1.0 mg/mL的AAP-1和AAP-2对于α-葡萄糖苷酶抑制率分别为72.24%和87.10%,对于α-淀粉酶抑制率分别为80.51%和89.23%.研究结果表明,AAP-1和AAP-2均具有一定的抗氧化及降糖能力,同时,AAP-2的体外活性较高,为进一步开发木耳多糖提供理论依据.

关键词： 马铃薯   StLOS5   生物信息学分析   干旱胁迫  

摘要： 为探究马铃薯钼辅因子硫化酶基因(LOS5)的结构和功能,以紫彩3号马铃薯为试验材料,采用PCR技术克隆获得马铃薯StLO S5基因,并对其进行生物信息学分析、亚细胞定位、酵母逆境表型观察以及干旱胁迫下表达模式分析。结果表明,马铃薯StLOS5基因CDS区全长2460 bp,编码819个氨基酸,分子质量为91.50 ku,理论等电点为6.78,亲水系数为-0.268,属于亲水性蛋白。系统进化分析显示,马铃薯StLOS5蛋白与番茄LOS5同源性最高,可能具有相似的功能。在其启动子区域检测到多个与非生物胁迫相关的顺式作用元件。亚细胞定位显示,StLOS5主要定位于细胞核。酵母逆境表型观察试验结果显示,StLOS5具有提高渗透胁迫耐受性的能力。荧光定量PCR分析结果表明,StLOS5的表达具有组织特异性,且在叶片中含量较高,并在干旱胁迫下能够快速响应,8%聚乙二醇处理12 h后叶片表达量达到峰值。以上结果表明,StLOS5在马铃薯响应干旱胁迫过程中具有一定作用。

关键词： 慢性肾脏病   支链氨基酸   代谢紊乱   肾脏纤维化  

摘要： 肾脏纤维化是慢性肾脏病进展至终末期肾病的关键病理过程,其特征表现为细胞外基质过度沉积,导致肾脏组织结构破坏与功能丧失。支链氨基酸(BCAA)作为必需氨基酸,在维持蛋白质动态平衡、能量代谢调控及细胞信号转导等机制中发挥重要作用,其代谢紊乱可通过多种机制导致疾病发生发展。研究显示,BCAA代谢紊乱通过炎症与氧化应激、代谢重编程与能量障碍、上皮-间充质转化及肠道菌群失调等机制参与肾脏纤维化的进程。本文从BCAA代谢紊乱及其在肾脏纤维化中的作用两方面系统综述BCAA代谢紊乱与肾脏纤维化的关系,探讨通过调控BCAA稳态或其下游通路延缓肾脏纤维化的临床应用价值。

关键词： 核酸   生物化学   翻转课堂   慕课   课程思政  

摘要： 生物大分子的结构与功能是生物化学课程的核心内容,但其知识点密集且理论性强,传统教学模式下学生易因内容枯燥产生畏难情绪,导致学习效果不佳,进而影响后续课程的学习衔接。翻转课堂作为一种革新性教学模式,通过重构教学流程有效激发学生的自主学习积极性,已在高等教育领域获得广泛认可。本文以“核酸的结构与功能”章节为实践案例,聚焦慕课(MOOC)与翻转课堂的深度融合路径,系统提出具体教学实施策略,并结合教学实践进行针对性反思,旨在为提升工科专业学生的生物化学课程教学质量提供可借鉴的实践参考,助力优化工科生物化学课程的教学体系。