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关键词： 趋化因子受体7   骨髓间充质干细胞   腺病毒   猪小肠黏膜下层   皮肤修复   血管生成  

摘要： 背景:临床上对于皮肤损伤修复常用的自体及异体皮肤移植效果都不甚理想。近年来组织工程的发展为皮肤修复带来了新的希望,然而在皮肤组织工程中血管的再生一直是一个难题。猪小肠黏膜下层和骨髓间充质干细胞是当前广泛用于组织工程研究的天然细胞外基质类支架材料和种子细胞,趋化因子受体7是一种可以促发新生血管生成的细胞因子。目的:观察趋化因子受体7-骨髓间充质干细胞-猪小肠黏膜下层膜对大鼠背部皮肤损伤的修复效果及血管再生能力。方法:①过表达趋化因子受体7腺病毒载体转染骨髓间充质干细胞,Western blot及RT-qPCR方法评价转染效果;②将过表达趋化因子受体7的骨髓间充质干细胞与猪小肠黏膜下层复合培养,通过扫描电镜观察及活死细胞染色验证细胞相容性;③12只SD大鼠构建皮肤缺损动物模型,分别将趋化因子受体7-骨髓间充质干细胞-猪小肠黏膜下层(实验组)和猪小肠黏膜下层(对照组)置于大鼠皮肤缺损处,造模后1,3,7,14 d观察创面愈合情况,造模后7,14 d采用Western blot检测创面愈合组织中血管内皮生长因子蛋白表达,免疫组化染色检测创面组织CD31及增殖细胞核抗原蛋白表达。结果与结论:①通过腺病毒介导成功构建过表达趋化因子受体7的骨髓间充质干细胞,趋化因子受体7转染组细胞内趋化因子受体7的蛋白、mRNA表达均较对照组和空载组明显上调(P<0.001);②扫描电镜观察及活死细胞染色实验结果显示过表达趋化因子受体7的骨髓间充质干细胞在猪小肠黏膜下层膜表面生长良好,二者具有良好的相容性;③与对照组相比,实验组创面面积明显缩小(P<0.05),实验组创面愈合组织中血管内皮生长因子、CD31、增殖细胞核抗原的蛋白表达高于对照组(P<0.05),表明趋化因子受体7-骨髓间充质干细胞-猪小肠黏膜下层膜的促创面血管生成能力较强。

关键词： 外泌体   干细胞   骨组织再生   组织工程  

摘要： 巨大骨肿瘤切除、创伤导致的骨折不愈合、代谢性疾病、感染及遗传疾病导致的骨骼发育异常,均会导致骨缺损。目前,手术是治疗骨缺损最有效的方法,但存在骨量来源有限、取骨处遗留疼痛等缺点,近年来,干细胞来源外泌体作为一种无细胞疗法,在骨组织再生领域中越来越受到研究者们的关注。本文对外泌体的基本概念、生物学功能及其在骨组织再生领域中的应用与机制进行阐述,同时归纳外泌体于骨组织工程领域内对骨缺损修复所展现出的促进作用的研究成果,以期能为骨缺损修复的治疗策略开辟新的视角与思路。

关键词： 脂多糖   内皮细胞   核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)   白细胞介素1β   6-磷酸果糖-2-激酶3(PFKFB3)   子痫前期  

摘要： 背景:血管内皮细胞功能障碍为子痫前期发病的核心因素,脂多糖可用于建立子痫前期大鼠模型,但对内皮细胞的影响及机制尚未完全明确。目的:探讨脂多糖对人脐静脉内皮细胞功能的影响及可能存在的机制。方法:将人脐静脉内皮细胞分为对照组和脂多糖组,通过下列实验检测脂多糖处理后两组人脐静脉内皮细胞功能变化:细胞黏附实验检测人脐静脉内皮细胞对单核细胞的黏附性;小管形成实验检测人脐静脉内皮细胞的小管形成能力;qPCR检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、白细胞介素1β、6-磷酸果糖-2-激酶及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达水平;Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、6-磷酸果糖-2-激酶3、细胞间黏附分子1及内皮型一氧化氮合酶蛋白表达水平。人脐静脉内皮细胞分为对照组、脂多糖组和MCC950(核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3抑制剂)组,qPCR检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、白细胞介素1β、6-磷酸果糖-2-激酶3及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达水平。结果与结论:①与对照组相比,脂多糖组细胞间黏附分子1蛋白表达量增加(P<0.05),单核细胞黏附数量增多(P<0.05),提示人脐静脉内皮细胞活化,黏附能力增强;②与对照组相比,脂多糖能抑制人脐静脉内皮细胞的小管形成能力(P<0.05);③与对照组相比,脂多糖组内皮型一氧化氮合酶的mRNA及蛋白表达量减少(P<0.05),核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、白细胞介素1β、6-磷酸果糖-2-激酶mRNA表达量以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、6-磷酸果糖-2-激酶3蛋白表达量增加(P<0.05);④与脂多糖组相比,MCC950组白细胞介素1β和6-磷酸果糖-2-激酶3 mRNA表达量减少以及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达量增加(P<0.05)。结果表明,脂多糖可通过核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/白细胞介素1β/6-磷酸果糖-2-激酶3途径诱导人脐静脉内皮细胞功能障碍。

关键词： 鸡   传染性喉气管炎病毒   糖蛋白E   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 为了制备鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)糖蛋白E(glycoprotein E,gE)的多克隆抗体,试验以ILTV K317疫苗株的基因组DNA为模板,通过PCR扩增gE基因编码区亲水性强、抗原性好的区段,并克隆至pET-28a-SUMO载体,构建原核表达载体pET-28a-SUMO-gE;将完整的gE开放阅读框序列插入至pEGFP-N1载体,获得真核表达载体pEGFP-gE;将重组质粒pET-28a-SUMO-gE转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,确定最优的诱导表达条件后,通过镍柱亲和层析法获得纯化的重组蛋白gE;将含有gE优势表位的合成多肽与重组蛋白gE混合后,免疫新西兰大白兔制备抗血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体的效价,并采用间接免疫荧光(IFA)和Western-blot检测多克隆抗体的特异性。结果表明:在37℃条件下采用0.4 mmol/L对异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导2 h的条件下,重组蛋白表达量最高。重组蛋白gE分子量约为33 ku,主要以包涵体形式存在。间接ELISA测定的抗血清效价为1∶2048000。制备的多克隆抗体能正确识别转染细胞、感染的鸡胚绒毛尿囊膜及商品化疫苗中表达的gE蛋白。说明制备得到效价高、特异性良好的抗ILTV gE的多克隆抗体。

关键词： 内在无序蛋白质   组织特异性   基因年龄   理化性质   进化特征  

摘要： 内在无序蛋白质（IDPs）是一类缺乏稳定三维结构的蛋白质，在多种细胞过程中发挥着关键作用。鉴于超过一半的人类蛋白质至少是部分内在无序蛋白质，因此，系统地对内在无序蛋白质进行分类有助于更好地理解它们的功能和作用机制的规律。然而，目前仍无针对内在无序蛋白质的这种系统的分类。在本研究中，根据序列和无序保守性对内在无序蛋白质进行分类，并探究不同类型内在无序蛋白质的不同性质和功能意义。在灵长总目范围内选择了7个人类进化分支上的代表性节点物种，并根据同源基因分布范围及序列和无序程度的保守性将人类全体蛋白质划分为7个类别。其中，在7个物种中均存在同源基因的蛋白质中，根据序列和无序的保守程度将其中的IDPs分为4类：序列和无序性均保守的内在无序蛋白质，无序保守但序列不保守的内在无序蛋白质，序列和无序性均不保守的内在无序蛋白质，以及序列保守但无序性不保守的内在无序蛋白质。本研究系统地分析了上述各类蛋白质在理化性质、进化特征、功能作用、表达模式等方面的差异。同时具有序列和无序守恒的IDPs（Ho＿ConS＿ConD）代表了典型的IDPs表型；序列保守但无序性不保守的IDPs（Ho＿ConS＿NoConD）构成了一个看似矛盾但功能重要的类别；在这两个特征都缺乏保守性的IDPs（Ho＿NoConS＿NoConD），表现出明显的组织特异性，特别是在睾丸中。总之，本文从一个新的视角对内在无序蛋白质进行了分类研究，通过构建系统性的框架，阐明了不同无序蛋白质的功能。

关键词： 硫化氢   二氧化硫   S-巯基化   S-次磺化   血管疾病   含硫气体信号分子  

摘要： 硫化氢(hydrogen sulfide，H2S)和二氧化硫(sulfur dioxide，SO2)一直以来被人们以有害气体所熟知，但其作为内源性含硫气体信号分子在血管生理调控与疾病干预中展现着关键作用。近年来研究表明，它们通过作用于靶蛋白中特定的半胱氨酸残基，诱导S-巯基化（s-sulfhydrylation）与S-次磺化（s-sulfenylation）修饰，在多种血管病变中发挥潜在治疗作用。这两种修饰方式通过调控不同信号通路促进血管舒张、抑制血管平滑肌细胞增殖与衰老、减轻血管炎症与氧化应激，以及改善内皮功能。该文总结了近年来含硫气体信号分子对血管系统的研究进展，旨在为血管疾病的防治提供新的解决思路。

关键词： 航空通信   移动安全   物理不可克隆函数   认证协议   轻量级协议   安全性分析  

摘要： 针对航空通信网切换认证的安全与效率需求，提出一种基于物理不可克隆函数的民航高空平台站（High Altitude Platform Stations， HAPS）切换认证协议。该协议将物理不可克隆函数应用于切换认证，在注册阶段通过安全信道完成挑战响应对与用户身份绑定，依托其物理随机性抵御克隆与密钥泄露风险。通过设计物理不可克隆函数挑战响应对动态更新策略，生成不可预测的挑战响应组合，增强对重放攻击与数据库泄露的防御能力。安全性分析表明，利用BAN(Burrows Abadi Needham）逻辑形式化分析和Scyther工具证明了所提协议具备密钥一致性和双向认证能力，可抵抗重放攻击、中间人攻击等威胁。性能分析表明，所提协议计算开销仅为0.73 ms、通信开销低至2 088 bit，相较于传统认证协议，优化了资源受限场景下的认证效率。

关键词： 牛蒡根多糖   慢性高尿酸血症   肾脏保护   肠道菌群   胆汁酸代谢  

摘要： 探讨牛蒡根多糖（Arctium lappa root polysaccharides，ALRP）对腺嘌呤联合高嘌呤饮食诱导的慢性高尿酸血症（hyperuricemia，HUA）小鼠的治疗作用及其潜在分子机制。采用腺嘌呤联合高嘌呤饮食诱导建立HUA小鼠模型，将60只SPF级雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、模型组、非布司他阳性对照组、ALRP低剂量组和ALRP高剂量组，连续灌胃给药28 d。测定小鼠体重、肾脏指数，检测血清和尿液中尿酸（uric acid，UA）、肌酐（creatinine，Cr）水平及尿酸清除率（uric acid clearance rate，UACR）、尿酸/肌酐比值（U/C）；测定肾脏组织匀浆中氧化应激和炎症因子水平；HE染色观察肾脏组织病理学变化；通过宏基因组测序分析肠道菌群结构变化，并采用靶向代谢组学检测粪便胆汁酸含量。结果表明，与模型组相比，ALRP各剂量组小鼠体重显著增加，肾脏指数显著降低；血清UA、Cr水平显著下降，UACR显著升高，尿液U/C显著升高（P<0.05或P<0.01）；肾脏组织氧化应激水平显著降低，炎症因子水平显著下降（P<0.05或P<0.01）；肾脏组织病理学评分显著改善，肾小管损伤和间质炎症程度减轻（P<0.05或P<0.01）；肠道菌群α多样性增加，β多样性显著改变，有益菌丰度上升，有害菌丰度下降；粪便中次级胆汁酸含量显著增加（P<0.05或P<0.01）。综上，ALRP对慢性HUA小鼠具有显著的肾脏保护作用，其机制可能与降低血尿酸水平、改善肾脏氧化应激和炎症状态、调节肠道菌群结构及促进胆汁酸代谢有关。

关键词： 恰玛古多糖   低共熔溶剂   提取工艺   抗氧化活性   降糖能力  

摘要： 采用超声波协同低共熔溶剂法(DES)提取恰玛古多糖（BRPs）。以BRPs的提取率为指标，结合响应面法优化提取工艺，通过单糖组成、分子质量、红外光谱分析等方法对其进行结构表征和活性研究。结果表明：最优提取工艺为DES中氯化胆碱?丙三醇摩尔比1∶3、超声功率150 W、含水量50%、料液比1∶18(g∶mL)、提取温度60℃、提取时间53 min，在此条件BRPs提取率达9.4%。BRPs结构是半乳糖醛酸为主链，鼠李半乳糖醛酸聚糖?Ⅰ为连接区，阿拉伯聚糖为侧链的典型果胶类多糖。其重均分子质量为100.392 kDa，由半乳糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、葡萄糖和葡糖胺6种单糖组成。抗氧化和降糖试验结果表明，BRPs对ABTS自由基与DPPH自由基具有一定的清除作用。BRPs对α?葡萄糖苷酶抑制率达96.99%，具有很强的降糖能力。综上，建立高效、环保的BRPs提取工艺，揭示“果胶型”结构特征与多糖组成，证实其良好的生物活性潜力。

关键词： 多糖   面团   流变   油炸方便面   低脂  

摘要： 为解决传统油炸方便面高油脂、营养单一的问题，将阿拉伯木聚糖（AX）、多聚果糖（PF）、菊粉（IN）三种多糖按5、10、15 wt.%梯度用于油炸方便面加工中，通过Mixolab、流变仪、低场核磁共振等仪器，系统探究其对面团加工特性及成品品质的影响。结果表明，三种多糖均随添加量增加降低面粉吸水率，且对面团、面片及成品品质的影响具有显著调控作用：AX因破坏面筋网络，显著增强面片延展性与成品硬度；PF低添加量下优化面筋稳定性，维持体系粘弹性均衡，蒸煮损失增幅最小；IN显著延长面筋稳定时间，并缩短成品复水时间；三种多糖均随添加量升高显著降低油脂含量，其中PF15降幅最大，达16.18 wt.%,IN15、AX15依次为14.95 wt.%、13.51 wt.%；感官评价显示，PF组色泽稳定、适口性佳，IN组表观规整，AX高剂量组因基质多孔致表面粗糙，综合而言PF10成品为最佳。综上所述，三种多糖可从不同维度定向改良方便面的加工适应性与食用品质，为开发低脂功能性油炸方便面提供重要理论依据。