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关键词： 侧向流动分析   适配体   即时检测   信号放大   反式切割  

摘要： 即时检测(POCT)具有快速、易操作及近患优势,在临床快速诊断、资源受限场景及动态监测中展现广阔应用前景。侧向流层析试纸条在纸基传感界面进行,成本低、操作简便和检测快速,已成为POCT领域的研究热点。该文系统阐述基于核酸策略的试纸条技术原理与分类,重点评述其信号放大策略及在POCT领域的应用进展,并深入探讨当前面临的挑战与未来发展趋势,以期为该技术的开发与应用提供参考。

关键词： 葛仙米多糖   纳米硒   结构表征   抗氧化   抑制癌细胞  

摘要： 目的:探究葛仙米多糖(Polysaccharide of Nostoc sphaeroides Kützing,PNSK)对纳米硒(Nano-Selenium Particles,SeNP)的稳定修饰作用机制及修饰前后生理活性的变化。方法:以PNSK为原料,采用亚硒酸钠(Na_(2)SeO_(3))-抗坏血酸(V_(C))氧化还原法制备葛仙米多糖纳米硒(Polysaccharide of Nostoc sphaeroides Kützing Nano-Selenium Particles,PNSK-SeNP),通过紫外可见光谱、高效液相色谱、X射线衍射、红外光谱、X射线光电子能谱等对PNSK及PNSK-SeNP的结构进行了表征,并对比分析了PNSK及PNSK-SeNP的抗氧化、抑制癌细胞活性。结果:PNSK-SeNP的硒含量为52.03±0.20 mg/g,粒径为166.83±4.51 nm,PNSK-SeNP制备前后的单糖摩尔比变化不显著。PNSK-SeNP的X射线光电子能谱图中具有Se 3d信号峰,硒元素以0价态存在,红外光谱和X射线光电子能谱图均表明PNSK-SeNP中葛仙米多糖的主要结构和官能团未发生变化,纳米硒与PNSK间未形成新的化学键。抗氧化测定发现,PNSK和PNSK-SeNP对羟自由基(·OH)的半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为4.45和0.55 mg/mL,对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS^(+))的IC_(50)值分别为4.58和0.79 mg/mL,对A549肺癌细胞的IC_(50)分别为0.87和0.06 mg/mL,同时PNSK-SeNP可以有效抑制A549肺癌细胞迁移,诱导其凋亡。相关性分析发现PNSK-SeNP的硒含量与其抗氧化、抑癌作用具有显著相关性。结论:PNSK可有效稳定纳米硒,且PNSK-SeNP的体外抗氧化、抑制癌细胞活性较PNSK均显著增加。

关键词： 糖尿病性白内障   黄精多糖   晶状体上皮细胞   内质网应激   凋亡  

摘要： 目的探究黄精多糖(PSP)对高糖诱导的晶状体上皮细胞(LECs)内质网应激(ERS)及凋亡的影响。方法将SRA01/04细胞分为Control组、HG组和HG+PSP组。通过CCK-8法检测细胞活力以筛选PSP最佳干预浓度。建立大鼠晶状体体外培养模型,观察PSP对晶状体混浊的影响。采用Western blot检测磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)等ERS相关蛋白及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)等凋亡蛋白的表达。采用免疫荧光染色法检测GRP78的表达与分布,TUNEL法检测细胞凋亡。结果CCK-8法检测结果显示,与Control组相比,HG组细胞活力降低(P<0.001);与HG组相比,不同浓度PSP干预后细胞活力有不同程度的回升,其中PSP浓度为25.00μmol·L^(-1)时细胞活力升高最显著(P<0.01)。晶状体体外培养结果显示,HG组晶状体混浊面积占比较Control组明显升高(P<0.001),而HG+PSP组较HG组显著降低(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与Control组相比,HG组p-PERK/PERK、GRP78及CHOP蛋白表达均升高,Bcl-2/Bax比值降低(均为P<0.05);与HG组相比,HG+PSP组上述ERS相关蛋白表达均显著降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(均为P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,与Control组相比,HG组GRP78荧光强度显著增加(P<0.01);与HG组相比,HG+PSP组荧光强度显著降低(P<0.01)。TUNEL检测结果表明,HG组细胞凋亡水平较Control组升高,加入PSP后凋亡降低(均为P<0.05)。结论PSP能够通过抑制高糖诱导LECs的ERS和细胞凋亡,从而延缓晶状体混浊的发生。

关键词： 软枣猕猴桃   水提物   多糖   抗疲劳   抗氧化   降糖活性  

摘要： 为扩大软枣猕猴桃应用范围,采用超声波法分别提取软枣猕猴桃水提物和软枣猕猴桃多糖,对其抗疲劳、抗氧化及降糖活性进行研究。结果表明,水提物和多糖可增强小鼠运动耐力、肝糖原和肌糖原含量、总抗氧化能力和乳酸脱氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物歧化酶活力,降低血尿素氮、血乳酸和丙二醛含量;水提物和多糖均对DPPH自由基、·OH具有较强的清除能力,且水提物体外抗氧化能力优于多糖;水提物和多糖对α-淀粉酶的半抑制质量浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为3.477、6.022 mg/mL;对α-葡萄糖苷酶的IC_(50)分别为1.699、1.652 mg/mL,水提物的降糖活性更显著。研究结果将为软枣猕猴桃精深产品的开发提供理论基础。

关键词： 氨基酸代谢紊乱   冠心病   同型半胱氨酸   支链氨基酸   芳香族氨基酸   动脉粥样硬化   风险预测  

摘要： 鉴于氨基酸代谢紊乱与冠心病(coronary heart disease,CHD)发生发展密切相关,文章旨在系统梳理相关氨基酸代谢异常与CHD的关联、作用机制及临床应用前景。采用系统综述的方法,围绕同型半胱氨酸、支链氨基酸、芳香族氨基酸等,分析其代谢异常在CHD相关病理过程中的作用,同时探讨氨基酸代谢产物及肠道菌群的潜在影响。明确了多种氨基酸代谢异常与CHD风险存在关联,其通过参与动脉粥样硬化、血栓形成及内皮功能障碍等病理过程影响疾病进展;氨基酸代谢指标在CHD风险预测、辅助诊断及治疗干预中展现出临床应用潜力。因此,氨基酸代谢紊乱作为CHD防治的新靶点,尽管相关研究仍有矛盾与不足,但具临床价值和研究潜力,为心血管疾病研究提供了新的方向。

关键词： 杭白菊   黄酮   多酚   多糖   抗氧化活性   抗炎活性  

摘要： 本试验以不同花期及花序开放形态下的杭白菊作为研究材料,对其黄酮、酚类化合物和多糖含量进行了多成分综合评价,分析杭白菊在不同花期、花序开放形态下各类化学成分的动态变化规律及其与抗氧化、抗炎活性的相关性。结果显示,杭白菊蕾期的黄酮和酚类化合物含量及抗炎抗氧化活性均高于其他时期,管状花未开放杭白菊的总酚含量为21.23 mg·g^(-1),总黄酮含量为15.27 mg·g^(-1),1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)清除能力分别为65.48和80.63 mg·g^(-1),一氧化氮(NO)抑制率为68.76%;同一花期下,杭白菊的总酚和总黄酮含量多表现为未开放>部分开放>完全开放状态;蕾期杭白菊的多糖含量最低,晚花期全开放杭白菊的多糖含量最高,达到133.83 mg·g^(-1)。通过聚类分析和主成分分析(PCA),将不同花序开放形态下的杭白菊样品分为3类:蕾期未开放、蕾期部分开放、初花期未开放样品为第Ⅰ类;初花期部分开放、全开放、盛花期未开放为第Ⅱ类;盛花期部分开放和全开放、晚花期部分开放和全开放为第Ⅲ类。其中,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、木犀草苷、异绿原酸C、异绿原酸A和槲皮苷为不同花期及花序开放形态样品的主要差异化合物。相关分析结果显示,酚类和黄酮类化合物与杭白菊的抗氧化、抗炎活性具有明显相关性,其中木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷与抗氧化活性的相关性最好,隐绿原酸和异绿原酸C与抗炎活性的相关性最好。综上,杭白菊中黄酮、多酚和多糖类化合物的含量同时受花期和花序开放形态的影响,且黄酮、酚类化合物含量与抗氧化和抗炎活性密切相关。

关键词： 语音克隆   文本转语音   XTTS   FreeVC   Flask  

摘要： 随着深度学习和语音合成技术的不断发展,语音克隆在智能语音助手、虚拟主播和无障碍通信等领域展现出广阔的应用前景。然而,现有语音克隆系统在音色相似度、交互便捷性和大规模数据处理能力等方面仍存在不足,难以满足用户对高质量、个性化语音合成的实际需求。为此,基于XTTS模型设计并实现了一个支持多语种语音克隆与批量文本转语音的Web平台,针对语言覆盖数量有限、低资源条件下音色迁移受限以及批量处理效率低的问题进行了改进。系统采用前后端分离架构,后端基于Flask搭建API接口,前端结合主流Web技术与AJAX实现异步交互,数据库采用MySQL管理用户与音频数据。平台集成语音克隆、文本转语音与批量处理等功能模块,具备良好的灵活性与扩展性。测试结果表明,该系统在语音自然度与音色相似度方面表现良好,具有较高的应用价值与推广潜力。

关键词： 拟穴青蟹   类微小核糖核酸病毒   病毒鉴定   宏转录组测序   小RNA分析  

摘要： 【目的】鉴定拟穴青蟹中的潜在RNA病毒,解析其基因组特征、分类地位及其来源的小干扰RNA特征。【方法】以拟穴青蟹外观健康个体为研究对象,采用宏转录组技术筛选候选病毒序列;利用RT-PCR、RACE及Sanger测序获取病毒全长基因组序列;基于生物信息学方法开展开放阅读框预测、保守结构域注释及系统发育分析;进一步通过小RNA测序分析病毒来源的小干扰RNA(vsiRNAs)的长度分布特征。【结果】在拟穴青蟹样品中共鉴定到3种RNA病毒,包括呼肠孤病毒、类整体病毒以及一种新型类微小核糖核酸病毒,命名为拟穴青蟹类微小核糖核酸病毒1(SpPLV1)。该病毒基因组全长9596nt,包含2个开放阅读框,编码RNA解旋酶、RNA依赖的RNA聚合酶及衣壳蛋白等保守结构域。系统发育分析表明,SpPLV1与温州类微小核糖核酸病毒6、7等聚集为独立分支,并与海洋RNA病毒科亲缘关系较近。小RNA分析发现,在拟穴青蟹样品中分别检出125 720条和226 399条可比对至温州蟹病毒5和拟穴青蟹呼肠孤病毒基因组的vsiRNAs,其长度以22nt为主,且正义链与负义链vsiRNA分布均衡;此外,检测到44条可比对至SpPLV1基因组的sRNA序列,且未呈现明显的长度峰值与正负链分布特征。【结论】SpPLV1是在拟穴青蟹中发现的一种新的类微小核糖核酸病毒,其基因组结构具有该类病毒的典型特征,属于与海洋RNA病毒科相近的未分类病毒谱系。研究结果丰富了拟穴青蟹微小核糖核酸病毒的多样性,为进一步开展该病毒的生物学特性及其在宿主生理调控与病害发生中的潜在作用研究提供了理论依据。

关键词： 文蛤   丙氨酸   GWAS   TWAS   WGCNA  

摘要： 【目的】通过多组学手段,系统解析文蛤丙氨酸含量的遗传基础与调控网络,为风味性状分子育种提供理论依据。【方法】以300只2龄文蛤为材料,测定足组织游离氨基酸含量,综合运用全基因组关联分析(GWAS)、表达全基因组关联分析(eGWAS)、全转录组关联分析(TWAS)及加权基因共表达网络分析(WGCNA),从遗传变异、基因表达及共表达网络层面解析文蛤鲜味氨基酸(丙氨酸)含量的遗传基础与多层次调控网络。【结果】GWAS鉴定到4个与丙氨酸含量显著相关的SNP位点,注释获得PRSS48和FUT11两个候选基因,提示蛋白质代谢与糖基化修饰可能影响丙氨酸积累。GWAS与eGWAS共定位发现chr17:23 364 804位点(PP.H4=1.000),可能通过顺式调控影响下游基因表达。TWAS筛选到25个相关基因,功能涉及信号转导、代谢调控等。WGCNA识别出3个显著相关模块(Magenta、Red、Green),富集通路及蛋白质互作网络分析表明,三者分别主导组织水平代谢协调、底物驱动合成代谢及系统层面免疫清除与稳态维持。【结论】本研究从多组学角度揭示了文蛤丙氨酸含量受多基因微效调控和多通路交叉协同,且由合成、支撑与分解模块构成的动态调控网络协同调控,研究结果为文蛤风味性状的分子标记辅助选择与多基因聚合育种提供了重要候选基因资源和理论支持。

关键词： 血清8b型禽腺病毒(FAdV-8b)   Fiber knob蛋白   单克隆抗体   原核表达   亚克隆  

摘要： 【目的】表达纯化血清8b型禽腺病毒(Fowl adenoviruses serotype 8b,FAdV-8b)Fiber knob蛋白,并制备其特异性单克隆抗体,为FAdV-8b特异性检测方法的开发提供参考。【方法】本研究将Fiber knob目的基因插入大肠杆菌原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-knob,并通过IPTG诱导表达Fiber knob蛋白。使用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与小鼠骨髓瘤SP/20细胞进行融合,采用间接ELISA方法进行亚克隆筛选。通过ELISA、斑点印迹(Dot blotting)、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定单克隆抗体特异性及反应原性,并对单克隆抗体亚型进行鉴定。【结果】经SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示,在约40 ku处观察到特异性条带,与预期结果一致,重组Fiber knob蛋白成功表达。纯化后用于小鼠免疫,通过细胞融合、筛选获得4株稳定分泌抗Fiber knob蛋白抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1B1、7C1、3D4和10E2。经ELISA、Dot blotting、Western blotting和IFA鉴定,这4株单克隆抗体仅与Fiber knob蛋白和FAdV-8b HN1472发生特异性反应,而不与FAdV-4 WZ、传染性支气管炎病毒(IBV)、H3N3及H9N2亚型禽流感病毒(AIV)发生交叉反应。亚型分析结果显示,单克隆抗体1B1和7C1的重链为IgG2a类,3D4和10E2的重链为IgG1类,轻链均为Kappa型。【结论】本研究经原核表达系统成功获取了FAdV-8b Fiber knob蛋白,并通过免疫小鼠成功筛选出4株具有优异特异性与良好反应活性的FAdV-8b Fiber knob蛋白单克隆抗体。研究结果为FAdV-8b Fiber knob蛋白的生物学功能研究和FAdV-8b的血清学检测方法提供了参考依据。