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关键词： 骨髓间充质干细胞   白藜芦醇   脂多糖   种植体周围炎   成骨分化   FoxO1   活性氧   NLRP3  

摘要： 背景:国内种植体周围炎的发病率不断攀升,对种植体的修复效果造成极大影响。研究白藜芦醇能否改善炎症微环境下骨髓间充质干细胞的生物学活性及作用机制,对探索种植体周围炎相关治疗药物开发提供一定的理论支撑。目的:研究白藜芦醇在炎症微环境下对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法提取、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞,将细胞分为3组:正常对照组、脂多糖组(1μg/mL)、脂多糖+白藜芦醇(1μmol/L)组,干预24 h。DCFH-DA活性氧荧光探针检测活性氧水平,RT-qPCR检测促炎基因白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子αmRNA表达,成骨诱导7 d后进行碱性磷酸酶染色,成骨诱导21 d后进行茜素红染色,成骨诱导7 d后RT-qPCR检测成骨基因Runx2、Osx mRNA表达,成骨诱导7 d后Western blot检测FoxO1、NLRP3蛋白表达。结果与结论:①白藜芦醇减轻炎症微环境对骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性及钙化结节形成的抑制作用;②白藜芦醇可抑制炎症微环境中骨髓间充质干细胞促炎基因白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子αmRNA表达并上调成骨基因Runx2、Osx mRNA表达;③白藜芦醇可下调炎症微环境中骨髓间充质干细胞的活性氧水平;④白藜芦醇可促进FoxO1蛋白表达并抑制NLRP3蛋白表达;⑤结果表明,白藜芦醇(1μmol/L)通过激活FoxO1信号通路、抑制NLRP3炎症小体表达,从而减少炎症因子的释放、清除过量活性氧,最终促进炎症微环境下骨髓间充质干细胞的成骨分化。

关键词： 骨关节炎   骨髓间充质干细胞外泌体   转化生长因子β1   巨噬细胞极化   M1型巨噬细胞   M2型巨噬细胞   促炎因子   抗炎因子  

摘要： 背景:骨关节炎是一种由多因素引起的退行性疾病,研究发现巨噬细胞极化在骨关节炎中起着重要作用,M1型巨噬细胞释放促炎因子,促进骨关节炎的发展,M2型巨噬细胞产生抗炎因子,抑制骨关节炎的发展。目的:探究骨髓间充质干细胞外泌体联合转化生长因子β1对巨噬细胞极化的影响,探讨治疗骨关节炎的新方法。方法:采用差速离心法提取骨髓间充质干细胞外泌体,通过透射电镜、粒径分析和Western blot检测相关蛋白表达进行鉴定。使用骨髓间充质干细胞外泌体、转化生长因子β1单独或联合处理巨噬细胞24 h,以未干预巨噬细胞为对照组,运用共聚焦显微镜观察骨髓间充质干细胞外泌体在巨噬细胞内的分布情况,采用RT-PCR、ELISA、Western blot实验评估巨噬细胞极化的效果。结果与结论:①骨髓间充质干细胞外泌体呈新月形,平均粒径约115 nm,表达特异性蛋白CD63;②与对照组相比,其他组抗炎因子白细胞介素10、CD163表达增多,促炎因子白细胞介素6、白细胞介素1β表达减少,骨髓间充质干细胞外泌体+转化生长因子β1组效果最显著(P<0.001)。结果表明,骨髓间充质干细胞外泌体与转化生长因子β1的联合应用能更有效地促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化。

关键词： 超声波辅助   离子液体   绿豆草   多糖   响应面法   抗氧化  

摘要： 为提高绿豆草(Rorippa indica(L.)Hiern)资源的利用率,以绿豆草为原料,运用响应面法对超声波辅助离子液体提取绿豆草多糖的工艺及其抗氧化活性进行了深入研究。首先,以单因素实验为前提,运用Box-Behnken实验设计与响应面法,对超声温度、液料比、超声时间以及离子液体质量分数4个关键因素进行优化,分析其对绿豆草多糖提取率与抗氧化活性的影响。结果显示,最优工艺条件为超声温度为70℃、液料比为26∶1、超声时间为30 min以及离子液体质量分数为2.9%。在这些优化条件下,进行了3次重复实验以验证模型的预测准确性,实测绿豆草多糖提取率达到了76.44 mg/g,与模型预测值相比,偏差仅为0.12%,证明了回归模型的高可靠性和实用性。绿豆草多糖对DPPH、OH自由基的清除能力表现出显著效果,半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC_(50))值分别为61.91、134.98 mg/L,表明在优化工艺条件下所提取的绿豆草多糖具备良好的抗氧化活性。该研究为绿豆草的深度开发利用提供了科学依据,还为其在功能性食品和医药领域的应用提供了潜在可能。

关键词： 核苷酸   生物学功能   动物生产   肠道健康   免疫调节  

摘要： 核苷酸作为核酸的基本组成单元,既是遗传信息储存与传递的物质基础,也广泛参与能量代谢、辅酶合成、细胞信号传导、肠道健康维持及免疫功能调节等关键生理过程。近年研究表明,科学补充核苷酸有助于提高动物生长与繁殖性能、改善肉品质、促进肠道微生态平衡、增强肠道屏障功能,并提升机体的抗应激能力。文章围绕核苷酸的概述与生物学功能,系统综述了其在动物生产中的应用研究进展,阐述其应用效果与潜在作用机制,并对当前研究中存在的问题进行探讨,以期为核苷酸在动物生产与精准营养领域的合理应用提供参考依据。

关键词： 野菊   CiMYB33   拟南芥   耐盐性  

摘要： 为了探究CiMYB33基因在盐胁迫下的功能,以野菊(Chrysanthemum indicum)叶片DNA为模板,克隆了CiMYB33的全长序列,并利用生物信息学软件,与其他植物的MYB33基因进行比对,并构建进化树。通过蘸花法将该基因遗传转化拟南芥(Arabidopsis thaliana),并通过实时荧光定量PCR鉴定,获得转基因植株。对野生型和过表达CiMYB33转基因拟南芥种子进行不同盐浓度(0、75、100和150 mmol·L^(-1)NaCl)处理,并分析种子发芽率。对幼苗施用200 mmol·L^(-1)NaCl,观察表型变化和生理指标变化,并分析其耐盐性。系统发育分析结果表明,CiMYB33蛋白与青蒿(Artemisia annua)GAMYB蛋白同源性最高。盐胁迫条件下的研究结果显示,CiMYB33过表达拟南芥表现出显著增强的抗逆性特征,其种子发芽率和幼苗生长状态与野生型相比均呈现明显优势;CiMYB33过表达拟南芥的游离脯氨酸、叶绿素质量分数和相对含水量均高于野生型,相对电导率和丙二醛质量摩尔浓度则低于野生型;CiMYB33过表达拟南芥显示出良好的膜修复能力,与野生型相比,产生较为轻微的细胞膜受损。因此,野菊CiMYB33基因能够增强其异源过表达拟南芥的耐盐能力。

关键词： 桑黄   多糖   多酚   萜类   药理作用   提取分离  

摘要： 桑黄为传统药用真菌,主要包括桑树桑黄(Sanghuangporus sanghuang)、杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)、丁香桑黄(Sanghuangporus baumii)及临清桑黄(Inonotus hispidus)4种常见种类。为明确其主要活性成分差异及其提取工艺适配性,本研究对其多糖、多酚、萜类三大主要活性成分的药理作用及对应提取工艺特性进行系统综述。结果表明,桑黄多糖具有明显的抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血糖及免疫调节活性;桑黄多酚主要展现抗氧化、抗肿瘤及降血糖功效,其中丁香桑黄多酚对2型糖尿病具有潜在饮食干预价值;桑黄萜类主要起到抗氧化和抗肿瘤作用。提取工艺方面,多糖提取中超声—热水协同法、酶法得率较高(1.3%~5.5%),适配高纯度多糖制备;多酚提取中深共熔溶剂(DES)法作为绿色技术,提取率是传统方法的1.5~1.9倍;萜类提取以超声—乙醇法和原位萃取发酵法(产量14~19 g/L)适用性较强。综上,本文明确了不同桑黄种类的活性成分特征及提取工艺适配性,梳理了各类提取方法的特点与应用场景,为桑黄资源的高效开发利用提供参考。

关键词： 豆甾醇   急性肺损伤   脂多糖   肺泡Ⅱ型上皮细胞  

摘要： 目的探讨豆甾醇对脂多糖(LPS)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)炎症损伤的改善作用。方法采用50μg/mL LPS体外诱导AECⅡ细胞,构建急性肺损伤(ALI)细胞模型。将细胞分为对照组、LPS组、1.5μg/mL豆甾醇组、2.0μg/mL豆甾醇组、2.5μg/mL豆甾醇组。通过CCK-8法检测细胞存活率;采用相应试剂盒测定白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;运用PCR技术检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA相对表达量。结果LPS组的AECⅡ细胞存活率、IL-10表达水平低于对照组,IL-1β、TNF-α表达水平及HMGB1、TLR4、NF-κB mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05);1.5μg/mL豆甾醇组、2.0μg/mL豆甾醇组、2.5μg/mL豆甾醇组的AECⅡ细胞存活率、IL-10表达水平高于LPS组,IL-1β、TNF-α表达水平及HMGB1、TLR4、NF-κB mRNA相对表达量低于LPS组(P<0.05)。结论豆甾醇可通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路表达,提高ALI损伤状态下AECⅡ细胞存活率,降低炎症因子水平,从而缓解ALI。

关键词： 驴驹   蛋白质水平   生长性能   血清生化指标   表观消化率  

摘要： 试验旨在研究开食料蛋白质水平对驴驹生长性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响。选取健康状况良好、平均体重为(52.0±2.5)kg的2月龄德州驴驴驹21匹,随机分为3组,每组7个重复,饲喂消化能水平接近而蛋白质水平分别为20.00%(高蛋白组)、18.00%(中蛋白组)、16.00%(低蛋白组)的3种开食料。预试期15 d,正试期45 d。结果显示:中、高蛋白组驴驹平均日增重、开食料采食量显著高于低蛋白组(P<0.05);高蛋白组驴驹中性洗涤纤维表观消化率显著高于低、中蛋白组(P<0.05);低蛋白组驴驹血清葡萄糖、尿素氮含量显著低于中、高蛋白组(P<0.01);中蛋白组驴驹血清三酰甘油含量显著高于低、高蛋白组(P<0.01),高蛋白组驴驹血清碱性磷酸酶活性显著低于低、中蛋白组(P<0.05)。综上,开食料中蛋白质水平为18.00%~20.00%可提高驴驹平均日增重、采食量及中性洗涤纤维的表观消化率,促进驴驹脂肪的合成和糖代谢。

关键词： 桑葚多糖   超声提取   响应面法   抗氧化活性   α-淀粉酶   α-葡萄糖苷酶   脂肪酶  

摘要： 为了优化超声辅助乙醇提取多糖工艺,评估所得粗多糖的生物活性,本研究以黑桑葚为原料,在单因素实验基础上,考查温度、超声功率、时间以及乙醇浓度对多糖得率的影响,采用Box-Behnken响应面试验优化粗多糖提取工艺。同时,通过测定自由基清除能力及其对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、脂肪酶活抑制能力,进一步评估桑葚多糖的生物活性。结果表明,桑葚粗多糖最佳提取参数为:超声温度63℃、功率180 W、时间61 min、乙醇含量39%,得率达13.63%±0.33%。多糖对ABTS^(+)、DPPH和羟基自由基的半数清除率IC_(50)值分别为0.12、0.21和2.78 mg/mL;对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和脂肪酶的IC_(50)分别为0.16、0.24和1.64 mg/mL。采用最佳工艺所得桑葚粗多糖具有良好的抗氧化和酶活抑制能力。该结果为桑葚抗氧化、降糖、降脂等功能性食品的开发提供理论依据。

关键词： 树枝状两亲性肽   骨髓间充质干细胞   基因转染   血管内皮生长因子165   三维培养   血管化   股骨头坏死  

摘要： 背景:组织工程模块为股骨头坏死的治疗提供了新的思路,将血管化支架移植于坏死区域,在生长因子及支架的作用下诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化,促进微血管生成改善局部血运能够促进坏死区域的修复。目的:探讨体外构建诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的树枝状两亲性肽自组装凝胶模块的可行性。方法:分离提取4-6周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞,采用流式细胞术进行鉴定,体外定向成脂、成骨诱导分化检测细胞多向分化潜能。采用固相法合成肽IKVAVAK-/RGDK-KGGGGAAAA(K)-C16H31O,调配质量浓度为10 mg/mL多肽溶液,加入生理盐水后触发多肽自组装,形成半透明的水凝胶,透射电子显微镜下观察凝胶结构。用携带血管内皮生长因子165基因的腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,然后将10 mg/mL多肽溶液和细胞悬液混合,细胞分布于凝胶内部形成三维培养体系,设置为实验组;将转染空病毒的骨髓间充质干细胞与10 mg/mL多肽溶液混合形成三维培养体系,设置为对照组。体外培养7 d后采用免疫荧光及RT-qPCR检测血管内皮细胞分化情况。结果与结论:(1)流式细胞术结果显示间质干细胞表面分子CD29、CD44表达≥95%,造血干细胞表面分子CD34、CD45表达≤2%;在体外能够向成骨、成脂诱导分化;(2)树枝状多肽溶液在离子触发下形成的凝胶呈透明状,透射电镜下观察呈形态均一的小尺寸纳米胶束;(3)免疫荧光及RT-qPCR结果显示,实验组血管内皮生长因子165表达水平高于对照组,且血管内皮特异性标记物CD31、CD34表达水平高于对照组。结果表明,血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞种植于多肽凝胶构建组织工程模块,能够诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化。