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关键词： 奶牛   妊娠相关糖蛋白1   原核表达   多克隆抗体   早期妊娠诊断  

摘要： 妊娠相关糖蛋白1（Pregnancy-associated glycoprotein 1，PAG1）不仅是反刍动物早期妊娠诊断的重要标志物，还与妊娠维持及胎盘发育密切相关。本研究以奶牛胎盘组织为材料，提取RNA并逆转录为cDNA，扩增PAG1（GenBank No. NM＿174411.2）基因，构建pET30a原核表达载体，诱导表达并纯化重组His-boPAG1蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价，Western blot验证抗体对重组His-boPAG1蛋白及奶牛血清中PAG1的特异性识别能力，并利用免疫组化分析boPAG1在奶牛早期胎盘组织中的定位与表达。结果表明，成功构建重组质粒pET30a-boPAG1（6 546 bp），在终浓度1 mmol/L IPTG诱导6 h时His-boPAG1蛋白表达量最高，其相对分子质量约为43 ku。以纯化His-boPAG1蛋白免疫BALB/c小鼠后，获得效价达1∶16 000的多克隆抗体。Western blot结果显示，该抗体能够特异性识别重组His-boPAG1蛋白及奶牛血清中的PAG1蛋白。免疫组化结果表明，boPAG1主要定位于妊娠1～3月龄奶牛胎盘绒毛双核滋养层细胞（Trophoblastic binucleate cell，BNC）的细胞核和细胞质中，且表达水平随妊娠月龄增加而升高。本研究成功制备了高效价、高特异性的boPAG1多克隆抗体，并初步阐明了boPAG1在奶牛早期胎盘中的表达特征，为奶牛早期妊娠诊断及PAG1生物学功能研究提供了重要的实验材料和理论依据。

关键词： 亚硝酸盐还原酶   启动子   日本落叶松   毛状根   氮同化   亚硝酸盐胁迫   顺式作用元件   表达分析  

摘要： 【目的】亚硝酸盐还原酶（nitrite reductase, NiR）是植物氮同化关键酶，可催化亚硝酸盐还原为铵态氮，保障氮同化高效进行。研究日本落叶松（Larix kaempferi） LkNiR基因启动子的表达特性及亚硝酸盐胁迫响应规律，为选育氮高效利用型林木品种提供理论支撑。【方法】从日本落叶松基因组DNA中克隆LkNiR启动子序列，利用PlantCARE与PLACE数据库预测顺式作用元件；构建LkNiR-GFP报告载体，通过农杆菌介导的遗传转化获得转基因烟草（Nicotiana tabacum）及日本落叶松毛状根，结合PCR鉴定、荧光观察与RT-qPCR技术检测启动子活性；以100 mmol/L亚硝酸钠处理日本落叶松幼苗，采用RT-qPCR技术分析LkNiR基因的时序表达模式。【结果】LkNiR基因启动子（登录号：PV700087）全长1 941 bp，含TATA-box、CAAT-box等核心元件及多种激素与胁迫响应元件，LkNiR启动子含9个氮同化响应顺式元件。该启动子在转基因烟草中呈现组织偏好性表达，在根中活性较CaMV35S启动子高92.1%，在落叶松毛状根中活性较CaMV35S启动子高103.3%。亚硝酸盐胁迫下，LkNiR基因表达呈时空分化，根中早期快速响应，茎中响应平缓，叶中诱导最强且持续。【结论】LkNiR启动子具有明显的根部偏好表达特性，其活性受亚硝酸盐信号诱导且具有时空分化特征，在日本落叶松氮同化与逆境响应过程中发挥关键调控作用。

关键词： 崇明大米   直链淀粉   蛋白质   胶稠度   食味值  

摘要： 为明确影响崇明大米感官品质的关键理化因子,以20份崇明大米(8个品种)为研究对象,以5份不同地区粳米为对照,测定直链淀粉含量、蛋白质含量、胶稠度及食味值,采用Excel和SPSS软件进行相关性分析。结果显示:崇明大米直链淀粉含量6.3%～14.2%(均值9.7%)、蛋白质含量4.32%～7.7%(均值6.0%)、胶稠度60～90 mm(均值76.65mm),呈低直链淀粉、高胶稠度特征,食味值平均79.59,优于对照品种。相关性分析表明,综合食味值与直链淀粉含量呈显著负相关(r=-0.518, P<0.01),直链淀粉含量与胶稠度呈显著负相关(r=-0.441, P<0.05),蛋白质含量相关性不显著。研究证实,直链淀粉含量是影响崇明大米感官品质和胶稠度的关键因子,蛋白质含量影响有限。

关键词： 间充质干细胞   细胞外囊泡   慢性阻塞性肺疾病   免疫调节   作用机制  

摘要： 慢性阻塞性肺疾病（COPD）是以持续性呼吸道症状和气流受限为特点的疾病，间充质干细胞（MSCs）是一种多能干细胞，近年来，越来越多的人关注MSCs作为多种呼吸系统疾病的潜在治疗药物的研究，现有研究表明MSCs主要通过抗炎、抗凋亡、抗纤维化及抗血管重塑等机制在治疗COPD方面发挥着潜在作用，MSCs来源的细胞外囊泡（EVs）作为MSCs旁分泌作用的关键成分，在免疫调节中起关键作用。该研究就MSCs的EVs对COPD的干预作用及机制及未来MSCs的EVs治疗COPD病人的安全性作一综述。

关键词： 肉苁蓉   多糖   提取纯化   结构表征   生物活性  

摘要： 肉苁蓉(Cistanche deserticola Y. C. Ma)作为传统“药食同源”中药材,富含多糖类活性成分,近年来因其广泛的生物活性备受关注。肉苁蓉多糖结构复杂、水溶性强,具有显著的免疫调节、抗衰老、神经保护、肠道菌群调控及保肝等多种药理作用,其机制涉及抗氧化、抗炎、调节信号通路及“肠-脑轴”等多靶点协同效应。随着提取与纯化技术的不断发展,如超声-酶法、微波辅助及超滤分级等,肉苁蓉多糖的得率与结构完整性显著提升,并逐步实现结构-活性关联分析。系统分析肉苁蓉多糖的提取纯化策略、化学结构特征、生物活性机制及其在医药与功能性食品领域的应用前景,意在为其高值化开发与临床转化提供理论支撑与指导意义。

关键词： 肺炎球菌多糖抗体   肺炎球菌多糖结合疫苗   速率散射比浊法   多糖含量  

摘要： 目的 制备针对肺炎球菌6A和6B型荚膜多糖的高特异性亲和纯化抗体，用其建立13价肺炎球菌多糖结合疫苗（CRM197及TT载体）中6A和6B型多糖含量的速率散射比浊检测方法，并对方法进行验证，以期为该疫苗多糖含量的检测提供高特异性抗体及可靠的检测方法。方法 采用1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸盐（1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP）活化法制备6A和6B型多糖-卵清蛋白（ovalbumin,OVA）结合物，以其作为免疫原分别免疫普通级雄性新西兰兔，获得抗血清。抗血清依次经辛酸-硫酸铵和抗原亲和层析纯化（6A抗血清过6B抗原柱，6B抗血清过6A抗原柱），以去除交叉反应性抗体。通过间接ELISA法检测纯化抗体的效价及交叉反应性。以亲和纯化的6A和6B抗体为检测抗体，在IMMAGE 800特定蛋白仪上建立速率散射比浊检测方法，并对该方法的线性范围、专属性、精密性、准确性及耐用性进行验证。采用该方法测定3批13价肺炎球菌多糖结合疫苗（CRM197及TT载体）成品中的6A和6B型多糖含量。结果 6A和6B型多糖-OVA结合物的多糖蛋白结合比分别为1.29和1.37。3次免疫后，2种抗血清效价均达1∶102 400；经抗原亲和层析纯化后，6A与6B抗体交叉反应大幅降低。建立的方法在6A型多糖1～6µg/mL、6B型多糖2～12µg/mL范围内，与检测值呈良好的线性关系（r均> 0.985）;6A和6B抗体与其他12种型别多糖结合物均无明显交叉反应；精密性验证相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）均<30%；准确性加标回收率均在70%～130%范围内；耐用性验证双样平行偏差（relative deviation,RD）均<30%。3批疫苗成品中6A型多糖含量为4.4～4.8µg/mL,6B型多糖含量为8.5～9.5µg/mL，均符合质量标准要求。结论 成功制备了高特异性的肺炎球菌6A和6B型亲和纯化抗体，有效消除了型间交叉反应。基于该抗体建立的速率散射比浊法专属性强、精密性和准确性良好，可用于13价肺炎球菌多糖结合疫苗（CRM197及TT载体）成品中6A和6B型多糖含量的质量控制检测，也为同类多糖疫苗的抗体开发提供了技术参考。

关键词： 蛋白质组学   艳山姜挥发油   急性肺炎   炎症反应  

摘要： 目的 基于蛋白质组学技术，结合体内外实验，探究艳山姜挥发油(EOFAZ)改善急性肺炎的作用与分子机制。方法 采用烟熏法联合呼吸道合胞病毒(RSV)经鼻感染法，构建SD大鼠急性肺炎模型，设空白组、模型组、EOFAZ低剂量组、EOFAZ高剂量组、阳性药地塞米松组；通过苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化，检测大鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平；通过蛋白质组学筛选大鼠肺组织中的差异蛋白(DEPs)并进行富集分析；采用脂多糖(LPS)诱导人肺上皮细胞RLE-6TN建立炎症损伤模型炎症，通过Western blot检测关键蛋白LGALS3、PTPN2、PPP3CB的表达情况。结果 与空白组比，模型组大鼠肺组织发生炎性细胞浸润和水肿等损伤，BALF中白细胞介素(IL)包括IL-1β、IL-6、IL-2、IL-4以及肿瘤坏死因子(TNF-α)水平显著升高(P<0.05);经EOFAZ干预后，大鼠肺组织病理损伤显著改善，炎症因子水平显著降低；通过蛋白质组学共筛选出148个差异蛋白，经生物信息学分析其主要富集于炎症反应、免疫应答等生物过程，从这些生物中筛选出LGALS3、PTPN2、PPP3CB为EOFAZ的核心靶点；Western blot显示，与对照组相比，模型组大鼠的肺组织和RLE-6TN细胞中LGALS3、PTPN2、PPP3CB蛋白表达水平显著上升(P<0.05),EOFAZ给药能够显著抑制这些蛋白的上调趋势(P<0.05)。结论 EOFAZ可改善急性肺炎引起的炎症损伤，其机制可能与下调LGALS3、PTPN2、PPP3CB等蛋白表达、抑制炎症信号通路有关。

关键词： 咖啡生豆   多糖   提取工艺优化   响应面试验   工艺稳定性  

摘要： 以云南小粒咖啡生豆为原料，采用热水提取-乙醇沉淀工艺制备咖啡粗多糖，探究提取温度、时间、液料比以及乙醇体积分数对得率的影响并借助响应面法优化工艺参数。结果显示，各因素对得率均有显著影响，最佳工艺条件为提取温度60℃、提取时间45min、液料比20mL/g、乙醇体积分数75%，在这种情况下实测得率和模型预测值相差较小且多批次实验时批内与批间得率波动小，表明所建工艺重复性与稳定性较好，能给咖啡多糖的标准化制备提供参考。

关键词： 青赤散   溃疡性结肠炎   肠道干细胞   黏膜屏障  

摘要： 目的:探讨青赤散通过调控NF-κB/β-catenin蛋白促进肠道干细胞增殖，修复肠道黏膜屏障治疗溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）的作用机制。方法:将32只C57BL/6J小鼠随机分为4组，分别为正常组、模型组、青赤散低、高剂量组。采用葡聚糖硫酸钠构建UC小鼠模型，计算疾病活动指数评分；应用苏木精-伊红染色观察青赤散对UC小鼠肠黏膜炎症的影响；采用免疫组织化学染色法检测小鼠肠黏膜中β-catenin、Lgr5蛋白表达水平；采用免疫荧光共染检测NF-κB、β-catenin蛋白共表达情况。结果:与正常组比较，模型组小鼠肠道炎症评分升高，肠道黏膜炎症加重，NF-κB表达水平升高，β-catenin、Lgr5蛋白表达水平降低；与模型组比较，青赤散组DAI评分降低，小鼠结肠长度明显增加（P<0.05）,且呈剂量依赖性改变；苏木精-伊红染色显示，青赤散各剂量组小鼠肠道黏膜水肿减轻，隐窝结构较完整，仅存在少量炎性细胞浸润及轻度糜烂浅溃疡，且高剂量组改善显著。结论:青赤散可通过调控NF-κB/β-catenin蛋白表达促进肠道Lgr5+干细胞增殖促进肠道黏膜屏障修复，从而起到治疗UC的作用。

关键词： 蛋黄   多糖协同   热稳定性   二十二碳六烯酸  

摘要： 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid, DHA)作为人体关键ω-3多不饱和脂肪酸，具有免疫调控、健脑益智等作用，但存在易氧化、生物利用率低的缺陷。蛋黄是一种天然优良水包油体系，但其在加热过程中易因蛋白质聚集引发凝胶化等问题。因此，本研究构建多糖-酶解(磷脂酶-蛋白酶)蛋黄液复合体系，探究不同类型多糖对其包封DHA的影响。通过测定乳液粒径、电位、多重光散射和DHA包封率，发现阳离子多糖壳聚糖(Chitosan, CS)因电荷中和引发絮凝(添加质量分数0.2%CS电位从–30.07 mV升至–20.87 mV，粒径增幅达98%，ΔBS曲线波动剧烈)；中性多糖瓜尔豆胶借助高黏度物理屏障与空间位阻效应，使加热后粒径仅增加13%,DHA包封率达97.24%；低浓度阴离子多糖海藻酸钠丙二醇酯通过静电斥力(Zeta电位–36.7 mV)实现最优协同，包封率达95.99%。研究结果为开发耐高温、高稳定性的功能性蛋黄基食品提供了理论基础。