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关键词： 云南栘[木衣]   基因克隆   基因表达   生物信息学分析   DdebHLH22基因  

摘要： bHLH转录因子在植物生长发育及抗逆过程中发挥着极为关键的调控作用,为进一步研究b HLH转录因子在云南栘[木衣](Docynia delavayi(Franch.) Schneid.)中的表达特征和作用机制,以全基因组、转录组与代谢组多组学联合分析筛选获得的果实香气物质合成关键基因DdebHLH22为研究对象,基于其CDS序列进行基因克隆,开展生物信息学分析,并采用RT-qPCR技术对该基因的组织特异性表达进行了分析。结果表明:DdebHLH22基因的全长CDS序列为744 bp。DdebHLH22相对分子质量为27 800.67,编码243个氨基酸,理论等电点为5.58;属于不稳定亲水蛋白,包含34个潜在蛋白磷酸化位点,无信号肽及跨膜区域,其二级结构和三级结构的组成以α螺旋和无规则卷曲为主;系统进化树构建分析结果显示,云南栘[木衣]与苹果的亲缘关系最近;转录组数据分析表明,DdebHLH22基因在果实的不同发育阶段以及采摘后的不同贮藏时期表达水平不同,采摘后S1期表达水平最高后呈下降趋势;实时荧光定量PCR结果显示,DdebHLH22基因在果实、叶、根、茎中均有表达,在果实中呈现特异性。

关键词： 金银花多糖   豆沙包   冻融循环   流变学特性   水分分布  

摘要： 为了探究金银花多糖对冻融循环后豆沙包品质的影响，该研究以添加不同质量分数(0%、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%、2.0%)的金银花多糖制作豆沙包生坯，并进行冻融循环。对生坯水分含量、水分活度、流变特性、水分分布进行研究，并对生坯蒸制而成的豆沙包比容、高径比、质构、色泽和感官特性进行分析，同时探究其挥发性物质。结果表明，添加金银花多糖可以减少冻融循环过程中豆沙包水分的流失。随着金银花多糖的添加，豆沙包生坯自由水含量不断减小，在添加量为2.0%时最小为1.34%。当金银花多糖添加量为1.2%时，豆沙包生坯的弹性最大、硬度最小，分别为(12.02±1.04)mm和(3.25±0.25)N。此时，豆沙包的白度为56.00±0.19，比容和高径比达到最高，分别为(1.41±0.035)mL/g和0.59±0.053，硬度为(1.79±0.36)N，弹性和咀嚼性较好，强结合水含量相比对照组提升了16.76%，自由水含量降低了36.37%，感官评分达到最高(88.00±1.53)分。此外，电子鼻结果显示，金银花多糖的添加优化了豆沙包的风味。因此，综合分析添加1.2%的金银花多糖可以减弱冻融循环对豆沙包产生的负面影响，改善豆沙包的品质。本研究为改善冷冻面制品在运输、销售过程中因冻融循环引起的品质劣变，提升抗冻融能力，延长货架期提供了一定的理论基础和实践参考。

关键词： 膝关节骨关节炎   人脐带血间充质干细胞   WOMAC评分   Lequesne评分   Lysholm评分   安全性  

摘要： 目的 观察膝关节腔注射人脐带血间充质干细胞（hUC-MSCs）对膝关节骨关节炎的临床治疗效果。方法 选取2024年1月—2025年1月北京中医药大学东方医院秦皇岛医院收治的66例膝关节骨关节炎患者，采用随机数字表法分为对照组（膝关节腔内注射玻璃酸钠）、观察组（膝关节腔内注射hUC-MSCs），各33例。两组患者均完成12个月随访。比较两组患者治疗前、治疗后3个月、治疗后6个月、治疗后12个月的西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数（WOMAC）评分、勒克勒指数（Lequesne）评分、Lysholm膝关节评分量表评分，记录两组患者治疗期间关节疼痛、关节肿胀、关节积液等不良反应的发生情况。结果 治疗后3、6、12个月，两组WOMAC评分与Lequesne评分均呈下降趋势，Lysholm评分呈上升趋势；观察组各时间点上述评分改善效果均明显优于对照组（P<0.05）。两组不良反应总发生率比较，差异无统计学意义（P >0.05）。所有不良反应经非甾体抗炎药对症处理后均得到缓解，未出现严重不良事件。结论 经膝关节腔注射hUC-MSCs，可明显改善膝关节骨关节炎患者关节功能，缓解关节疼痛与炎症表现；不良反应经对症处理后均好转，未出现严重不良事件，整体安全性可靠，具备较高的临床推广与应用价值。

关键词： 番茄潜叶蛾   CYP9A304v2   乙基多杀菌素   时空表达   生物信息学   分子对接  

摘要： 【目的】世界性入侵害虫番茄潜叶蛾Tuta absoluta对生物杀虫剂乙基多杀菌素表现出逐渐增强的抗药性，本研究旨在探究CYP9亚家族基因CYP9A304v2在番茄潜叶蛾生长发育及代谢乙基多杀菌素过程中的潜在功能。【方法】本研究通过基因克隆、生物信息学分析、时空表达谱检测、胁迫诱导实验及分子对接等技术，对CYP9A304v2基因的序列特征、系统发育关系、在不同发育阶段以及乙基多杀菌素胁迫条件下的表达模式、以及其蛋白与药剂的结合能力进行分析。【结果】CYP9A304v2基因开放阅读框长度为1 596 bp，编码了531个氨基酸，系统发育分析揭示番茄潜叶蛾CYP9A304v2属于CYP6家族。时空表达谱显示该基因在番茄潜叶蛾幼虫4龄和蛹期特异性高表达，且在乙基多杀菌素胁迫下显著上调表达（P <0.05）。分子对接结果显示，CYP9A304v2蛋白与乙基多杀菌素具有较强的结合亲和力，结合自由能均低于﹣37.7 kJ/mol。【结论】时空表达谱显示CYP9A304v2在番茄潜叶蛾幼虫4龄及蛹期特异性高表达，且其蛋白与乙基多杀菌素具有强结合亲和力，暗示该基因可能在幼虫-蛹转变期间及对乙基多杀菌素的解毒代谢起关键作用。本研究为番茄潜叶蛾抗药性机制研究提供了候选基因及理论依据。

关键词： 普鲁兰多糖   鲜切马铃薯   可食涂膜   贮藏品质   生理特性   多酚氧化酶   过氧化物酶  

摘要： 为明确不同浓度普鲁兰多糖可食涂膜对鲜切马铃薯贮藏期品质及生理特性的影响，本研究以鲜切马铃薯为实验材料，配制1、16、31、46、61 mg/mL共5个质量浓度的普鲁兰多糖涂膜溶液，以蒸馏水浸泡为对照，于4℃冷藏条件下贮藏14 d，测定鲜切马铃薯在贮藏期间(0～14 d)每隔2 d的感官品质、失重率、可溶性固形物含量、可滴定酸含量、维生素C含量、褐变度及关键酶活性，探究普鲁兰多糖可食涂膜的保鲜效果。结果表明：与对照组相比，不同浓度普鲁兰多糖溶液涂膜均能显著提升鲜切马铃薯的保鲜效果(P<0.05)，其中46 mg/mL处理组效果最优；在贮藏第14天时，该组鲜切马铃薯维生素C含量达1.68 mg/100 g，较对照组显著提高(P<0.05)；褐变度为1.57，显著低于对照组(P<0.05)，有效延缓了酶促褐变；过氧化物酶活性达7.8 U/g，显著高于对照组(P<0.05)，增强了抗氧化能力；同时该组失重率最低，感官评分较高，可溶性固形物与可滴定酸含量保持稳定。综上所述，普鲁兰多糖可食涂膜可通过减缓水分流失、抑制多酚氧化酶活性、提升过氧化物酶活性及保留营养成分，维持鲜切马铃薯的贮藏品质，且46 mg/mL为最优涂膜浓度，本研究可为鲜切马铃薯绿色保鲜技术的开发与应用提供理论依据和实践参考。

关键词： 骨生成   微RNA-758   细胞周期素D1   牙周膜干细胞   成骨分化   成骨相关转录因子   骨钙素   多潜能干细胞  

摘要： 目的 探究微RNA(miR)-758通过细胞周期素D1(CCND1)对人牙周膜干细胞（PDLSCs）成骨分化的影响。方法 2023年3月至2024年4月从基因综合数据库（GEO）获得成骨诱导与非诱导PDLSCs之间差异表达的miRNA。该研究采用基于细胞转染方式进行分组，具体分组及处理如下：miR-758 mimic组、mimic-NC组、miR-758-inhibitor组、inhibitor-NC组，mimic-NC+oeNC组、miR-758+oe-NC组、miR-758+oe-CCND1组。应用碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红S染色分别评价ALP活性和矿化程度。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测PDLSCs中miR-758、CCND1的表达；蛋白质印迹法检测成骨相关转录因子（OSX）、骨钙素和Runt相关转录因子2(RUNX2)的相对表达水平。通过功能获得和丧失实验研究miR-758的作用。此外，通过双萤光素酶报告基因实验评估miR-758与CCND1的调控关系。结果 成骨诱导后的PDLSCs第1、7、14、21天miR-758表达分别为1.00±0.09、2.13±0.11、3.79±0.21、4.58±0.36，与非诱导PDLSCs相比，miR-758在经历成骨诱导的PDLSCs中的表达水平显著增加（F=161.22,P<0.001）;inhibitor-NC组、miR-758-inhibitor组、mimic-NC组、miR-758-mimic组miR-758表达分别为1.00±0.09、0.19±0.04、1.00±0.10、4.32±0.24,ALP活性分别为0.14±0.02、0.03±0.01、0.11±0.01、0.28±0.03(F=522.81、86.93，均P<0.001)，过表达miR-758促进了PDLSCs分化过程中ALP活性、RUNX2、骨钙素和OSX的表达，而敲低miR-758则抑制了PDLSCs分化过程中ALP活性、RUNX2、骨钙素和OSX的表达。其次，茜素红染色证实过表达miR-758促进成骨细胞矿化程度，而敲低表达miR-758降低成骨细胞矿化程度。此外，进一步双萤光素酶报告实验结果证实miR-758通过靶向CCND1的3'-UTR以调控CCND1的表达。过表达miR-758导致CCND1的表达水平降低，敲低miR-758导致CCND1的表达水平提高。最后，拯救实验结果显示过表达miR-758促进PDLSCs成骨分化，而进一步过表达CCND1则部分消除了这一作用。结论 miR-758/CCND1调控网络在调控PDLSCs成骨分化过程中发挥促进作用。

关键词： 电针   溃疡性结肠炎   动力   肠嗜铬细胞   环核苷酸门控阳离子通道2   5-羟色胺  

摘要： 目的：观察电针“上巨虚”通过环核苷酸门控阳离子通道2（HCN2）改善溃疡性结肠炎（UC）小鼠结肠动力障碍的机制。方法：雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组与电针组，每组8只；采用葡聚糖硫酸钠饮用法复制UC小鼠模型。电针组电针“上巨虚”，每日20 min，连续治疗7 d。计算小鼠体质量变化率，评价疾病活动指数（DAI）;HE染色观察小鼠结肠组织病理变化；在体/离体电生理技术检测小鼠结肠运动变化；比较小鼠结肠转运时间及肠道推进率；免疫荧光法检测结肠HCN2、5-羟色胺（5-HT）、色氨酸羟化酶（TPH1）、5-HT转运体（SERT）的表达；荧光定量PCR及Western blot法检测结肠TPH1、SERT的mRNA和蛋白表达。Vil1MerCreMer小鼠随机分为载体组与诱导组，每组8只。Vil1MerCreMer小鼠特异性条件敲除肠上皮中HCN2基因。诱导组小鼠注射5 mg/mL的他莫昔芬。ELISA法检测Vil1MerCreMer小鼠血清中5-HT、环核苷酸（cAMP）的含量。将RIN-14B细胞分为正常组与转染组，转染组敲低RIN-14B细胞的HCN2表达。ELISA检测细胞上清液5-HT、cAMP的表达。实时定量PCR法检测RIN-14B细胞中HCN2、TPH1 mRNA的表达。结果：与空白组相比，模型组小鼠一般情况差，体质量变化率显著增加、DAI升高（P<0.001），结肠黏膜结构紊乱，水肿与炎性浸润明显，病理评分升高（P<0.001）；电针组小鼠一般情况显著改善，体质量变化率、DAI及病理评分降低（P<0.001）；在体及离体结肠运动的频次、振幅及曲线下面积、结肠转运时间延长、肠道推进率降低（P<0.001）；结肠中HCN2的表达增多（P<0.001），与5-HT存在共定位现象；结肠5-HT及TPH1、SERT表达升高（P<0.001）；电针治疗均可逆转上述效应（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。当条件性敲除肠上皮中HCN2后，诱导组小鼠血清中5-HT、cAMP的含量降低（P<0.001）；敲低RIN-14B细胞HCN2后，转染组细胞中HCN2、TPH1 mRNA表达降低（P<0.001），细胞上清液中5-HT、cAMP的含量下降（P<0.001）。结论：电针“上巨虚”可能通过调控肠嗜铬细胞中HCN2的表达，影响5-HT分泌，进而改善UC小鼠肠道动力。

关键词： 油体   油体蛋白   油体基油凝胶   多糖  

摘要： 常温下呈固态的脂肪能够赋予食品独特的质构、口感和加工性能，但其通常富含饱和脂肪酸，长期过量摄入可能增加心血管疾病、肥胖等慢性病的发生风险，因此开发健康的脂肪替代品具有重要意义。近年来，油凝胶应运而生，可在部分食品领域替代固体脂肪。然而，传统油凝胶的制备常需高添加量的凝胶剂，导致成本较高或产生安全问题。油体是存在于植物种子中的天然亚细胞器，主要由三酰甘油核心、单层磷脂膜及镶嵌其中的蛋白质构成，富含多种营养素，并具备一定的物理与化学稳定性。以其为基础构建油体基油凝胶，可利用其固有的天然界面，通过添加少量凝胶剂，即可有效强化界面膜并构建三维网络。具有凝胶剂用量少、持油能力强、营养价值高等显著优点，在替代固体饱和脂肪方面展现出良好潜力。目前，油体基油凝胶已在营养递送、可食用薄膜及脂肪替代等领域显示出广阔的应用前景。本文系统综述了油体基油凝胶的特性、制备方法及应用现状，以期为该领域的深入研究与产业化开发提供参考。

关键词： 无缝克隆   Golden Gate克隆   Gibson Assembly克隆   NC克隆  

摘要： 分子克隆技术自20世纪70年代诞生以来，已从传统的克隆方法发展成多样化的克隆方法体系。本文综述了分子克隆技术的发展历程，详细阐述了依赖限制性内切酶的克隆、基于聚合酶链式反应（PCR）技术的克隆、依赖位点特异性重组的克隆以及依赖同源重组的无缝克隆的原理和优劣势，为基因克隆策略的优化选择提供了理论依据和方法参考。

关键词： 姜黄素   心肌梗死   骨髓间充质干细胞   内质网应激   免疫印迹法   大鼠  

摘要： 目的 探讨姜黄素(Cur)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗心肌梗死(MI)的调控，并研究其是否通过内质网应激(ERS)相关通路发挥作用。方法 将40只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、MI模型组(MI组)、BMSCs移植组(BMSCs组)和姜黄素预处理BMSCs移植组(Cur组)。通过结扎左冠状动脉前降支建立MI模型，sham组只穿线不结扎。模型构建后，BMSCs组和Cur组分别于心肌梗死区注射未处理BMSCs或经姜黄素预处理的BMSCs。移植4周后，通过超声心动图指标评估心功能：左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV),采用HE染色和Masson染色观察心肌组织病理变化与纤维化程度；TUNEL染色检测细胞凋亡；免疫荧光染色评估血管新生情况；Western blotting分析ERS相关蛋白：Bcl-2、Bax、活化的-Caspase (c-Casp)-3、Casp-12及葡萄糖调节蛋白-78 (GRP-78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达。结果 与sham组相比，MI组大鼠LVEDV和LVESV显著增大(P<0.05),LVEF和LVFS明显降低(P<0.05),心肌组织排列紊乱，纤维化面积显著增加，细胞凋亡率升高，ERS相关蛋白Bax、Casp-12、CHOP、GRP-78表达上调(P<0.05),而Bcl-2表达下调(P<0.05)。与MI组相比，BMSCs移植改善了心功能并减轻心肌损伤，而Cur组的效果更明显，进一步增强LVEF和LVFS(P<0.05),下调LVEDV和LVESV(P<0.05),心肌纤维化面积和细胞凋亡率也明显下降(P<0.05),ERS通路蛋白Bax、c-Casp-3、Casp-12、CHOP、GRP-78表达均下降(P<0.05),Bcl-2表达显著升高(P<0.05)。结论 姜黄素预处理可能通过抑制ERS介导的细胞凋亡通路，增强BMSCs移植在心肌梗死后的治疗作用。