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关键词： 桃红四物汤   骨髓间充质干细胞   成骨分化   Wnt/β-catenin信号通路  

摘要： 目的探讨桃红四物汤(THSWD)含药血清通过Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响。方法体外培养大鼠BMSCs,采用不同浓度THSWD含药血清(2.5%、5%、10%、15%、20%、30%)干预BMSCs,以CCK-8法筛选THSWD含药血清最佳作用浓度。分别设置空白组、模型组、THSWD组以及阳性对照组,观察大鼠BMSCs成骨分化情况,通过碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红(ARS)染色检测骨向分化程度;通过RT-qPCR和Western blot法检测各组细胞成骨关键因子及Wnt/β-catenin通路关键蛋白表达。结果THSWD含药血清可显著提高BMSCs存活率,在10%浓度、作用48 h时效果最显著。ALP、ARS结果显示,THSWD组BMSCs成骨分化能力及钙盐沉积程度高于模型组(P<0.001)。RT-qPCR和Western blot分析显示,THSWD组Runx2、OCN、Col-1、Wnt1、Wnt3a和β-catenin的mRNA和蛋白表达水平显著高于模型组(P<0.05)。结论THSWD可促进BMSCs的增殖与成骨分化,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

关键词： 玉米酒   成分分析   氨基酸   抗氧化能力  

摘要： 中国白酒风格多样,贵州玉米酒颇受农村及低收入人群喜爱。因玉米酒生产厂家分散、成本低、消费群体单一且监管难,现有研究较少。本实验选购了贵州地区五种玉米酒(W1—W5),收集整理相关样本,测定其理化指标、氨基酸含量及抗氧化能力,以探究玉米酒质量与功效。结果显示,所测玉米酒存在酒精度、总酸、总酯不符合国家标准的情况,五种酒均含氨基酸且具一定抗氧化能力,其中W3酒品质与抗氧化能力最优且酒度最低,建议消费者选购时优先考虑低酒度玉米酒。本研究为玉米酒开发改进提供了理论基础,对贵州白酒行业健康发展具有启示意义。

关键词： 马铃薯   StUGT52基因   异源过表达   耐盐性   功能分析  

摘要： UDP-糖基转移酶基因广泛参与植物生长和抗逆性的调节,是糖基转移酶中最大的一个家族。马铃薯作为我国重要的菜粮兼用型作物,其生长和产量受到盐胁迫的严重影响。目前,参与马铃薯盐胁迫响应的UGT基因及其机制尚不明晰。本研究通过分析前期的马铃薯盐胁迫转录组数据,从马铃薯中克隆得到StUGT52基因,该基因CDS全长1488 bp,编码495个氨基酸。蛋白序列分析显示, StUGT52为不稳定的亲水性蛋白,与番茄SlLS1-like和茄子SpLS1-like的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析表明, StUGT52基因受盐胁迫显著诱导。StUGT52蛋白主要定位于细胞质和细胞核中。利用农杆菌蘸花法转化拟南芥,获得7个异源表达StUGT52基因的转基因株系。在盐胁迫处理条件下,转基因株系种子发芽率和根长均显著高于野生型, F_(v)/F_(m)值和可溶性糖含量也显著高于野生型株系,而离子泄漏率、MDA和O_(2)^(-)累积均显著低于野生型株系,表明StUGT52基因通过促进渗透调节物质累积,并抑制活性氧产生,减轻膜脂氧化损伤,进而提升转基因拟南芥的耐盐性。研究结果为进一步探究StUGT52基因在马铃薯盐胁迫应答中的功能奠定了理论基础,为耐盐性作物遗传改良提供了新的基因资源。

关键词： 烟酰胺单核苷酸   乳铁蛋白   脂质体   复乳法   Box-Behnken响应面法   血脑屏障  

摘要： 为改善烟酰胺单核苷酸(NMN)的脑靶向性并增强其血脑屏障透过性,采用复乳法结合功能化修饰策略构建并制备乳铁蛋白修饰的烟酰胺单核苷酸脂质体(NMN-Lip-Lf)。首先通过单因素实验及Box-Behnken响应面法优化脂质体处方与工艺参数:确定膜脂比1∶9.5、NMN药液质量浓度4 mg/mL、DSPE-PEG_(2000)物质的量占比3%;优化超声乳化条件(内水相/有机相体积比1∶4.3,内水相/外水相体积比1∶9,超声功率200 W,两次乳化时间分别为4.5、1 min,减压蒸发参数(32℃、10 min))。进一步通过酯化反应将DSPE-PEG_(2000)-COOH替换部分DSPE-PEG_(2000),并与乳铁蛋白偶联制备功能化脂质体。表征结果显示,NMN-Lip-Lf粒径(147.40±5.49)nm,PDI 0.26±0.05,Zeta电位-(8.87±0.41)mV,包封率和载药量分别为(25.11±1.35)%、(5.02±0.27)%。胶体稳定性良好,体外释放呈现明显的药物缓释特性。体外血脑屏障模型实验结果显示,与原料药(NMN)和未修饰脂质体(NMN-Lip)相比,NMN-Lip-Lf的血脑屏障透过率分别提升为它们的6.2倍、4.7倍。此结果为NMN中枢神经系统靶向递送系统的开发应用提供了新策略。

关键词： 岩藻多糖   β-葡聚糖   生长   免疫   抗病力   凡纳滨对虾  

摘要： 葡聚糖和海藻多糖是两类常用的饲料添加剂,但关于二者作用效果的差异迄今报道较少。本研究在饲料中分别添加β-葡聚糖以及岩藻多糖,比较了二者对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼虾的生长、非特异性免疫及对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)抗病力的影响。研究分别设置了添加酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和裸藻(Euglena gracili)来源的β-葡聚糖以及巨藻(Macrocystis pyrifera)来源的岩藻多糖3个处理组(分别记为YG、MG和AP),饲料中添加浓度为0.65 g/kg,以商品饲料作为对照组(DZ),每个处理组分别设置5个生物学重复,对虾的初始体质量为(1.26±0.02)g,养殖周期为42 d。养殖实验结束后,进行为期14 d的副溶血弧菌攻毒实验。研究表明,各处理组对虾的养殖存活率均在90%以上,其中YG、MG和AP组存活率均显著高于对照组(P<0.05)。YG组对虾的末体质量和特定生长率显著高于对照组(P<0.05),各处理组对虾的饲料效率和消化率显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,添加β-葡聚糖以及岩藻多糖均可不同程度提高对虾血清碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、总一氧化氮合酶(T-NOS)、溶菌酶(LZM)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、以及总抗氧化能力(T-AOC)和酚氧化酶(PO)含量。各处理组比较,以YG和MG组效果最佳,AP组次之。各处理组对虾肝胰腺LGBP、SOD、HSP70和proPO基因的相对表达量均显著高于对照组(P<0.05),β-葡聚糖添加组对虾LGBP、SOD、和HSP70基因的相对表达量均显著高于岩藻多糖添加组(P<0.05)。各处理组对虾的肝胰腺Imd、Relish和Toll基因的相对表达量均显著高于对照组(P<0.05),3个处理组之间未见显著差异。在mTOR信号通路中,β-葡聚糖添加组对虾肝胰腺中TOR、elF4E2、elF4E1α和4EBP基因表达水平显著高于对照组(P<0.05),岩藻多糖添加组TOR和elF4E2基因表达水平显著高于对照组(P<0.05)。副溶血弧菌攻毒实验表明,添加不同来源β-葡聚糖均能一定程度提高对虾存活率,其中以酵母来源组效果最佳(P<0.05)。研究结果表明,饲料中适当添加β-葡聚糖和岩藻多糖均能不同程度地提高凡纳滨对虾的生长性能、免疫能力和抗病力,其中以添加酵母来源β-葡聚糖的总体效果最佳。

关键词： 流式细胞术   T细胞受体β链恒定区   T细胞淋巴瘤   T细胞克隆  

摘要： 目的探讨T细胞受体β链恒定区(TRBC)1、TRBC2双染的流式细胞术检测对T细胞淋巴瘤(TCL)细胞克隆性判断的临床价值。方法回顾性收集昆明医科大学第一附属医院2022年5月至2025年8月应用TRBC1单染(TCL患者28例、非TCL患者48例)及TRBC1、TRBC2双染(TCL患者18例、非TCL患者25例)的骨髓样本资料。根据诊断结果将入选患者分为TCL组(46例)与非TCL组(73例)。采用流式细胞术设门圈定淋巴细胞,结合CD3、CD5等表型标志,分析骨髓αβ-T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞亚群中TRBC的表达特征。结果TRBC1单染患者中,非TCL组患者主要呈多克隆表达,TCL组患者主要呈单克隆表达。TRBC1单染诊断CD4^(+)CD8^(-)、CD4^(-)CD8^(+)TCL的灵敏度为94%,特异度为96%,阳性预测值为91%。然而,2例非TCL组患者的TRBC1表达率表现为单克隆,难以将反应性增生与肿瘤性单克隆区分,易导致假阳性,对于免疫表型为CD4^(-)CD8^(-)的患者TRBC1表达缺失时,不能简单判断为TRBC2表达。TRBC1、TRBC2同步检测中,非TCL均显示多克隆表达,TCL均为单克隆表达,以TRBC2+及CD4^(-)CD8^(+)类TCL高发。非TCL中CD4^(+)T细胞的TRBC2表达率高于CD8^(+)T细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。与非TCL组相比,TCL组αβ-T细胞、CD4^(+)CD8^(-)TCL患者中的CD4^(+)T细胞、CD4^(-)CD8^(+)TCL患者中的CD8^(+)T细胞的TRBC2/TRBC1,明显偏离正常范围,差异有统计学意义(P<0.001)。TRBC1、TRBC2双染诊断CD4^(+)CD8^(-)、CD4^(-)CD8^(+)TCL灵敏度为100%、特异度达97%、阳性预测值为94%,能更好地区分反应性与克隆性增生。结论流式细胞术TRBC1、TRBC2同步检测是诊断TCL的高效工具,与TRBC1单染相比有更高的准确性和鉴别能力,可精确判断T细胞克隆性及TRBC亚型,对临床诊疗具有重要指导价值。

关键词： 枯草芽孢杆菌   小肠吸收   氨基酸   小肽  

摘要： 为探究枯草芽孢杆菌对肉鸡小肠氨基酸及小肽吸收的影响,试验选取健康白羽肉鸡雏鸡60000只,随机分成3个处理组,每组8个重复,根据添加枯草芽孢杆菌(活菌数≥1.0×109 CFU/g)剂量不同分为基础日粮组(C组)组,低剂量组(L组,添加1‰)和高剂量组(H组,添加1.5‰)。于肉鸡20日龄和40日龄分别从每个重复中随机取1只,每组共8只,采集小肠肠道组织制作石蜡切片,观察形态学结构;采集肠道组织样品用于RT-qPCR检测小肠氨基酸及小肽吸收相关基因表达情况。结果显示:各组在小肠绒毛形态均正常,20 d L和H组十二指肠绒毛形态完整,长度增加,H组十二指肠绒毛密度增加,隐窝加深。与C组相比,20 d L组肉鸡十二指肠绒毛长度极显著增加15.04%(P<0.01),H组空肠绒毛长度显著增加28.70%(P<0.05),L组十二指肠和空肠Slc7a7表达量显著升高69.96%和148.34%(P<0.05);40 d L组肉鸡十二指肠绒毛长度极显著增加21.22%(P<0.01),L组十二指肠Slc7a7显著升高92.39%(P<0.05),H组十二指肠Slc6a19的表达量极显著升高120.14%(P<0.01)。与L组相比,20 d H组十二指肠绒毛长度和隐窝深度均极显著增加23.48%和104.14%(P<0.01),十二指肠、回肠绒毛长度/隐窝深度极显著降低23.48%和104.14%(P<0.01);40 d H组十二指肠、空肠绒毛长度极显著增加42.05%和28.70%(P<0.01),十二指肠绒毛长度/隐窝深度极显著降低45.95%(P<0.01)。综上所述,日粮中添加低剂量的枯草芽孢杆菌20 d可增加肉鸡小肠绒毛长度,降低隐窝深度,提高绒隐比,同时上调小肠氨基酸转运载体Slc7a7和Slc6a19的表达。因此,枯草芽孢杆菌有助于改善肉鸡肠道黏膜结构,促进机体氨基酸转运。

关键词： 刺五加   多糖   提取方法  

摘要： 刺五加为五加科植物刺五加的干燥根及根茎或茎。刺五加是中国的传统中药也是黑龙江的道地药材。刺五加最早记录于《神农本草经》,并且一直沿用至今积累了大量的临床经验,经历了时间的检验。刺五加多糖是刺五加主要活性成分并且其结构复杂多样。刺五加多糖具有抗肿瘤、调节免疫、抗疲劳和抗氧化等方面的药理作用。刺五加多糖的应用范围广,它不但可以用于治疗人类疾病,也可以用于畜禽疾病的预防,具有极大的经济价值和研究价值。本文综述了刺五加多糖提取方法研究进展,归纳刺五加多糖提取方法有热水浸提法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、酶提取法、共晶溶剂提取法。这些方法为刺五加多糖的后续相关实验提供参考。特别是为后续多种提取技术在实验中的联用提供参考。

关键词： 油菜   水分   蛋白质   核磁共振   代谢组学  

摘要： 旨在为油菜的品质评价与遗传改良奠定方法与数据基础,以大地95油菜(甘蓝型)为研究对象,干质量偏差为指标,结合^(1)H NMR谱图,对不同极性提取剂添加顺序、提取剂用量、冷冻干燥时间3个提取营养物质的条件进行了优化,在此基础上,以油菜营养物质得率为指标,对提取剂种类、料液比、提取次数3个提取条件进行了优化。同时,分析了6个不同品种和生长期油菜中水分和蛋白质含量,对比了大地95油菜蕾薹期不同部位(叶、茎、花苞)的蛋白质含量。结果表明:通过干质量偏差和^(1)H NMR谱图,确定以极性溶剂提取油菜营养物质,冷冻干燥时间为72 h;极性溶剂提取油菜营养物质的最佳条件为提取剂为50%甲醇、料液比1∶10、提取次数3次;代谢组学分析表明,氨基酸在花苞中的含量较高,而糖类物质在茎中的含量最高;不同品种、不同生长期油菜的水分含量均在80%以上;不同品种油菜的蛋白质含量差异不大,但蕾薹期的蛋白质含量最高(36%左右),其次是花期(29%左右)和苗期(18%左右);在蕾薹期时,大地95油菜叶片中的蛋白质含量(36%左右)明显高于茎(19%左右)和花苞(31%左右)。综上,所构建的基于NMR技术的油菜前处理方法,有助于揭示油菜营养物质积累与分布规律。

关键词： 阿维菌素   白羽王鸽   脑组织   程序性坏死   黄芪多糖  

摘要： 为探讨黄芪多糖对农药阿维菌素(AVM)染毒王鸽脑组织中毒的改善作用,试验将40只白羽王鸽随机分成4组,分别为空白组、染毒组、黄芪低剂量组、黄芪高剂量组,每组10只。剖杀取脑组织后通过光镜观察脑组织细胞形态,检测脑损伤因子、炎症相关因子和氧化应激因子。通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测程序性坏死相关基因的mRNA表达情况。结果表明:通过黄芪给药组与染毒组比较,光镜结果显示,大脑和小脑的空泡化、炎症反应、毛细血管肿胀等现象均缓解,黄芪高剂量组尤为明显;脑损伤因子、炎症相关因子和氧化应激因子检测结果均显示,给药组的大脑、小脑各因子水平趋于正常,黄芪高剂量组的改善效果更好;qPCR结果显示,与模型组比较,黄芪高剂量组大脑、小脑中程序性坏死相关基因的mRNA表达量显著降低(P<0.05),黄芪低剂量组无显著变化。以上结论说明黄芪多糖对AVM中毒王鸽脑组织损伤有显著改善作用。