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关键词： 辣椒   氨基酸水溶肥   农药减量   减药增效  

摘要： 为探究氨基酸水溶肥及其农药减量配施对辣椒病害防控、生长、产量、品质及效益的影响,以‘乐业椒1号’辣椒为材料开展田间试验,设置空白对照(CK)、农药(C)、氨基酸水溶肥(J0)、氨基酸水溶肥+农药减施16.67%(J15)、氨基酸水溶肥+农药减施33.33%(J30)5个处理,辣椒移栽成活后每15 d处理一次,定期调查田间病害发生情况,测定相关的农艺性状、产量和品质,并分析不同处理间的经济效益。结果表明:1)在病害防控方面,与CK相比,J0处理对辣椒病毒病、早疫病和霜霉病均表现出良好的防治效果,防效分别为67.31%、59.59%和42.74%(P<0.05);J15处理对早疫病的防效显著优于C、J0和J30处理(P<0.05)。2)在生长方面,氨基酸水溶肥及其配合农药减量喷施在全生育期均能显著提升辣椒鲜重、干重和茎粗等指标,其中J15处理在坐果期和成熟期的多数生长指标上表现最优(P<0.05)。3)在产量方面,氨基酸水溶肥及其与农药减量喷施对辣椒单果重、单株总果数和产量有显著促进作用,J15增产效果最显著(P<0.05)。4)在品质方面,J0和J15处理显著提高了辣椒果实中维生素C、可溶性蛋白和可溶性糖含量,J30处理显著提高了辣椒果实中可溶性蛋白和可溶性糖含量(P<0.05)。5)从经济效益分析,C、J0、J15和J30处理均可提高辣椒收益,利润排序为J15>J30>J0>C。综上,氨基酸水溶肥及其农药减量配施是实现辣椒“减药、增产、提质、增收”的有效途径,对推动辣椒产业的绿色发展具有重要的指导意义。

关键词： 霞多丽   氨基酸   风土   挥发性化合物  

摘要： [目的]探究宁夏贺兰山东麓产区不同风土条件对葡萄Vitis vinifera果实中氨基酸积累及葡萄酒香气形成的影响,为优化该产区葡萄种植风土选择及提升葡萄酒品质提供理论依据。[方法]以宁夏贺兰山东麓永宁、青铜峡、银川3个产区4个地块(玉泉、御马、西鸽和志辉)的‘霞多丽’ *** ‘Chardonnay’葡萄果实及其酿造的葡萄酒为研究对象,检测果实氨基酸组成与质量浓度,并解析葡萄酒中的挥发性成分。[结果]在4个地块的葡萄果实中,氨基酸总量志辉地块最高,为6 876.62 mg·L-1,玉泉最低,为3 873.65 mg·L-1,4个地块中御马与西鸽之间差异不显著,但其他2个地块之间差异显著(P<0.05);不同地块葡萄果实的丙氨酸、精氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的质量浓度差异显著(P<0.05),而甘氨酸和脯氨酸的差异更为突出。4个地块葡萄酒的香气成分主要由4大类物质构成,共占总香气成分的95.1%,其中高级醇类占49.3%,脂肪酸乙酯类占22.2%,其他酯类占12.6%,脂肪酸类占11.0%。利用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)可较好地区分4个地块,其中御马和西鸽组间差异较小,可归为一类。通过变量投影重要性(VIP)得分图可显著区分地块的香气物质为8种,其中异戊醇、十三酸乙酯、乙基9-癸烯酸酯、辛酸乙酯、异丁醇为御马和西鸽葡萄酒的主要特征物质;苯乙醇、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二甲酯为玉泉葡萄酒的主要特征物质。[结论]宁夏贺兰山东麓各子产区‘霞多丽’葡萄果实氨基酸积累和葡萄酒的香气特征均受到风土条件差异的影响,其中,丙氨酸受生态条件影响最大,并对葡萄酒的香气物质高级醇类有突出贡献。图5表5参33

关键词： 百香果   热激转录因子   基因家族   高温胁迫  

摘要： 【目的】热激转录因子(heat stress transcription factor, HSF)是真核生物中普遍存在的一类调节热激反应的转录因子,能够激活热激蛋白基因的转录及表达,在植物响应高温胁迫的转录调控网络中发挥着主要作用。然而,百香果HSF基因在植株响应高温胁迫中的功能尚不明确,本研究旨在表达模式分析基础上克隆热胁迫响应基因PeHSF1,并通过烟草转基因技术探究其在高温胁迫中的功能。【方法】以百香果‘钦果9号’为材料,采用实时荧光定量PCR分析11个百香果HSF基因家族成员在热胁迫下的表达模式。对PeHSF1基因进行克隆,通过叶盘转化法转化烟草,分析转化植株在高温胁迫下的表型。【结果】PeHSF1基因在高温胁迫下表达量上升最为显著,亚细胞定位显示其编码的蛋白质定位于细胞核,过表达PeHSF1的烟草植株在高温胁迫下叶片萎蔫程度、相对电导率和丙二醛含量较对照高,可溶性糖含量较对照低。【结论】PeHSF1基因在烟草中异源过表达降低了烟草对高温胁迫的抗性,为进一步解析PeHSF1在百香果高温胁迫中的作用和百香果耐高温品种的遗传改良提供理论依据和基因资源。

关键词： DKK2   绵羊   基因克隆   cDNA末端快速扩增  

摘要： Dickkopf 2(DKK2)属于Dickkopf蛋白家族,是Wnt信号转导途径的负调控开关。本研究以绵羊尾部脂肪组织为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)成功克隆绵羊DKK2 基因的全长序列,并对获得序列进行系统的生物信息学分析,预测其蛋白结构,检测其在绵羊各组织中的表达。结果显示,绵羊DKK2基因全长1 307 bp,包括编码区序列780 bp,5'UTR序列235 bp,3'UTR序列292 bp,共编码259个氨基酸,预测蛋白分子量为28.46 ku,理论等电位点为9.44,属于分泌蛋白。绵羊DKK2与人类和小鼠之间的同源性较高。亚细胞定位预测显示,DKK2蛋白主要分布于细胞核,同时在线粒体和胞外区域也有分布。组织表达谱分析发现,DKK2在绵羊肌肉组织中表达水平最高,而在脾脏、胃、十二指肠及肝脏中的表达相对较低。本研究明确了绵羊DKK2基因的序列信息,为后续DKK2基因在绵羊遗传育种中的相关研究奠定基础。

关键词： 恶性疟原虫   棕榈酰转移酶   棕榈酰化   配子体   2-溴棕榈酸  

摘要： 目的 观察恶性疟原虫不同发育阶段棕榈酰转移酶(palmitoyltransferases,PATs)活性变化及其对红内期增殖和配子体生成的影响,为开发抗疟药物新靶点提供科学依据。方法 采用点击化学技术检测疟原虫环状体、滋养体、裂殖体和配子体期等不同发育阶段PATs的活性特征。将感染红细胞分成对照组、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组和2-溴棕榈酸(2-bromopalmitate,2-BP)组,其中对照组为普通培养基,DMSO组和2-BP组分别在培养基中加入DMSO和终浓度为10μmol/L的2-BP,验证2-BP对PATs活性的抑制情况;通过绘制生长曲线和配子诱导实验,观察2-BP抑制PATs活性后恶性疟原虫无性增殖及配子体生成的变化,并结合转录组测序进一步分析其对疟原虫转录水平的影响及可能机制。结果 PATs绿色荧光强度在恶性疟原虫不同发育阶段存在差异(F=38.120,P<0.001);其中滋养体(35.680±8.439)、裂殖体(33.380±9.030)及配子体(21.540±8.654)阶段荧光强度较强,环状体(10.720±3.183)阶段较弱(P均<0.05);培养4 d后(裂殖体阶段)对照组、DMSO组、2-BP组绿色荧光强度分别为8.738±1.576、8.633±1.827、4.911±0.318(F=91.490,P<0.001),2-BP处理后PATs活性受到显著抑制(P<0.05)。抑制PATs活性后,对照组、DMSO组、2-BP组疟原虫无性期原虫率-时间曲线下面积分别为25.700±0.696、28.630±3.062、8.370±1.751,差异有统计学意义(F=83.440,P<0.001);两两比较结果显示,2-BP组无性期原虫率低于对照组和DMSO组(P均<0.001);且无性期原虫发育延迟、形态异常。对照组、DMSO组和2-BP组中每个裂殖体中裂殖子数量分别为(18.050±4.362)、(18.200±3.517)、(14.020±4.320)个/裂殖体,差异有统计学意义(H=39.100,P<0.001);两两比较结果显示,2-BP组较对照组和DMSO组均显著下降(P校正均<0.001)。抑制PATs活性后,对照组、DMSO组和2-BP组恶性疟原虫配子体生成率-时间曲线下面积分别为18.900±0.384、18.240±0.177、7.507±0.201,差异有统计学意义(F=1 677.000,P<0.001);其中2-BP组配子体生成率低于对照组和DMSO组(P均<0.001),配子体生成及成熟受阻且多数停滞在中晚期。添加2-BP后,恶性疟原虫无性期下调显著的差异基因主要富集于细胞周期、有丝分裂、DNA损伤响应与细胞结构;在配子体阶段下调显著的差异基因主要富集于细胞周期(如有丝分裂、G1/S期转换)、RNA代谢与转录(如碳代谢抑制4-无TATA负调控复合物)以及细胞发育与分化相关的生物学过程。结论 棕榈酰化修饰在恶性疟原虫无性增殖、配子体生成和发育中发挥重要作用。

关键词： 黄瓜子   多糖   分离纯化   结构表征   抗炎活性  

摘要： 通过对黄瓜子多糖进行分离纯化,初步表征其单糖组成和分子量,并探究其体外抗炎活性。采用水提醇沉法获得黄瓜子粗多糖(Cucumis sativus L. seed polysaccharides,CSP),分别利用Amberlite FPA90Cl阴离子和Amberlite FPC3500H阳离子串联交换树脂柱以及离子交换纤维素DEAE Cellulose 52柱对CSP进一步进行分离纯化后,得到黄瓜子均一多糖CSP-S8,得率为7.05%,结合色谱、质谱等多种分析方法对CSP-S8的纯度、分子量和单糖组成等进行分析;细胞实验探究CSP-S8对RAW 264.7细胞活力的影响、抗炎效果及炎症相关基因表达。结果表明,从CSP中分离纯化得到CSP-S8,其分子量约为90 673 Da;单糖组成及其摩尔比为鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖=7.6∶11.6∶14.1∶15.1∶16.1;结合FT-IR推测CSP-S8为含有α-糖苷键的酸性多糖;细胞实验表明:与对照组相比,CSP-S8给药后RAW 264.7细胞的活力显著提高。与模型组相比,CSP-S8抑制了脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的细胞NO生成,不同程度降低细胞中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的生成;通过RT-qPCR分析发现,CSP-S8显著抑制了经LPS诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA的表达。本研究成功从黄瓜子多糖中分离纯化得到均一多糖CSP-S8,并对其结构进行初步表征,证实该多糖在体外可显著提升RAW 264.7细胞活力、抑制LPS诱导的NO及炎症因子释放、下调相关炎症基因表达,具有良好的体外抗炎活性。

关键词： 林下种植三七   PnAACT基因   基因克隆   萜类合成   表达分析  

摘要： AACT 基因是合成三萜皂苷的甲羟戊酸 (MVA) 途径中的关键酶基因。然而,迄今为止,尚未有关于 AACT 基因在不同林下种植条件下以及不同花期三七中的变化研究。本研究以华山松-三七和云南松-三七林下种植系统中的三七花为研究对象,基于其转录组数据设计引物,利用 PCR 技术从三七花中成功克隆出MVA合成酶基因,命名为 PnAACT 。结果表明,PnAACT 基因的开放阅读框长度为1227bp,编码408个氨基酸;PnAACT蛋白属于酸性亲水蛋白,不含有跨膜区和信号肽。系统发育树显示PnAACT与越南参PvAACT蛋白的同源相似度达99.26%。同时,荧光定量 PCR(RT-qPCR) 揭示了PnAACT基因在三七花初开期的表达显著高于全开期,且在云南松林下种植的三七花中表达最高。此外,三七花 PnAACT 基因表达与环境因子中的气温呈正相关,与空气湿度和海拔呈负相关。本研究旨在揭示 PnAACT 基因在三七花萜类生物合成过程中的调控作用,并为三七花皂苷及其他次生代谢物的生物合成研究提供新的方向。

关键词： 蝇类   种类鉴定   基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱   蛋白质样品   制备方法  

摘要： 目的 评估甲酸和乙腈的浓度、体积等因素对不同蝇类蛋白质样品制备的影响,探讨蝇类鉴定的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法中的蛋白质样品制备技术,为蝇类鉴定新方法的构建提供依据。方法 70%甲酸分别与50%乙腈、100%乙腈组成2种体系,在4~6个不同体积下,提取实验室家蝇品系不同部位的蛋白质,比较蛋白质提取成功数、谱图采集成功数和肽峰数目。以2024年8-9月采集自北京市昌平区的野外大头金蝇为材料,针对不同体质量的个体,提取胸部和整头虫体的蛋白质,比较不同甲酸-乙腈体积提取后的肽峰数目。再以酱亚麻蝇胸部和整头虫体为材料,分析黏稠蛋白质提取液,比较不同浓度蛋白提取液的谱图一致性和肽峰数目变化。采用SPSS 27.0软件进行统计分析,组间比较采用Kruskal-Wallis H检验或Mann-Whitney U检验。结果 固定甲酸浓度为70%,乙腈浓度变化对蛋白质提取成功数影响不大,同一部位内的提取数差异≤2个样品,对谱图采集成功数和肽峰数目具有部位特性,但未表现出一致性的变化规律。体质量15~17 mg/只的家蝇头、翅和足所需的基本裂解液量为30μl,腹部为50μl,胸部(去足、翅)为60μl,整头虫体为110μl。当头部、腹部在基本裂解液量基础上增加30μl、整头虫体增加10μl,能提高谱图采集成功数。对于体质量4~<10、10~<20、20~<30和30~<46 mg/只的大头金蝇,当胸部(去足、翅)的裂解液体积分别为160、230、260、280μl,整头虫体为230、310、380、420μl,能维持较高肽峰数目水平,并减少黏稠样品的发生。黏稠和稀释1倍的蛋白质样品的谱图相似,但前者的采集难度更大。结论 70%甲酸和50%乙腈可作为用于MALDI-TOF MS鉴定的蝇类蛋白质提取裂解液。针对体质量差异较大的野外蝇类,可基于样品质量调整甲酸-乙腈的添加体积,以获取浓度适宜的蛋白质提取液,满足后续质谱鉴定的要求。

关键词： 灵芝孢子多糖   肥胖   紧密连接蛋白   肠道菌群  

摘要： 为了探究灵芝孢子多糖(Ganoderma Lucidum Spores Polysaccharides,GLSP)对肥胖小鼠肠道健康的调节作用。通过建立高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,分别灌胃低、高剂量灵芝孢子多糖(LGLSP、HGLSP)和低、高剂量发酵灵芝孢子多糖(LFGLSP、HFGLSP)10周后,分析血清脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)含量及紧密连接蛋白(Claudin-1和ZO-1)的表达,再对小鼠肠道内容物16S r RNA测序,分析肠道菌群组成及变化。研究表明,与模型组小鼠相比,HGLSP、LFGLSP和HFGLSP干预组小鼠血清LPS含量分别降低了35.23%,45.10%和38.63%;HGLSP干预组小鼠肠道Claudin-1和ZO-1表达量增加了60.99%和91.19%;GLSP和FGLSP干预增加了肥胖小鼠肠道菌群多样性。结合LEf Se分析各组丰度有显著差异的属,结果显示不同剂量GLSP和FGLSP的干预分别上调了Blautia(布劳特氏菌属)、Romboutsia(罗姆布茨菌属)、Oscillospira(颤螺旋菌属)、Coprococcus(粪球菌属)等有益菌属的丰度。综上,GLSP和FGLSP的干预一定程度改善了肥胖小鼠肠屏障损伤,调节了肥胖小鼠肠道菌群的多样性和菌群组成,从而保护了肥胖小鼠肠道健康。本研究为灵芝孢子相关保健产品的开发利用提供了理论基础。

关键词： NK细胞   外泌体   肿瘤   脐带血干细胞  

摘要： 目的:探究脐带血干细胞来源的NK细胞外泌体(NK cell exosomes derived from umbilical cord blood stem cells, UCB-NK-EXO)对肺癌模型的治疗效果和机制。方法:从脐带血分离出的脐血干细胞,经含IL-21的NK无血清培养基扩增出NK细胞,收集细胞上清提取并鉴定外泌体。通过CCK8实验检测外泌体对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测外泌体对A549细胞凋亡的影响;利用共聚焦显微镜观察其被细胞摄取情况。小动物活体成像评估UCB-NK-EXO在荷瘤小鼠肿瘤部位的富集,并观察肿瘤生长并检测血清肝肾功能指标;Western blot检测小鼠肿瘤组织凋亡信号分子表达水平。结果:UCB-NK-EXO与NK92-EXO在粒径、电位上特征上无显著差异,但UCB-NK-EXO处理后,A549细胞存活率显著低于NK92-EXO处理组(P <0.001)。UCB-NK-EXO在肿瘤部位富集并诱导肿瘤细胞凋亡,并且显著抑制肿瘤生长(P<0.001),延长生存期,其效果优于多柔比星(Doxorubicin, DOX),且未引起明显体重下降和肝肾损伤;Western blot结果显示UCB-NK-EXO包含颗粒酶B(Granzyme B)、穿孔素(Perforin)等毒性蛋白,显著上调小鼠肿瘤组织Caspase等凋亡相关蛋白表达。结论:UCB-NK-EXO在体内外均能有效抑制A549肺癌生长,并富集于小鼠肿瘤部位,其机制包括向肿瘤细胞递送毒性蛋白,激活Caspase凋亡通路和诱导肿瘤细胞凋亡,且肿瘤抑制效果和安全性均优于传统化疗药物多柔比星。