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关键词： 血脂异常   前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型单克隆抗体   应答不良  

摘要： 前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型单克隆抗体是一类新型降脂药物,可显著降低动脉粥样硬化性心血管疾病患者的血脂水平。但随着其广泛应用,部分患者出现了应答不良的现象。该文就前蛋白转化酶枯草溶菌素kexin 9型单克隆抗体应答不良的现象及其可能存在的机制进行综述。

关键词： 软骨损伤   软骨修复   膝骨关节炎   淫羊藿苷   淫羊藿苷含药血清   工程化组织构建  

摘要： 背景:课题组前期研究发现,淫羊藿苷含药血清能够延缓大鼠膝骨关节炎进展,促进软骨细胞增殖与干细胞成软骨分化,但是否能应用于临床尚缺乏充分依据。目的:探讨淫羊藿苷含药血清对脂多糖诱导的人软骨细胞炎症损伤的修复效应。方法:CCK-8法检测淫羊藿苷含药血清对人软骨细胞活力的影响并筛选出最佳的淫羊藿苷含药血清体积分数及干预时间;然后将人软骨细胞分为空白对照组、脂多糖组、淫羊藿苷含药血清组及脂多糖+淫羊藿苷含药血清组,按上述分组予以处理后,免疫荧光法检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原分泌情况;实时荧光定量PCR法检测相关基因表达。结果与结论:①淫羊藿苷含药血清对人软骨细胞呈现出良好的生物安全性,当淫羊藿苷含药血清体积分数为15%、干预48 h时细胞活力达最高水平,以此条件为标准进行后续实验;②与空白对照组相比,脂多糖显著抑制软骨细胞分泌Ⅱ型胶原,而淫羊藿苷含药血清能有效促进正常和炎症状态下软骨细胞分泌Ⅱ型胶原;③在脂多糖刺激下,软骨细胞的Ⅱ型胶原和聚蛋白聚糖mRNA表达显著降低,基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5 mRNA表达显著升高;淫羊藿苷含药血清能促进炎症状态下软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达,抑制基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5 mRNA表达。结果表明,淫羊藿苷含药血清对人软骨细胞具有良好的安全性,在维持软骨细胞正常生理功能、促进细胞外基质合成和抑制炎症因子分泌方面发挥重要作用。

关键词： 小干扰RNA   细胞膜囊泡   牙髓干细胞   肿瘤坏死因子  

摘要： 目的:探索细胞膜囊泡(cell membrane vesicles,CMVs)作为广泛适用的基因沉默工具小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)递送平台的可行性,并以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)炎症模型验证其应用效果。方法:采用细胞松弛素B处理3T3细胞制备CMVs,并通过共聚焦显微镜、动态光散射检测CMVs理化性质。利用洋地黄皂苷透化CMVs将靶向肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的siRNA(siTNF-α)负载至CMVs中,构建CMVs@siTNF-α。通过流式细胞术和共聚焦显微镜检测siRNA负载与胞内转运效率。以LPS(1 mg/L)刺激DPSCs建立炎症模型,并与CMVs或CMVs@siTNF-α共培养。采用细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞毒性,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测TNF-α、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的表达与分泌。结果:CMVs呈球形,由细胞膜及细胞质构成,平均粒径为903 nm,表面电位为-9.39 mV。流式细胞术结果显示,负载荧光素酰胺(fluorescein amidite,FAM)标记siRNA(FAM-siRNA)后CMVs荧光强度升高;DPSCs加入CMVs@FAM-siTNF-α培养24 h后,荧光信号增强。CCK-8检测结果显示CMVs及CMVs@siTNF-α对DPSCs无明显毒性。LPS处理显著上调DPSCs中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,与LPS组相比,CMVs@siTNF-α下调TNF-αmRNA及其蛋白表达水平,并抑制IL-1β和IL-6的转录与分泌。单独CMVs处理无明显差异。结论:CMVs可作为一种低毒性的siRNA递送平台,在体外炎症模型中实现TNF-α沉默及下游炎症反应抑制,具有进一步研究和应用的潜力。

关键词： 芜菁   芜菁多糖   芜菁多糖铁复合物   优化工艺   氯化铁共热法   响应面法   抗氧化活性   降糖活性  

摘要： 目的以芜菁多糖为原料优化芜菁多糖铁复合物(BPIC)的合成工艺,并测定其体外活性。方法以芜菁多糖为原料,通过氯化铁共热法合成BPIC;通过自由基清除法与酶抑制法研究BPIC的体外抗氧化及降糖活性。结果合成BPIC的优化工艺为:反应温度70℃、pH7.0、物料比1.25:1、反应时间3 h。该条件下产物的铁含量为4.04%。体外实验结果表明:BPIC在一定浓度范围内具有的抗氧化、降血糖能力随浓度的增加而增强。结论BPIC的体外活性主要来自多糖组分。

关键词： 中药   栀子   炎症小体   急性肺损伤  

摘要： 目的探讨栀子治疗急性肺损伤(ALI)的作用及机制。方法采用脂多糖(LPS)构建ALI小鼠模型,使用H&E染色评价肺组织病理变化,流式细胞计数法检测肺泡灌洗液中性粒细胞数量、ELISA及RT-qPCR检测血清和肺组织中炎症因子水平;联合BMDM构建多种炎症小体激活模型,通过免疫印迹法(WB)检测caspase-1 p20等蛋白表达和ASC寡聚化,酶联免疫吸附试验检测炎症因子IL-1β等含量,LDH试剂盒检测LDH释放量,流式细胞计数法检测mtROS变化。结果栀子可改善肺组织炎症浸润及细胞损伤,减少BALF中性粒细胞含量(P<0.001),减少血清和肺组织中IL-1β水平(P<0.001);还可显著抑制多种炎症小体激活;其主要是通过抑制ASC寡聚化和mtROS的产生而抑制炎症小体活化。结论栀子可通过减少mtROS释放及ASC寡聚抑制多种炎症小体激活,发挥治疗ALI的作用。

关键词： 长链非编码核糖核酸   浆细胞瘤多样异位基因1   微小核糖核酸-18b-5p   牙髓间充质干细胞   成牙本质分化  

摘要： 目的:分析长链非编码核糖核酸(LncRNA)浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)靶向微小核糖核酸-18b-5p(miR-18b-5p)参与牙髓间充质干细胞(dental pulp mesenchymal stem cells,DPMSCs)成牙本质分化的作用机制。方法:分离培养人DPMSCs,油红O、茜素红、阿利新蓝染色鉴定,流式细胞术检测细胞表面标记分子。以2×10^(4)个细胞/cm^(2)的密度将细胞接种于24孔板,分为PVT1上调+miR-18b-5p下调组(转染pcDNA-PVT1和antagomiR-18b-5p)、PVT1下调+miR-18b-5p上调组(转染si-PVT1和agomiR-18b-5p)、空载1组(转染NC pcDNA)、空载2组(转染ago-NC)、PVT1上调+空载2组(转染pcDNA-PVT1和空载体2)、空载1+miR-18b-5p下调组(转染空载体1和antagomiR-18b-5p)和空白组。7天后茜素红染色观察细胞钙矿化情况,试剂盒检测碱性磷酸酯酶(ALP)活性。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组LncRNA PVT1、miR-18b-5p与牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)基因表达。免疫印迹法(Western blot)检测各组DSPP、OCN和RUNX2蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测实验探讨LncRNA PVT1与miR-18b-5p的靶向关系。结果:成功分离人DPMSCs并经油红O、茜素红、阿利新蓝染色和流式细胞术鉴定。PVT1上调+miR-18b-5p下调组成牙本质分化活性最强(P<0.05),PVT1下调+miR-18b-5p上调组则最弱(P<0.05)。PVT1上调+miR-18b-5p下调组LncRNA PVT1、DSPP、OCN和RUNX2表达最高(P<0.05),miR-18b-5p表达最低(P<0.05),PVT1下调+miR-18b-5p上调组相反(P<0.05)。LncRNA PVT1与miR-18b-5p存在结合位点,且LncRNA PVT1可负反馈靶向miR-18b-5p。结论:上调LncRNA PVT1可靶向抑制miR-18b-5p,促进人DPMSCs成牙本质分化,推测与上调DSPP、OCN和RUNX2表达有关。

关键词： 淮南猪   背最长肌   丙酮酸脱氢酶激酶4   生物信息学   组织表达分析  

摘要： 本研究旨在对淮南猪丙酮酸脱氢酶激酶4(Pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4)基因进行克隆与生物信息学特征分析,为后续深入开展该基因功能验证提供理论依据。以淮南猪背最长肌组织cDNA为模板,通过PCR克隆其完整CDS区序列,进行生物信息学预测分析。结果显示,淮南猪PDK4基因全长1224 bp,编码407个氨基酸序列,与牛、羊、人的同源性较高。该蛋白分子量为46.17 kDa,属于不稳定蛋白,包含1个支链酮酸脱氢酶激酶的Adom3功能域与1个组氨酸激酶型ATP酶C端结构域;且可能与UCP3、DKAT等蛋白具有很强相关性。qRT-PCR结果显示,PDK4基因在淮南猪各组织中存在广泛表达,其中在脂肪组织中表达较高。该研究为进一步探究PDK4基因生物学功能提供了参考。

关键词： 脑出血   骨髓间充质干细胞   神经炎症   细胞凋亡   乌司他丁  

摘要： 目的 探讨低氧诱导的骨髓间充质干细胞(H-BMSCs)与乌司他丁(UTI)联合治疗对脑出血(ICH)小鼠的神经保护作用及潜在机制。方法 将雄性ICR小鼠随机分为假手术组、ICH组、UTI组、H-BMSCs组及UTI+H-BMSCs组。除假手术组外,其余各组小鼠通过向右侧纹状体中注射Ⅶ型胶原酶构建ICH模型。干预后第3 d,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估小鼠神经功能;采用干-湿比重法测定脑组织含水量;采用Western blotting法检测炎性因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)及凋亡相关蛋白(Bcl2、Bax)的表达水平;采用TUNEL法检测神经细胞凋亡情况。结果 与假手术组相比,ICH组、UTI组、H-BMSCs组及UTI+H-BMSCs组mNSS评分、脑含水量、Bax表达、细胞凋亡及血肿周围脑组织IL-1β、TNF-α和IL-6蛋白表达水平均显著升高,Bcl2表达显著下降(均P<0.05)。与ICH组比较,UTI组及UTI+H-BMSCs组mNSS评分、脑含水量、Bax表达、细胞凋亡及血肿周围脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著降低,Bcl2表达显著升高(均P<0.05),H-BMSCs组mNSS评分、脑含水量、细胞凋亡及血肿周围脑组织IL-1β、IL-6蛋白表达显著降低(均P<0.05)。UTI+H-BMSCs组mNSS评分、脑含水量、细胞凋亡及血肿周围脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白表达显著低于UTI组及H-BMSCs组(均P<0.05)。与UTI+H-BMSCs组比较,H-BMSCs组Bcl2表达显著下降,Bax表达显著上升(均P<0.05)。结论 UTI与H-BMSCs联合治疗可能通过抑制炎症反应、减少细胞凋亡等机制促进ICH小鼠的神经功能恢复,发挥协同脑保护作用。

关键词： 人工智能   核酸递送   脂质纳米粒   自动化平台   临床转化  

摘要： 人工智能(artificial intelligence, AI)凭借其强大的数据处理与智能决策能力,在赋能核酸递送系统开发中展现出显著技术优势与广阔应用前景。本文系统综述了AI技术对脂质纳米粒(lipid nanoparticle, LNP)这一核心核酸递送载体的研发重塑,并介绍了其在分子设计、靶向递送及体内外行为预测等方面的研究进展和技术突破。阐述了AI赋能下LNP临床转化的整合策略,包括利用多模态数据构建组织特异性递送载体、通过自动化平台实现“设计-实验-反馈”闭环优化以及借助数字孪生技术与跨物种预测工具推动临床转化等。剖析了当前AI驱动LNP开发面临的数据质量与模型可解释性等挑战,并展望了融合因果推理与物理建模的下一代AI技术,推动实现LNP的“可设计、可预测、可验证”,为核酸药物递送提供重要参考。

关键词： 实验教学   高中生物学   教学策略   学科核心素养  

摘要： 为了提高实验教学的有效性与高中生物学科核心素养达标程度,文章在核心素养目标的指引下,提出了包括教学情境设计、开发地方性实验材料和教学环节精准设计三个维度的实验教学优化策略。同时,利用该策略对人教版必修一《分子与细胞》中的“还原糖、脂肪和蛋白质检测”实验进行了优化设计。