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关键词： 枣   种质   氨基酸   综合评价  

摘要： 以国家枣种质资源圃253份种质脆熟期果实为研究对象,采用超高效液相色谱仪(UPLC, ultra-high performance liquid chromatograph),分别测定枣果实中游离氨基酸和水解氨基酸的含量,并结合相关性分析、主成分分析、综合评分和聚类分析等方法,对17种氨基酸指标的品种间差异展开系统分析。结果表明: (1)所有供试样品中共鉴定出17种氨基酸,包括7种必需氨基酸(水解氨基酸:19.86~222.80 mg/100 g、游离氨基酸:0.99~43.79 mg/100 g)、10种非必需氨基酸(水解氨基酸:41.85~814.58 mg/100 g、游离氨基酸:39.15~402.00 mg/100 g),其中脯氨酸含量位居首位。水解氨基酸中,脯氨酸均值为219.81 mg/100 g,是其余氨基酸的2.6~54.8倍;游离氨基酸中,脯氨酸均值为123.40 mg/100 g,显著高于其他氨基酸,为其余氨基酸的2.49倍以上。水解氨基酸中组氨酸、精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸11种氨基酸在不同种质间呈正态分布。游离氨基酸中丝氨酸、精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸7种氨基酸在不同种质间呈正态分布。(2)水解氨基酸中天冬氨酸、谷氨酸等药用氨基酸含量介于25.34~496.24 mg/100 g,其中天冬氨基酸含量最高。(3)游离氨基酸中天冬氨酸、精氨酸等药用氨基酸含量介于3.96-45.98 mg/100 g,其中精氨基酸含量最高;呈味氨基酸含量从高到低表现为:甜味>苦味>鲜味>芳香族。(4)相关性分析结果显示,枣果实不同氨基酸组分间存在相关关系。水解氨基酸中139个相关系数(136个正相关系数、3个负相关系数)达到极显著水平,游离氨基酸中72个正相关系数达到极显著水平。(5)基于主成分分析和综合评分表明,水解氨基酸中提取出4个主成分,累计贡献率达到81.742%,综合得分前10的优质种质为合阳铃铃枣、天津大马牙、榆次团枣、酸枣2、酸枣4、乐金4号、保德油枣、聊城圆铃枣、临县大酸枣和太谷胜利枣;游离氨基酸中提取出5个主成分,累计贡献率达到67.622%,综合得分前10的优质种质为酸枣4、酸枣1、新疆小圆枣、酸枣10、临猗梨枣、中阳木枣、乾陵大枣、哈密大枣、永济蛤蟆枣和二十家大枣。(6)采用K-means聚类算法将253份枣资源分为3个差异显著的类群,水解氨基酸中3个类群氨基酸含量依次为Ⅰ>Ⅲ>Ⅱ,游离氨基酸中3个类群氨基酸含量依次为Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ。本研究结果可为优质氨基酸组成的枣种质选育及深加工提供依据。

关键词： 芥菜型油菜   BjMADS23基因   启动子   表达载体构建  

摘要： 克隆并分析Bj MADS23基因启动子,对于研究该基因启动子在芥菜型油菜抗逆性调控中的作用具有重要意义。本研究采用PCR方法克隆了Bj MADS23基因启动子序列,利用PlantCARE在线工具分析其顺式作用元件,并通过无缝克隆技术构建了与GUS基因融合的植物表达载体pBjMADS23+GUS。结果表明,克隆获得的BjMADS23基因启动子序列全长为2450 bp,含有TATA-box、CAAT-box等核心启动子元件,以及多个与光响应、脱落酸诱导、厌氧诱导、水杨酸诱导和干旱诱导相关的顺式作用元件。鉴定结果表明Bj MADS23基因启动子与GUS基因的融合表达载体构建成功。研究结果为后续研究BjMADS23基因在芥菜型油菜中的转录调控提供了相关依据。

关键词： 藻海研站菌K4-1   蛋白酶EK4-1   诱导信号分子   蛋白酶表达诱导  

摘要： 【背景】微生物蛋白酶不仅对微生物生存和物质循环具有重要作用,而且广泛应用于生物医药、肽合成和生物降解等行业。绝大多数微生物蛋白酶是诱导型酶,目前对诱导微生物蛋白酶基因表达和生物合成的信号分子的研究还相对缺乏。【目的】确定诱导藻海研站菌K4-1胞外蛋白酶EK4-1基因表达的信号分子类型及浓度范围,并分析信号分子对EK4-1合成的诱导作用,进而加深对诱导微生物蛋白酶产生的信号分子的认识,为阐明微生物蛋白酶的表达机制、提高蛋白酶产量以用于基础研究或潜在应用奠定基础。【方法】采用RT-qPCR检测8种胰岛素B链源寡肽和7种氨基酸对EK4-1表达的诱导情况及信号分子的有效诱导浓度范围。采用比浊法绘制菌株K4-1的生长曲线,确定信号分子的添加时间。采用福林酚法检测发酵培养基中EK4-1的产量,分析信号分子对EK4-1合成的诱导情况。【结果】七肽HLCGSHL和六肽EALYLV对EK4-1的表达具有一定的抑制作用,三肽RGF和二肽HL、AL、YL、LV、GF均能诱导EK4-1的表达,且二肽诱导效果优于三肽。其中GF作用最佳,有效诱导浓度范围为0.005 mmol/L~20 mmol/L。组成二肽的7种氨基酸均能诱导EK4-1的上调表达,其中L-丙氨酸和L-亮氨酸的诱导作用相对较弱,甘氨酸作用最佳,其有效诱导浓度范围为0.05 mmol/L~40 mmol/L。在酪蛋白发酵培养基中,添加GF或甘氨酸后的上清液最高酶活分别约为对照组的1.84倍和1.44倍。在海水发酵培养基中,添加GF后的上清液最高酶活约为对照组的1.12倍,添加甘氨酸后的上清液最高酶活均低于对照组。【结论】明确了诱导EK4-1表达的信号分子类型及浓度范围,揭示了培养基氮源成分越简单,信号分子对EK4-1合成的诱导效果越佳,为了解微生物蛋白酶的诱导表达机制奠定了基础,为解决蛋白酶低表达量等问题提供了新思路。

关键词： 饲用燕麦   农艺性状   营养成分   碳水化合物组分   蛋白质组分   相关性分析  

摘要： 本试验旨在探究青藏高原地区种植的8个饲用燕麦品种的农艺性状、营养成分及碳水化合物与蛋白质组分,并通过多重关联分析解析不同饲用燕麦品种的营养积累规律及与农艺性状的相关关系,以期为高品质饲用燕麦品种的精准选育提供理论依据。在26个燕麦品种中,根据茎、叶、穗在全株中的占比,筛选出具有代表性的8个品种(林纳、萨摩、摩根、速锐、青引1号、甜燕2号、青海甜燕麦和青海444),进行农艺性状、全株营养成分及碳水化合物与蛋白质组分测定。结果显示:茎占比高的林纳、萨摩的中性洗涤纤维(NDF)、半纤维素和慢速降解碳水化合物(CB2)含量均高于叶占比高的青海甜燕麦和穗占比高的甜燕2号。茎、叶、穗占比平均的摩根和青引1号的中速降解真蛋白质(PB2)含量显著高于林纳和萨摩(P<0.05)。青海甜燕麦的粗蛋白质(CP)、非蛋白氮(NPN)和可溶性蛋白质(SP)含量显著高于林纳、萨摩和甜燕2号(P<0.05),其不可降解蛋白质(PC)含量显著低于林纳和萨摩(P<0.05)。叶占比低的青海444的不可利用碳水化合物(CC)含量显著高于青海甜燕麦(P<0.05)。甜燕2号的淀粉(Starch)和中速降解碳水化合物(CB1)含量显著高于林纳、萨摩和青海甜燕麦(P<0.05)。穗占比低的速锐的酸性洗涤不溶蛋白(ADFIP)含量显著高于甜燕2号(P<0.05)。通过相关性分析发现,茎占比与ADFIP含量呈极显著正相关(P<0.01);叶占比与Starch、CB1含量存在负相关关系(P>0.05),与SP含量呈极显著正相关(P<0.01);穗占比与PB2含量存在正相关关系(P>0.05),与ADFIP含量呈显著负相关(P<0.05)。综上可知,营养成分在饲用燕麦不同部位的积累中存在明显的规律,在叶片中积累的营养成分最为优质,部分农艺性状与营养成分存在相关性,通过农艺性状可以预测燕麦营养成分。

关键词： 金银花   WOX基因家族   表达分析   系统进化  

摘要： 为明确金银花WUSCHEL相关同源异型盒家族(WOX)基因的生物学功能及表达模式,本研究基于金银花全基因组数据库,对LjWOX家族成员进行鉴定克隆、亚细胞定位与生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)解析其表达特征。结果显示,金银花基因组中鉴定出12个LjWOX成员,分布于9条染色体,其氨基酸序列长度、分子量及等电点差异显著,且均定位于细胞核。系统发育分析将该家族分为远古支、中间支和WUS支;基因结构分析发现,LjWOX基因含1~3个内含子,编码蛋白均有保守基序motif1与motif2,部分成员具分支特异性基序,启动子区域富含光反应、激素及应激反应顺式作用元件。组织表达分析表明,LjWOX4、LjWOX8和LjWOX9在茎、叶及胚性愈伤组织中高表达。ABA和MeJA处理下,多数LjWOX基因上调表达:LjWOX2在ABA处理8h达峰值,或为ABA信号早期响应关键基因;LjWOX5、LjWOX7、LjWOX8和LjWOX12在MeJA处理8h显著上调,或参与茉莉酸信号传导调控。本研究为解析金银花生长发育与逆境适应分子机制提供理论依据。

关键词： 大黄鱼   中草药多糖   免疫指标   杀香鱼假单胞菌  

摘要： 为评估中草药多糖对大黄鱼免疫和抗氧化能力的影响,将黄芪、党参、当归、枸杞及云芝等中草药多糖注射至体质量(50.00±5.46)g、体长(13.00±2.79)cm的大黄鱼体内,比较其血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)活性,以及头肾、脾脏等免疫组织中免疫基因相对表达水平等非特异性免疫指标及其对致病性杀香鱼假单胞菌人工感染的抵抗力。结果显示,各试验组血清SOD和LZM均呈现上升趋势,并在注射后14 d达到峰值,显著高于对照组(P<0.05)。主要组织相容性复合体(MHC类基因)(MHCIα和MHCIIβ)、T细胞标志物基因(CD4和CD8)以及体液免疫基因(sIgM和pIgR)在多糖注射后均表现出显著上调(P<0.05)。在应用杀香鱼假单胞菌进行攻毒后,黄芪多糖和党参多糖表现出一定保护效果。综合来看,当归多糖和党参多糖在综合免疫调节方面效果最佳。

关键词： 猪圆环病毒4型   Cap蛋白   可溶性表达   单克隆抗体  

摘要： 旨在制备针对猪圆环病毒4型(PCV4)衣壳蛋白Cap的单克隆抗体(mAb)。利用生物信息学软件分析PCV4 Cap蛋白序列特征;构建原核表达载体并在大肠杆菌中通过低温诱导表达PCV4 Cap蛋白;经Ni-NTA亲和层析纯化重组蛋白后免疫BALB/c小鼠。利用杂交瘤融合技术及有限稀释法筛选稳定分泌抗体的阳性单克隆细胞株;通过小鼠制备腹水并用Protein A亲和层析纯化mAb;采用ELISA、Western-blot及间接免疫荧光试验(IFA)分析mAb的效价、反应性及亚型。结果表明,PCV4 Cap蛋白分子质量约为27 kDa,在25 ℃以可溶形式表达。PCV4 Cap蛋白免疫小鼠后共筛选出5株稳定分泌mAb的阳性单克隆细胞株,腹水纯化后5株单抗结果显示效价为1∶800~1∶12 800。Western-blot显示5株单抗均能与PCV4 Cap蛋白发生特异性免疫反应,其中3G10、8F6和11G7 mAb还能与PK-15细胞中真核表达的Cap蛋白发生明显免疫反应。5株mAb经抗体亚型鉴定,重链均为IgG1亚型,轻链均为kappa链。本研究成功制备了5株具有较好反应性的PCV4 Cap单克隆抗体,为PCV4临床诊断试剂的研发、抗原表位图谱绘制及病毒致病机制研究提供了关键的生物材料。

关键词： 猪流行性腹泻病毒   茯苓多糖   猪小肠上皮细胞   免疫功能   炎症反应  

摘要： 试验旨在研究茯苓多糖(Poria cocos polysaccharides, PCP)对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪小肠上皮(IPEC-J2)细胞的干预作用及机理。通过PEDV在IPEC-J2细胞中的生长曲线及评估PCP对IPEC-J2细胞活性的影响,确定最佳感染时间和PCP最适作用浓度。于此基础上,在PEDV感染细胞中添加200 μg/mL PCP进行处理,并检测病毒、抗病毒及炎性基因相对表达量。同时,通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放试验评估PCP对细胞损伤的保护作用。最后,通过转录组学进一步揭示PCP作用机制,并用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)对关键差异基因进行验证。结果表明:添加 200 μg/mL PCP对IPEC-J2细胞生长具有显著的促进作用(P<0.05), 且PEDV在IPEC-J2细胞中能有效复制;PEDV 感染条件下添加PCP处理 24 h,可显著抑制病毒结构蛋白相关基因[猪流行性腹泻病毒核蛋白(PEDV-N)、猪流行性腹泻病毒膜蛋白(PEDV-M)和猪流行性腹泻病毒刺突蛋白(PEDV-S)]及多种炎症和抗病毒相关基因的转录水平(P<0.05),并显著降低LDH释放量(P<0.05)。转录组学分析与qRT-PCR验证表明,PCP可能通过调控白细胞介素-27(IL-27)、干扰素β1(IFNB1)、白细胞介素-29(IL-29)和白细胞介素-28B(IL-28B)等关键因子,介导免疫调节效应,从而抑制病毒复制并减轻炎症损伤。综上所述,PCP能通过免疫调节作用干预PEDV感染进程,进而降低病毒复制水平并缓解细胞损伤。

关键词： 豇豆粉   肠道结构   肝脏健康   氨基酸代谢   斑点叉尾(鱼回)  

摘要： 本实验旨在探讨饲料中豇豆(Vigna unguiculata L. Walp)粉替代豆粕对斑点叉尾(鱼回)(Ictalurus punctatus)生长性能、肠道结构、肝脏健康及对氨基酸代谢能力的影响。研究配制了四组等氮(37%)等脂(8%)的实验饲料,分别使用豇豆粉替代饲料中0、10%、20%、30%的豆粕,分别以CON、R10、R20、R30表示。选取240尾斑点叉尾(鱼回)(22.44±0.28) g随机分为4组,每组3个重复,进行为期8周的养殖实验。实验结果表明, R10、R20组增重率显著高于CON组,各替代组特定生长率显著高于CON组, R10组摄食量显著高于其余各组(P<0.05),随着替代水平的上升,斑点叉尾(鱼回)摄食量呈下降趋势。肠道切片HE染色结果显示替代组杯状细胞数量与绒毛高度的比值显著提升(P<0.05), R20组环壁肌层厚度显著高于CON组(P<0.05)。肝脏切片HE染色及TUNEL染色结果未见明显炎症或凋亡,蛋白质合成基因(mtor、p70s6k、eif2b)呈上升趋势。研究结果表明,使用豇豆粉替代饲料中不超过30%的豆粕不影响斑点叉尾(鱼回)的生长性能,对肝脏蛋白质代谢无负面影响,且可改善中肠组织形态。

摘要： 胰腺导管腺癌（PDAC）是一类侵袭性强、致死率高的恶性肿瘤，其临床诊治的核心瓶颈在于早期诊断困难及细胞异质性介导的治疗抵抗。因此，解析早期病变异质性的调控机制、挖掘关键驱动分子及生物标志物，是突破该瓶颈的重要方向。研究表明，致癌性 KRAS突变与胰腺炎症损伤协同作用，驱动腺泡-导管组织转化（ADM）并向胰腺上皮内瘤变（PanIN）演进，最终发展为侵袭性PDAC。谱系示踪显示，ADM来源细胞具有明显的肿瘤转化异质性，提示PDAC在癌前阶段已具备固有异质性特征，这很可能是肿瘤进展、治疗抵抗及复发转移的根源。尽管目前已鉴定出簇状样细胞、神经内分泌细胞等多种癌前亚群，但其谱系起源、转录调控机制及动态演变规律仍有待阐明。系统解析早期异质性的调控网络，识别高致瘤潜能细胞亚群及其关键驱动分子，对发现PDAC早期诊断标志物、制定精准靶向干预策略具有重要意义。