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关键词： 白桦树汁   乳酸菌   抗氧化活性   氨基酸   挥发性化合物  

摘要： 本研究旨在系统评估乳酸菌发酵对白桦树汁营养成分和挥发性化合物的影响,以期为开发白桦树汁发酵产品的菌株选择提供科学依据。选取8株不同乳酸菌,分别对不同时期采集的白桦树汁进行发酵处理,系统分析发酵前后白桦树汁的理化指标、抗氧化性、氨基酸组成以及挥发性化合物的变化情况。结果表明,不同时期采集的白桦树汁存在化学成分差异,前期白桦树汁具有更高的糖和酸,以及更为丰富的挥发性化合物,而后期白桦树汁拥有较高含量的风味氨基酸。8种乳酸菌在白桦树汁中表现出良好的生长代谢能力。经菌株发酵后,白桦树汁pH、还原糖含量减少,总酸含量增加,抗氧化能力提高。通过高效液相色谱分析氨基酸组成,白桦树汁发酵后共检测到21种氨基酸,前期白桦树汁发酵后甜味、苦味氨基酸含量都有增加,而后期发酵后甜味氨基酸减少,苦味氨基酸无明显变化。使用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术分析挥发性化合物组成,白桦树汁发酵后共检测到46种挥发性化合物,其种类和含量显著增加。不同时期采集的白桦树汁在发酵后的品质变化存在显著差异。前期采集的白桦树汁发酵后总酸含量、还原糖含量、氨基酸和挥发性化合物组成变化都更为显著。主成分分析显示,发酵前后的白桦树汁具有显著的品质差异。综上,乳酸菌发酵能够提升白桦树汁风味品质,且植物乳植杆菌BB16被认为是最佳发酵菌株。

关键词： 干细胞   脐带间充质干细胞   树鼩   胸腺   衰老   衰老标志分子   增殖基因   免疫  

摘要： 背景:胸腺作为免疫系统核心器官,是T淋巴细胞分化、发育、成熟的场所。在青春期时,胸腺就开始发生萎缩退化,是人类最早出现衰老的器官。目前干预胸腺衰老的研究仍较少,高活性脐带间充质干细胞改善树鼩胸腺衰老研究国内尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对衰老树鼩胸腺结构和功能的影响。方法:通过剖腹产获取新生树鼩脐带组织,使用组织贴壁法分离培养获得高活性脐带间充质干细胞,使用吉凯基因绿色荧光蛋白以感染复数值140共培养72 h为转染条件,转染第4代高活性脐带间充质干细胞。20只平均年龄在7周岁的雌性树鼩,随机分为老年模型组与老年治疗组,每组10只;10只年龄在3周岁的雌性树鼩设为青年对照组。老年治疗组通过尾静脉输注第4代高活性脐带间充质干细胞,剂量为1×10^(7)个/kg,1次/d,连续3次;青年对照组与老年模型组不做任何特殊处理。常规饲养4个月取胸腺组织,苏木精-伊红染色观察胸腺组织结构;Masson染色观察胸腺组织纤维化程度;免疫组织化学染色检测衰老标志分子p21、p53表达;免疫荧光染色检测增殖蛋白Ki67、增殖细胞核抗原表达;活性氧荧光染色检测胸腺组织的活性氧含量;免疫组织化学染色检测胸腺组织CD3^(+)总T淋巴细胞数量;酶联免疫吸附实验检测树鼩血清中胸腺素β4水平;DAPI复染胸腺组织细胞核观察高活性脐带间充质干细胞在胸腺组织的分布情况。结果与结论:①老年治疗组树鼩胸腺中观察到吉凯基因绿色荧光蛋白转染的高活性脐带间充质干细胞;②与老年模型组相比,老年治疗组树鼩胸腺紊乱结构得到明显改善,胸腺实质组织增加(P<0.05),脂肪减少,皮髓质界限清晰,胶原纤维占比降低,具有向年轻状态变化趋势;③与老年模型组相比,老年治疗组衰老标志分子p21、p53表达下调(P<0.01,P<0.05);④与老年模型组相比,老年治疗组增殖与凋亡分子Ki67表达呈增加趋势,但差异无显著性意义(P>0.05),增殖细胞核抗原表达增加(P<0.05),活性氧水平表达显著下降(P<0.01);⑤与老年模型组相比,老年治疗组CD3^(+)T淋巴细胞比例呈增加趋势,但差异无显著性意义(P>0.05);⑥与老年模型组相比,老年治疗组血清胸腺素β4水平增加(P<0.01);⑦研究结果表明,高活性脐带间充质干细胞能够改善衰老树鼩胸腺组织结构,降低衰老标志分子表达水平,提高胸腺细胞的增殖活性和胸腺功能。

关键词： 小体型肉鸭   肉品质   氨基酸   脂肪酸  

摘要： 为开发地方鸭种质资源,试验比较益扬1号鸭H1品系和H2品系及杂交后代的肌肉氨基酸、脂肪酸和血浆生化指标。试验测定了H1♂×H1♀(H1)、H2♂×H2♀(H2)、H1♂×H2♀(H12)3个组合小体型肉鸭49日龄胸腿肌氨基酸和脂肪酸含量及血浆生化指标。结果显示:在血浆生化指标中,H12组碱性磷酸酶显著高于H1组(P<0.05),血浆球蛋白、胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量显著低于H2组(P<0.05);胸肌中H12组NEAA、鲜味氨基酸和甜味氨基酸含量显著高于H1组(P<0.05),腿肌中H12组非必需氨基酸(NEAA)、苦味氨基酸和芳香族氨基酸含量显著高于H1和H2组必需氨基酸EAA、鲜味氨基酸和甜味氨基酸含量显著高于H1组(P<0.05);胸肌中,H12组单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸含量显著高于H1组而饱和脂肪酸含量显著低于H1组和H2组(P<0.05);腿肌中,H12组多不饱和脂肪酸含量显著高于H1和H2组(P<0.05)。综上所述,通过不同品系的杂交,益扬1号杂交后代在肌肉营养价值和口感风味等方面得到显著提高。

关键词： 牛干扰素基因刺激因子   基因克隆   细胞定位   表达谱   牛结节性皮肤病病毒  

摘要： 为探究牛干扰素基因刺激因子(boSTING)的分子特征、细胞定位及差异表达。用RT-PCR方法获得boSTING基因,其全长为1137 bp,编码378个氨基酸,且N端存在5个跨膜结构域;通过遗传进化分析发现,家牛(Bos taurus)的boSTING与野牛、印度瘤牛、牦牛及杂牛的亲缘关系最近,与树袋熊、鸭嘴兽等的亲缘关系较远;通过双酶切、间接免疫荧光试验、qPCR及Western blot检测显示,成功构建了pCAGGS-HA-STING和pCAGGS-GFP-STING的重组真核表达质粒且能在细胞中正确表达;用qPCR、Western blot和激光共聚焦检测boSTING的细胞定位及其在牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染牛不同组织和细胞中的表达水平,结果显示,该分子定位于细胞质,且高表达于心脏和肾脏组织及牛肾传代细胞。本研究明确了boSTING的分子特性、细胞定位与差异表达模式,为探索其在机体抵抗LSDV等DNA病毒感染中的分子机制提供了一定的理论依据。

关键词： 厚壳贻贝   可拉酸   提取优化   附着   足丝蛋白  

摘要： 【目的】为探究海洋细菌胞外多糖可拉酸(CA)诱导厚壳贻贝附着的机制。【方法】以厚壳贻贝稚贝为对象,探究可拉酸产生的最适培养条件,并提取纯化进行单糖组成分析,使用不同浓度可拉酸诱导厚壳贻贝附着,注射厚壳贻贝后通过荧光定量探究足丝附着效果。【结果】本研究采用一株高产可拉酸的海假交替单胞菌(Pseudoalteromonas marina ECSMB14103Δ01912),对其培养条件进行单因素实验、Box-Benhnken中心组合设计优化实验,确定了该菌产生可拉酸的最佳培养方案:pH为6.0,培养温度为30℃,培养时间为18 h,接种量为8%。通过水沉醇提法提取细菌胞外产物,并使用离子色谱法分析产物的单糖组成,发现提取产物是由岩藻糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸按摩尔比2∶2∶1∶1聚合成的杂多糖,确定提取产物为可拉酸。将可拉酸包埋于琼脂诱导厚壳贻贝稚贝附着,发现可拉酸最佳诱导浓度为20和50μg/mL。将纯化的可拉酸注射至贻贝体内,通过荧光定量发现,贻贝足丝黏附蛋白基因Mcfp-1P、Mcfp-2、Mcfp-5表达量显著上调,而Mcfp-1T表达量在可拉酸处理后没有显著性变化;贻贝足丝胶原蛋白基因Mccol2表达量显著上调,而Mccol3显著下调。【结论】可拉酸可能是通过调控足丝黏附蛋白和胶原蛋白的分泌,调节厚壳贻贝的二次附着。本研究初步揭示了厚壳贻贝的附着机制,同时为可拉酸诱导稚贝附着应用于厚壳贻贝养殖提供潜在价值。

关键词： 灵芝胞外多糖   发酵工艺   Plackett-Burman实验   响应面法   抗氧化活性  

摘要： 以灵芝(Ganoderma lucidum)L2-22为出发菌株,在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman实验与响应面法优化了灵芝产胞外多糖的发酵工艺,并评价了灵芝胞外多糖的抗氧化活性。结果表明,在摇床转速为160 r·min^(-1)、发酵温度为30℃、初始pH值为5.27、装液量为26%、接种量为8%的最佳发酵条件下,灵芝胞外多糖产量达到15.12 g·L^(-1);灵芝胞外多糖具有较高的抗氧化活性,当浓度为1.0 mg·mL^(-1)时,其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除率分别达到(93.44±0.60)%、(99.89±0.09)%、(69.29±0.80)%;此外,在0.1~1.0 mg·mL^(-1)浓度范围内,其对Fe 3+的还原能力整体强于VC。

关键词： 短管兔耳草   葡萄糖基转移酶   生物信息学分析   原核表达   功能验证  

摘要： 糖基化在植物天然产物的结构多样化中起着重要作用,鉴定高效的糖基转移酶是合成糖苷产物的关键步骤。该研究从短管兔耳草中克隆得到一条新的糖基转移酶基因UGT74DU1,借助伴侣蛋白质粒pGro7在大肠杆菌中实现可溶性高表达,并通过体外酶促反应验证了其功能。UGT74DU1全长1413 bp,编码470个氨基酸,蛋白质分子质量约为52.6 kDa,理论等电点为5.53。氨基酸序列比对及系统发育分析显示,UGT74DU1与CrUGT74AN3亲缘关系最近,序列相似度仅46.86%。通过LC-MS分析及核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)结构鉴定发现UGT74DU1可以优先识别槲皮素、山奈酚、芦丁、异槲皮苷等黄酮类化合物C-7-OH,反应生成黄酮-7-O-葡萄糖苷,进一步识别C-4′-OH生成黄酮-4′,7-O-双葡萄糖苷;同时也可以催化苯乙醇苷类化合物毛蕊花糖苷羟基肉桂酰基的C-3″-OH糖基化,生成毛蕊花糖苷-3″-O-β-葡萄糖苷,具有一定的底物宽泛性。

关键词： 花生   半胱氨酸氧化酶(AhPCO)   亚细胞定位   非生物胁迫   基因克隆   表达分析  

摘要： 植物氧感知机制研究表明,植物半胱氨酸氧化酶基因(PCOs)作为核心氧传感器,通过调控氧敏感信号通路,使植物在胁迫环境中维持正常生长发育,从而获得生存优势。本研究克隆了花生AhPCO基因的CDS序列,其全长843 bp,编码281个氨基酸,理论pI值为6.06,不存在信号肽,为亲水性不稳定蛋白。亚细胞定位结果显示AhPCO蛋白定位于细胞核和细胞质。AhPCO蛋白与拟南芥AtPCO1蛋白具有较近的亲缘关系。启动子元件分析结果表明,AhPCO基因的转录水平可能受脱落酸和厌氧诱导。qPCR结果显示,AhPCO基因表达具有组织特异性,在花生不同组织的表达水平依次为种子>茎>根>叶>花;与正常对照组相比,AhPCO基因的表达水平在高温处理2 h和盐胁迫12 h时显著升高;在干旱胁迫15 d时表达显著降低,复水1 d后表达水平急剧升高,复水2和4 d后表达水平虽逐渐降低,但仍显著高于正常对照组。AhPCO基因是一个受多种非生物胁迫(高温、盐、干旱及复水)显著调控,并具有组织表达特异性的基因,其在花生应对环境胁迫的应激反应和恢复过程中可能扮演着重要的调控角色。本研究为揭示AhPCO基因的功能奠定了理论基础,同时为培育耐逆境胁迫的优异花生新品种提供了潜在的抗性基因资源。

关键词： 高密度单核苷酸多态性位点   法医单核苷酸多态性系谱推断技术   全基因组测序技术   亲缘关系推断   共祖片段算法  

摘要： 目的 研究不同量级单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点组合,基于筛选SNP位点集进一步提高远亲缘关系的预测能力。方法 首先选取3种芯片中国基因分型芯片(Chinese genotyping array,CGA,Illumina)、全球筛查芯片(global screening array,GSA,Illumina)、23魔方V2版高密度SNP芯片(23MF_V2 high-density SNP array,Affy,Thermo Fisher Scientific(formerly Affymetrix))位点进行合并、质控,筛选得到一组高密度SNP位点集(1 180 k);从161份全基因组测序数据中获取1 180 k位点集,使用共祖片段(identity-by-descent,IBD)算法进行亲缘关系推断,通过IBD片段长度和预测准确性的变化趋势评估该位点集的亲缘关系推断能力。结果 经过筛选后,得到1 184 334个常染色体SNP位点集(下文称高密度SNP位点集)。与3种芯片位点集的平均结果相比较,高密度SNP位点集增加了总IBD片段长度以及1~9级的平均IBD片段长度;8级置信区间准确率为70.97%,提高了3.50%;1~8级平均置信区间准确率为91.39%,提高了1.00%;8、9级假阴性率分别降低2.42%、6.76%。高密度SNP位点集的1~8级亲缘关系推断系统效能达98.91%。通过随机减少位点结果发现,增加SNP位点数量能提升较远亲缘关系推断能力。结论 高密度SNP位点集显著增强远缘关系推断效能,可精准覆盖1~8级亲缘关系,且1~8级平均置信区间准确率稳定在90%以上。本研究发现,SNP位点数量增加,可以提高远亲缘预测能力。

关键词： 番荔枝   多糖   分离纯化   结构表征   抑菌活性  

摘要： 为探究番荔枝果肉多糖的结构特性及其对食源性致病菌的抑菌作用,采用超声辅助提取并分离纯化得到番荔枝果肉多糖(WPAS),通过离子色谱、高效凝胶渗透色谱、红外光谱、刚果红试验、X射线衍射、Zeta电位分析及扫描电镜等技术表征其结构特征。结果表明,WPAS是一种以阿拉伯糖为主要单糖组成的中性多糖,重均分子量14.99 kDa,呈无定形非晶态结构,表面具有多孔网状形貌,且其溶液具有良好的稳定性。体外抑菌实验显示,在质量浓度为20 mg/mL时,对枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌抑菌圈直径分别为20.34±0.75 mm和10.21±1.47 mm,MIC值分别为12.50 mg/mL和17.50 mg/mL。通过细胞膜通透性及ATP酶活性检测评估其对枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌的抑菌效应。结果显示,WPAS可破坏菌体细胞膜完整性及显著抑制ATP酶活性发挥抑菌效应。综上,WPAS对枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌具有较好的抑菌能力,研究结果可为番荔枝多糖在食品防腐以及功能性产品的开发方面提供理论参考。