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关键词： 藏羊   性别   肉品质   氨基酸   脂肪酸   挥发性成分  

摘要： 传统上认为生长在盐碱地区的藏羊具有更好的肉品质。为比较盐碱地区不同性别藏羊肉的品质及风味差异,以该地区健康无病、相同饲养条件下的6月龄青海藏羊为研究对象,采集背最长肌样本,测定公、母藏羊的胴体品质、食用品质、感官品质、营养品质,及氨基酸、脂肪酸和挥发性成分含量。采用独立样本t检验分析数据差异,结合气相色谱-离子迁移谱(Gas chromatography-ion mobility spectrometry, GC-IMS)技术与相对气味活度值法(Relative odor activity value, ROAV)筛选关键性风味物质。结果显示,公藏羊的活体重更高(P<0.05),达37.90 kg,而母藏羊表现出更高的腹壁厚和背膘厚(P<0.05),分别为20.80 mm和20.23 mm。感官雷达图表明,母藏羊肌肉的弹性、适口性及整体评价得分均较高,风味得分相近。母藏羊的a*值、b*值、pH45min、pH24h更低(P<0.05),剪切力(18.10 N)和蒸煮损失(31.48%)也更低(P<0.05),蛋白质含量(21.73 g/100g)和总多不饱和脂肪酸(137.94 mg/100g)含量更高(P<0.05)。而公藏羊的总氨基酸(24.43 mg/100g)含量更高(P<0.05)。母藏羊中1-辛烯-3-醇、1-戊醇、4-甲基-3-戊烯-2-酮、乙偶姻等醇类和酮类化合物的含量更高(P<0.05),公藏羊中(E)-2-戊烯醛、2-甲基丁醛单体、庚醛、己醛等醛类物质含量更高(P<0.05)。筛选出2-甲基丁醛、正辛醛、正壬醛、乙偶姻、4-甲基-3-戊烯-2-酮为关键挥发性风味物质。因此,母藏羊的食用品质更佳,营养价值更高,二者风味各有优势。该研究为性别差异化养殖、优质藏羊肉开发及盐碱地区畜牧资源利用提供理论参考。

关键词： 防风   多糖类   哮喘   胃肠道微生物组   药理作用分子作用机制(中药)   小鼠  

摘要： 目的 探讨防风多糖(SP)通过调节肠道菌群对过敏性哮喘小鼠的作用及机制。方法 将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量SP组、高剂量SP组和地塞米松组,每组6只。采用卵清蛋白致敏与激发法构建哮喘模型。记录小鼠行为学变化;采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肺及肠道组织病理学改变;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)水平;通过16S rDNA测序分析小鼠粪便菌群结构。基于差异菌属相关代谢物预测潜在靶点,并与过敏性哮喘相关基因取交集,筛选出SP潜在作用靶点;进一步构建蛋白相互作用(PPI)网络,并进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果 与对照组比较,模型组小鼠出现典型哮喘症状,血清IL-6水平升高,肺与肠道组织呈现明显炎性损伤,肠绒毛长度等形态学指标恶化,肠道菌群α多样性降低、β多样性紊乱、拟杆菌门/厚壁菌门(B/F)比值升高,菌群潜在致病性增强(F=3.215~13.526,P<0.05)。与模型组比较,SP干预后小鼠行为学与病理学变化显著改善,低剂量SP组血清IL-6水平降低,肺和肠组织病理损伤减轻,肠道形态学指标显著恢复,菌群α多样性指标显著回升,菌群结构向对照组趋近,B/F比值显著回调,菌群潜在致病性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。基于分析筛选出模型组中丰度显著升高的关键差异菌属异普雷沃氏菌属和乳球菌属(H=10.396、6.940,P<0.05),SP干预后其丰度显著降低。同时,SP干预还调节了菌群代谢功能,表现为恢复磷酸戊糖途径与丙酸盐代谢,同时抑制花生四烯酸代谢(P<0.05)。结论 SP可能通过调节肠道菌群结构及其代谢活动,减轻哮喘小鼠的炎症反应,这为“肺-肠轴”理论提供了实验证据支持。

关键词： 鸽腺病毒1型(PiAdV-1)   Fiber-2蛋白   原核表达   多克隆抗体  

摘要： 【目的】制备鸽腺病毒血清1型(Pigeonadenovirustype1,PiAdV-1)LS株Fiber-2蛋白的兔源多克隆抗体,并对其功能进行验证,为PiAdV-1的血清学检测提供工具,为亚单位疫苗的研发奠定基础,为后续PiAdV-1的防控提供思路。【方法】通过扩增Fiber-2基因片段,构建重组质粒pET-32a-A-Fiber-2。用原核表达系统经终浓度1mmol/LIPTG、16℃200r/min诱导表达得到Fiber-2蛋白后,采用镍柱亲和层析纯化系统纯化Fiber-2蛋白,并通过SDS-PAGE结合考马斯亮蓝染色以及Western blotting对重组蛋白进行分析鉴定。利用纯化出的Fiber-2蛋白免疫新西兰大白兔,制备Fiber-2多克隆抗体血清;采用间接ELISA法检测兔血清中Fiber-2多克隆抗体效价;通过Western blotting、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)以及琼脂扩散试验评估Fiber-2多克隆抗体血清的特异性。【结果】经琼脂糖凝胶电泳鉴定,出现大小为1 629 bp的特异性条带,成功构建重组质粒pET-32a-A-Fiber-2。通过原核表达系统的表达、考马斯亮蓝染色分析及Western blotting鉴定,出现蛋白特异性条带,成功表达Fiber-2蛋白,后经镍柱亲和层析纯化的Fiber-2重组蛋白浓度为15.8 mg/mL;间接ELISA结果显示,Fiber-2蛋白兔血清多克隆抗体效价最高为1∶8 192 000;Western blotting结果阳性血清组出现大小为58 ku的特异性条带,阴性对照组没有特异性条带;IFA试验转染组中不同稀释度的阳性血清出现特异性绿色荧光,未转染组以及阴性血清组没有绿色荧光出现;琼脂扩散试验中阳性血清效价最高为1∶16,阴性血清没有沉淀线出现;以上结果表明多克隆抗体能特异性识别和结合Fiber-2蛋白,说明重组蛋白Fiber-2具有良好的免疫原性和反应原性。【结论】本研究通过原核表达系统成功表达Fiber-2蛋白并且成功制备了Fiber-2蛋白兔多克隆抗体,为Fiber-2蛋白的血清学检测和功能研究提供了试验基础。

关键词： 菲律宾蛤仔   冷冻   闭壳肌   ATP   蛋白质  

摘要： 【目的】阐明冷冻处理导致菲律宾蛤仔壳与肉黏连加剧、脱壳率下降这一现象的根本原因。【方法】本研究以冷冻处理的菲律宾蛤仔为对象,分别从闭壳肌能量代谢及蛋白质理化性质角度对壳肉黏连机制进行了探讨。首先通过菲律宾蛤仔闭壳肌的剪切力及微观结构的变化,明确了肌纤维结构完整性对其质构特性的影响;其次通过菲律宾蛤仔闭壳肌ATP及其关联化合物含量、Ca2+-ATPase活性与pH值的变化,探讨了壳肉黏连现象与能量代谢的关联性;进而借助差示扫描量热仪(DSC)、SDS-PAGE等方法,揭示了蛋白质理化性质与壳肉黏连之间的内在联系。【结果】经冷冻处理后,菲律宾蛤仔脱壳率仅为3.00%,较新鲜组(12.33%)显著下降;剪切力分别为30.9、16.3与18.93 N。预冷冻处理后的肌纤维断裂明显,细胞间隙增大,表明冷冻导致肌纤维结构完整性严重破坏。同时,预冷冻处理后,闭壳肌ATP完全降解,Ca2+-ATPase活性由0.31降至0.10 μmol/(mg·min),pH值从7.27降至6.85。DSC、盐溶解度和SDS-PAGE图谱结果进一步表明关键蛋白降解明显,尤其是副肌球蛋白。【结论】冷冻处理通过破坏肌纤维结构完整性、诱导蛋白降解并影响能量代谢,导致闭壳肌收缩能力下降,闭壳肌与壳黏连现象加剧。本研究为阐明菲律宾蛤仔壳肉分离机制提供理论依据。

关键词： 外泌体   阿尔茨海默病(AD)   细胞外囊泡(EV)   干细胞   生物标志物  

摘要： 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)作为神经退行性疾病,其病理机制与β淀粉样蛋白(amyloid β-protein, Aβ)沉积、tau蛋白异常磷酸化及神经炎症等密切相关。近年来,外泌体(exosome)因其独特的生物学特性在AD的研究中备受关注,越来越多的研究表明,外泌体不仅参与调控AD多种生理和病理过程,并且在疾病的诊断和治疗中都发挥着重要作用。本文就外泌体在AD病理中的作用、诊断价值以及治疗潜力进行综述,重点描述外泌体在AD病理机制中的"双刃剑"效应及动态调控,深入探讨基于多组学联合分析的早期诊断策略,并聚焦于外泌体工程化的最新技术及其临床转化前景,以期为AD的早期精准诊断与有效治疗提供新的思路和策略。

关键词： 温胆汤   非酒精性脂肪肝   网络药理学   蛋白质组学   活性成分   PPAR信号通路  

摘要： 该研究通过整合网络药理学、蛋白质组学与实验验证,系统探讨了温胆汤(WDD)治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的分子机制。该实验采用高脂饮食诱导小鼠NAFLD模型,并将小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组(辛伐他汀,3.03 mg·kg-1)及WDD低(3.035 g·kg-1)、中(6.07 g·kg-1)、高(12.14 g·kg-1)剂量组,干预6周。干预结束后,使用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;ELISA法检测血清小鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;肝组织进行苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察病理变化;利用网络药理学分析潜在的作用靶点及通路;采用蛋白质组学技术鉴定差异表达蛋白并进行通路分析。通过RT-qPCR和Western blot分别检测相关基因与蛋白的表达水平。动物实验证实,WDD可剂量依赖性地改善肝脏脂肪变性、炎症及脂质沉积,显著降低血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C及促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,显著升高HDL-C水平。网络药理学分析筛选出柚皮素、黄芩素等关键活性成分,其作用涉及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)、脂质与动脉粥样硬化等多条通路;蛋白质组学进一步鉴定出PPAR、晚期糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)等差异表达通路。整合分析共同提示PPAR信号通路是核心作用通路。分子生物学验证表明,WDD可显著抑制小鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合酶(FASN)、肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α的mRNA表达水平和PPARα、CPT1A、PPARγ的蛋白表达水平。结果表明,WDD可能通过“多成分-多靶点-多通路”的协同作用,以PPAR信号通路为核心,改善脂质代谢紊乱与炎症反应,从而缓解NAFLD进展。

关键词： 干细胞   子宫内膜异位症   宫腔粘连   卵巢早衰   盆底功能障碍   妇科肿瘤  

摘要： 随着现代医学的发展,干细胞凭借其自我更新、增殖及多向分化潜能,已成为再生医学的研究热点。在妇科领域,干细胞疗法为子宫内膜异位症、宫腔粘连、卵巢早衰等疾病提供了新的治疗思路,展现出良好的应用前景。然而,其临床转化仍面临细胞来源与标准化、安全性评估及疗效验证等多重挑战。随着技术进步与深入研究,干细胞有望在妇科疾病治疗中实现更安全、有效的应用,从而使更多的患者受益。本文旨在系统总结干细胞在妇科疾病中应用的现状,分析存在的挑战,并提出未来的发展方向。

关键词： Penicillium herquei   倍半萜合酶   (–)-吉玛烯D   内生真菌   蛇足石杉  

摘要： (–)-吉玛烯D是一种具有重要生物活性的单环倍半萜类化合物, 同时也是合成其他双环倍半萜母核的关键前体之一。尽管植物来源的吉玛烯D合酶已有较多报道, 但目前真菌尤其是青霉属真菌来源的吉玛烯D合酶却鲜见报道。本研究从蛇足石杉内生真菌Penicillium herquei中克隆获得1个倍半萜合酶基因PhGDS, 该基因编码蛋白含有I型倍半萜合酶典型的DDXXD和NSE/DTE保守结构域。为明确其功能, 分别在酿酒酵母和大肠杆菌中对PhGDS进行异源表达, 并采用气相色谱-质谱联用技术、核磁共振波谱技术对产物进行鉴定。结果从酿酒酵母发酵产物中分离得到2个产物, 分别鉴定为(–)-吉玛烯D (66.01 mg·L-1) 和Germacra-1(10),5-dien-4α-ol (0.54 mg·L-1)。在大肠杆菌中成功实现PhGDS的可溶性表达, 体外酶活性分析证明其能够催化法尼基焦磷酸 (farnesyl diphosphate, FPP) 生成(–)-吉玛烯D和Germacra-1(10),5-dien-4α-ol。本研究首次在青霉属中发现并鉴定了吉玛烯D合酶, 为利用合成生物学技术规模化制备(–)-吉玛烯D及其衍生倍半萜类化合物, 提供了宝贵的基因资源。

关键词： 新生儿   不同体重   遗传代谢病   氨基酸   肉碱   参考区间  

摘要： 目的 通过对河南省148538例新生儿遗传代谢病筛查,建立河南地区不同体重新生儿11种氨基酸和31种肉碱含量的参考区间。方法 收集2016年1月—2020年10月期间,河南省18个地市送至本实验室,进行新生儿遗传代谢病筛查干血斑标本。采用串联质谱法对新生儿干血斑标本进行遗传代谢病筛查,对11种氨基酸和31种肉碱的参考区间进行统计分析。结果 筛查的148538例新生儿中,低体重组415例,正常体重组134481例,高体重组9882例;不同体重组间新生儿干血斑串联质谱11种氨基酸均有显著差异,31种肉碱中除酰基肉碱C6外均有显著差异。结论 通过结果分析,了解河南地区不同体重新生儿11种氨基酸和31种肉碱浓度的变化趋势,建立河南地区不同体重新生儿11种氨基酸和31种肉碱的参考区间,为遗传代谢病实验室筛查提供更加精确的参考依据。

关键词： 结核分枝杆菌(Mtb)   结核病(TB)   CRISPR-AaCas12b   表达与纯化   分子诊断  

摘要： 目的 结核分枝杆菌(Mtb)可通过免疫逃逸介导潜伏感染与低菌量感染,传统病原学及免疫学检测难以实现早期、灵敏、特异的精准诊断,本研究通过构建成簇的规律间隔短回文重复序列相关蛋白(CRISPR-Cas)检测体系,评估其对结核病(TB)的诊断效能,旨在为其早期分子诊断及免疫相关隐匿感染的识别提供新策略。方法 构建重组嗜酸脂环酸芽孢杆菌CRISPR-Cas12b蛋白(AaCas12b)表达载体并转化至感受态细胞,采用低浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)低温诱导策略实现重组AaCas12b的可溶性表达,结合镍柱亲和层析纯化工艺建立蛋白制备体系;靶向Mtb特异性插入序列IS6110建立重组酶聚合酶恒温扩增(RPA)方法,体外转录合成其特异性单链向导RNA(sgRNA),进而构建CRISPR检测体系,并与抗酸染色、***试验、分枝杆菌培养及GeneXpert检测技术等临床常用诊断方法比较,系统评估其在TB诊断中的应用。结果 本研究建立了重组蛋白原核表达与纯化体系,获得具有核酸切割活性的AaCas12b蛋白,浓度13.42mg/mL,回收率61.45%;靶向IS6110序列建立了RPA-CRISPR-AaCas12b特异性检测体系,对Mtb检测下限(LOD)达1.5CFU/mL。在临床样本验证中,该体系诊断TB灵敏度达95.83%(95%CI:79.97%~99.27%),特异度为92.31%(95%CI:75.88%~97.88%),准确率为94.00%(95%CI:83.78%~97.93%)。结论 本研究建立的AaCas12b蛋白制备体系高效稳定,可提供低成本、高活性的工具蛋白;基于RPA-CRISPR-AaCas12b技术靶向IS6110构建的诊断TB平台具有良好的特异性与灵敏度,为后续深入开发TB快速诊断平台提供了技术参考与实验基础。