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关键词： 纤维化   车前子多糖   Nrf2/GPX4信号通路  

摘要： 目的基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路探讨车前子多糖抗肾纤维化的作用及机制。方法本实验时间为2025年8—12月。将30只雄性Dahl盐敏感大鼠随机分为五组:低盐组、低盐+车前子多糖组、高盐组、高盐+车前子多糖组及高盐+车前子多糖+ML385组,每组6只。低盐组与低盐+车前子多糖组大鼠以含0.3%氯化钠溶液的饲料喂养;高盐组、高盐+车前子多糖组及高盐+车前子多糖+ML385组大鼠则以含8.0%氯化钠溶液的饲料喂养。同时,低盐+车前子多糖组、高盐+车前子多糖组大鼠给予车前子多糖灌胃,高盐+车前子多糖+ML385组大鼠在高盐+车前子多糖组基础上予以ML385腹腔注射。各组均连续干预4周。干预4周后,观察五组大鼠肾脏病理学改变,比较五组大鼠尿蛋白、血肌酐及肾组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、亚铁离子(Fe^(2+)),肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)表达水平,肾组织中Nrf2、GPX4 mRNA相对表达量,肾组织中Nrf2、GPX4蛋白相对表达量。结果高盐组大鼠尿蛋白、血肌酐及肾组织匀浆MDA、Fe^(2+)高于低盐组,肾组织匀浆SOD低于低盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖组大鼠尿蛋白、血肌酐及肾组织匀浆MDA、Fe^(2+)低于高盐组,肾组织匀浆SOD高于高盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖+ML385组大鼠尿蛋白、血肌酐及肾组织匀浆MDA、Fe^(2+)高于高盐+车前子多糖组,肾组织匀浆SOD低于高盐+车前子多糖组(P<0.05)。高盐组大鼠肾组织中α-SMA、FN表达水平高于低盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖组大鼠肾组织中α-SMA、FN表达水平低于高盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖+ML385组大鼠肾组织中α-SMA、FN表达水平高于高盐+车前子多糖组(P<0.05)。高盐组大鼠肾组织中Nrf2、GPX4 mRNA相对表达量低于低盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖组大鼠肾组织中Nrf2、GPX4 mRNA相对表达量高于高盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖+ML385组大鼠肾组织中Nrf2、GPX4 mRNA相对表达量低于高盐+车前子多糖组(P<0.05)。高盐组大鼠肾组织中Nrf2、GPX4蛋白相对表达量低于低盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖组大鼠肾组织中Nrf2、GPX4蛋白相对表达量高于高盐组(P<0.05)。高盐+车前子多糖+ML385组大鼠肾组织中Nrf2、GPX4蛋白相对表达量低于高盐+车前子多糖组(P<0.05)。结论车前子多糖可有效减轻高盐诱导肾纤维化模型大鼠的肾纤维化程度并改善肾功能,其作用机制与其可通过激活Nrf2/GPX4信号通路抑制氧化应激及铁死亡有关。

关键词： 鸡   TGF⁃β1   原核表达   抗体   多克隆抗体  

摘要： 旨在制备鸡转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF⁃β1)的多克隆抗体。首先,以马立克病病毒转化的T淋巴细胞系MSB1细胞的mRNA为模板,通过RT⁃PCR技术扩增鸡TGF⁃β1基因的完整CDS区,将其连接至原核表达载体pET⁃32a(+)中,构建重组表达质粒pET⁃32a⁃TGF⁃β1;随后,将重组质粒转化至大肠杆菌表达菌株BL21中进行诱导表达,采用亲和层析法对表达蛋白进行纯化;接着,利用免疫家兔制备多克隆抗体,并通过间接ELISA检测抗体效价,通过Western blot技术和间接免疫荧光检测来评价多克隆抗体的特异性。结果表明,重组原核表达质粒pET⁃32a⁃TGF⁃β1构建成功,经IPTG诱导后获得约65 kDa的重组蛋白;免疫家兔获得TGF-β1抗血清,ELISA检测显示抗体效价达1∶640000;Western blot结果证实,该抗血清能特异性识别目的蛋白;间接免疫荧光结果显示,该多克隆抗体能很好地识别TGF⁃β1阳性细胞。综上,本研究制备出的兔抗鸡TGF⁃β1多克隆抗体,可用于鸡TGF⁃β1的检测。

关键词： 玉米   NAC基因   NAC转录因子   非生物胁迫  

摘要： 该研究从玉米自交系B73中克隆了一个新的NAC基因ZmNAC96,并对其进行生物信息学和非生物逆境胁迫响应表达分析.结果显示:ZmNAC96编码区长900 bp, ZmNAC96属于NAC转录激活因子;ZmNAC96主要在玉米茎和叶片中表达,其表达可被NaCl、PEG和ABA诱导,且ZmNAC96启动子区含有多个非生物胁迫响应元件.这些结果表明ZmNAC96可能作为转录激活因子参与玉米的非生物逆境胁迫响应,为ZmNAC96功能的解析奠定了基础.

关键词： 姬松茸多糖   抗氧化活性   结构表征   抗疲劳活性   氧化应激  

摘要： 采用DEAE-琼脂糖凝胶FF层析柱对姬松茸多糖（Agaricus blazei Murill polysaccharides，ABP）进行分离纯化，通过体外抗氧化实验筛选活性最优的组分ABP-1；随后运用高效液相色谱、离子色谱、红外光谱、核磁共振及扫描电镜等技术，探究ABP-1的结构表征及其与抗氧化活性的构效关系；通过小鼠负重力竭游泳实验，结合肝糖原、肌糖原储备量及血清中疲劳因子、氧化应激因子的检测，系统评价其抗疲劳活性，开展体外抗氧化与体内抗疲劳核心指标的相关性分析。结果显示，纯化后共获得3种多糖组分，其中ABP-1对羟自由基、超氧阴离子自由基等的清除率及还原力均优于或持平抗坏血酸，体外抗氧化活性表现最优，且呈浓度依赖性；ABP-1纯度达95.32%，高效液相色谱分析显示其数均分子质量为5 017 Da、重均分子质量为10 481 Da，离子色谱检测表明其由8种单糖组成（半乳糖占比47.10%），红外光谱与核磁共振结果证实其含有羟基、吡喃糖环、α/β混合型糖苷键及多样的单糖连接方式等结构特征，扫描电镜观察显示其具有疏松多孔的三维网络形貌；抗疲劳活性实验中，ABP-1最优剂量组的负重力竭游泳时间较阳性对照组（人参皂苷Rg1）延长25.06%，肝糖原储备量提升28.52%，肌糖原储备量提升53.09%；血清指标方面，肌酸激酶活力降低60.91%，乳酸脱氢酶活力提高39.51%，尿素氮含量降低32.44%，乳酸含量降低87.04%，超氧化物歧化酶活力提升33.87%，过氧化氢酶活力提升131.36%，丙二醛含量降低33.62%，谷胱甘肽含量提升109.82%。相关性分析证实ABP-1体外抗氧化指标与体内抗疲劳指标呈显著/极显著相关，实现了体外ROS抗氧化靶点与体内运动性疲劳诱因的直接匹配形成完整构效闭环。该研究阐明了ABP-1结构特征与体外抗氧化、体内抗疲劳活性的构效关系，明确了其兼具抗氧化与抗疲劳活性的核心优势，为后续相关研究提供了理论依据。

关键词： 拓扑异构酶   抑制剂   核酸   DNA   RNA  

摘要： 拓扑异构酶(topoisomerase,Topo)通过改变核酸的拓扑结构调控DNA复制、转录、染色体组装和翻译等过程，是核酸代谢中的关键酶。目前，Topo在DNA复制、损伤修复和转录调控中的作用已经相对清楚，但其在染色质三维结构调控、RNA代谢调控等过程中的作用还有很多未知。Topo抑制剂(如伊立替康、环丙沙星)在抗肿瘤、抗细菌感染等方面有广泛应用，但也存在不良反应明显和易产生耐药性等缺点，急需开发更优的抑制剂。因此，进一步探究Topo在细胞中的分子功能具有重要的科学意义和临床应用价值。本文对人类细胞中6种Topo(TOP1、TOP1MT、TOP2A、TOP2B、TOP3A和TOP3B)的结构域组成、分子功能、抑制剂及其在发育和疾病中的作用等研究进展进行了综述，以期为Topo的分子功能研究和新型抑制剂的开发提供参考。

关键词： 植物源蛋白质   功能特性   提取方法   微胶囊壁材  

摘要： 蛋白质资源丰富且营养价值较高，因其良好的功能特性，是制备微胶囊化产品的最佳壁材选择之一。本文综述了植物源蛋白质的提取、功能特性和蛋白基微胶囊化壁材的研究进展，介绍了植物源蛋白质结构和功能特性之间的关系，植物源蛋白基微胶囊壁材的组合方式对提高其包埋物的包埋率、生物利用度、延缓其释放和延长货架期具有研究价值。通过对蛋白质的提取方法、蛋白质结构和功能特性及蛋白基微胶囊壁材的应用，为寻找价格低廉、低成本的植物源蛋白微胶囊壁材提供可能，扩大微胶囊产品在食品中的应用领域，促进植物源蛋白质的深加工与发展提供参考。

关键词： 流感病毒   帽依赖性核酸内切酶   小分子抑制剂   药物设计   耐药性  

摘要： 甲型流感病毒曾引发四次全球大流行， 严重危害人类健康并造成重大社会经济负担。目前， 临床常用的抗流感药物主要通过阻断流感病毒进入宿主细胞、抑制病毒复制或阻止病毒释放等环节发挥作用。然而， 流感病毒可通过抗原漂移和抗原转变等机制实现免疫逃逸， 导致其对现有抗病毒药物产生显著耐药性。因此， 迫切需要开发新型、高效且具有抗耐药性的抗流感病毒药物， 以控制流感的感染和传播。流感病毒帽依赖性核酸内切酶在病毒转录和复制过程中发挥关键作用， 是抗流感病毒药物研发的重要靶标。本文从药物化学视角， 系统总结了近十年针对该靶标的小分子抑制剂的研究进展， 以期为后续药物研发提供参考与指导。

关键词： 免疫性血小板减少症(ITP)   细胞外囊泡   间充质干细胞   细胞治疗   外泌体  

摘要： 免疫性血小板减少症（ITP）是一种免疫介导的获得性出血性疾病，传统治疗方法复发率较高。研究表明，ITP患者骨髓间充质干细胞（BM-MSC）的数量及功能存在异常，而外源性MSC输注则可通过免疫调节与抑制自身抗体生成等途径发挥治疗作用。近年来，MSC来源的细胞外囊泡（MSC-EV）作为一种极具潜力的无细胞治疗策略备受关注。MSC-EV能够递送丰富的生物活性物质，且具备低免疫原性和高稳定性等优势，已在ITP动物模型中展现出显著疗效。综上，恢复ITP患者BM-MSC功能及应用外源性MSC和MSC-EV有望为ITP的治疗提供全新方向。

关键词： 3型副流感病毒   核衣壳蛋白(NP)   单克隆抗体   化学发光免疫分析   诊断靶标  

摘要： 为筛选人副流感病毒3型（human parainfluenza virus 3， HPIV-3）抗原检测的最优靶标，本研究系统比较了其4种主要结构蛋白[血凝素神经氨酸酶 （hemagglutinin-neuraminidase， HN）、融合蛋白（fusion protein， F）、核蛋白（nucleoprotein， NP）、磷蛋白（phosphoprotein， P）]作为诊断抗原的免疫反应性与诊断潜力。在此基础上，开发针对HPIV-3的高灵敏度、高特异性抗体是建立检测方法的前提。采用杆状病毒-昆虫细胞表达系统重组表达制备了HPIV-3的4种主要结构蛋白（HN、F、NP、P），SDS-PAGE纯度达到80%。在此基础上采用杂交瘤技术制备相应的单克隆抗体。通过杂交瘤技术，共获得133株单克隆抗体。针对NP蛋白的单克隆抗体，无论在产生数量还是对天然病毒抗原的反应性上，均显著优于针对HN、F、P蛋白的抗体。利用天然抗原通过正交矩阵、检测限评价、表面等离子体共振（surface plasmon resonance， SPR）抗体亲和力测定等方法筛选并评估所制备单克隆抗体性能，最终优选出18#、121#、84#等多株高质量单克隆抗体，其中18#抗体对重组抗原的亲和力解离平衡常数（dissociation constant， KD）值达到8.92×10-11，且3株抗体在不同缓冲体系、温度及反复冻融条件下均表现出良好的稳定性。免疫荧光实验验证84#抗体可特异性识别感染细胞内的病毒。以此为材料进一步建立双抗体夹心法HPIV-3抗原化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay， CLIA）检测体系，并采用HPIV-3病毒稀释液和临床样本检验其灵敏度和特异性，结果显示，抗体配对组合18#+HRP-84#和121#+HRP-84#具有良好的检测效果，75例临床样本阳性检出率为20%，且具有较低的交叉反应；而121#+HRP-84#临床样本阳性检出率为18%，但特异性较强，未出现交叉反应。本研究证实，NP蛋白是HPIV-3抗原检测的显著优势靶标；基于NP蛋白开发的双抗体夹心CLIA检测体系具有较高灵敏度、良好的稳定性和较低的交叉反应，展现了良好的试剂盒开发潜力与应用前景。

关键词： 质谱分析   蛋白质组学   自上而下   翻译后修饰   蛋白质变体   多种解离技术  

摘要： 解析蛋白质及其变体结构是阐明其生物学功能与分子调控机制的核心前提。质谱技术凭借其高灵敏度、高准确度及高通量优势，能实现对蛋白质大规模精准鉴定。基于质谱的自上而下蛋白质组学（TDP）以完整蛋白质作为分析对象，规避了传统自下而上蛋白质组学（BUP）酶解步骤导致肽段信息被割裂等问题，从而能够在蛋白质变体（proteoform）水平上保留多种结构变异和修饰之间的组合关系，弥补BUP在完整proteoform解析方面的不足。本文系统总结了TDP的完整分析流程，涵盖样品制备、电离技术、串联质谱（MS/MS）和数据处理等主要环节，并重点讨论了MS/MS解离技术。不同解离/离子活化方式，如CID/HCD、ECD/ETD、EThcD、AI-ETD和UVPD等，具有不同的碎裂机制和碎片离子类型，互补使用有助于提高蛋白质序列覆盖度、翻译后修饰（PTM）定位可信度和复杂proteoform的表征深度。基于上述技术进展，TDP在解析疾病相关proteoform、揭示病理机制以及发现新型体液诊断标志物方面展现出了独特优势，本文也对其在肿瘤标志物、神经退行性疾病及临床诊断中的应用进行了整理介绍。