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关键词： 猪苓多糖   椎间盘退行性变   炎症   活性氧  

摘要： 目的探讨猪苓多糖(PUP)通过活性氧(ROS)调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体通路对椎间盘退行性变(IDD)髓核细胞炎性模型的保护作用。方法培养大鼠椎间盘髓核细胞,按照不同处理方式分为对照组、模型组[(白细胞介素-1β(IL-1β)处理]、低质量浓度PUP组(1.25 ng/mL的PUP和IL-1β处理)、中质量浓度PUP组(2.50 ng/mL的PUP和IL-1β处理)、高质量浓度PUP组(5.00 ng/mL的PUP和IL-1β处理)、高质量浓度PUP+三甲胺N-氧化物(TMAO)组(5.00 ng/mL的PUP、IL-1β和TMAO处理)、TMAO模型组(IL-1β和TMAO处理)。比较各组细胞增殖活力、炎性因子水平、细胞焦亡程度、氧化应激反应、线粒体功能以及ROS/NLRP3/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)通路情况。结果模型组的细胞增殖活力、超氧化物歧化酶(SOD)水平、线粒体功能(线粒体膜电位、ATP水平)均低于对照组,炎性因子[IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平、丙二醛(MDA)水平、细胞焦亡程度、ROS水平及NLRP3和Caspase-1表达水平均高于对照组;与模型组比较,不同质量浓度PUP组的细胞增殖活力、SOD水平、线粒体功能呈质量浓度依赖性升高,炎性因子水平、MDA水平、细胞焦亡程度、ROS水平及NLRP3和Caspase-1表达水平呈质量浓度依赖性降低;高质量浓度PUP+TMAO组的细胞增殖活力、SOD水平、线粒体功能均低于高质量浓度PUP组、高于TMAO模型组,炎性因子水平、MDA水平、细胞焦亡程度、ROS水平及NLRP3和Caspase-1表达水平均高于高质量浓度PUP组、低于TMAO模型组;以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PUP对IDD髓核细胞炎性模型具有保护作用,通过ROS抑制NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡、氧化应激、线粒体功能障碍是与这一保护作用相关的分子机制。

关键词： 中速型麻黄鸡   粗蛋白质   生长性能   蛋白质代谢   蛋白质沉积  

摘要： 为分析小麦-高粱型饲粮粗蛋白质水平对31~60日龄中速型麻黄鸡生长性能、蛋白质沉积、血浆生化指标和肝脏蛋白质代谢的影响,以确定其饲粮粗蛋白质需要量,本研究根据体重一致原则选用31日龄中速型麻黄鸡母鸡900只,随机分为5个粗蛋白质水平组(依次为16%、17%、18%、19%和20%),每组6个重复(30只鸡/重复),试验期为30 d。统计并比较分析不同蛋白质组肉鸡生长性能;每重复选取1只接近平均体重的肉鸡测定机体蛋白质沉积率;每重复选取2只接近平均体重的肉鸡进行屠宰采样,测定血浆生化指标和肝脏蛋白质代谢相关指标;应用荧光定量PCR法检测肝脏蛋白质代谢关键基因mRNA表达水平的变化。结果表明:1)肉鸡平均日增重、末重和体蛋白质含量随着饲粮粗蛋白质水平的提高均呈线性和二次曲线升高(P<0.05),料重比、日沉积蛋白质量和蛋白质沉积率呈二次曲线降低(P<0.05)。与16%粗蛋白质组相比,18%粗蛋白质组体蛋白质含量、日沉积蛋白质量、蛋白质沉积率均显著提高(P<0.05)。与18%粗蛋白质组相比,19%和20%粗蛋白质组平均日增重和末重显著降低(P<0.05),料重比显著升高(P<0.05);20%粗蛋白质组日沉积蛋白质量和蛋白质沉积率显著降低(P<0.05)。2)肉鸡血浆总蛋白含量和胰岛素样生长因子1(IGF-1)随着饲粮粗蛋白质水平的提高均呈线性和二次曲线升高(P<0.05)。与16%粗蛋白质组相比,18%粗蛋白质组血浆中总蛋白含量显著提高(P<0.05)。与18%粗蛋白质组相比,20%粗蛋白质组血浆IGF-1含量显著降低(P<0.05)。3)18%粗蛋白质水平组试鸡肝脏IGF-1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、核糖体蛋白激酶1和真核生物起始因子4E结合蛋白1 mRNA表达水平显著高于16%和20%粗蛋白质水平组(P<0.05)。综上,小麦-高粱型饲粮18%粗蛋白质水平可通过改善肉鸡血浆和肝脏蛋白质代谢提高31~60日龄中速型麻黄鸡生长性能和体蛋白质沉积。本研究通过推广精准营养技术和优化饲料资源利用,不仅显著提升了中速型麻黄鸡养殖效益,还有助于实现粮食资源节约。

关键词： 蛋白质-蛋白质相互作用位点预测   蛋白质语言模型   图注意力网络  

摘要： 识别蛋白质-蛋白质相互作用位点对解析生命过程和药物设计至关重要.近年来,基于深度学习的方法在蛋白质相互作用位点预测中取得了显著进展.本文提出了一种新型深度学习模型GL-GAT,该模型整合了卷积神经网络(CNN)、双向长短时记忆网络(Bi-LSTM)以及图注意力网络(GAT)以充分挖掘蛋白质序列与三维结构信息.具体而言,首先利用CNN提取蛋白质语言模型ESM-2生成的序列特征,并采用Bi-LSTM提取位置特异性得分矩阵、二级结构和位置信息;然后,将上述特征拼接生成节点特征,并基于蛋白质三维结构构建蛋白质图;最后,通过GAT聚合邻域信息,并通过全连接神经网络输出残基位点预测概率.实验结果表明,相较于现有主流方法,GL-GAT在多个关键性能指标上均表现出更高的预测精度.

关键词： 甘薯   IbOPR2   酵母单杂   转录因子   启动子  

摘要： 茉莉酸类物质(JA)作为植物内源激素,广泛参与植物耐盐胁迫过程,12-氧-植物二烯酸还原酶(OPR)作为JA合成关键酶,其表达调控机制尚不明确。为筛选与鉴定调控IbOPR2基因表达的转录因子,本研究以甘薯耐盐品系‘海大7791’为材料,克隆IbOPR2基因启动子序列。采用生物信息学方法分析其顺式作用元件,并通过转录激活试验检测其启动子活性。利用酵母单杂交试验筛选其互作转录因子,并通过酵母单杂交点对点验证试验确认结合特异性。结果表明,克隆的IbOPR2基因上游1964 bp启动子序列含有MYBHv1、MYB和WRKY识别位点元件、MYB和MYC等胁迫响应元件、MeJA激素应答元件,并且启动子具有显著转录激活能力。以MeJA应答元件和MYC元件作为诱饵的酵母单杂交试验,共筛选到5个候选转录因子,分别为IbPHL7、IbZFP16、IbSKIP11、IbTGA2和IbERF2。随后酵母单杂交点对点试验发现,IbPHL7、IbZFP16和IbSKIP11均能与IbOPR2启动子元件特异性结合。双荧光素酶报告基因系统试验结果表明,IbPHL7、IbZFP16和IbSKIP11可以激活IbOPR2启动子的转录活性。qRT-PCR分析结果表明,IbPHL7、IbZFP16和IbSKIP11均响应甘薯的盐胁迫。以上结果表明,它们可能作为IbOPR2上游调控因子,调控IbOPR2基因表达。本研究首次筛选了甘薯IbOPR2上游调控因子,为深入解析IbOPR2响应盐胁迫的表达调控机制奠定了基础。

关键词： 慢重症   炎症反应   蛋白质   分解代谢   肌肉   营养支持  

摘要： 慢性危重症(chronic critical illness,CCI)是重症技术发展的产物,是一种影响功能结局和长期生存的衰弱性疾病。其特征是持续性炎症、免疫抑制和分解代谢综合征,它的研究在近几十年不断发展完善。本文描述了慢重症的定义、临床特征,介绍了其炎症及免疫抑制的驱动因素、炎症导致的肌肉萎缩,肌肉蛋白的分解以及目前临床上的抗炎治疗、营养支持配合运动和免疫治疗,除此之外,还简单描述了近年来新兴的代谢组学工具以及人工智能在CCI中的应用,以达到对慢重症患者更好的评估治疗。

关键词： 玛卡多糖   大孔吸附树脂   响应面法   脱色工艺   抗氧化活性  

摘要： 为优化黑玛卡多糖的脱色工艺并评价其抗氧化活性,本研究以D101型大孔吸附树脂为脱色剂,采用响应面法优化脱色工艺。首先通过单因素试验探究树脂用量、脱色时间和脱色温度对多糖脱色率及保留率的影响,并在此基础上采用Box-Behnken设计建立回归模型;采用DPPH和ABTS自由基清除实验,以VC为阳性对照,测定脱色前后玛卡多糖的吸光度并计算自由基清除率,对比分析其抗氧化效果。结果表明,回归模型显著(P<0.0001),拟合度高(R2=0.9866),可有效预测工艺参数。优化后的最佳工艺条件:粗多糖质量浓度5.0 mg/mL、树脂用量2.0 g、脱色时间1.5 h、脱色温度50℃。验证试验显示,在此条件下多糖脱色率达55.4%,保留率为53.56%,综合评分54.48%,与模型预测值基本一致。抗氧化活性测试表明,玛卡多糖对DPPH和ABTS自由基均具有良好的清除能力,且呈明显量效关系;脱色后多糖仍保持较好的抗氧化活性,尤其在ABTS自由基清除方面表现突出。综合表明,本研究确立的脱色工艺稳定可行,为黑玛卡多糖的纯化提供参考。

关键词： 药物纳米递送系统   天然多糖   纳米载体  

摘要： 药物纳米递送系统(drug nano-delivery systems,DNDs)凭借其独特结构能与各种药物及天然生物活性化合物结合,在疾病治疗方面发挥重要作用。研究表明,部分药物及其所含的天然生物活性成分,在临床应用中常因生物利用度低及口服后药代动力学表现不佳而受到限制。为此,近年来将天然多糖作为包覆材料,显著提高其安全性、生物相容性以及生物利用度等。本文系统梳理了DNDs中常见的天然多糖材料及多糖基纳米载体种类,并对纳米载体递送药物在疾病中的应用及未来发展前景进行综述。

关键词： 草鱼   常规营养成分   氨基酸   脂肪酸   药物残留  

摘要： 为了解池塘微流水环境生态草鱼的肌肉品质和药物残留情况,比较分析了微流水池塘养殖草鱼和传统精养池塘草鱼肌肉常规营养成分、氨基酸、脂肪酸及药物残留等指标,并同步检测了养殖水源水质。结果显示,草鱼池塘养殖水源无异色、异臭、异味,符合《无公害农产品淡水养殖产地环境条件》(NY/T5361—2016)标准要求;微流水池塘养殖草鱼肌肉中粗蛋白质质量分数为(20.21±0.33)%,显著高于传统精养池塘草鱼(P<0.05);微流水池塘养殖草鱼肌肉中氨基酸总量(TAA)、必需氨基酸总量(TEAA)及呈味氨基酸总量(TDAA)分别为(17.56±0.60)%、(7.22±0.33)%、(8.02±0.24)%,均显著高于传统精养池塘草鱼(P<0.05);微流水池塘养殖草鱼肌肉中多不饱和脂肪酸(PUFA)占脂肪酸总量的质量分数为(32.44±1.33)%,显著低于传统精养池塘草鱼(P<0.05),饱和脂肪酸(SFA)和单不饱和脂肪酸(MUFA)含量分别为(23.35±0.10)%、(44.21±1.24)%,与传统精养池塘草鱼无显著差异(P>0.05);2种环境中的草鱼均未检测出药物残留。研究表明,微流水池塘环境的草鱼其肌肉氨基酸组成平衡、营养合理、食用安全。

关键词： 小尾寒羊   骨髓间充质干细胞   培养鉴定   诱导分化  

摘要： 为探究小尾寒羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)生物学特性及体外分化潜能,从4月龄小尾寒羊胚胎中无菌分离出胎羊股骨,利用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,对小尾寒羊BMSCs培养鉴定,绘制第3、13、23代BMSCs生长曲线,计算群体倍增时间及克隆形成率;利用BMSCs划痕试验检测细胞迁移能力,利用免疫荧光和RT-PCR检测干细胞表面标志物,利用染色体核型分析法检测基因稳定性;并向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞定向诱导分化,评估其多向分化潜能。结果表明,BMSCs细胞贴壁后呈长梭形,生长曲线呈典型的“S”形。随着代次的升高,细胞增殖能力、迁移能力、克隆形成率均呈下降趋势,群体倍增时间不断延长。免疫荧光鉴定显示,表面标志物CD29、CD44、CD73、CD90和CD105阳性表达,而与造血干细胞相关的CD34不表达。RT-PCR检测显示,小尾寒羊BMSCs的CD29、CD73、CD90和CD105,CD34基因呈阴性表达。染色体核型分析显示,小尾寒羊BMSCs呈正常二倍体核型(2n=54,XY),染色体基因组未发生改变。小尾寒羊BMSCs经特异性诱导成功分化出骨、软骨和脂肪细胞。全骨髓贴壁法体外培养成功分离出小尾寒羊BMSCs,且具有较强的体外增殖能力和分化潜能。以上研究结果为再生医学和生物工程学研究提供参考。

关键词： 皮肤损伤修复   干细胞裂解液   反复冻融法   超声波破碎法   成纤维细胞  

摘要： 目的:比较反复冻融法与超声波破碎法制备的干细胞裂解液修复皮肤损伤的效果,筛选干细胞裂解液的最优制备方法。方法:将人皮肤成纤维细胞以1×10^(5)/mL、1×10^(6)/mL、5×10^(6)/mL、1×10^(7)/mL 4种密度重悬于生理盐水,分别采用反复冻融和超声波破碎法处理,通过BCA法检测细胞破碎率和蛋白质含量,筛选两种方法最佳制备条件;采用细胞划痕愈合实验、CCK-8法、Transwell实验分别检测人皮肤成纤维细胞划痕愈合能力、细胞活力、细胞迁移数,ELISA检测裂解液中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、干细胞因子(SCF)蛋白浓度。结果:超声波破碎法最佳条件为细胞浓度5×10^(6)/mL、超声处理5 min;反复冻融法最佳条件为细胞浓度5×10^(6)/mL、冻融3次(45 min)。两种方法细胞破碎率无显著差异(P>0.05),超声波破碎法制备的裂解液总蛋白含量更高;两种方法制备的裂解液对人皮肤成纤维细胞活力的影响无显著差异(P>0.05),反复冻融法制备的裂解液能显著促进人皮肤成纤维细胞迁移、提升细胞划痕修复效率(P<0.05)。ELISA结果显示,反复冻融法制备的裂解液中VEGF、SCF蛋白浓度显著高于超声波破碎法(P<0.05或P<0.01),EGF浓度无显著差异(P>0.05)。结论:反复冻融法制备的干细胞裂解液修复皮肤损伤的效果优于超声波破碎法。