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关键词： 山药   多糖   分级醇沉   结构表征   降脂活性  

摘要： 使用不同浓度乙醇溶液(40%、50%、60%、70%和80%)分级沉淀得到5组山药多糖(P40、P50、P60、P70和P80),对分级多糖的结构特征和降脂活性进行分析与检测。结果表明,山药分级多糖均是由甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖聚合而成的α-构型低聚糖,具有O—H、C—H、C=O、C—O—C和—NH2等官能团结构。在检测浓度范围内,山药分级多糖呈剂量依赖性体外降脂活性,其中P60的综合降脂能力最强。当浓度为10 mg/mL时,P60对胰脂肪酶活性、胆固醇酯酶活性及胆固醇胶束溶解度抑制率分别达到(14.67 ± 0.74)%、(45.21 ± 1.91)%和(48.61 ± 2.63)%,对牛磺胆酸钠和甘氨胆酸钠的结合率分别达到(50.04 ± 1.23)%和(32.21 ± 1.90)%,具有较好的体外降脂活性。

摘要： 蛋白质是生命功能的主要执行者,其稳定的三维结构是许多蛋白行使催化、运输、结构支撑等功能的分子基础.然而,绝大部分蛋白质本身是脆弱的,高温、机械力、极端pH等环境压力都可能导致其变性失活,这限制了蛋白质在工业催化、生物医学材料及极端环境生物技术等领域的应用.因此,如何设计并制造出比天然蛋白质更稳定、更能耐受苛刻条件的人工蛋白质,一直是化学生物学、合成生物学与生物材料领域的一项核心挑战.

关键词： 红芪多糖   蜜炙   免疫缺陷   差异性研究  

摘要： 旨在通过建立环磷酰胺诱导的免疫缺陷小鼠模型,比较红芪多糖(HPS)与炙红芪多糖(炙红芪多糖)对免疫功能的调节作用差异性,从现代药理学角度探讨“蜜炙增效”传统炮制理论的科学内涵,为临床精准用药提供依据。通过离子色谱法分析红芪蜜炙前后多糖的单糖组成、单糖含量百分比;将90只昆明小鼠随机分为9组(每组10只):空白组,模型组,阳性对照组(盐酸左旋咪唑,20 mg·kg-1),HPS低、中、高剂量组(75、150、300 mg·kg-1)及H-HPS低、中、高剂量组(同前剂量)。除空白组外,其余各组均腹腔注射环磷酰胺(80 mg·kg-1)建立免疫缺陷模型。造模3 d后,各组灌胃给予相应药物,每日1次,连续12 d,期间记录小鼠体质量变化;计算脾脏与胸腺指数;通过苏木精-伊红(HE)染色法观察脾脏和胸腺组织病理形态;采用流式细胞术分析外周血T淋巴细胞亚群比例;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清免疫球蛋白及细胞因子水平。结果显示红芪蜜炙前后多糖的单糖组成均以葡萄糖为主,且蜜炙后葡萄糖与半乳糖醛酸比例上升、半乳糖比例下降、甘露糖未检出。药效结果显示,与空白组相比,模型组小鼠体质量下降,脾脏指数与胸腺指数极显著降低(P<0.01);脾脏红髓与白髓界限模糊,动脉周围淋巴鞘及淋巴小结结构退化,淋巴细胞数量减少;胸腺被膜皱缩,皮质与髓质结构破坏;脾脏CD4阳性T淋巴细胞/CD8阳性T淋巴细胞(CD4+/CD8+)比值、血清免疫球蛋白A(IgA)、血清免疫球蛋白G(IgG)、血清免疫球蛋白M(IgM)水平以及白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)含量均显著或极显著下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,除H-HPS高剂量组外,各给药组均能显著提升小鼠体质量及脏器指数,减轻环磷酰胺所致的脾脏和胸腺组织损伤,提高CD4+/CD8+比值,并升高血清免疫球蛋白及相关细胞因子水平,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。H-HPS各剂量组对免疫指标的改善作用优于相应剂量的HPS组,且表现出“倒U型”剂量效应关系。综上所述,HPS与H-HPS均能有效改善环磷酰胺所致免疫缺陷状态,其中H-HPS对小鼠行为、器官、组织、细胞及分子水平的调节作用均优于HPS,且其作用效果与其单糖组成密切相关。该研究为红芪“蜜炙增效”的传统炮制理论提供了实验依据,支持其在临床中的合理应用。

关键词： 牛耳枫   查尔酮合成酶(CHS)   基因克隆   生物信息学  

摘要： 为了揭示牛耳枫查尔酮合成酶基因(DcCHS)的特征及潜在功能,基于牛耳枫转录组数据筛选高表达候选基因,提取总RNA合成cDNA后,利用PCR技术克隆目的基因。采用生物信息学方法分析基因的理化性质、结构域、亚细胞定位及空间结构,进行多序列比对和系统发育树构建,并通过分子对接验证CHS蛋白与小分子的结合活性。结果表明,DcCHS1、DcCHS2和DcCHS3的开放阅读框(ORF)全长分别为1188、1188 、1023 bp,G+C含量均大于51%,分别编码395、395、340个氨基酸。DcCHS1、DcCHS2、DcCHS3蛋白的分子质量分别为43.08、43.03和37.03 ku。3个DcCHS均为非分泌型蛋白,其中,DcCHS1为弱酸性不稳定蛋白,DcCHS2和DcCHS3为弱酸性稳定蛋白。亚细胞定位预测显示其主要位于细胞质。3个DcCHS蛋白的脂肪指数均大于90,且均无信号肽和跨膜结构域。3个DcCHS蛋白均含有CHS催化中心的4个保守残基(Cys、Phe、His、Asn)及CHS家族特征序列“WGVLFGFGPGLT”。系统发育分析显示,牛耳枫CHS基因与柑橘、拟南芥等物种的CHS基因亲缘关系较近。分子对接结果显示,DcCHS蛋白与柚皮素、根皮素等黄酮类小分子具有良好的结合能力。3个DcCHS基因可能在花色苷积累、非生物胁迫响应等方面起到了重要作用。

关键词： 黄酒   外加氮源   风味   氨基酸   挥发性成分  

摘要： 为探究外加酵母可同化氮源(Yeast Assimilable Nitrogen,YAN)对黄酒风味品质的调控机制,本研究以氯化铵(NH4Cl)、精氨酸(Arg)和谷胱甘肽(GSH)为外加氮源,通过模拟发酵实验系统分析其对黄酒理化指标、挥发性成分、游离氨基酸和有机酸的影响,并结合感官评价验证风味品质差异。结果表明:NH4Cl组总糖(22.04 g/L)与总酸(7.36 g/L)显著高于对照组(未添加外加氮源);Arg组氨基酸态氮(0.58 g/L)积累最优,鲜味氨基酸定向富集,酯类种类增至19种,总糖(9.37 g/L)与总酸(4.68 g/L)最低,有机酸总量最高;GSH组己酸乙酯含量最高,风味与对照组差异最小,且游离氨基酸总量提升14%,定向富集琥珀酸等风味协调型有机酸。主成分分析证实不同YAN驱动的挥发性物质差异显著(累计方差贡献率75%),其中Arg与GSH通过调控酯类合成及氨基酸代谢优化风味平衡。感官评价显示,Arg组在酒香浓郁度、酒体醇厚感上表现突出,GSH组香气协调性与余味持久度最优。综上,外加氮源通过调控酵母氨基酸代谢及酯类合成路径,差异化调节黄酒风味品质:NH4Cl适用于高级醇控制,Arg利于鲜味提升与酯类多样性拓展,GSH组则与对照组结果较为相似,维持风味稳定性。本研究为黄酒发酵工艺的氮源精准调控提供了理论依据。

关键词： 香兰素   人工抗原   细胞融合   杂交瘤细胞   单克隆抗体  

摘要： 香兰素过量摄入存在健康风险,建立其精准检测方法至关重要,而高灵敏度、高特异性的单克隆抗体是实现免疫学快速检测的关键。以香草酸为半抗原,采用活性酯法与载体蛋白(BSA、OVA)偶联,合成香兰素人工抗原(免疫原与包被原)。通过紫外全波长扫描及凝胶电泳鉴定偶联效果。将免疫原免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,多克隆抗体效价达1:160 000,表明人工抗原具有良好的免疫原性。选取效价较高的小鼠进行细胞融合,经3次亚克隆筛选获得两株阳性杂交瘤细胞(1A2和3D4),分别注入小鼠(B1和B2)腹腔制备腹水,获得抗香兰素单克隆抗体。间接ELISA结果显示,两种腹水效价均为1:819 200;间接竞争ELISA测定腹水的灵敏度,B1和B2小鼠腹水的半数抑制浓度分别为1610 ng/mL和290 ng/mL。其中,B2腹水与乙基香兰素、甲基香兰素、香豆素、BSA及OVA的交叉反应率均低于0.1%。成功制备出高灵敏度、高特异性的香兰素单克隆抗体,为后续开发香兰素免疫学检测方法奠定了基础。

关键词： 类风湿关节炎   微小核糖核酸   巨噬细胞极化   炎症反应   信号通路  

摘要： 类风湿关节炎(RA)是一种以慢性滑膜炎症和关节破坏为特征的自身免疫性疾病,其发病机制复杂,巨噬细胞极化在疾病进展中起着重要作用。近年来,多项研究发现微小核糖核酸(miRNA)作为重要的转录后调控因子,可以通过调节巨噬细胞的极化状态参与RA的炎症反应过程,从而加重关节损伤。该文综述了各种miRNA在调控巨噬细胞极化过程中的作用机制,重点探讨不同miRNA对巨噬细胞极化的调控作用及其在RA中的潜在应用价值。

关键词： 菊粉   放射性肠损伤   肠道干细胞   小鼠   电离辐射   益生元   肠道上皮再生   肠道干细胞标志物  

摘要： 目的 探讨菊粉对放射性肠损伤的防护作用及其相关机制。方法 选取6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常组、单纯照射组、50g/kg菊粉干预组、100g/kg菊粉干预组、150g/kg菊粉干预组、50g/kg菊粉干预+照射组、100g/kg菊粉干预+照射组和150g/kg菊粉干预+照射组,每组8只。经5周菊粉喂养后,小鼠接受全腹部10GyX射线照射(照射野覆盖胸骨剑突至耻骨联合),剂量率为1.17Gy/min。每日监测小鼠体质量,照射后第5日收集小鼠小肠组织,通过测量结肠长度评估肠损伤程度;采用HE染色观察肠道组织形态,PCNA与Ki-67免疫组织化学染色检测肠隐窝细胞增殖能力;采用免疫荧光共定位染色检测肠道干细胞标志物Lgr5、Ascl2与增殖标志物Ki-67的共表达;并采用qRT-PCR及Westernblotting检测辐射及正常状态下肠道干细胞标志物的mRNA和蛋白表达水平。结果 与单纯照射组相比,50g/kg菊粉显著减缓小鼠体质量下降(P<0.05),50g/kg(P<0.01)和100g/kg(P<0.05)菊粉缓解结肠缩短,改善肠道绒毛损伤(P<0.01)及隐窝损伤(P<0.01,P<0.05),并上调PCNA(P<0.01,P<0.05)、Ki-67表达(P<0.05);免疫荧光结果显示,辐射显著降低Lgr5+、Ascl2+干细胞数量并抑制Ki-67增殖信号,隐窝结构破坏明显;菊粉干预可显著恢复干细胞荧光信号强度与阳性细胞比例,提高干细胞与增殖指标的共定位水平,其中50g/kg、100g/kg菊粉改善效果较好;qRT-PCR显示菊粉上调受照射小鼠肠道干细胞相关基因表达(P<0.05);在正常小鼠中,不同剂量菊粉对干细胞标志物呈差异性调控,可适度提升健康小鼠肠道干细胞的干性。结论菊粉可通过恢复肠道干细胞数量、增强其增殖活性及上调干细胞标志物表达,促进电离辐射诱导的肠道损伤修复,并能够调控正常小鼠的肠道干细胞稳态。

关键词： 灵芝   多糖   分离纯化   结构   生物活性   构效关系  

摘要： 灵芝多糖是从灵芝属真菌中提取的、具有不同结构特征及活性的大分子化合物。本文综述了其结构特征、提取纯化方法及生物活性,并重点探讨了结构类型与生物功能之间的构效关系。首先,基于现有研究系统归纳了灵芝中包括β-(1→3)-葡聚糖、β-(1→6)-葡聚糖及半乳聚糖等在内的各类多糖的结构特点。其次,梳理了从传统水提、酸碱提取到超声、微波、酶辅助及深共熔溶剂等新型提取技术的发展,并分析了提取方式对多糖得率、结构及活性等方面的影响。在此基础上,阐述了灵芝多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、代谢调节和神经保护等方面的生物活性,并从构效关系角度剖析了β-(1→3)骨架、三股螺旋构象及适度支化等结构特征对其功能的基础性作用。本文通过整合现有研究成果,构建了灵芝多糖构效关系的关联框架,为其在功能食品、药物开发及相关领域的精准设计与系统利用提供了理论依据与重要参考。

关键词： 手性   构象   构型   动态外消旋   隐手性   柱芳烃  

摘要： 手性是指物体与其镜像不能重合的现象。手性分子与其镜像互为对映异构体。在立体化学研究中,手性可分为构型手性和基于构象的手性。其中,构型手性基于原子连接的固定空间排列,而构象手性则是由单键旋转引起的瞬时不对称导致的。与构型手性相比,基于构象的手性是一种特殊的动态手性,是指分子虽无构型手性,但在特定构象下呈现手性的现象。本文主要介绍meso-酒石酸、联苯及柱[5]芳烃的手性构象;并结合实验结果,阐述柱[5]芳烃的手性构象在隐手性氨基酸检测中的应用。