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关键词： 脱钙松质骨支架   滑膜间充质干细胞   膝关节置换   软骨损伤   组织工程  

摘要： 目的探讨脱钙松质骨支架用于软骨损伤修复的可行性。方法以人体松质骨作为原料制备脱钙松质骨支架,并将其与自体滑膜间充质干细胞(SMSCs)共培养。对支架的孔隙率、降解率、SMSCs的黏附率、细胞生长活力及体外构建组织工程软骨进行研究。结果脱钙松质骨支架具有良好的空隙及网状胶原纤维结构,孔隙率为75.2%~94.8%(84.30%±6.75%)。SMSCs在种板后6 h的黏附率为63.43%~79.73%(72.14%±5.89%)。脱钙松质骨支架第8周的降解率为76.52%~93.67%(88.25%±10.39%)。CCK-8法检测SMSCs在脱钙松质骨支架上的生长活力,共培养1~3 d为SMSCs生长滞留期,共培养5~6 d达到对数生长期,以后逐渐进入平台期。关节滑液诱导下,SMSCs与异体的脱钙松质骨支架培养约28 d时形成类似关节软骨组织,对其冰冻切片行HE染色、甲苯胺蓝染色,结果显示支架类软骨组织内的细胞符合软骨细胞特征。结论脱钙松质骨支架具有良好的三维孔隙、空隙内网状胶原纤维空间结构,有利于种子细胞立体生长分化形成软骨组织,能有效满足对软骨损伤修复的要求。

关键词： sepsis   fatty acid-binding protein   LPS  

摘要： Dysregulated inflammation and multi-organ failure are hallmarks of sepsis,a potentially fatal illness for which there are currently no effective *** acid-binding protein(A-FABP)has been identified in recent research as a crucial mediator of the inflammatory pathways underlying *** this study,we used a murine model of lipopolysaccharide(LPS)-induced endotoxemia to assess the therapeutic potential of 6H2,a monoclonal antibody that targets *** comparison to untreated septic mice,6H2 treatment significantly increased survival rates,decreased histopathological damage in the liver,lungs,kidneys,and heart,and reduced systemic *** to biochemical analyses,6H2 treatment decreased circulating levels of A-FABP,and this was associated with a reduction in inflammatory *** results indicate that A-FABP inhibition is a potentially effective treatment approach for sepsis,with 6H2 demonstrating strong therapeutic efficacy.

关键词： 川明参多糖   低共熔溶剂   提取工艺   结构表征  

摘要： 【目的】探索优化川明参多糖(Chuanminshen violaceum Polysaccharide,CVP)绿色高效提取技术,并推动其在功能性食品领域的开发利用。【方法】通过单因素试验和响应面试验,建立并优化利用低共熔溶剂(Deep Eutectic Solvent,DES)提取CVP的方法,再分别采用离子交换柱与凝胶柱分离纯化CVP,并结合离子色谱、高效凝胶渗透色谱、红外光谱及扫描电子显微镜对CVP结构进行表征。【结果】最佳提取条件为氯化胆碱-柠檬酸的DES体系(二者物质的量比为1∶1,含水量30%)、液料比20∶1、提取温度70℃、提取时间120 min,在此条件下,CVP提取率为(44.17±0.19)%,较传统方法提升了26%以上;纯化后获得相对分子质量单一、结构均一的CVP组分CVP-1-1和CVP-2-1,其中CVP-1-1由葡萄糖和半乳糖组成,总糖含量为(94.87±0.80)%,相对分子质量为9471 Da,CVP-2-1由葡萄糖、半乳糖和鼠李糖组成,总糖含量为(92.01±1.77)%,相对分子质量为18159 Da;上述5种多糖均为含α-糖苷键和β-糖苷键的吡喃环多糖,其微观形态与相对分子质量及纯化工艺相关,纯化后多糖表面更加多孔、疏松,碎片化程度更高,且相对分子质量及破碎、聚集程度不同。【结论】将DES应用于CVP提取,提取率较传统提取法显著提升,且所得CVP相对分子质量较低,可能具有较高的抗氧化活性,可为CVP功能性食品开发提供参考。

关键词： 饲料原料   氮-蛋白质转换系数   非蛋白氮   氮测定方法   影响因素  

摘要： 蛋白质是动物机体细胞及组织的基础物质,在生命活动中发挥至关重要的作用,准确评估饲料中的蛋白质含量对动物生产具有重要意义。但基于标准的氮-蛋白质转换系数(NPCF)×氮水平估算的粗蛋白含量可能存在一定误差,无法准确反映实际的蛋白质含量。因此,文章旨在深入分析影响NPCF的各种因素,并对不同饲料原料的NPCF研究进展进行综述,以期为进一步优化饲料资源的利用效率提供重要的科学依据,也为畜牧业的可持续措施提供新的视角与解决方案。

关键词： 长牡蛎   汞   蛋白质组学   生物标志物   分子机制  

摘要： 目的探究牡蛎对汞的富集、形态转化及代谢净化机制,阐明MeHg的形成与清除动力学。方法采用双箱动力学模型模拟汞在长牡蛎体内的累积、转化与净化过程;采用Label-free非标记定量蛋白质组学技术对高浓度汞暴露组(Hg-H)牡蛎消化腺进行蛋白质鉴定与差异表达分析,开展亚细胞定位、结构域预测、基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)数据库通路富集分析;利用实时荧光定量(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)技术分析0~60 d时间内消化腺中金属硫蛋白(metallothionein,MT)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)基因的表达。结果汞胁迫与净化实验结果显示,牡蛎消化腺中汞、甲基汞含量与胁迫浓度成正比,并且甲基汞含量最高峰出现延迟效应;qPCR结果显示Hsp70与MT基因表达呈时序性协同变化,Hsp70于胁迫5 d迅速上调(7.15倍),净化40 d达峰值(32.09倍);MT表达呈双峰模式(胁迫10 d 5.81倍,净化40 d 3.55倍),其动态与蛋白组结果一致。蛋白质组学分析共定性蛋白5487个,筛选得到多个时间点对比下的显著差异表达蛋白,差异蛋白显著富集于细胞核、胞外区、细胞膜等区域,涉及热休克蛋白(Hsp20/Hsp70)、C型凝集素、过氧化氢酶、C1q等结构域。GO和KEGG分析表明,差异蛋白主要参与应激反应、免疫应答、抗氧化过程、氨基酸代谢和信号转导等生物过程,且花生四烯酸代谢通路可能与汞的排出过程密切相关。结论汞胁迫可显著影响牡蛎消化腺蛋白质表达谱,触发包括热休克蛋白、免疫因子和代谢酶在内的多蛋白协同响应,且与汞/甲基汞的累积、转化及排出过程密切相关。本研究通过蛋白组、qPCR与汞富集与净化的整合分析,揭示了牡蛎应对汞胁迫的分子机制,为贝类污染毒理研究和水产品安全监测提供了理论支撑。

关键词： 糖尿病血管病变   脂肪间充质干细胞   血管内皮细胞   外泌体   细胞自噬  

摘要： 目的:探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)衍生的外泌体(exosomes,Exos)对高糖(high glucose,HG)环境中血管内皮细胞自噬的影响和作用机制。方法:采用超速离心法分离AMSCs的Exos,并使用透射电镜观察Exos的形态、纳米颗粒跟踪分析Exos的直径以及Western blot法检测Exos标志物白细胞分化抗原9(cluster of differentiation 9,CD9)、CD63、肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)的蛋白表达。将人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分为对照(control;5.5 mmol/L葡萄糖)组、HG模型(30 mmol/L葡萄糖诱导)组、低剂量(50 mg/L)Exos(low-dose Exos,Exos-L)组、中剂量(100 mg/L)Exos(moderate-dose Exos,Exos-M)组、高剂量(150 mg/L)Exos(high-dose Exos,Exos-H)组和Exos(100 mg/L)+10µmol/L哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路激活剂MHY1485(Exos-M+MHY)组。透射电镜检测自噬体;Western blot检测自噬标志蛋白胞浆型微管相关蛋白1A/1B轻链3(microtubule-associated protein 1A/1B light chain 3,LC3)、P62和自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)表达及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)和mTOR磷酸化水平。结果:AMSCs衍生的Exos呈现凹面半球状囊,直径约为134.5 nm,Western blot检测Exos表面标志蛋白CD9、CD63和TSG101表达呈阳性;与control组相比,HG组的HUVECs中LC3-II/LC3-I值和ATG5表达水平显著减弱,P62表达水平显著升高,而Exos-L、Exos-M及Exos-H组HG对细胞自噬的抑制作用显著改善(P<0.01);在机制上,与control组相比,HG组HUVECs中p-AKT和p-mTOR表达水平显著上调,Exos-M组p-AKT和p-mTOR表达水平下调(P<0.01);与Exos-M组相比,Exos-M+MHY组AKT/mTOR通路的活化程度显著升高,LC3-II/LC3-I值和ATG5表达水平显著降低,P62的表达水平显著升高(P<0.01)。结论:AMSCs衍生的Exos通过抑制AKT/mTOR信号通路逆转HG对血管内皮细胞自噬的抑制作用。

关键词： 牙髓干细胞   外泌体   口腔疾病   组织再生   应用潜能  

摘要： 口腔颌面部损伤通常被分为硬组织损伤和软组织损伤,这些损伤可能会对患者的外貌、功能和心理健康造成严重影响,给患者的生活造成不同程度的负面影响。随着人们对口腔领域认知水平的不断提高,口腔组织再生技术逐渐得到了重视。牙髓干细胞(DPSCs)是从牙髓组织中分离得到的间充质干细胞,具有自我更新和多向分化的能力。此外,DPSCs还具备来源丰富易获得、免疫原性低、易保存、临床应用广泛以及无伦理争议等优点,使得DPSCs成为再生医学中理想的种子细胞之一。

关键词： 碱蓬   多糖   脱蛋白   维拉帕米   斑马鱼  

摘要： 为优化碱蓬多糖(Suaeda glauca polysaccharide,SGP)的提取工艺,并基于斑马鱼模型评价碱蓬多糖的心脏保护活性,采用响应面法优化碱蓬多糖热水提取工艺,设置提取时间、提取温度及液料比3个因素进行单因素试验,以多糖得率为评估标准,采用响应面试验优化SGP提取工艺;并通过考察蛋白质脱除率与多糖保留率,比较反复冻融法、三氯乙酸法、Sevage法以及木瓜蛋白酶法的除蛋白效果;采用苯酚-硫酸法和高效凝胶渗透色谱法分别检测SGP的总糖含量和分子量;采用盐酸维拉帕米诱导的斑马鱼心脏损伤模型,以心包水肿面积、静脉淤血面积、心率、血流速度和心输出量为指标,评价SGP的心脏保护活性。结果表明,SGP的最佳水提工艺为提取温度77℃,提取时间2.8 h,液料比32 mL·g^(-1),此时多糖得率为4.98%。Sevage法与反复冻融法除蛋白效果不佳,而在木瓜蛋白酶活力为24000 U·mL^(-1)时,脱蛋白效果较好,且1次处理的蛋白脱除率可达到92.96%,多糖保留率为87.92%。综合考虑成本及终产物的结构稳定性,以木瓜蛋白酶法除蛋白效果最优。经检测,SGP总糖含量为79.32%,分子量为55.821 kD。斑马鱼筛选结果显示,相比于模型组,200、100、50μg·mL^(-1)SGP处理可有效改善斑马鱼心脏损伤造成的心包水肿面积及静脉淤血面积扩大、心率减慢等症状,并显著提高斑马鱼心输出量和血流速度,且对心包水肿面积与静脉淤血面积的改善效果甚至优于阳性药。综上,优化了SGP提取工艺,且首次报道了SGP具有潜在的心脏保护活性,为碱蓬的高值化利用提供了理论依据。

关键词： 单克隆抗体   杂交瘤细胞   物理信息神经网络   迁移学习   计划采样  

摘要： 物理信息神经网络(physics-informed neural networks,PINN)将机理方程融入神经网络以提升模型预测精度,已初步应用于细胞培养过程建模。虽然PINN凭借物理规律对解空间进行约束减少了对数据量的依赖,但在小样本场景下,仍有可能收敛到次优解。本研究提出了一种改进的混合物理信息神经网络(improved hybrid-physics-informed neural network with scheduled sampling,SSIHPINN),通过物理引导初始化和计划采样模块为单克隆抗体细胞培养过程建立更稳健的模型。通过对比实验和消融实验对SS-IHPINN进行了评估和比较,结果表明这2个功能模块的协同作用使SS-IHPINN具有更高的预测性能。即使细胞培养过程参数发生变化,该框架也表现出良好的泛化和迁移学习能力。本研究提出的方法有效提升了小样本条件下的建模性能,为生物过程的监测提供了可靠的技术支撑。

关键词： 溃疡性结肠炎   人结肠上皮细胞   白花前胡甲素   核转录因子-κB信号通路   炎症   增殖   凋亡  

摘要： 目的探究白花前胡甲素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人结肠上皮NCM-460细胞炎症损伤的保护及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调控作用。方法体外培养人结肠上皮NCM-460细胞,将其分为对照组、脂多糖组(1μg/mL LPS处理)和不同浓度白花前胡甲素组(1μg/mL LPS+6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL白花前胡甲素处理),药物干预处理24 h,筛选最适浓度进行后续实验。随后将NCM-460细胞分为对照组、脂多糖组、白花前胡甲素组(1μg/mL LPS+25μg/mL白花前胡甲素处理)、BAY 11-7082组(1μg/mL LPS+5μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082处理)、抑制剂组(1μg/mL LPS+25μg/mL白花前胡甲素+5μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082处理)和激活剂组(1μg/mL LPS+25μg/mL白花前胡甲素+1μmol/L NF-κB通路激活剂Prostratin处理),药物干预处理24 h。分别采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit 8,CCK-8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色法、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法、蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞活力、增殖率、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和NF-κB信通路关键蛋白水平。结果根据细胞活力和炎症因子TNF-α水平,选25μg/mL白花前胡甲素用于后续实验。脂多糖组细胞增殖率和CyclinD1水平较对照组下降(P<0.05),凋亡率及TNF-α、IL-8、Caspase 3、磷酸化-NF-κBp65(p-NF-κBp65)蛋白表达水平显著升高(P<0.05);白花前胡甲素组和BAY 11-7082组扭转了上述LPS对NCM-460细胞的作用(P<0.05);与白花前胡甲素组相比,抑制剂组增强了白花前胡甲素组对NCM-460细胞的作用(P<0.05),激活剂组则削弱了白花前胡甲素对NCM-460细胞的作用(P<0.05)。结论白花前胡甲素可能通过阻滞NF-κB通路转导来抑制LPS诱导的NCM-460细胞炎症、凋亡和增殖抑制。