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关键词： 枸杞多糖   肠道菌群   2型糖尿病   短链脂肪酸   糖脂代谢   炎症  

摘要： 背景:枸杞多糖作为一种天然活性成分,具有降低血糖以及改善糖尿病相关症状的潜力。然而,从肠道菌群的角度,枸杞多糖对糖脂异常影响的潜在因素尚未完全阐明。目的:探究枸杞多糖在2型糖尿病中的作用及相关机制。方法:从18只8周龄雄性SD大鼠中随机选取6只为空白对照组,其余12只大鼠给予高糖高脂饲料饲养8周+尾静脉单次注射1%链脲佐菌素溶液构建2型糖尿病模型,造模成功后随机分为模型对照组(n=6)和枸杞多糖组(n=6)。枸杞多糖组大鼠按照200 mg/(kg·d)的剂量灌胃枸杞多糖溶液,2 mL/次,1次/d,连续灌胃12周,收集大鼠血清及粪便。通过16S rDNA测序分析肠道菌群,采用α多样性、β多样性及主成分分析等方法表征菌群丰度与结构特征;采用液相色谱-质谱联用法检测短链脂肪酸水平;通过ELISA法检测糖脂代谢、胰岛素抵抗及炎症反应相关指标。结果与结论:①与模型对照组相比,枸杞多糖组高密度脂蛋白胆固醇水平升高,总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平降低,说明枸杞多糖改善了2型糖尿病大鼠的脂质积累,并抑制体质量减轻;②与模型对照组相比,枸杞多糖组白细胞介素6、肿瘤坏死因子α以及血糖水平降低,胰岛素以及胰高血糖素样肽1水平升高,说明枸杞多糖有效抑制了炎症反应和胰岛素抵抗;③枸杞多糖显著改善了肠道菌群的组成,增加了Lachnospiraceae_NK4A136_group、Clostridia_UCG-014_unclassified、Monoglobus、Phascolarctobacterium、Candidatus_Saccharimonas、Desulfovibrionaceae unclassified以及Desulfovibrio丰度,减少了Muribaculaceae_unclassified和Enterorhabdus丰度;④枸杞多糖还显著提高了短链脂肪酸水平,并且Clostridia_UCG-014_unclassified、Candidatus_Saccharimonas和Muribaculaceae_unclassified可能参与调节丁酸的生成,以改善2型糖尿病大鼠的糖脂代谢,Lachnospiraceae_NK4A136_group、Monoglobus和Desulfovibrionaceae unclassified可能参与调节异丁酸的生成,以抑制胰岛素抵抗以及改善脂代谢;⑤枸杞多糖可通过增加Firmicutes_unclassified、Clostridia_UCG-014_unclassified、Intestinimona和Colidextribacter以及抑制Kineothrix的丰度来改善2型糖尿病大鼠的炎症反应。

关键词： 籽粒苋   营养成分   粗蛋白   矿物元素   氨基酸   脂肪酸  

摘要： 籽粒苋是一种营养丰富的伪谷物,为了探究不同种类籽粒苋的营养成分特点和差异,选取产自云南镇雄县的千穗苋(A.hypochondriacus)、尾穗苋(A.caudatus)、老鸦谷(A.cruentus)为试材,测定其主要营养成分,并与几种常见粮食进行对比分析。结果显示:3种籽粒苋中,总淀粉含量表现为尾穗苋>千穗苋>老鸦谷,粗蛋白含量表现为老鸦谷>尾穗苋>千穗苋,粗纤维含量表现为老鸦谷>千穗苋>尾穗苋。老鸦谷中的总黄酮和粗灰分含量最高,而千穗苋中的总多酚和可溶性糖含量最高。矿物质含量方面,老鸦谷的钙、铁、锰含量最高;千穗苋的镁、铜、锌含量最高。3种籽粒苋均含有10种非必需氨基酸和7种必需氨基酸,其中谷氨酸含量最高,总氨基酸含量表现为千穗苋>尾穗苋>老鸦谷。3种籽粒苋均检出18种脂肪酸,包括13种饱和脂肪酸、3种单不饱和脂肪酸和2种多不饱和脂肪酸,其中亚油酸含量最高。综上,3种籽粒苋的营养成分种间差异性显著,且粗蛋白、粗纤维、钙、铁、镁、锌含量都具有显著优势。试验结果可为当地农产品的规范化种植和进一步精深加工提供指导。

关键词： 传统黄酒   氨基酸   检测   种类   变化  

摘要： 本研究检测了传统黄酒发酵过程(第7、14、30、60天)及成品黄酒中的氨基酸种类与含量变化。结果表明:发酵60天时,氨基酸量已占成品黄酒量的82%以上,多数氨基酸在发酵进程中呈缓慢累积趋势;而色氨酸、葡萄糖氨基(2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖)含量则在发酵后期下降。黄酒发酵醪后期优势乳酸杆菌与酿酒酵母菌协同作用,持续驱动发酵进程,酒精度最高可达23%vol。同时,本研究在黄酒发酵醪及黄酒中检测到2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖和磷酸丝氨酸,为黄酒氨基酸代谢途径的研究提供了新的数据参考。

关键词： 成骨分化   iRBMSCs   骨髓间充质干细胞  

摘要： 骨髓间充质干细胞的稳定标准化来源,是骨修复组织工程研究与应用的重要前提。为解决这一核心问题,本研究以新西兰兔为研究对象,分离原代兔骨髓间充质干细胞(RBMSCs),通过逆转录病毒表达SV40大T抗原(LTA)对其进行永生化处理,成功建立了永生化细胞系iRBMSCs。为验证该细胞系的成骨分化能力,研究采用碱性磷酸酶(ALP)染色与定量、茜素红染色等体外实验方法,证实MOI=30的骨形态发生蛋白9(BMP9)可有效诱导iRBMSCs的成骨分化;同时借助微计算机断层扫描(μCT)和组织学检查,发现iRBMSCs与GelMA水凝胶在体内诱导成骨分化过程中存在协同作用。研究进一步证实,所建立的iRBMSCs无致瘤性且能维持长期增殖活性,为骨缺损修复工程提供了稳定可靠的细胞系来源,也为骨修复组织工程的后续研究与临床应用奠定了重要基础。

关键词： 运动性心脏肥大   病理性心脏肥大   异丙肾上腺素   串联质量标签   过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1   半乳糖凝集素3  

摘要： 背景:将运动性心脏肥大的机制造福病理性心脏肥大患者,是当前心血管研究的热点领域之一,然而,运动性和病理性心脏肥大两者差异的分子机制尚未完全阐明。目的:以运动性和病理性心脏肥大模型小鼠为研究对象,基于心脏蛋白质组学寻找病理性心脏肥大的潜在干预靶点。方法:将21只6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、运动组和异丙肾上腺素组,每组7只。运动组小鼠持续训练8周建立运动性心脏肥大模型,异丙肾上腺素组小鼠皮下注射异丙肾上腺素7 d建立病理性心脏肥大模型,通过心脏质量指数、心胫比、苏木精-伊红染色、麦胚芽凝集素染色和天狼星红染色验证造模成功后,应用串联质量标签技术揭示2种不同心脏肥大模型的差异蛋白表达水平和功能特征。结果与结论:①与对照组相比,运动组与异丙肾上腺素组小鼠的心脏质量指数和心胫比显著升高(P<0.001,P<0.05);与对照组相比,异丙肾上腺素组小鼠心肌细胞排列紊乱,观察到大量炎症细胞浸润,心肌细胞损伤明显;②与对照组相比,运动组与异丙肾上腺素组小鼠的心肌细胞横截面积显著增加(P<0.05,P<0.01);异丙肾上腺素组心肌纤维化面积显著高于对照组(P<0.01);③运动组和对照组相比,有46个差异表达蛋白;异丙肾上腺素组和对照组相比,有302个差异表达蛋白;运动组和异丙肾上腺素组相比,有340个差异表达蛋白;3个比较组差异表达蛋白中,2个交集蛋白为过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1和半乳糖凝集素3;④基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析提示,运动可能通过上调过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1促进脂肪酸代谢等诱导心脏生理性肥大,异丙肾上腺素可能通过下调过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1导致过氧化物酶体失调引发脂毒性等诱导心脏病理性肥大。结果提示:过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1和半乳糖凝集素3可能成为病理性心脏肥大的干预靶点。

关键词： 乌鳢水泡病毒G蛋白   原核表达   多克隆抗体制备  

摘要： 为获得具有中和活性的乌鳢水泡病毒(Snakehead vesiculovirus,SHVV)多克隆抗体,根据GenBank数据库公布的SHVV G蛋白基因序列设计特异性引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得大小为1524 bp的G蛋白胞外区基因片段,构建pET-28a-ΔG重组质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和Ni-NTA亲和层析纯化后获得高纯度重组G蛋白,用该蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,4次免疫后经眼眶采血获得多克隆抗体。间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果表明,制备的多克隆抗体效价为1∶102400。免疫印迹(western blot)和间接免疫荧光实验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果表明,该抗体能特异性识别SHVV G蛋白。血清中和实验结果表明,该抗体可显著抑制SHVV的增殖,证明其具有中和SHVV的活性。研究成功制备了能特异性识别SHVV G蛋白并具有中和活性的多克隆抗体,为后续SHVV免疫学快速检测方法的建立和疫苗研制提供了参考。

关键词： 癌症核酸疫苗   mRNA疫苗   肿瘤免疫治疗   新抗原   个体化治疗  

摘要： 癌症核酸疫苗通过递送编码肿瘤抗原的核酸序列激活特异性抗肿瘤免疫,是精准肿瘤免疫治疗的重要方向之一。与传统蛋白疫苗及细胞疫苗相比,核酸疫苗具有设计灵活、制备周期短和易于个体化开发等优势。COVID-19 mRNA疫苗的应用促进了核苷修饰技术和脂质纳米颗粒递送平台的发展,为治疗性癌症疫苗的转化提供了支持。基于高通量测序与人工智能算法的新抗原疫苗策略正推动癌症疫苗由经验性设计向精准个体化治疗策略转变。目前,多种癌症核酸疫苗已在黑色素瘤、胰腺癌和非小细胞肺癌等肿瘤中开展临床研究,并显示出良好的免疫原性和治疗潜力。个体化m RNA疫苗联合免疫检查点抑制剂的治疗模式正在由晚期疾病治疗向术后辅助治疗及微小残留病灶干预阶段拓展。本文系统总结了癌症核酸疫苗的关键技术基础与临床研究进展,分析了新抗原预测准确性、递送效率及免疫抑制微环境等挑战,并讨论了人工智能辅助抗原预测及联合治疗策略的发展方向。

关键词： 3D打印   聚己内酯/β-磷酸三钙支架   骨髓间充质干细胞   骨形态发生蛋白   大段骨缺损   组织工程  

摘要： 背景:聚己内酯/β-磷酸三钙复合材料在骨组织工程中展现出良好潜能,但其与骨髓间充质干细胞和骨形态发生蛋白2联合应用修复大段骨缺损的效果尚需系统评估。目的:探讨3D打印聚己内酯/β-磷酸三钙支架单独及联合骨髓间充质干细胞、骨形态发生蛋白2的体外成骨效能及体内植入对大鼠股骨大段骨缺损的修复作用。方法:采用熔融沉积成型3D打印技术制备直径4 mm、高6 mm的圆柱状聚己内酯/β-磷酸三钙复合支架,孔径500μm,孔隙率70%。取第3代同种异体SD大鼠骨髓间充质干细胞,以1×10^(6)个/支架的浓度接种并培养24 h;采用表面吸附-冷冻干燥法将重组人骨形态发生蛋白2(10μg/支架)负载于支架。体外检测支架形貌、细胞相容性及成骨性能。建立大鼠股骨中段大段骨缺损(6 mm)模型,随机分为4组(n=10):单纯聚己内酯/β-磷酸三钙支架组(A组)、聚己内酯/β-磷酸三钙支架+骨髓间充质干细胞(B组)、聚己内酯/β-磷酸三钙支架+骨形态发生蛋白2组(C组)、聚己内酯/β-磷酸三钙支架+骨髓间充质干细胞+骨形态发生蛋白2组(D组)。术后观察动物一般情况及存活率,于术后4,8周分批取材,Micro-CT扫描分析骨体积分数及骨小梁参数,压缩实验检测股骨压缩强度与压缩模量,苏木精-伊红染色、Masson三色染色观察新生骨组织形态,免疫荧光染色检测Runt相关转录因子2表达。结果与结论:①术后A组1只大鼠因麻醉过深死亡,C组1只大鼠因切口感染剔除,B、D组全部存活;②术后4周,D组骨缺损区已见连续性骨痂桥接,骨体积分数及骨密度均高于其余各组(P<0.05);术后8周,D组骨缺损完全愈合,骨体积分数显著高于A、B、C组(均P<0.05),压缩强度恢复至正常股骨的约75%,压缩模量恢复至约68%;③苏木精-伊红及Masson染色显示D组新生骨小梁粗大、排列有序,板层骨结构成熟;Runt相关转录因子2免疫荧光阳性面积百分比及成骨基因(Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原蛋白)表达水平均以D组最高(P<0.05);④结果表明,聚己内酯/β-磷酸三钙支架联合骨髓间充质干细胞与骨形态发生蛋白2可协同促进大鼠股骨大段骨缺损的早期桥接与力学功能重建,该“支架-细胞-因子”复合策略为优化骨组织工程支架提供了实验依据。

关键词： 黄曲霉毒素B_(1)   ZIF-8   核酸适配体   荧光传感器  

摘要： 黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))是一类毒性极强的霉菌毒素,实现食品中AFB_(1)的灵敏、准确检测具有重要意义.基于5-羧基四甲基罗丹明(TAMRA)标记的核酸适配体与金属有机框架ZIF-8构建了一种新型荧光适配体传感器,用于食品中AFB_(1)的快速检测.在无AFB_(1)时,核酸适配体通过静电或π-π堆积作用固定于ZIF-8表面,导致荧光淬灭;当存在AFB_(1)时,核酸适配体与AFB_(1)结合,并转变为内环结构,从ZIF-8表面脱离,荧光信号得以恢复.该传感器检出限低至1 nmol/L,对食品中常见干扰物质表现出良好的选择性.将该方法应用于玉米、黄豆、葵花籽实际样品中AFB_(1)的检测,验证了其可靠性和实用性,为食品中AFB_(1)的快速筛查提供了一种简便高效的技术手段.

关键词： 短须裂腹鱼   铜锌超氧化物歧化酶基因   谷胱甘肽过氧化物酶基因   组成型热应激蛋白70基因   饥饿胁迫  

摘要： 揭示短须裂腹鱼(Schizothorax wangchiachii)铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和组成型热应激蛋白70(HSC70)基因的结构特征及对饥饿胁迫的响应,为鱼类应激胁迫相关研究提供基础资料。将300尾短须裂腹鱼幼鱼随机分成3组进行持续7 d的饥饿胁迫试验,在第1天、第4天和第7天分别取鱼体肝脏、脾脏、鳃和肾脏组织,通过同源克隆和PCR快速扩增的方法获得各组织中的Cu/Zn-SOD、GPX、HSC70基因的cDNA序列,研究3种基因在不同组织中的表达,并探究其同源性和系统进化。结果表明:短须裂腹鱼Cu/Zn-SOD基因全长cDNA为801 bp,开放阅读框(ORF)为465 bp,翻译的氨基酸序列含有2个铜锌超氧化物歧化酶家族的标签序列;GPX基因全长cDNA 925 bp,ORF长度576 bp,包括GPX基因家族标签序列、Se结合活性位点和PGNG结构域;HSC70基因的cDNA核心序列全长2 348 bp,ORF长度1 950 bp,含有3个保守的家族标签基序。系统进化树的结果显示,短须裂腹鱼Cu/Zn-SOD基因的氨基酸序列与犀角金线鲃(Sinocyclocheilus rhinocerous)具有很高的相似性,达到95%;GPX基因的氨基酸序列与似野结鱼(Tor tambroides)的相似性最高,为97.38%;HSC70基因的氨基酸序列与齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)同源性最高,为99.38%。荧光定量PCR检测结果表明Cu/Zn-SOD和GPX基因在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05)。短期饥饿影响GPX基因在肝和肾中的表达;GPX基因比Cu/Zn-SOD基因和HSC70基因更为敏感,可以作为短期饥饿胁迫的检验指标,为短须裂腹鱼的健康养殖提供理论依据。