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关键词： 植物生长促进菌(PGPB)   胞外多糖   植物促生   作用机制   土壤改良  

摘要： 胞外多糖(exopolysaccharides, EPS)在促进植物生长、提高植物抵御非生物胁迫能力、改良土壤质量等方面应用潜力较大。本文剖析了产胞外多糖植物生长促进菌(plant growth-promoting bacteria, PGPB)在促进生物膜形成、改善土壤结构、提高植物根际营养和缓解非生物胁迫等方面的作用机制,重点围绕植物促生、盐碱土壤改良和修复重金属污染等方面概述了PGPB胞外多糖的应用,并对胞外多糖结构与功能之间的关系及有待解决的科学问题进行了展望。通过对PGPB胞外多糖作用机制及应用的整理和总结,期望为进一步开发产胞外多糖PGPB菌种资源、深入探索胞外多糖的结构和功能及其高效发酵生产过程提供理论依据,为胞外多糖在农业领域的开发提供参考。

关键词： ε-聚赖氨酸   普鲁兰多糖   羟丙基甲基纤维素   复合膜   性能   保鲜  

摘要： 以普鲁兰多糖(PUL)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)为原料,ε-聚赖氨酸(ε-PL)为功能性物质,采用溶液浇铸法,制备了复合膜,考察了ε-PL添加量对复合膜透光率、水蒸气透过率、抗氧化和抑菌等性能的影响,通过傅里叶红外光谱(FTIR)和X射线衍射(XRD)进行表征,探讨了复合膜对鲜切马铃薯的保鲜性能。结果表明,ε-PL的加入能与PUL/HPMC基质分子间产生氢键作用,实现与基质膜之间较好的相容性;ε-PL可以改善复合膜的水蒸气阻隔性和机械性能;当ε-PL添加量为6%时,复合膜的水蒸气透过率最小,拉伸强度达到最大值;随着ε-PL添加量的增加,复合膜表现出优越的紫外阻隔性、抗氧化性和抑菌性。复合膜对保鲜性能的影响结果表明,ε-PL的加入能有效抑制鲜切马铃薯在贮藏过程中的生理代谢,减少营养物质流失,保持鲜切马铃薯的品质。研究证实ε-PL可用于可食膜改性及食品包装,具备延长鲜切果蔬货架期的潜力。

关键词： 松茸   多糖   UVB   抗氧化   黑色素生成  

摘要： 为探究松茸多糖抑制UVB辐射诱导的黑色素生成作用及其分子机制,本研究以松茸(Tricholoma matsutake,TM)为原料,采用热水浸提法制备松茸多糖(Tricholoma matsutake polysaccharides,TMP),经工艺优化和DEAE Sepharose Fast Flow纯化后得到松茸多糖TMP-N,通过建立小鼠黑色素瘤细胞(Mouse melanoma cells,B16-F10)模型探究了松茸多糖TMP-N抑制UVB诱导黑色素生成的分子机制。结果表明,松茸多糖TMPN的分子量为7819.5 Da,主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和岩藻糖组成;使用TMP-N孵育B16-F10细胞能够有效抑制酪氨酸酶活性,增强细胞的抗氧化能力,减少UVB诱导的黑色素生成;荧光定量PCR测定结果表明,该活性可通过调控PKA和MAPK通路中关键基因的表达而实现。本研究解析了松茸多糖TMP-N调控黑色素生成的机制,为天然活性成分替代化学合成光保护剂提供了理论支撑,对UVB辐射损伤的安全高效防护具有重要应用价值。

关键词： 琼脂   多糖   提取过程   改性   分子结构   凝胶性能  

摘要： 琼脂是从江蓠藻细胞壁中提取的线性多糖,其热可逆双螺旋凝胶网络结构使其具有良好的凝胶化、稳定性及生物相容性等,因而在食品、医药及生物材料等领域不可或缺。然而,随着应用领域对琼脂品质要求的不断提高,传统提取和改性方法已难以满足需求,高品质琼脂成为行业发展的重要方向。该文系统综述近年来高品质琼脂分子结构精准调控策略,重点探讨物理、化学、生物等修饰手段在琼脂生产过程中对琼脂品质,如凝胶性能、分子量、硫酸基含量与3,6-内醚半乳糖组成的有效调控。同时,深入剖析多糖分子结构对琼脂理化性质的影响机制,揭示其在性能优化过程中的权衡关系,以期为高端功能化琼脂凝胶材料的创新发展提供理论参考。

关键词： 传染性法氏囊病病毒(IBDV)   感染性克隆   病毒拯救   核酶  

摘要： 【目的】利用反向遗传操作技术构建鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)BJQ902株感染性克隆,为疫苗的开发及病毒复制和致病机制研究提供重要工具。【方法】以BJQ902株全基因组序列为基础,利用PCR技术扩增IBDV BJQ902株基因组A、B片段,并在A、B片段两端分别引入自裂解核酶RiboJ和HDVrz序列,利用同源重组技术将带有核酶结构的A、B片段插入到载体pCAGGS上,构建重组质粒pCAGGS-BJQ-RAH和pCAGGS-BJQ-RBH,将重组质粒pCAGGS-BJQ-RAH和pCAGGS-BJQ-RBH共转染DF-1细胞,连续盲传3代拯救重组BJQ902株(rBJQ902)。将BJQ902株及rBJQ902株感染DF-1细胞,利用PCR、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定rBJQ902株。【结果】成功获得了BJQ902株基因组A、B片段,大小分别为3 260和2 827 bp;将自裂解核酶RiboJ和HDVrz序列分别连在A、B片段两端,大小分别为3 436和3 033 bp;将带有核酶序列的A、B片段分别连接到pCAGGS载体上,成功获得了重组质粒pCAGGS-BJQ-RAH和pCAGGS-BJQRBH;在DF-1细胞中连续盲传3代获得rBJQ902株;与亲本毒株BJQ902相比,感染DF-1细胞48 h后,rBJQ902株也可扩增得到VP2片段;rBJQ902株的病变与亲本株一致;Western blotting和IFA都可检测到rBJQ902株VP2蛋白的表达,该毒株在细胞培养中展现出与亲本病毒相似的生物学特性。【结论】本研究成功获得了BJQ902株的感染性克隆毒株rBJQ902,为深入研究IBDV的生物学特性及致病机制提供了技术支持,为后续病毒学研究奠定基础。

关键词： 毛竹   WOX4基因   启动子活性   顺式作用元件   激素  

摘要： 【目的】WOX4基因是参与植物生长发育调控的关键基因之一。研究毛竹Phyllostachys edulis PheWOX4c启动子的生物学功能和表达调控机理,为阐明毛竹生长发育过程的调控机制提供参考。【方法】通过Plant CARE网站初步鉴定毛竹PheWOX4c基因启动子上顺式作用元件,构建不同长度5′端缺失启动子植物表达载体,报告基因为GUS,选择不同环境因子对瞬时转化后的本氏烟草Nicotiana tabacum叶片进行处理。通过GUS染色分析PheWOX4c基因启动子全长及各长度启动子片段活性,以及启动子在不同环境因子处理下的响应模式。【结果】PheWOX4c基因启动子序列上可能包含众多激素响应元件[水杨酸(SA)、脱落酸(ABA)、生长素(IAA)和茉莉酸甲酯(MeJA)等]和非生物胁迫响应元件(低温、干旱等)。通过GUS染色发现PheWOX4c基因启动子活性会受到SA、ABA、IAA以及低温处理的抑制,表明有负调控SA的响应元件存在于启动子序列-507~-137 bp,且该区间还存在负调控ABA的响应元件,而-137~0 bp处存在正调控ABA的响应元件,在-2045~-1745 bp和-137~0 bp存在MeJA应答增强元件,在-1140~-507 bp存在与低温相关的负调控响应元件。【结论】PheWOX4c基因启动子含有多种激素响应元件和非生物胁迫响应元件,且不同调控元件对多种激素的响应存在差异,表明该基因受多个转录因子的调控,其上游调控网络十分复杂。

关键词： 小胶质细胞   脂多糖   衰老   尼古丁   炎症  

摘要： 目的探究低剂量尼古丁(Nic)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞(BV-2)衰老抑制作用及机制。方法首先探究LPS引起小胶质细胞衰老效果最佳浓度,处理时间为24 h与48 h,细胞进行β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色。随后小胶质细胞分为四组处理:Veh组、LPS组、Nic组及LPS+Nic联合处理组,持续处理24 h,评估细胞的衰老;利用免疫荧光染色技术,检测炎症因子TNF-α在小胶质细胞中的表达情况,及Lamin A/C、β-gal和p53衰老标志物的表达。结果随着LPS刺激浓度的增加会显著引起小胶质细胞不同程度衰老,且随着处理时间的延长,LPS呈现对小胶质细胞的毒性作用。相反,低剂量尼古丁使小胶质细胞形态多处于未激活状态,且LPS+Nic联合处理组与单LPS组相比,β-半乳糖苷酶阳性的细胞数量显著降低,提示低剂量尼古丁有延缓小胶质细胞衰老作用。细胞免疫荧光染色结果显示LPS处理显著上调TNF-α炎症因子以及Lamin A/C、β-gal、p53衰老标志物表达,而LPS+Nic联合处理显著降低TNF-α炎症因子及Lamin A/C、β-gal、p53衰老标志物的表达。结论炎症环境会加速小胶质细胞衰老,而低剂量Nic显著抑制LPS诱导的细胞衰老进程。

关键词： 脂肪间充质干细胞   髓核细胞   衰老   SIRT1/FoxO1   信号通路  

摘要： 目的 探究脂肪间充质干细胞在氧化应激下衰老髓核细胞(NPC)中的作用及其介导凋亡调控的相关分子机制。方法 根据处理条件不同将NPC分为空白组(NPC组)、实验组(NPC+ADSC组)、氧化损伤模型组(NPC+H2O2组)、实验+氧化损伤组(NPC+ADSC+H2O2组)。通过CCK-8法确定合适的H2O2浓度以构建氧化损伤模型,然后通过β-半乳糖苷酶染色分析各组NPC衰老程度。免疫荧光检测NPC组和NPC+ADSC组细胞中Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)的表达;Western blot分析各组NPC中P53、P16、P-Rb、SIRT1、FoxO1、p-FoxO1、β-catenin、Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白表达水平。结果 与NPC+H2O2组相比,NPC+ADSC+H2O2组NPC衰老数量减少(P<0.05)。NPC与ADSC共培养后细胞中CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达增加(P<0.05)。Western blot检测发现,与ADSC共培养可以抑制H2O2诱导的NPC衰老相关蛋白(P53、P16及P-Rb)及线粒体凋亡相关蛋白(Bax及Caspase-3)的表达(P<0.05),而SIRT1、p-FoxO1及Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),FoxO1、β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 ADSC可以修复氧化应激导致的NPC线粒体损伤,抑制其细胞衰老,该过程可能与调控SIRT1/FoxO1/β-catenin信号通路有关。

关键词： 芍药苷   人颌骨骨髓间充质干细胞   成骨分化   PI3K/AKT信号通路  

摘要： 目的探究芍药苷(paeoniflorin,PF)对人颌骨骨髓间充质干细胞(human jaw bone marrow mesenchymal stem cells,hJBMMSCs)增殖及成骨分化的影响及相关机制。方法采用组织块法分离培养hJBMMSCs,根据实验要求进行相关条件培养,采用CCK-8法检测不同浓度(1、5、10、50、100μmol/L)PF对hJBMMSCs增殖能力的影响;通过碱性磷酸酶(ALP)检测分析、茜素红S染色、RT-qPCR和Western blot探讨PF对hJBMMSCs成骨分化及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。结果10μmol/L PF显著促进hJBMMSCs增殖,而100μmol/L PF有明显细胞毒性;其中,10μmol/L浓度条件下hJBMMSCs各成骨相关mRNA和蛋白表达水平均明显上升,并上调p-PI3K表达水平,而PI3K抑制剂干预后,hJBMMSCs的成骨能力显著下降。结论10μmol/L PF可能通过调节PI3K/AKT信号通路以促进hJBMMSCs的成骨分化。

关键词： 护苗卫士   生命教育   大班幼儿   户外游戏   生命感知  

摘要： 生命教育是贯穿人一生的教育,对于大班幼儿而言,其核心是帮助幼儿认识生命、尊重生命、珍惜生命,萌发关爱生命的情感,培养责任意识与共情能力。户外场景中的一草一木、一芽一叶,都可能成为激发幼儿生命感知的教育载体。在大班户外活动“护苗卫士”中融入生命教育。